Infektsioonide transkriptsiooni seroloogilised markerid

Share Tweet Pin it

Seroloogiline vereanalüüs - mis see on? Tundmatuid protseduure hirmutab alati ja paneb sind halvima kahtluse alla. Kuid seroloogilised uuringud on ainult uuring vere seerumi aktiivsete komponentide kohta ning ei ole vaja kahtlustada, et teil on mingeid haigusi, kui saate selle analüüsi jaoks nõu. Vere seroloogia on tehtud mitte ainult haiguskahtlusega, vaid ka ennetuslikel eesmärkidel: näiteks töökoha taotlemisel on kõik kohustatud testima hepatiidi markerite ja HIV-i markereid.

Selleks, et tuvastada inimestel esinevaid nakkushaigusi või nende puudumist kinnitada, viiakse läbi seroloogilised uuringud. Analüüs põhineb seerumis antikehade või antigeenide interaktsioonil lisatud reagendiga. Interaktsioonist tulenev aglutinatsioonireaktsioon võimaldab meil kindlaks teha patogeeni tüübi ja millise etapi nakkusprotsess on.

Vereanalüüsid viiakse läbi kahel viisil:

  1. Nakkushaigust põhjustanud seerumitesse lisatakse antigeen. Viiruse antikehad patogeenile viivad kohe keemilise reaktsiooni. Nii saate määrata, kui tugev keha immuunvastust, samuti nakkusprotsessi raskusastet.
  2. Teine meetod määratakse kindlaks patogeense patogeeni tüübi järgi. Kui see lisatakse, lisatakse spetsiifilise patogeeni vastu toodetud inimese antikehad seerumile. Kui patogeen on inimese veres, tekib aglutinatsioon.

Peaaegu määrati kindlaks ka inimvere rühmad ja reesus, kui patsiendi biomaterjal komponendid segatakse erinevate rühmade seerumitega.

Seetõttu ei ole üllatav, kui arst suunab katseid: hepatiit C vastu toodetud antikehad ei kaitse keha teist tüüpi hepatiidist. Sama juhtub ka teiste nakkustega. Andmete dekodeerimisel on normaalne sisu antikehade või antigeenide nullsisaldus.

Olles saanud teada, mis on seroloogiline vereanalüüs, tahavad paljud patsiendid teada, mida selle dekodeerimine annab.

Kasutades saadud andmeid võite:

  • tuvastama patoloogilise mikroorganismi nakkusprotsessi varajastes staadiumides;
  • kontrollida haiguse arengut ja raviprotsessi tõhusust;
  • reagendi majandusliku kättesaadavuse tõttu sageli proovivõtu võimalus;
  • tulemust saab mõne tunni jooksul saada, mis on haigla raviks väga oluline;
  • enne biomaterjali võtmist ei vaja patsient peaaegu erilist ettevalmistust.

Selline kontroll ei ole ette nähtud ainult infektsioonide avastamiseks: onkoloogilised protsessid, allergilised ained, endokriinsüsteemi häired ja mõned muud haigused tuvastatakse samal viisil.

Selle meetodi kerge puudus on see, et mõnikord saadakse valepositiivne või valenegatiivne tulemus. See võib juhtuda rasedatel naistel või kui patsient oli söönud mõnda sööki või jooke eelmisel päeval.

Kui andmete esialgse dekodeerimise käigus tuvastatakse positiivne tulemus, määratakse eksam alati diagnoosi viga kõrvaldamiseks.

Vaatamata uuringu lihtsusele ja asjaolule, et väliseid tegureid peaaegu ei mõjuta, kuid laboratooriumitehnikud soovivad siiski saada kõige usaldusväärsemaid andmeid, soovitame teha natuke ettevalmistust biomaterjali tarnimise eelõhtul:

  • dieedist eemaldada rasvased ja vürtsised toidud;
  • süüa vähem maiustusi ja ei joo magusaid gaseeritud jooke;
  • lõpetage alkoholi joomine;
  • piirata füüsilist pingutust (sportlastel soovitatakse vahele jätta koolitust ja rasket füüsilist tööd tegevad inimesed võtavad töölt vabaks);
  • vältida stressiolukordi.

Kõik ülaltoodud tegurid võivad dekodeerimise andmeid mõjutada ja tulemus võib olla valepositiivne.

Kuid nagu varem öeldud, pole alati esimene positiivne reaktsioon, eriti kui tuvastatud haigusega kaasnevad sümptomid puuduvad, alati patoloogia näitaja.

Seroloogiline analüüs on ainult nimi, mis on haruldane, tegelikult seda uuringut teostati rohkem kui üks kord enamikus lastel ja täiskasvanutel, kuna selle abil on võimalik kindlaks teha põhjustaja reaalajas ja jälgida raviprotsessi efektiivsust.

Markerite väärtus viirusliku hepatiidi B diagnoosimisel

B-hepatiidi viirus (HBV) on oma DNA ja proteiinkatte kompleksne moodus. Seda iseloomustab suur korduvus, võime muteeruda, integreerida inimese genoomi.

Antigeenide, antikehade, viirusliku DNA kombinatsioon moodustab seroloogiliste (seerum) markerite süsteemi, mille tuvastamine määrab haiguse faasi, aitab seda teha retrospektiivseks analüüsiks ja prognoosida tulemust ning säilitada dünaamiline kontroll nakkuse arengu üle.

Organismis viirus purustab osadesse, tuum tungib hepatotsüütidesse, kus ta hakkab tootma uut DNA-d ja valke, millest kogutakse kokku terveid virionid.

HBV DNA tsirkuleerub veres, selle membraanide osad on antigeenid. Mõne aja pärast tekib keha immuunvastus vastavalt "antigeeni-antikeha" põhimõttele.

B-hepatiidi pinnaantigeen (Austraalia antigeen) identifitseeriti esmakordselt Austraalia aborigeenides, mille jaoks sai ta nime. See on B-hepatiidi viiruse välise valgukatte pinnaantigeen. Sellel on mitmeid alatüüpe, mida tinglikult tähistavad ayw, ayr, adw, adrq, adrq + koodid, millel on mõned struktuuri erinevused.

See on HBsAg, mis mängib võtmerolli haiguse arengus ja progresseerumises, tagab viiruse elujõulisuse ja selle hepatotroopia on maksarakkude sisestamine. Selle esinemine viitab B-hepatiidi infektsioonile ja selle antikehade põhjal on loodud immuunkaitse.

HBsAg ilmub verd inkubatsiooniperioodi kestel, tavaliselt 15-25 päeva pärast nakatamist. Nüüdsest nakatumine muutub nakkuseks, see tähendab, et see võib edastada vedajalt teistele.

Viiruse DNA hepatotsüütides toodab nii palju HBsAg, et selle kogus ületab kogu virioni sadu tuhandeid kordi. Mõningast osast kogutakse uute viiruste ümbrik, ülejäänud valk jõuab verdesse. Nende küllastumine võib ulatuda 500 μg / ml-ni, mis on võrreldav keha enda vadakuvalguga.

Kogu antigeeni prodromaalne (preikteriaalne) ja iroortne periood tsirkuleerub veres ja haiguse ägedate haigusseisundite lõpuks kaduvad ja kaovad 80... 140 päeva pärast haiguse esimestest ilmingutest. Üle 180 päeva antigeeni olemasolu näitab kroonilise hepatiidi vormi tekkimist.

Immuunvastus - antikehad HB-le (anti-HBsAg) - ilmnevad pärast mõnda aega pärast antigeeni kadumist - 1 kuni 6 kuud, tavaliselt 2-4 kuud. Ajavahemik antigeeni kadumise ja antikehade ilmumise vahel on seroloogiline aken, antigeenide asendamine antikehadega nimetatakse serokonversiooniks. See on selge näitaja akuutset perioodi lõppu ja taastumise algust viiruse eluaegse puutumatuse moodustamisega.

Selle dünaamilise stsenaariumi rikkumine, seroloogilise akna puudumine, HB-de antikehade ilmumine liiga kiiresti on ebasoodne märk. On olemas hüperimmuunreaktsiooni oht, haiguse fulminantse vormi areng koos raskete maksa- ja muude organite kahjustustega. Seerumi markerite samaaegne avastamine pärast haiguse mitu kuud näitab hepatiidi kroonilist vormi.

HBsAg-i vereanalüüsi tulemus ei ole alati usaldusväärne. Vale negatiivsed vastused on võimalikud järgmistel põhjustel.

  • liiga lühike ajavahemik infektsiooni ja uuringu vahel - vähem kui 3 nädalat;
  • antigeeni alamtüübi ja diagnostilise immunoensüümkomplekti antigeeni valkude ja antikehade erinevus on erinev;
  • segainfektsiooni tõenäosus - HIV, hepatiit C.

Kui esineb kahtlus B-hepatiidi nakkuse ja antigeeni negatiivsete testitulemuste kohta, viiakse läbi viiruse DNA ja teiste viiruse markerite olemasolu PCR-testid, korratakse analüüsi mõne aja pärast.

HBsAg-i suhtes on positiivne test inimestele, kellel ei ole hepatiiti, nn terved viirusekandjad. Üleannustamise oht teistele säilib, hoolimata kliiniliste ilmingute puudumisest, meditsiiniline järelevalve on vajalik.

HBsAg antikehad on ainsad kaitsvad immuunsed elemendid, mis kaitseb keha täielikult B-hepatiidi nakkuse eest.

Need anti-HBsAg omadused on sätestatud vaktsineerimise põhiprintsiibis. Vaktsiin sisaldab rekombinantset (kunstlikult saadud) Austraalia antigeeni, mis on kombineeritud alumiiniumhüdroksiidiga. Pärast vaktsiini intramuskulaarset süstimist hakkavad antikehad hakkama arenema kahe nädala jooksul, pärast kolmekordse inokulatsiooni tuleb moodustada täisväärtuslik immuunsus.

Anti-HBsAg kaitsev tase on üle 100 mIU / ml. Aja jooksul, pärast 8-12 aastat, võib anti-HB-de kontsentratsioon väheneda.

Vaktsiini manustamisel on negatiivne või nõrk immuunvastus võimalik, kui antikeha tase ei ületa 99 mIU / ml. Siin on mitu tegurit:

  • vanus alla 2 või üle 60 aasta;
  • pikaajaliste krooniliste infektsioonide esinemine;
  • nõrk üldine immuunsus;
  • vaktsiini ebapiisav doos.

Need olukorrad, samuti antikehade nõutava kaitsetaseme vähendamine on põhjus, miks vaktsiin suurendab (täiendavat) annust aasta jooksul.

See antigeen kontsentreerub ainult hepatotsüütidel, tuvastatakse ainult maksa punktormaterjali uurimisel ja moodustunud selle tervislik antikehad ilmnevad peaaegu haiguse esimestel päevadel, kui haiguse kliinilisi tunnuseid veel ei ole.

HBcoreAgile on olemas kahte tüüpi antikehi:

  1. IgM-i immunoglobuliinid suurenevad hepatiidi ägedas faasis ja kroonilise vormi ägenemise ajal, kadudes remissiooni ajal ja pärast taastumist. HBcore-IgM kogu eluea pikkus veres on 6-12 kuud. See marker on akuutse hepatiidi B peamine näitaja;
  2. Klassi G immunoglobuliinid (HBcore-IgG) leitakse eluks kõigil, kellel on kunagi olnud hepatiit B, kuid millel ei ole kaitsvaid omadusi.

Nende antikehade tuvastamine aitab haiguse diagnoosimist seroloogilise akna ajal HBs-markerite puudumisel.

HBcore-IgM ja HBcore-IgG testimise positiivsed tulemused võivad mõnikord olla ebausaldusväärsed - lihas-skeleti süsteemi teatud haiguste korral toodetakse M- ja G-klassi immunoglobuliine.

Antigeen moodustub osa HBcoreAg transformatsioonist ja on iseloomulik aktiivse viiruse replikatsiooni faasile maksasrakkudes. Selle markeri välimus näitab ka vere nakkust ja patsiendi väljaheite suurenemist. Hepatiidi ägedas vormis soodne käik vähendab HBeAg kontsentratsiooni 20-40 päeva pärast haiguse algust koos antikehade samaaegse suurenemisega (anti-HBeAg), kuni need täielikult asendavad antigeenid.

Serokonversioon ja eriti selle märgid, näiteks antikehade kontsentratsiooni kiire tõus - näitaja peaaegu taastumiseks, mis välistab krooniliseks võimaluse. Vastupidi, nõrgad HBeAg-vastased indikaatorid või nende pikaajaline puudumine suurendavad hepatiidi kroonilise integratiivse vormi - viiruse genoomi sisenemist hepatotsüütide DNA -se riski - riski.

Haiguse kroonilises vormis näitab HBeAg kõrge kontsentratsiooni olemasolu ja viiruse DNA koopiate olemasolu, et säilitatakse aktiivne replikatsioon. Vähendatud antigeeni tiitrid ja DNA tasemed (10 ^ 5 koopiat / ml.

Pärast taastumist jääb anti-HBeAg verd veel kuueks kuuks kuni viieks aastaks.

B-hepatiidi seroloogiliste markerite esinemise kõige tõhusamad meetodid on ELISA ja PCR.

Ensüümimonoomianalüüs on väga tundlik informatiivne meetod, mis võimaldab tuvastada viirusliku hepatiidi markereid, praktiliselt taastades "antigeeni-antikeha" reaktsiooni laboris. Puhastatud seerumiproovi kombineeritakse reagendiga, mis sisaldab antikeha või antigeeni. Saadud immuunkompleks värvitakse eriainega ensüümi näidustuste ajal. Tulemust uuritakse optiliselt.

Analüüsi spetsiifilisus võimaldab saavutada täpse tulemuse ka veres sisalduva elemendi madalal kontsentratsioonil. Erinevalt teistest uuringutüüpidest tuvastab ELISA mitte ainult HBcoreAg-i, vaid ka HBcore-IgM-i ja HBcore-IgG-i eraldi, mis suurendab infosisu.

PCR (polümeraasi ahelreaktsioon) kasutatakse viiruse DNA osakeste tuvastamiseks, nende olemasolu kvalitatiivseks analüüsiks ja vere kvantitatiivseks viiruse koormamiseks. PCR puhul piisab ühe uuritud proovis oleva DNA molekuli esinemisest. Seda saab kasutada infektsiooni avastamiseks inkubatsiooniperioodil - see "näeb" viirust teisel nakatunenädal. Kõrge tundlikkusega PCR võimaldab diagnoosimisel saada 100% usaldusväärset teavet. Haigusjuhu täielikuks dünaamiliseks seireks tuleb PCR-i diagnoosimist teha vähemalt iga kolme kuu tagant.

Kõikidel juhtudel võetakse pärast eelkättesaadavust uuringu veeniveri, mis sisaldab 12-tunnist kiirust, keeldub alkoholi ja ravimite joomist.

Seroloogiliste markerite testide tulemused, nende kvalitatiivsete ja kvantitatiivsete omaduste pädevuslik lugemine aitavad tuvastada nakkuse olekut - selle olemasolu või puudumine organismis, haiguse perioodi ja vormi kindlaksmääramine, ennustada selle edasist arengut.

Vere seroloogilise analüüsi tunnused

Seroloogilised vereanalüüsid tehakse, et välja selgitada, kas isik on haigestunud teatud nakkushaigustega või on täiesti tervislik. Seroloogiline kontroll tehakse pärast transkriptsiooni väljastamist. Uuring võimaldab teil tuvastada, kui kaugele haigus on läinud, et määrata haiguse staadium. Protsessi määratlus ja analüüsi etappide üksikasjalik kirjeldus illuminates Wikipedia.

Antikehade vereanalüüs on näidustatud paljude haiguste jaoks. Need on haruldased ja laialt levinud tervisehäired. On teada, et antikehad ja antigeenid suudavad omavahel suhelda. Arstid kasutavad seda funktsiooni teadusuuringute läbiviimiseks.

Kui inimene on haige, moodustub immuunkaitse kompleksid. Arst, kes viib uuringu läbi, lisab antigeeni või antikeha ja jälgib seejärel reaktsiooni. Nii saab selgeks, millist infektsiooni kehas esineb. Pärast seda saate ravi alustada ohutult.

Seroloogiline vereanalüüs tehakse järgmiselt. Arst võtab patogeeni antigeeni, lisab selle seerumini. Selle manipuleerimise tulemusena algab keemiline reaktsioon. Arst teeb hindamise ja annab tulemuse.

Sageli on olukord, kus sündmused arenevad vastupidisel viisil. Põhieesmärk on teha kindlaks, millist haigust inimene on. Seda saab teha vastavalt olemasolevatele antigeenidele. Nende tuvastamiseks võtab arst antikehad ja lisab need verdesse.

Kui teil on vaja teada, millist veregruppi inimene on, võtavad nad ka materjali. Arstid pööravad suurt tähelepanu vere hüübimisele. Võibolla uuring näitab kõrvalekalle normist, siis kui te ravi ei alusta, võivad tagajärjed olla katastroofilised. See ei seisne mitte ainult tromboosi, südameatakk võib olla isikul. Lisaks suureneb insuldi tõenäosus.

Kui soovite uurimistööd läbi viia, pidage meeles, et seda tuleb teha tühja kõhuga. Laboratooriumides võetakse vereanalüüs. Kuidas reaktsioon käib, määrab arst seerumi kasutamise. Selle kaudu saab mõista, kuidas antigeenid ja antikehad interakteeruvad. Saadud teave võimaldab meil esitada täieliku pildi. Uuringu tulemusel põhinev arst näeb ette kõige tõhusama ravi. Seetõttu saate materjalist kindlasti võimaluse korral üle anda.

Jälgige dieeti vähemalt materjali tarnimise päevale eelneval päeval. Ärge sööge rasva, kompvekid tuleks ka välistada. Ära söö liiga palju toitu korraga. Alkohol täielikult kõrvaldada. Lisaks sellele ei tohiks te end füüsilise pinge vältimiseks end ära kasutada. Kuna stress võib põhjustada tulemuste moonutamist, vältige seda enne vereanalüüsi tegemist.

Kui arvate, et teil on Giardia, amebiasis, võite vabalt võtta ühendust laboratooriumiga. Materjali uurimine näitab, kas isik on haigestunud toksoplasmoosi, opisthorchiaosiga ja paljude teiste haigustega. Antikehad on signaal ravi alustamiseks.

See uuring on ette nähtud rasedatele naistele südame-veresoonkonna patoloogia puhul. Erinevad veenid, autoimmuunhaigused on kõik uuringu näitajad.

Lisaks sellele tehakse uuringuid:

  • pärast ravi;
  • enne ja pärast operatsiooni;
  • ravi efektiivsuse hindamiseks.

Uroloogia ja venereoloogia uuringud tehakse kõige sagedamini.

Kui tulemused näitavad, et antikehasid pole, siis on see väga hea. Infektsioon puudub. Kuid see juhtub harva, eriti kui varem olid kõik haiguse esinemist näitavad sümptomid. Üldjuhul muutub seroloogiline analüüs sageli diagnoosi viimiseks.

Tavaliselt tehakse antikehade vereanalüüs kaks korda. Esiteks lihtsalt määrake, kas on olemas nakkus. Teine kord antikeha testi võetakse, et mõista, kuidas protsess on dünaamiline. Kui sidemete arv antikehade ja antigeenide vahel on suurenenud, tekib infektsioon. Selleks, et valida õige ravi, peaks arst saama rohkem teavet. Sellises olukorras viiakse läbi täiendavad keemilised reaktsioonid. Nii saate aru, mida haigus peab võitlema. Lisaks määratakse kindlaks haiguse staadium.

Antikehade vereanalüüside tulemusi saab suurendada ainult. Norm on väärtus nullmärgil. Sel põhjusel ei saa tulemust vähendada.

Viirusliku hepatiidi B ja C laboratoorsed diagnoosid

Laboratoorsete uuringute tulemused omavad tähtsat, kuid mitte juhtivat rolli viirusliku hepatiidi diagnoosimise ja selle etioloogia kindlakstegemisel.

Biokeemiline vereanalüüs

Patsientide vere biokeemiline analüüs on juba ammu kliiniliste laboratooriumide praktika alustanud. Bilirubiini, vadakuvalkude ja ensüümide vahetuste näitajate kogutud andmed võimaldavad tuvastada inimkehas esinevaid põletikulisi protsesse ja soovitavad nende lokaliseerimist. Need kriteeriumid ei ole spetsiifilised ja ei iseloomusta viirusliku hepatiidi etioloogiat, kuid on siiski olulised maksa funktsionaalse seisundi hindamiseks.

Bilirubiini vahetusindikaatorid.

Patsient saab hinnata bilirubiini metabolismi seisundit vere, uriini ja rooja biokeemilise analüüsi põhjal. Vaba bilirubiin on hemoglobiini derivaat, mis vabaneb punavereliblede hemolüüsi ajal. Füsioloogilistes tingimustes hemoleeritakse iga päev ligikaudu 1% tsirkuleerivatest erütrotsüütidest, mis moodustavad 200-250 mg bilirubiini. Bilirubiini peamine osa siseneb põrna ja luuüdi mononukleaarsete fagotsüütide süsteemi rakkudesse. Bilirubiin vees ei lahustu, mistõttu liigub veres mittespetsiifilised transportvalgud, albumiin. Vaba bilirubiin on toksiline ühend, mis on võimeline tungima hematoentsefaalbarjääri, põhjustades entsefalopaatiat. Bilirubiini detoksikatsioon toimub maksarakkudes, kus glükuroonhape on sellega seotud, moodustades bilirubiini glükuroniidid. Need ühendid ei ole enam mürgised ja vees lahustuvad, mis hõlbustab nende eemaldamist keha osana sapist. Soolestikus moodustuvad bakteriaalsete ensüümide toimel kaks bilirubiini lagunemisprodukti rühma - urobilinogeene ja sterkobinogeene, millest enamik eritub väljaheites. Normaalsetel füsioloogilistel tingimustel ei kaasne bilirubiini eemaldamisega neerud.
Bilirubiini tervetel inimverd sisaldub kontsentratsioonis 1,7-17,1 mmol / l ning sisaldab kahe fraktsiooni: lahustumatu bilirubiini seotud albumiiniga - kaudse bilirubiini ja lahustuva glucuronide bilirubiini - otsene bilirubiini. Tavaliselt on nende suhe 3: 1.
Hepatiidi korral kahjustatakse maksarakke ja selle tulemusena väheneb sapi tootmine. Lisaks põhjustab maksa parenhüümi kahjustuse tagajärg mitte ainult sapiteede kanalit, vaid ka verd. Need protsessid põhjustavad mõlema selle fraktsiooni mõlema vere bilirubiini koguhulka. Tuleb märkida, et lõpus predzheltushnogo perioodi mõnedel patsientidel on tavalise kogubilirubiini hakkab kasvama murdosa otsest bilirubiini, mis on varajane näitajaks tsütolüüsida protsesse maksas. Uriinis hakatakse tuvastama bilirubiini ja urobiliini ning sterkobiini kontsentratsioon käärhoonetes väheneb järsult (tabel 1).
Tabel 1. Bilirubiini metabolismi suhe normaalse ja maksa-kollasuse tekkes.

Seerumi bilirubiini üldsisaldus

1,7 - 17,1 umol / l

Otseseerumi bilirubiin

Kaudne seerumi bilirubiin

Uriini reaktsioon bilirubiinile ja urobiliinile

Erektsioonide reaktsioon sterkobiliinile

Tuleb märkida, et bilirubiini metabolismi indikaatorid viirusliku hepatiidi diagnoosimiseks mängivad rolli ainult kollatõve kujunemisel. Enamik viirusliku hepatiidi anikterilist vormi ja preiterterfaasi on enamasti tunnustamata.

Ensüümi aktiivsuse hindamine.

Määramine seerumis aminotransferaas aktiivsust ((ALAT) ja aspartaadi aminotransferaas (AST)) on väga tundlik näitaja Tsütolüüsi hepatotsüütide mis määrab juhtiv roll diagnoosimisel hepatiit erinevate etioloogiate. Tsütolüütilises protsessis, mis areneb viirusliku hepatiidiga patsiendi maksas, valitseb ALT "loputus", AST suurenemine on oluliselt väiksem (tabel 2).

Tabel 2. Ensüümi aktiivsuse kindlaksmääramine seerumis

Hepatiidi väärtused

Hepatotsüütide spetsiifilisus

Leeliseline fosfataas (SHF)

31-115 U / l lapsed: kuni 350 U / l

* väärtused on antud vastavalt KDL NPF "Liteh" poolt kasutatavate diagnostiliste testimissüsteemide soovitustele

Täiendava kinnituse gepatogennoy milline ensüümi aktiivsust saab määrata pechenochnospetsificheskih ensüümid -. Sorbitooldehüdrogenaasi, fruktoos-1-fosfataldolazy urokinaasi jne Nad paiknevad peamiselt hepatotsüüdides ja nende avastamine veres on unikaalselt seotud maksahaigus. Kuid need testid on tundlikumad ALT aktiivsuse määramise suhtes. ALAT ja AST aktiivsus peegeldab maksa põletiku raskust, kuid mitte hepatiidi etioloogiat.

Valkude proovid

Ägeda viirusliku hepatiidi korral jääb vereplasma proteiinisisaldus ja nende koostis peaaegu muutumatuks. Erandiks on tümooli test, mille väärtused on tavaliselt kuni 4 U ja tõusevad hepatiitini 6-8 RÜ-ni.

Kui CG staadiumis CP-l võib tekkida vereserumi albumiini kontsentratsiooni vähenemine, protrombiiniindeksi vähenemine (alla 70%), hepatotsellulaarse puudulikkuse sündroomi teistel hüübimisfaktorite kontsentratsiooni langus. Hepatiidi aktiivsuse lisanäitajad on kiirendatud ESR (~ 15 mm / h), gamma-globuliini kontsentratsiooni suurenemine seerumis.

Viirusliku hepatiidi seroloogiliste markerite tuvastamine

Hepatiidi viiruslikku olemust on võimalik kindlaks teha ja teavet selle etioloogia kohta saada ainult hepatiidi viiruste seroloogiliste markerite abil. Sellised markerid hõlmavad viiruse valke (antigeene), spetsiifilisi antikehi, mida organism toodab infektsiooni korral, ja viiruse nukleiinhappeid (DNA või RNA), mis esindavad selle genoomi.

Spetsiifiliste viiruslike või bakteriaalsete valkude (antigeenid) või antikehade tuvastamiseks peremeesorganismis ühe või teise patogeeni manulusel bioloogilistes kudedes ja vedelikes viidatakse immunoloogilistele laboratoorsete analüüside meetoditele. Viimastel aastakümnetel on immunoloogilised uurimismeetodid laialt levinud. Selle põhjuseks oli immunoloogia ja biotehnoloogia tihe liitmine, mis võimaldas välja töötada ja praktikas rakendada mitmesuguseid testimissüsteeme, mis põhinevad antigeeni antikeha vastastiktoimel. Viiruse hepatiidi puhul viitab ELISA kaudsetele patogeeni tuvastamise meetoditele, võimaldades tuvastada haiguse etioloogiat.

Suhteliselt hiljuti on kliiniliste diagnostiliste laborite praktikasse sisse viidud geniandiagnostika meetodid, mis võimaldavad geenide või mõttetute DNA ja / või RNA järjestuste avastamist ja iseloomustamist. Nende areng tuleneb polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) põhimõtte arendamisest 1983. aastal. Esimesed aruanded PCR-i praktilise rakendamise kohta ilmusid 1985. aastal ja sellest ajast peale on väljaannete arv, kus PCR-i kasutatakse üheks uurimismeetodiks, on üks maailma teadus-kirjanduse esimesi kohti. Need lähenemisviisid on rakendatavad nakkushaiguste genoomide avastamiseks ja uurimiseks, onkoloogiliste haiguste markerite avastamiseks, erinevate geneetiliste muutuste tuvastamiseks inimese genoomis, mis on seotud erinevate funktsionaalsete häiretega. Erinevalt ELISA-st viitab PCR-analüüs otsesetele meetoditele patogeeni avastamiseks kliinilises materjalis, mis võimaldab hinnata viiruseprotsessi aktiivsust ja tuvastada patogeeni levikut erinevates elundites ja kudedes.

Viirusliku hepatiidi B serodiagnostika

Hepatiit B viirus (hepatiit B viirus, HBV) kuulub Hepadnoviridae perekonda. Viiruse genoomi esindab osaliselt kahekordne 3200 bp suurune ümmargune DNA molekul. Valgusmikroskoobi all näeb HBV välja nurga all oleva osakese läbimõõduga 42 nm (Dane'i osake), mis koosneb tuumast - nukleoonist, mis on kujutatud iososedriga diameetriga 28 nm, mille sees on kaheahelaline DNA, terminaalne valk ja DNA polümeraasi ensüüm. Nukleoidvalk sisaldab HBcAg ja HBeAg. Väliskest (7 nm paksune) moodustab HBV pinnaantigeen - HBsAg (joonis 2, 3). B-hepatiidi viirus on pseudoretroviirus, s.t. selle DNA võib osaliselt sisestada hepatotsüütide genoomi.

Joon. 2. HBV virioni struktuuri skeem ja pinnaantigeeni komponendid. Pinna valgu (HBsAg) liigne tootmine põhjustab selle esinemise patsiendi seerumis vabas vormis.

Joon. 3. Daniini osakesed patsiendi seerumis (valguse mikroskoopia)

AVH-iga ja kroonilise hepatiidi ägenemise korral võib patsiendi hepatotsüütides ja seerumis avastada viirusosakesed. Kroonilise hepatiit B integratiivse vormi ja remissiooni staadiumis HBV seerumis ei tuvastata.

HBV infektsiooni labori diagnoosimise aluseks on viiruse nakkuse seroloogiliste markerite määramine: HBsAg, HBeAg, anti-HBc klass IgM ja IgG, anti-HBe ja anti-HBs, HBV DNA ja viiruse DNA polümeraasi aktiivsus. Sõltuvalt viirushepatiidi B käigust tundub seroloogiliste markerite muutuste spekter teistsugune (joonis 4, 5)

Joon. 4. Akuutse hepatiit B seroloogiliste markerite muutuste spekter eraldusjärgus

Joonis 5. Seroloogiliste markerite muutuste spekter kroonilise B-hepatiidi korral

HBsAg on HBV nakkuse peamine marker. Ägeda viiruse B korral (90-80%) võib HBsAg-i tuvastada inkubatsiooniperioodil, alates infektsiooni 3-5-ndast nädalast. Antigeenide tsirkulatsiooni keskmine kestus on 70-80 päeva. HBsAg kiire kadumine (kollatõbi esimestel päevadel) antiBB-de ilmnemisega on halb prognostiline märk. Kroonilises B-hepatiidis võib HBsAg tsirkuleerida patsiendi veres paljude aastate jooksul. Tuleb märkida, et praegu kasutatavatel meetoditel HBsAg, sealhulgas ELISA määramiseks, on tundlikkuse piirväärtus. Seepärast on hepatiidi kliiniliste tunnuste ja HBsAg puudumise korral seerumis vaja uurida teisi HBV infektsiooni markereid. HBsAg esinemine veres viitab viiruse esinemisele maksas ja on väga tõenäoline veres. Mitte iga HBsAg sisaldav seerum ei sisalda B-hepatiidi viirust. Mõnel juhul ei sisalda viiruse DNA täielikult hepatotsüütide DNA-d, vaid osaliselt ainult HBsAg-i sünteesi kodeerivat piirkonda. Neil juhtudel sünteesitakse HBsAg ilma virioni teiste komponentideta (st ilma teiste antigeenita). Arvatakse, et selline olukord tekib siis, kui "tervislik" kandja HBsAg.

B-hepatiidi viiruse HBeAg iseloomustab kõrge vere nakkavust, mis on HBV aktiivse replikatsiooni indikaator. HBeAg tsirkuleerub patsiendi veres ainult HBsAg manulusel. Kõhulihase perioodi esimesel nädalal tuvastatakse see 85-95% patsientidest. HBeAg detekteerimine kaheks kuuks või kauemaks on prognostiline märk kroonilise hepatiidi tekkest. Enamikul kroonilise hepatiidiga patsientidel, kellel on kõrge aktiivsus HBeAg-protsessis, püsib see pikka aega (kuni mitu aastat).

B-hepatiidi viiruse klassi M (anti-HBc IgM) nukleaarse antigeeni antikehad - HBV aktiivse replikatsiooni marker ja äge infektsioon. Tuvastati 1-2 nädalat pärast HBsAg avastamist ja püsib 2-18 kuud. Ägeda hepatiidi B patsientidel on 4-20% -l HBc-vastane IgM-i ainus infektsiooni marker. Kroonilise B-hepatiidiga patsientidel võib mõne vähese tiitrusega patsiendil avastada HBc-IgM-i kui akuutse infektsiooni ajal, kusjuures antikehade tiiter peegeldab hepatiidi raskust.

HBcAg klassi G (anti-HBc IgG) antikehad ilmnevad peaaegu samaaegselt anti-HBc IgM-iga. Reeglina jäävad nad kõikideks isikuteks, kellel on elu jooksul B-hepatiit. HBsAg-vastane antikeha levib 95% HBsAg kandjatest koos HBsAg-ga.

HBsAg-vastased antikehad (anti-HB-d) viitavad eelmisele infektsioonile või vaktsineerimisjärgsele immuunsusele (kaitse tase - 10 RÜ / ml). Need ilmnevad taastumisperioodil, 4 nädalat pärast HBsAg kadumist, saavutades maksimaalse kontsentratsiooni 1-2 aasta jooksul, millele järgneb ajakohane diagnostiliste meetodite abil avastamiseks ligipääsmatu taseme järkjärguline vähenemine. Mõnedel juhtudel võivad anti-HB-d elada kogu aeg. Hepatiit B-ga patsientide kliinilise paranemise taustal on anti-HB-de esinemine hea prognostiline märk. On oluline märkida, et ägeda HBV infektsiooni dünaamikas on "aken", kui HBsAg ei ole enam määratletud ja anti-HB-sid pole veel ilmnenud. Samal ajal tuvastatakse anti-HBc IgM ja IgG. Sellest järeldub, et on vaja uurida AVH-i patsiente anti-HBc-IgM-i suhtes isegi HBsAg ja anti-HBs-uuringu negatiivsete tulemustega.

HBeAg-vastased antikehad (anti-HBe) ilmuvad veres pärast HBeAg eliminatsiooni ja viiruse replikatsiooni viimist. B-hepatiidi ägeda perioodi 9. nädala lõpuks on enam kui 90% -l patsientidest anti-HBe. Taastumisaja jooksul võib anti-HBe kaob. Kuid anti-HBe olemasolu ei viita konkreetse seerumi nakkavuse puudumisele. On näidatud, et paljudel B-hepatiidi (umbes 10%) arengus esinevatel patsientidel esineb viiruse "immuunrõhu" all mutantvormid, mis "vältida" immuunsüsteemi ja ei ole kõrvaldatud. HB-vastase antikeha rakkudest eraldati mutant, mis ei suutnud toota HBeAg-i defektide tõttu eelregiooni piires ja mida nimetati HBeAg-negatiivseks. HBeAg-negatiivse mutandi välimus põhjustab maksakahjustuse progresseerumist viiruse replikatsiooni jätkamisega (HBV DNA olemasolu seerumis). HBeAg-negatiivse mutandi esmane nakkus suurendab oluliselt fulmitava hepatiidi riski.

Kirjeldatud hepatiit B markereid kontrollitakse ELISA abil. Antikehade (anti-HBe, anti-HBs, anti-HBc IgM, anti-HBc IgG) ja antigeenide (HBsAg, HBeAg) antikehade spekter võimaldab määrata B-hepatiidi diagnoosi ja määrata haiguse staadium (tabel 3). Selle meetodi puuduseks on see, et seda ei saa kasutada viiruse mutantvormide infektsioonil, immunosupressiooniga (vähipatsiendid, narkomaanid jne) ja organismis esineva patogeeni kvantitatiivseks hindamiseks. Nende probleemide lahendamine sai võimalikuks molekulaarbioloogiliste meetodite kasutuselevõtmise tulemusena kliiniliste diagnostiliste laborite praktikas.

Tabel 3. Hepatiit B viiruse nakkuse seroloogiliste markerite erinevad kombinatsioonid ja nende tõlgendamine

antiNBc
Igm

antivib
c summad

Genotsioloogiaga seotud meetodid, mis hõlmavad PCR-i, suurendavad oluliselt viiruse B laboratoorset diagnoosimist, võimaldades otseselt identifitseerida patogeeni, luua HBV koe ja rakusisese lokaliseerimise, tuvastada ja iseloomustada viiruse mutantseid vorme, hinnata vireemia taset haiguse ajal, sealhulgas viirusevastase ravi taustal.

Praegu on PCR-meetodil põhinevad laboratoorsed tingimused HBV DNA tuvastamiseks mitmesugused diagnostiliste testimissüsteemid - Roche, NPF Litekh, DNA tehnoloogia, LCR (ligaasi ahelreaktsioon) - Abbott, bDNA (meetod "erinevad" DNA-sondid) - kindel "Chiron". Need katsesüsteemid võimaldavad patogeeni olemasolu kvalitatiivsel määramisel bioloogilises materjalis: seerumis või plasmas, maksas koes, mononukleaarsetes rakkudes. Üks võimalus HBV DNA kvalitatiivseks määramiseks on in situ PCR-tehnoloogia (histoloogilistes sektsioonides), mis võimaldab kindlaks teha viiruse rakusisese lokaliseerimise hepatotsüütides.

Abbot kasutas LCR-i abil ainukese kaubandusliku testi süsteemi HBeAg-negatiivse hepatiidi B diferentsiaaldiagnostikas. Selle süsteemi oluliseks puuduseks on ainult üks paljudest mutatsioonidest, mis põhjustab HBeAg viiruse sünteesi puudumist. HBeAg-negatiivse B-hepatiidi viiruste jaoks iseloomulike geneetiliste muutuste kogu identifitseerimine on seni võimalik ainult viiruse genoomi PCR-amplifitseeritud fragmentide otsese järjestamise teel.

HBV DNA sisalduse kvantitatiivne iseloomustus kliinilistes proovides on oluline viirusevastase ravi efektiivsuse hindamiseks ja sellel on prognostiline tähtsus HBV krooniliseks määramiseks. Kui algselt madal vireemia (HBV DNA alla 500 fg / l) protsendi kroonilise akuutne hepatiit B nullilähedane, samas kontsentratsioonis DNA HBV vahemikus 500 kuni 2000 fg / ul krooniliseks protsessi täheldatakse 25-30% patsientidest, samas kõrgema vireemia patsient (üle 2000 fg / μl) äge hepatiit B muutub sageli krooniliseks.

Tuntud kommertskatsesüsteemid HBV DNA kontsentratsiooni hindamiseks rakendavad konkureeriva PCR analüüsi põhimõtet, millele järgneb hübridisatsioonikava amplifikatsiooniproduktide määramiseks (Roche, NPF Liteh). See lähenemisviis põhineb teadaoleva kontsentratsiooni siseanalüüsi kliinilisel proovil, mis on kvalitatiivselt erinev määratud maatriksist. Pärast PCR-i arvutamiseks arvutatakse HBV DNA kontsentratsioon katsematerjalis, lähtudes sisestandardi tuntud kontsentratsioonist ja sisestandardi ja määratud maatriksi amplifikatsioonikoguste kuhjumise suhetest.

Praegu arengus laboridiagnostikale hepatiidi meetodeid normaaltingimustes loomise suunas kaubandusliku testikomplektidega identifitseerimist kliiniliselt olulisi HBV mutanttüvesid, samuti uute optiliste seadmete (biosensorid) terviklike HBV infektsiooni diagnoosimiseks (viirusvalkude selle antikehad ja HBV DNA)

Hepatiit C seradiagnostika

C-hepatiidi viirus (hepatiit C viirus, HCV) on RAV, mis sisaldab Flaviviridae perekonda kuuluvaid hepatotroopseid ja lümfotroopseid viirusi. Viiruse genoomi esindab üheahelaline (+) RNA molekul, mille mõõtmed on umbes 9500 alust, mis kodeerivad struktuurseid ja mittestruktuurseid valke (joonis 6).

Joon. 6. HCV genoomse RNA skeem ja viiruse valgu süntees

Struktuursed valgud hõlmavad südamiku valku (tuum) ja ümbritsevaid glükoproteiine (E1 ja E2). Mittestruktuurne piirkond on valkude kompleks, millel on ensümaatiline aktiivsus, peamiselt RNA-sõltuv RNA polümeraas. Lisaks viiruslikele valkudele on virionist väljaspool ka lipiidmembraan, mis koosneb lipoproteiinide madala tihedusega peremeesorganismist (joonis 7).

Joon. 7. Hepatiit C viiruse struktuuri skeem.

Kuni 1990. aastani diagnoositi parenteraalset transmissiooni CGN-A-Ni-B, viiruse hepatiidi muude teadaolevate markerite puudumisel seerumi ALAT aktiivsuse suurenemise tõttu 6 kuud. Kuid mõnedel patsientidel, kellel on krooniline hepatiit C, ei suurene ALAT tase. C-hepatiidi tänapäevases diagnostikas on peamine roll HCV-vastaste antikehade määramisel ja HCV RNA tuvastamisel.

Erinevalt B-hepatiidist, milles on võimalik tuvastada viiruse antigeenid ja nende antikehad, võib hepatiit C abil tuvastada ainult antikehasid ELISA-ga. HCV antigeenid, kui nad sisenevad verd kogustes, mis on vaevu lõksus. Neid saab leida ainult maksakoes, kasutades immunohistokeemilisi uurimismeetodeid. See piirab oluliselt võime hinnata nakkusprotsessi kulgu ja aktiivsust.

HCV-vastane antikeha ei viita viiruse replikatsiooni jätkamisele ja võib olla nii praeguste kui ka minevikuinfektsioonide märguanne. Samuti on vaja arvestada, et HCV-doonorivastast antikeha, mis ei pruugi näidata HCV nakkust, saab tuvastada retsipientidel, kes on üle nakatunud verd. Kroonilise C-hepatiidiga patsientidel leitakse anti-HCV sisaldus veres mitte ainult vabas vormis, vaid ka tsirkuleerivate immuunkomplekside koostises.

Igale viiruslikule proteiinile, mis paikneb viiruse genoomi struktuurilises ja mittestruktuurilises piirkonnas, moodustuvad antikehad. See määrab nende erineva spetsiifilisuse ja seega erinevate diagnostilise teabe. Hepatiit C sõeluuringuks kasutatakse ELISA-meetodit ja kinnitava testi abil kasutatakse immunoblot-meetodit (RIBA). HCV-de tuvastamiseks on erinevad diagnostiliste testimissüsteemide põlvkonnad, mis erinevad nende tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest (tabel 4).

Tabel 4. Diagnostiliste ensüümide immunoloogilise testi süsteemide erinevate põlvkondade võrdlus HCV antikehade tuvastamiseks.

* 4. põlvkonna katsesüsteemid sisaldavad sünteetilisi ja rekombinantseid viiruslikke antigeene, mille suurused võivad erineda kolmanda põlvkonna fragmentidest.

Esimene diagnostilise testi süsteem, mis põhineb C-100-3 antikehade tuvastamisel, töötati välja 1989. aastal M. Houghtoni laboris ja sai kiiresti üldlevinud. See võimaldas püüda antikehi vööndis, mis iseloomustab ainult 12% viiruslikust valgusest mittestruktuurilises piirkonnas (NS3, NS4). Lisaks ei ühti kunstlik rekombinantse antigeen C-100-3 täielikult looduslike viirusvalkudega, mis määrab selle nõrga immunogeensuse. C-valgu (Ag-tuum) antikehad antigeeni C-100-3 abil ei jää üldse. See määrati kindlaks HCV-vastase antikehade määratluse madala spetsiifilisusega ja suure hulga vale-negatiivsete tulemustega, eriti kroonilise C-hepatiidiga patsientidel. Raske hüpergammaglobulineemiaga patsientidel on vastupidi C-100-3 test sageli valepositiivne.

Teise põlvkonna katsesüsteemid, mis ilmusid aastal 1991, võimaldavad hõivata antikehasid valkudele erinevates genoomi piirkondades, mitte ainult mittestruktuurilistes, vaid ka struktuurilistes piirkondades. Nende eeliseks olid eelkõige kõrge spetsiifilisus, samuti HCV antigeenide spektri täielikuma esindatuse võimalus. Teise põlvkonna katsesüsteemide kasutamine võimaldas märkimisväärselt parandada doonorite valimist ja vähendada transfusiooni järgse hepatiidi C tekke ohtu.

Teise põlvkonna katsesüsteemide kasutamisel ei välistata ka vale negatiivseid tulemusi, eriti HCV genotüüpidega patsientidel, mis on selles piirkonnas ebatavalised. Kolmanda ja neljanda põlvkonna kõige sobivamad katsesüsteemid, mida kasutatakse alates 1995. aastast kliinilises praktikas.

Kolmanda ja neljanda põlvkonna katsesüsteemid võimaldavad 99,8% -l juhtudest tuvastada HCV-vastast antikeha. Mõnel juhul ei pruugi HCV-vastased antikehad tuvastada näiteks siis, kui immuunvastus lükkub edasi, kui kasutatakse immunosupressiivset ravi või kui onkoloogilises haiguses, ravimite võtmisel jne esineb immunosupressioon. Valepositiivseid tulemusi on väga harva täheldatud. Nende välistamiseks analüüsitakse küsitavaid seerumeid RIBA või INNO LIA testides, mis tuvastavad iga HCV valgu antikehad. Hepatiidi C diagnoosimise ja patsientide seire määramine on sageli rasked, kui kasutatakse ainult klassikalisi laboratoorset diagnoosi meetodeid. Selle põhjuseks on HCV nakkuse käigu eripära, mille käigus võib täheldada järgmist: asümptomaatiline haiguse algfaasis; madal, sageli normaalne ALT tase; antikehade hilinenud ilmumine (kuni 2 aastat haiguse alguse tekkimisest); usaldusväärsete katsesüsteemide puudumine viirusvalkude avastamiseks. Molekulaardiagnostika hepatiit C juhtpositsiooni laboridiagnostikale HCV nakkuse hõivata genodiagnostic võimaldavaid meetodeid: otseselt tuvastada geneetilises materjalis viirus seerumis ja kudedes inimkeha (mononukleaarsetest rakkudest, hepatotsüütides, luuüdi, jne); hinnata viiruse replikatsiooni aktiivsust kudedes; kvantifitseerige viiruse kontsentratsiooni seerumis; tuvastama viiruse genotüübi ja jälgida HCV varieeruvust. HCV RNA tuvastamine seerumis on diagnoosi "kuldstandard", mis näitab jätkuvat HCV replikatsiooni. Vastavalt Maailma Terviseorganisatsiooni soovitusele võib hepatiit C diagnoosida, kui patsiendi seerumis on kolmekordne HCV RNA tuvastamine teiste hepatiidi markerite puudumisel. Hepatiidi ägedas faasis tuvastatakse RNA juba 1-2 nädala jooksul pärast nakatamist s.o. ammu enne HCV-i esilekerkimist. Kõigi HCV populatsiooni heterogeensuse korral on kõikidel viiruse geneetilistel variantidel genoomi 5'-mitteselemendatud piirkonnas konservatiivne piirkond, mille tuvastamisel põhinevad kõige tuntumad diagnostilised testimissüsteemid HCV RNA tuvastamiseks. Hiljuti peeti HCV RNA määramiseks kõige tundlikumaks testiks Amplicor HCV Roche'i test, mis näitas, et RNA on 700 koopiat milliliitri kohta. Abbotti LCx komplekti abil saab tuvastada 200 RNA / ml koopiat. BDNA Quantiplexi test (firma "Chiron") on praegu vähem tundlik, kuid on laialt levinud. Riigisisesed katsesüsteemid põhinevad HCV RNA määramisel kliinilises proovis RT-PCR-iga, kasutades sihtmärgiks viiruse genoomi konservatiivset 5'-mittesisaldatud piirkonna amplifikatsiooni (NPF Liteh, DNA-tehnoloogia). PCR võimaldab tuvastada HCV RNA mitte ainult vere seerumis, vaid ka maksa koes, mis on oluline HCV rolli kinnitamisel hepatotsellulaarse kartsinoomi moodustumisel. Selles patsiendikategoorias tuvastatakse HCV RNA hepatotsüütides ja seerumis anti-HCV ja HCV RNA puudumisel. HCV-infektsiooni kulgu iseloomustab mitmete ekstrahepaatiliste ilmingute areng, mis nõuab viiruse leviku jälgimist organismis. HCV RNA määratakse PCR-ga vere mononukleaarsetes rakkudes, krüopretsipitaatides, rakkude ajukoes, maksa biopsia ja lihaskoes. On metoodiline lähenemisviis, mis võimaldab mitte ainult määrata viiruse esinemist koes, vaid ka hinnata selle replikatsiooni aktiivsust - reaktsiooni (-) RNA ahelale. Kroonilise hepatiit C patsientide jälgimisel mängib olulist rolli patsiendi seerumi või vereplasma viiruse sisalduse kvantitatiivne hindamine ja HCV genotüübi määramine. Viirusevastase ravi kõige soodsam vastus on täheldatud madala vireemia ja 2. või 3. genotüübiga isikutel. Hea teadaolevate diagnostiliste testimissüsteemide alus HCV sisalduse määramiseks on lähenemine, mis põhineb HCV RNA ja sisestandardi konkurentsivõimelise võimendamise põhimõttel. Esiteks on need Roche ja NASBA HCV (Organon) Amplicor HCV monitori komplekti diagnostilised ettevõtted. Firma "Chiron" bDNA Quantiplex kvantitatiivsed testimissüsteemid, mis võimaldavad teil otseselt hinnata maatriksi kontsentratsiooni proovis salvestatud signaali intensiivsusega. Need katsesüsteemid eristatakse usaldusväärsuse, parema reprodutseeritavuse, kuid madalama tundlikkuse tasemega võrreldes amplifikatsioonidega. Ettevõtete Gen-Probe ja Bayer Diagnostics töötajad avaldasid HCV RNA kvantifitseerimise tulemusi, kasutades TMA-d (transkriptsiooni vahendatud võimendus) väga madala tundlikkuse lävega 50 koopiat / ml. Enamik kodumaiseid laboratoreid kasutavad HCV RNA kontsentratsiooni hindamiseks limiteeriva lahjendusmeetodi. See põhineb analüüsitava maatriksi laagerdamisel kontsentratsioonide kadumisel ja algkontsentratsiooni arvutamisel, mis põhineb amplifikatsiooni tulemustel, võrreldes kalibreerimiskõveraga. Kahjuks pole see meetod piisavalt õige, kuna see ei võta arvesse katseprooviga katseklaasis amplifitseerimisreaktsiooni summeerimise võimalust. Sellest hoolimata on meetod üsna lihtne täideviimiseks ja seda kasutatakse paljudes laborites "sisekasutuseks" (majas). HCV omaduse oluline tunnus on selle geneetiline heterogeensus, mis vastab nukleotiidide eriti kiirele nukleotiididele. Selle tulemusena moodustub suur hulk erinevaid genotüüpe ja alatüüpe. Simmondsi klassifikatsiooni järgi eristatakse 11 tüüpi (genotüübid 1-11), mis omakorda on jagatud HCV alatüüpideks (näiteks alatüübid 1a, 1c, 1c) alamtüübiks (näiteks alatüübid 1a, 1c, 1c). Eriti paljud HCV alatüübid on leitud Aafrikas ja Kagu-Aasias. See kinnitab kaudselt HCV olemasolu nendes piirkondades juba mitu sajandit. Nad arvavad, et HCV ilmnes hiljem Euroopas ja Põhja-Ameerikas, mis vastab tunduvalt väiksemale arvule alatüüpidele. Kliinilises praktikas on piisav eristada HCV 5 alatüüpi: 1a, 1b, 2a, 2b, 3a. Erinevate genotüüpide levimise geograafilised erinevused. Seega on Jaapanis, Taiwanis ja osaliselt Hiinas genotüübid 1b, 2a, 2b enamasti registreeritud. Tüüpi 1b nimetatakse isegi "jaapanlasena". Ameerika Ühendriikides on 1a - "Ameerika" genotüüp valitseb. Euroopa riikides valitseb genotüp HCV 1a, Lõuna-Euroopas suureneb oluliselt genotüübi 1b osakaal. Vene Föderatsiooni territooriumil on domineeriv genotüüp 1b, moodustades 80% viiruse populatsioonist, seejärel sagedus - 3a, 1a, 2a. Tavalise metoodika lähenemine HCV tüpiseerimiseks on tuvastada viiruse genoomi - 5 'tõlkimata, Cor, NS5A piirkondade konservatiivsetes piirkondades iseloomulikke geneetilisi muutusi (mutatsioonid). HCV kirjutades on amplifikatsiooni konserveerunud piirkondade viiruse genoomi ja analüüsi konkreetseid nukleotiidijärjestused meetodid: otsene sekveneerimine võimendati fragmendid järgnes PCR tüübispetsiifilistele spetsiifilisi praimereid RFLP (analüüs võimendatud fragmentideks restriktsiooniensüümide) reverse hübridiseerumisel tüübispetsiifilisest sondide (LiPA) SSCP (analüüs konformatsioonilises polümorfismi üheahelaline fragmendid DNA) HCV genotüübi loomiseks on loodud kaubanduslik InnoLiPA HCV testimissüsteem ("Innogenetics"), põhiliselt Mis põhineb reverse hübridiseerimise põhimõttel tüübispetsiifiliste sondidega (joonis 8). 1-1a genotüüp 2-1c genotüüp 3-2a genotüüp 4-1c + 3a genotüüp 5-2c genotüüp 6-1a + 2a genotüüp 7-negatiivne kontroll amplifikatsiooniga Pic. 8. kehtestamine genotüübiga C-hepatiidi viiruse abil test-süsteemi "InnoLipa ​​HCV" Mõnes suuremates keskustes teostada diagnostikamenetlustes algset HCV tüpiseerimine PCR tüübispetsiifilisest praimereid, DNA fragmendid restrictase analüüs (RFLP), üheahelaline konformatsioonilises analüüsi või DNA fragmentide (SSCP ) Seega NPF Litekh kliinilises ja diagnostilises laboris määratakse viiruse genotüüp PCR-SSCP-ga (joonis fig 9) või alleel-spetsiifiline amplifikatsioon vastavate praimeritega. Joonis 9. HCV RNA genotüpiseerimine SSCP analüüsi järgi: 1-5 genotüüp 1 kuni 6 - 1a7 - 2a8 - 3a. On kindlaks tehtud, et HCV populatsioon ei ole igas patsiendis ühtlane. HCV tsirkuleerib inimese keha kui sama viiruse genotüübiga seotud lähedaste mutantsete tüvede heterogeenset segu, millel on geneetilised erinevused viiruse genoomi varieeruvates piirkondades. Geneetiliselt erinevad HCV-i variantid, mis tsirkuleerivad ühe peremehe kehas nimega "kvaasiliigid". Erakordset ebastabiilsust iseloomustab E2 / NS1 piirkond, mis sisaldab ainult 80 nukleotiidi ja nimetatakse hüpervarieeruvat piirkonda (HVR1). Arvatakse, et E2 / NS1 genoomi poolt kodeeritavate valkude antikehad, millel on neutraliseerivad omadused. HVR1 piirkonna erakordne ebastabiilsus toob kaasa asjaolu, et viirus suudab oma antigeenset struktuuri muuta, mistõttu immunokompetentsed rakud ei suuda tuvastada pidevalt uuendatud antigeene. "Kvaasiliikide" esinemine on seotud viiruse põgenemisega immuunvastusest, HCV-i ebaefektiivse eemaldamisega ja selle tagajärjel selle pikaajalise püsivusega inimese kehas ja suurte krooniliste infektsioonide osakaaluga. Üksiku HCV populatsiooni heterogeensuse hindamine viiakse tavaliselt läbi HVR1 viiruse genoomi geneetiliste variantide arvu registreerimise alusel, kasutades heterodupleksi analüüsi või SSCP-d. Mõnede välismaiste teadlaste arvates põhjustab HVR-lookuse individuaalse HCV populatsiooni kõrge heterogeensuse tase HCG C-i raskemat liikumist kudede transaminaaside taseme kõikuvuse ja viirusevastase ravi suhtes. Füüsikalis-keemilise meditsiini teadusuuringute instituudi tehtud uuring näitas, et HCV populatsiooni geneetiliste muutuste registreerimisel ägeda hepatiit C korral ei ole prognoositav väärtus, nagu mõnedel juhtudel on HCG-C. Seega on geneetiline heterogeensus vaja pidada kui elusoleva viiruse adaptiivne reageering peremeesorganismi muutuvatele tingimustele, mida tõendavad erinevused hepatotsüütide, mononukleaarsete rakkude ja inimese seerumi HCV subpopulatsioonides. Lisaks sellele võib HCV üksikpopulatsiooni geneetilise varieeruvuse dünaamika ja muutused viiruse kontsentratsioonis patsiendi seerumis olla ka maksarakkudes esineva replikatsiooniprotsessi aktiivsuse kaudne marker. Hepatiidi C laboratoorne diagnostika areneb uute, arenenumate katsesüsteemide loomiseks. Ortho Clinic Diagnostic on käivitanud uue immunoloogilise analüüsi komplekti, et määrata veres oleva tuumantigeeni. Esimene etapp on antigeenide vabastamine rakulistest struktuuridest seerumi lüüsimisega, teine ​​on antigeenide hõivamine spetsiifiliste monokloonsete antikehadega. See katse on eriti kasulik HCV-nakkuse varase staadiumi tuvastamiseks, kui viiruspetsiifilised antikehad pole veel ilmnenud. Chiron ja Gen-Probe pakuvad uut amplifikatsioonikatset - NAT-i analüüsi - nii HCV kui ka HIV RNA tuvastamiseks, mis võib analüüsida analüüsitavas materjalis ühe viiruse koopiaid. Kokkuvõttes tuleb mainida vajadust patsiendi tervikliku uurimise järele, kaasates meditsiinilise ja bioloogilise teaduse uusimad edusammud viirusliku hepatiidi õigeks diagnoosiks ja patsiendile piisava ravi määramiseks.


Seotud Artiklid Hepatiit