Hepatiit C viiruse diagnoosimine

Share Tweet Pin it

Hepatiit C viirus (HCV) on Flaviviridae perekonnast pärinev RNA-d sisaldav viirus. See nakk suudab korrutada vererakkudesse (monotsüüdid, neutrofiilid, B-lümfotsüüdid ja makrofaagid) ning mõjutada ka maksa enda rakke - hepatotsüüte. Selle mutatsioonide aktiivsuse tõttu on seda tüüpi hepatiit võimeline vältima kokkupuudet inimese immuunsüsteemiga.

Selles viiruses on 11 genotüüpi ja selle alamtüüpide mass, mis erinevad maksakahjustuse tasemest ja mõjutavad hepatiidi ravi kestust. Sellised mitmesugused C-hepatiidid nõuavad erinevaid viirusevastase ravimeetodeid. Näiteks tuleb hepatiit 1 ja 4 genotüüpe ravida 48 nädala vältel ja 2. ja 3. tüüpi viiruste raviks, võib see kesta ainult 24 nädalat.

Pärast seda, kui hepatiidi C kiire katse tulemus oli positiivne, viidi läbi viiruse RNA tuvastamiseks vereproovides PCR-analüüs.

PCR-diagnostika

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on eksperimentaalne meetod viiruste tuvastamiseks. Selline C-hepatiidi analüüs võib märkimisväärselt suurendada mõnede DNA fragmentide või RNA viiruse kontsentratsiooni ülekantud proovides. See võimaldab neid ära tunda ja isegi numbrit lugeda.

See C-hepatiidi test viiakse läbi vastavalt järgmisele protseduurile:

  1. Proovitorusse sisestatakse vereproov (geneetiline materjal), mis võib sisaldada soovitud hepatiidi geeni. Sellel on paigutatud spetsiaalsed ained, praimerid, need on lühiajalised segmendid soovitud geenist, mis on keemiliselt sünteesitud. Sellele anumile on lisatud ka DNA või RNA polümeraas, mis suudab luua nukleiinhappe ahelaid, mis on täiesti identsed originaaliga. Saadud kompositsioonile lisati valikut vabu nukleotiide, mis on DNA ja RNA spetsiifilised ehitusmaterjalid, millest üks sisaldab radioaktiivse fosfori väikseid osakesi.
  2. Saadud segu kuumutatakse esialgu 95 kraadini, mille tagajärjel lahustuvad mõlemad DNA helikellid omavahel normaalses olekus.
  3. Analüüsi jätkamiseks jahutatakse ravimit, mille järel praimerid kinnituvad hepatiit-viiruse genoomi soovitud sektsioonile, takistades DNA moodustumist topelt-heeliksiks. Kui segu jahtub, otsib polümeraas nukleotiidide ahelaid. Selle ensüümi kinnitamise ajal libiseb see DNA ahelaga (plokina mööda köi) ja kahekordsel heeliksil ei saa seda "töödelda", segu soojendatakse sel eesmärgil.
  4. Analüüsi pikendamiseks viiakse uuesti läbi kuumutamine, mis viib nukleotiidide ahelate eraldumiseni. Kui proovid viiakse läbi sellistes PCR-tsüklites, suureneb soovitud hepatiidi geenide arv geomeetrilises proportsioonis ja ülejäänud geneetilised materjalid toodetakse (moodustatakse) ainult lineaarsel kujul.
  5. Uuringu lõpetamiseks puhastatakse lahus jääk-nukleotiidiosakestest. Need eraldatakse elektroforeesiga, eraldades DNA ahela molekulmassi parameetrid. Sellised hepatiit C testid, kasutades PCR-i, võimaldavad teil määrata, kas proovis on olemas soovitud viiruse geenid või mitte.

Selle testi eeliseks on PCR reaktsiooni väga kõrge künnis. Ideaaljuhul on sellise diagnoosi tehnika vaja kogu proovi jaoks ainult ühe viiruse genoomi kohta.

Lisaks on see PCR täiesti spetsiifiline. Igas geenis on unikaalne nukleotiidide järjestus, mis nagu sõrmejälge ei saa kuidagi korrata. Selle C-hepatiidi analüüsi jaoks sünteesitakse praimerid nii, et need vastavad absoluutselt soovitud geenide ainulaadsetele piirkondadele, mida pole teisel järjestusel.

See meetod võimaldab teil analüüsida ka hepatiit C ja määrata need, aidates lõpliku diagnoosi kindlaks teha.

Selline laborianalüüs annab rohkem teavet kui üksnes C-hepatiidi viiruse või muu tüüpi RNA olemasolu või puudumise vereproovides. Radioaktiivse kiirguse parameetri määramisel on võimalik kindlaks teha, kui palju soovitud geneetiline materjal oli algselt uuritavas proovis. See võimaldab teil määrata nn viiruse koormuse parameetri - hepatiidi RNA osakeste kontsentratsiooni teatud koguses.

PCR-i kvalitatiivne analüüs

See analüüs võimaldab määrata hepatiit B viiruse esinemist vereproovides. See peaks toimuma kõigile inimestele, kellel on leitud hepatiidi antikehasid.

Selliste uuringute tulemusel võib olla ainult kaks väärtust:

  • "Tuvastatud". Sellist positiivset testi tulemust tõlgendatakse järgmiselt: hepatiidi viiruse RNA bioloogilise materjali fragmentide analüüsitud proovist leiti. Sellest järeldub, et patsiendil oli see viirus nakatunud. See võib viidata sellele, et patogeeni hepatiit korvab kehas ja nakatab uusi rakke, hävitab maksa.
  • "Ei leitud." See tulemus näitab, et selles laboris analüüsitud proovis ei leitud C-hepatiidi viirusele spetsiifilisi RNA fragmente. Samuti on olemas võimalus, et patogeeni viiruse RNA kontsentratsioon uuritavas proovis oli nii väike, et test ei suutnud seda tuvastada.. Sellistel juhtudel öeldakse, et kontsentratsioonitase on analüüsi tundlikkuse läve madalam.

Selline test võib olla valepositiivne või valenegatiivne ka biomaterjali saastumise tõttu või analüüside jaoks vajalike keemiliste komponentidega reageerivate konkreetsete ainete olemasolust proovides.

Tuleb rõhutada, et hepatiit C ägedates faasides võib kvalitatiivne uuring, kasutades PCR meetodit, tuvastada selle RNA pärast 1-2 nädala möödumist organismi nakatumise hetkest. See tähendab, et haigust saab tuvastada juba ammu enne selle väliste sümptomite tekkimist või kehas hepatiidi antikehade ilmnemist.

Vereproovide võtmine (veenist) viiakse eelistatult läbi tühja kõhuga.

PCR kvantitatiivne analüüs

Selle analüüsi abil määratakse patsiendi hepatiidi viiruse kontsentratsiooni tase (viiruse koormus). Selline test tuleb läbi viia, et hinnata viiruse RNA kogust teatud koguse ühiku kohta.

Selle meetodi kohaselt läbi viidud hepatiit C-de desinfitseerimiskatsed võivad saada järgmisi tulemusi:

  • Kvantitatiivne näitaja (joonistel)

Viiruse kontsentratsioon (kogus) on esitatud arvuliselt. Selleks kasutatakse erinevaid mõõtühikuid: kas IU / ml (rahvusvaheline ühik milliliitri kohta) või koopiad / ml (viiruse RNA koopiate arv milliliitri kohta). Keskmiselt vastab 1 RÜ / ml 4 koopiat / ml, kuna erinevatel katsesüsteemidel on selliste ühikute jaoks erinevad ümberarvestuskoefitsiendid.

Madalad viiruse koormuse väärtused loetakse alla 400 000 RÜ / ml ja 8 000 000 RÜ / ml on kõrge.

Selline kvantitatiivne hindamine võimaldab kindlaks teha patsiendi haiguse (nakkusohu) nakkushaiguse taset. Mida rohkem see analüüsinäitaja on, seda suurem on patogeeni ülekandmise tõenäosus teistele inimestele (seksuaalse kontakti kaudu või vertikaalselt).

See kohtuotsus tähendab, et kvantitatiivne meetod ei suuda tuvastada hepatiidi RNA-d, kuid viirus ise on organismis olemas ainult väga madalates kontsentratsioonides. Seda kinnitas PCR täiendav kvalitatiivne analüüs ja selle positiivne tulemus kinnitab hepatiidi esinemise fakti.

  • Tulemust ei tuvastatud

    Analüüsi positiivne tõlgendamine näitab, et vereproovis sisalduv kvantitatiivne test ei suutnud tuvastada C-hepatiidi viiruse spetsiifilisi RNA osakesi.

  • Kvantitatiivne PCR analüüs, mida tehakse erinevatel viirusevastase ravi perioodidel (1., 4., 12. ja 24. nädal), võimaldab meil hinnata ravi efektiivsust ja teha vajalikud muudatused.

    Analüüsi spetsiifilisus

    See test tuleb läbi viia hepatiidi C erinevate genotüüpide kindlaksmääramiseks. Praegu on selle patogeeni ja selle paljudest alatüüpidest 11 genotüüpi. Meie riigis on I, II ja III liigi hepatiidi C genotüübid tavalised. Laboratooriumides on nad võimelised tuvastama nende liikide erinevaid alatüüpe: 1a, 1b, 2a, 2b või 3, 4, 5, 6 genotüübid koos erinevate alamtüüpide modifikatsioonidega. Kõigi nende hepatiidide korral on määramise eripära 100%.

    Genotüübi muutmise täpsustamine võimaldab valida sobiva ravi. Kindlat tüüpi genotüübi esinemine patsiendil ei viita sellele, et haigus on lihtsam või keerukam, need on ainult hepatiidi viiruse sortid ja mitte enam.

    Nendel juhtudel, kui viiruse genotüüpi ei saa laboris eraldada, võib tulemuseks olla: "pole kirjutatud. Uuriti genotüüpe: sellised-ja-sellised "(näiteks 1a, 2c, 3av). See dekodeerimine näitab, et selles laboris ei olnud sobivaid reagente, mis võiksid kindlaks määrata hepatiidi viiruse genotüübi. Uuringut testiti viiruste, loendi andmetega, kuid nende vastavust RNA proovidega ei tuvastatud.

    Lõpliku diagnoosi tegemiseks on ainult üks tüüpi analüüs ebapiisav. Iga katse võib anda valepositiivse tulemuse. Hepatiidi tüübi ja selle infektsiooni kahjustuse ulatuse täpseks määramiseks viige läbi põhjalik uuring. Selleks tehakse maksa biopsia ja testitakse ensüüme: ALT, ASAT, samuti leeliseline fosfataas ja LDH. Samuti võib läbi viia bilirubiini ja protrombiini indeksi analüüsi.

    Ainult selliste testide ja laboratoorsete testide kogum, milles on üldiselt analüüsitud patsiendi seisundit, aitab määrata kindlaks hepatiidi esinemist kehas, selle vormis ja raskusastmest. Nende põhjal saab arst määrata edasise ravi ja teha patsiendi jaoks võimalik prognoos.

    Mis on hepatiit C RNA?

    Hepatiit C viiruse RNA uuring on kõige olulisem protseduur, mis võimaldab teil täpselt määrata patsientide kestust ja ravimeetodeid. Haiguse diagnoos koosneb mitmest erinevast vereanalüüsist, näiteks:

    • hepatiit C markerid (anti-HCV);
    • hepatiit C viiruse RNA (HCV RNA) määramine.

    Esimene uuring tehti esimesel hepatiidi kahtlusel. Teine võimalus on kõige olulisem HCV RNA ravis, nii et seda on üksikasjalikumalt käsitletud.

    Mis on viirushepatiit C?

    Viiruse hepatiit C või HCV on nakkushaigus, mis mõjutab maksa. Viirus nakatub läbi vere. Te võite nakatuda, tehes vereülekannet, kui meditsiiniseadmete steriliseerimise eeskirju ei järgita. Vähem sagedamini esineb juhtumeid, kui haigus saadakse sugulisel teel või rase emalt lootele. Hepatiit C võib olla kahte tüüpi.

    Krooniline hepatiit C on kõige ohtlikum. See on haigus, mis võib kesta kogu elu. See põhjustab tõsiseid probleeme maksatalitluse, nagu tsirroos või vähk. 70-90% nakatunud inimestest muutub haigus krooniliseks.

    Kõige olulisem C-hepatiidi oht on see, et see toimub salaja, ilma ikteriliste märkideta. Sel juhul kaebavad kõige sagedamini palavik, iiveldus ja oksendamine, füüsiline nõrkus, väsimus, isutus ja kehakaal. Samal ajal leiab ta pahatahtlikku degeneratsiooni takskoe väikese kõvenemise taustal üsna sageli. Sel põhjusel nimetatakse C-hepatiidi tihtipeale "ajapommi" või "kangekaelse tapjana".

    Haiguse teine ​​tunnus on selle väga aeglane areng, mida hinnatakse kümneid aastaid.

    Reeglina ei tunne nakatunud inimesed mingeid sümptomeid ja ei tea nende tegelikust seisundist. Tihti saab haigust tuvastada ainult siis, kui pöördute mõne teise isiku arsti poole.

    Riski hulka kuuluvad:

    • lapsed, kes said oma emadest C-hepatiidi viiruse;
    • sõltlased;
    • inimesed, kes läbisid kehaosi või tätoveerisid mittesteriilsete vahenditega;
    • doonorvere või elundite saamine (kuni 1992. aastani, kui hemodialüüsi ei tehtud);
    • HIV nakatunud inimesed;
    • meditsiinitöötajad, kes puutuvad kokku nakatunud patsientidega.

    Hepatiidi C RNA määramine

    Hepatiit C viiruse RNA määratlus, mida nimetatakse ka C-hepatiidi PCRiks, on bioloogilise materjali (veri) uuring, mida saab kasutada hepatiidi viiruse genoomsete ainete otsese esinemise tuvastamiseks organismis (ükski viirus on üksiku RNA tükk).

    Peamine katsemeetod on PCR või polümeraasi ahelreaktsiooni meetod.

    HCV RNA jaoks on olemas kahte tüüpi vereanalüüsid:

    Kvaliteedikontroll

    Kvalitatiivse analüüsi tegemine võimaldab kindlaks teha, kas viirus on veres. Kõik patsiendid, kellel on leitud C-hepatiidi antikehad, peavad selle testi läbima. Selle tulemuste põhjal saate 2 vastust: "olemas" või "puudub" viirus. Positiivse testitulemusega (tuvastatud) saab hinnata viiruse aktiivset reproduktsiooni, mis nakatab maksas terveid rakke.

    Kõrgekvaliteedilise PCR-iga läbiviidud test on kohandatud spetsiifilise tundlikkusega vahemikus 10 kuni 500 RÜ / ml. Kui hepatiidi viirus avastatakse veres, mille konkreetne sisaldus on väiksem kui 10 RÜ / ml, võib viiruse tuvastamine muutuda võimatuks. Vähese spetsiifilise viiruse sisaldus on täheldatud patsientide seas, kellel on välja töötatud viirusevastane ravi. Seepärast on oluline, et meditsiinilise süsteemi tundlikkus oleks kõrge, et diagnoosida ja määrata polümeraasi ahelreaktsiooni kvalitatiivne tulemus.

    Sageli viiakse C-hepatiidi polümeraasi ahelreaktsioon kohe pärast vastavate antikehade leidmist. Järgmised testid viirusevastase ravikuuri ajal viiakse läbi 4., 12. ja 24. nädalal. Ja pärast HTP lõpetamist tehakse veel 24 nädalat pärast analüüsi. Siis - kord aastas.

    Kvantitatiivne test

    PCR-RNA kvantitatiivne analüüs, mida mõnikord nimetatakse viiruse koormuseks, määrab kindlaks viiruse kontsentratsiooni (spetsiifiline sisaldus) veres. Teisisõnu, viiruslik koormus on defineeritud teatud viirusliku RNA kogusena, mis võib olla teatud koguses verd (tavaliselt on 1 ml, mis on võrdne 1 cm kuubikuga). Katse tulemuste ühikud on rahvusvahelised standardseadmed, mis on jagatud ühe milliliitri (RÜ / ml). Viiruse sisu tundub mõnikord erinevalt, see sõltub laboratooriumidest, kus uurimistööd läbi viiakse. Hepatiidi C puhul kasutatakse kvantitatiivselt mõnikord mõnda väärtust, näiteks koopiaid / ml.

    Peate mõistma, et C-hepatiidi raskusastme puudumine selle tüve kontsentratsioonis veres ei sõltu.

    Kontrollige viiruse laadimist, et saaksite määrata haiguse nakkushaiguse määra. Seega võib viirusega nakatumise oht suureneda hepatiidi kontsentratsiooni tõusuga veres. Lisaks vähendab viiruse kõrge sisaldus ravi mõju. Seetõttu on väike viiruskoormus edukaks raviks väga soodsa tegurina.

    Lisaks sellele on C-hepatiidi katse ja selle kindlaksmääramine PCR-iga olulist rolli haiguse ravi rakendamisel ja ravi edukuse kindlaksmääramisel. Katsetulemuste põhjal on planeeritud rehabilitatsioonikursus. Näiteks, kui hepatiidi viiruse spetsiifiline kontsentratsioon on liiga aeglane, viirusevastane ravi on pikenenud ja vastupidi.

    Tänapäeva meditsiinis arvatakse, et koormus on suurem kui 800000 ME / ml. Üle 10 000 000 ME / ml koormust peetakse kriitiliseks. Kuid erinevatest riikidest pärit ekspertidelt ei ole ikka veel arvamust viiruse koormuse piiride kohta.

    Kvantitatiivse testi sagedus

    Üldjuhul tehakse hepatiidi kvantitatiivne analüüs enne viirusevastast ravi ja 3 kuud pärast meditsiiniliste protseduuride lõppu tehtud ravi kvaliteedi määramiseks.

    Selle tulemusena loetakse kvantitatiivseteks testideks eespool esitatud proovide tulemuste kvantitatiivseks hindamiseks. Selle tulemusel väljastatakse otsus "mõõdetud vahemiku all" või "ei tuvastata veres".

    Kvalitatiivse testi tundlikkuse parameeter on tavaliselt väiksem kui kvantitatiivse analüüsi tundlikkus. "Kadunud" transkript näitab, et mõlemat tüüpi testid ei leidnud viiruse RNA-d. Kui testi indeks oli "mõõdetud vahemikust madalamal" madalam, ei leitud kvantitatiivset tüüpi analüüsi tõenäoliselt hepatiidi RNA-d, kuigi see kinnitab väga väikese spetsiifilise sisaldusega viiruse olemasolu.

    C-hepatiit ja selle genotüübid

    Hepatiit C viiruse RNA genotüüpide diagnoosimisel esinevad erinevad C-hepatiidi geneetilised tüübid. Teadust on teada rohkem kui 10 viirusliku genoomi tüüpi, kuid meditsiinipraktikal on piisav, et välja selgitada mitmed genotüübid, millel on selles piirkonnas suurim osa. Geneetilise tüübi kindlaksmääramine mängib olulist rolli ravi ajastamise valimisel, mis on väga vajalik, kui arvestada hepatiidi ravimite suure hulga kõrvaltoimetega.

    Viirusliku hepatiidi C ravimeetodid

    Ainuke tõhus viis hepatiidi viiruse raviks on reeglina kahe ravimiga: interferoon-alfa koos ribaviriiniga. Üksikult ei ole need ravimid sama tõhusad. Ravimite soovitatav annus ja kasutamise aeg tuleks määrata ainult arst ja individuaalselt iga patsiendi jaoks. Nende ravimitega võib ravi kesta võtta 6-12 kuud.

    Täna ei leiutata ravimeid, mis tagavad sajaprotsendilise viiruse taastumise. Õige ravi korral võib patsientide paranemine ulatuda kuni 90% juhtudest.

    Medinfo.club

    Portaal maksa kohta

    HCV kvantitatiivne analüüs ja dekodeerimine

    C-hepatiit on haigus, mis võib paljuneda tervete maksarakkudega ja provotseerida proliferatiivsete haiguste ilmnemist. Kaasaegses maailmas, kui hepatiidi viirus on läbinud teatud mutatsiooni, on inimese immuunsüsteem ohustatud, sest võrreldes infektsiooniga on see tähtsusetu. Samuti väärib märkimist, et mitte kõigil patsientidel ei esine esmakordselt haiguse esimesi tunnuseid, eriti varases staadiumis.

    C-hepatiidi viiruse RNA-analüüs on kvantitatiivne uuring, mille norm on patsiendi veres viiruserakkude esinemise mõõdukas arv. Statistika kohaselt on ligikaudu 31% patsientidest sellest haigusest täielikult ravitud, kui see on algstaadiumis.

    Meditsiinipraktikas märgivad arstid, et 4 miljonit nakatatud sümptomit ja esimest sümptomeid ei esine üldse, kuigi tähelepanuta jäetud hepatiidi vorm võib põhjustada maksatsirroosi või vähki.

    Praegu kontrollitakse "vereülekande" protseduuri ajal seda verd C-hepatiidi viiruse esinemise suhtes, kuna see haigus levib doonorverega.

    Täna on C-hepatiidi ravimid juba maailmas ilmnenud, kusjuures efektiivsus on lähedane 100% -le. Kaasaegne farmaatsiatööstus on loonud ravimeid, mis praktiliselt ei sisalda kõrvaltoimeid. Paljud patsiendid saavad esimesi tulemusi, mis leevendavad sümptomeid ja vähendavad viiruse koormust pärast nädala möödumist. Lisateavet hepatiidi ravimite kohta India tootest leiate meie eraldi artiklist.

    Sofosbuvir Express on osutunud India hepatiit C ravimite transportimise turul. See ettevõte edukalt aitab inimestel haigusest enam kui kaks aastat taastuda. Siit leiate rahulolevate patsientide arvustused ja videod. Nende kontol on rohkem kui 4000 inimest, kes taastunud tänu ostetud ravimitele. Ärge jätke oma tervist kinni, minge www.sofosbuvir-express.com või helistage 8-800-200-59-21

    PCR-uuringute liigid

    PCR (polümeraasi ahelreaktsioon) on kõige kaasaegsem ja efektiivsem viis viiruse geeni ja selle võimaluste uurimiseks. Selline diagnostika on võimeline kindlaks määrama haiguse tüübi ja määrama selle edasise mutatsiooni patsiendi kehas.

    Analüüs viiakse läbi, võttes vere, mis seejärel paigutatakse spetsiaalsetele reagentidele, milles toimub rakkude kloonimine.

    Ühelt lahtrilt selgub kaks ja nii edasi. Selle tulemusena on sadu DNA-d, mille kaudu saate patogeeni diagnoosida ja varakult tuvastada viiruse.

    Seetõttu on PCR jaotatud mitut tüüpi:

    • kvalitatiivne analüüs - tunneb ära geenide infektsiooni veres. Kui patsiendi kvalitatiivse analüüsi ajal kinnitatakse haigust, siis tuleb nakkuse ulatuse kindlakstegemiseks läbi viia kvantitatiivne analüüs. Selle diagnoosi tulemusena kirjutavad eksperdid "avastatud / mitte tuvastatud". "Tuvastatud" - ütleb, et haigus esineb kehas ja selle RNA on juba identifitseeritud. "Ei leitud" - näitab viiruse geeni puudumist proovis, see tähendab, et hepatiidi RNA puudub. Kuid arstid soovitavad uuesti testida 10 päeva pärast.
    • kvantitatiivne analüüs - määratakse vere infektsiooni geneetilise materjali kogus. Selline diagnoos aitab kindlaks teha haiguse tõsiduse ja kogu kliinilise ajaloo. Sellise analüüsi tulemusena saab kirjutada ainult "Positiivne / negatiivne / kehtetu". "Positiivne" - tähistab nakkavat koormust. Arst määrab haiguse diagnoosimise meetodi, et määrata ravi tõhusus 4, 12, 16 ja 24 nädala jooksul. Kui viiruse indikaator jääb vahemikku 8x10 RÜ / ml, on ravi efektiivne, kui määr on kõrgem, siis ei. "Negatiivne" - nakkusgeeni ei leitud. "Kehtetu" - see juhtub, kui viiruse geen avastati kvalitatiivselt, kuid see ei tuvastatud kvantitatiivse analüüsi käigus. Sarnane on tingimusel, et infektsioonide tase on madalam.

    Erinevused kvalitatiivsel ja kvantitatiivsel analüüsil

    C-hepatiidi viirust diagnoositakse peamiselt kvantitatiivse analüüsi tegemiseks, mille dekodeerimine on vajalik haiguse õigeks tõlgendamiseks. Kuid vaatamata sellele on kvalitatiivsetel ja kvantitatiivsetel diagnostilistel meetoditel erinevused, näiteks: uurimisele määratud roll ja ülesanded - kvalitatiivsed - kinnitavad infektsiooni esinemist pärast viiruse tuvastatud antikehade olemasolu ja kvantitatiivset - sekundaarset meetodit, mis leevendab või kinnitab haigust, et teha õige ja ainus diagnoos.

    Kvantitatiivsete uuringute tõlgendamine

    Pärast diagnoosi saavad tulemust tõlgendada ainult arstid, kuna neid ei tohiks näidetes näidata, vaid sõnades. Statistika järgi on kõige tundlikum proovimaterjal kvantitatiivne PCR. Selleks, et mõista, kas organismis esineb viirus, on vaja mõista ja teada, et hepatiidi C kvantitatiivset analüüsi tõlgendatakse infektsiooni digitaalse nimetuse (standardi) abil:

    Hepatiidi viiruse RNA

    "Hepatiit C viiruse (HVC) geenide identifitseerimine patsiendi veres on selle nakkusliku patoloogia laboratoorse diagnoosi teine ​​etapp. Selle patogeeni tuvastamiseks, millel puudub rakumembraan ja järelikult pinnaantigeenid, kasutatakse polümeraasi ahelreaktsiooni meetodit. Selle meetodi abil määratakse molekul otseselt, kus kogu selle geneetiline teave on kodeeritud - RNA.

    RNA - Ribonukleiinhape koos DNA-ga on osa kõigi elusorganismide rakkudest. C-hepatiidi viirus sisaldab RNA molekuli ja on võimeline selle muteeruma.

    HVC genoomi test on tavaliselt välja kirjutatud pärast üldist, biokeemilist vereanalüüsi ja positiivset vastust antikehadele (anti-HVC).

    Mida see tähendab?

    HVC-vastaste antikehade uurimine on skriinimine, st seda saab kasutada inimeste suurte populatsioonide uurimiseks (arstid, rasedad, haiglahaiged, doonorid, süstivad uimastitarbijad, HIV-nakkusega inimesed). Anti-HVC laboranalüüsi negatiivne tulemus näitab, et patsiendi veres ei tuvastatud viiruse immuunvastust. Sellistel juhtudel saab negatiivset tulemust:

    Kui inimene pole kunagi olnud nakatunud hepatiit C vastu

    Kui laborikatsete süsteemi tundlikkus oli madalam HVC-vastase kontsentratsioonist.

    Kui nakkus tekkis vähem kui 2 kuud tagasi ja HVV-vastane veri ei piisa, et määrata. Kui inimtegurite tõttu on vale negatiivne reaktsioon.

    Kui tulemuseks on see, et patsiendil leiti HVC-vastased antikehad, tähendab see seda, et C-hepatiidi viirus oli uuringu ajal patsiendi kehas või mõni aeg tagasi veres. Anti-HVC-ga positiivse tulemuse korral on vaja täiendavaid laboratoorseid uuringuid, mis tuvastavad patogeeni enda geneetilise materjali, määravad kindlaks tema geenide kontsentratsiooni (viiruse koormus, vireemia) ja genotüübi loomist.

    Hepatiit C viiruse RNA analüüs

    Laboratoorsetes tingimustes võib HVC genoomi tuvastada mitmete uuringute abil:

    hargnenud DNA (p-DNA);

    transkriptsiooni amplifikatsioon (TMA);

    polümeraasi ahelreaktsioon (PCR).

    P-DNA meetod on odav ja hõlbus viis viiruse genoomi avastamiseks paljudes uuritud inimestest. Selle peamine puudus on madal tundlikkus: see näitab HVC ainult siis, kui selle kontsentratsioon ületab 500 RÜ / ml.

    Transkriptsioonilise amplifitseerimise meetod tuvastab seerumis viiruse nukleiinhapped. Analüüsil on suur tundlikkus (5-10 RÜ / ml), kuid see ei ole veel piisavalt integreeritud üldlevinud laboripraktikasse.

    Venemaal PCR-meetod on kõige suurema tundlikkusega (50-60 RÜ / ml) kõige tavalisem ja ligipääsetav laborianalüüs.

    PCR-uuring tehakse igas kliinilises laboris, millel on asjakohane akrediteering. Selle diagnostilise meetodi väga oluline nüanss, mis mõjutab analüüsi tulemust, on laboris kasutatava katsesüsteemi tundlikkus. Näiteks võimaldab diagnostiline tundlikkus 60 RÜ / ml, nagu Invitro Laboratories'is, viirusliku RNA avastamist 3 kuud pärast nakatumist. Katsesüsteemi madalal tundlikkusel ei pruugi patogeeni geene isegi 4 kuud pärast nakatumist avastada.

    Hepatiit C viiruse RNA: PCR-meetod

    PCR-meetodil on mitmeid eeliseid teiste HVC geenide tuvastamisel tehtavate laboratoorsete testide järele:

    kõrge tundlikkus. Meetod võimaldab määrata patogeeni geneetilist materjali isegi selle minimaalse kontsentratsiooniga proovis;

    suur spetsiifilisus. Määrab konkreetse genotüübi viiruse geenide seas erinevate DNA-de ja teiste patogeenide RNA-de, mis võimaldab patogeeni genotüpiseerimist;

    hoidmise kiirus. Patogeeni pika protsessi puudumine lühendab tulemuse saavutamise aega kuni mitu tundi; analüüsi universaalsus.

    Universaalne uurimisprotseduur võimaldab ühe inimese vereproovi samaaegset kasutamist erinevate patogeenide geneetilise materjali avastamiseks. Need eelised võimaldavad pidada PCR-i viirusliku hepatiit C laboratoorsel diagnoosimisel "kullastandardiks" koos anti-HVC ensüümi immunoloogilise testiga.

    PCR on uuring, mida kasutatakse indiviidi veres HVC geenide määramiseks. Uuring koosneb mitmest etapist:

    Biomaterjali proovide võtmine.

    RNA koopiate kontsentratsiooni suurendamine korduvalt valitud proovis.

    Geneetilise materjali avastamine spetsiaalsete katsesüsteemide abil.

    Pärast patsiendi venoosse vere võtmist viiakse läbi kunstlikult HVC geenide mitmekordse replikatsiooni (amplifitseerimine, kopeerimine) protsessi käivitamine.

    Selleks, et mõnel juhul muuta mitu korda tuumamaterjali koos biomaterjaliga. Kui katseklaasis oleva RNA koopiate arv jõuab soovitud väärtusele, viiakse patogeenide tuvastamine läbi spetsiaalse katse diagnostika.

    kvalitatiivne (tuvastab viiruse olemasolu),

    kvantitatiivne (määrab viiruse geenide kontsentratsiooni mahuühiku kohta)

    genotüpiline (määrab patogeeni genotüübi).

    Hepatiit C RNA: kvalitatiivne analüüs

    Kvaliteetse PCR-i ülesanne on kindlaks määrata HVC esinemine esitatud biomaterjalis. See uuring viiakse tavaliselt läbi haiguse diagnoosimise või veo tuvastamiseks. Määrake see pärast HVC-vastase antikeha tuvastamist ELISA-ga.

    Hepatiidi C diagnoosimiseks piisab, kui tuvastada HCV geenimaterjal kvalitatiivselt, st loendamata selle kontsentratsiooni veres. Kvaliteetse PCR-i tulemus võib olla: "RNA tuvastatakse" või "RNA ei tuvastata".

    Meetodi täpsus vastab 95% -le. Samal ajal jõuab testi diagnostika iseenesest täpselt 100% ja laboratoorseteks uuringuteks on alati 5% inimfaktor. Vale negatiivse analüüsi vältimiseks, eriti madala vireemiaga inimestel, on uuringus kasutatud diagnostilise süsteemi kõrge tundlikkus vajalik. Katsesüsteemi tundlikkus ei tohiks olla väiksem kui 60 RÜ / ml.

    Hepatiit C RNA: kvantitatiivne analüüs

    Kvantitatiivne analüüs on ette nähtud, kui peate teadma vireemia taset inimkehas. Selle uuringu tegemise näpunäited on järgmised:

    kõrge kvaliteediga PCR-i positiivne tulemus tingis viiruse antikehade tuvastamise;

    patoloogia faas;

    hepatiidi viiruse koormuse määramine;

    kombineeritud viirusevastaste ravimite valik;

    viroloogilise vastuse jälgimine viirusevastasele ravile;

    ägeda hepatiit C ülemineku tõenäosuse hindamine kroonilisele.

    Analüüsi tulemus väljendatakse IU / ml (rahvusvahelised ühikud 1 ml seerumis) või koopiate / ml (viiruse geenide koopiate arv 1 ml seerumis). Kvantitatiivne PCR ei ole normaalne: tavaliselt ei tohiks tuvastada HVC geeni inimveres. Uuringu tulemusi võrreldakse võrdlusväärtustega, mis on kehtestatud erineva viirusliku koormuse taseme jaoks.

    Seega näitavad näitajad (RÜ / ml):

    alla 4 x 10 x 5 peetakse madalaks vireemiaks;

    alates 4 × 10 * 5 kuni 8 × 10 * 5 - keskmine;

    üle 8 × 10 * 5 - kõrge.

    Rohkem viiruse RNA koopiaid veres, seda agressiivsem haigus ja seda suurem on viiruse ülekandumise risk teistele inimestele. Kuid viiruse koormuse tase pole ainus näitaja, mis mõjutab patoloogia raskust ja patsiendi edasist prognoosimist: samuti on oluline patogeeni genotüüp.

    Õige ravirežiimi määramiseks on vajalik genotüübi määramine. Samuti määrab see kindlaks patsiendi tervise ja elu prognoosi. Näiteks põhjustab viiruse genotüüp 3 sageli maksa fibroosi või maksatsirroosi, võrreldes genotüübi 1 kandjatega.

    C-hepatiit: analüüsid ja transkriptsioon

    RNA C-hepatiidi diagnoosimist ei saa teha ainult PCR-i kvalitatiivse ja / või kvantitatiivse analüüsi tulemustega: HVC määramine ja viiruse koormuse määramine ei ole piisav, et välja pakkuda piisavat viirusevastast ravi. Potentsiaalset patsienti tuleb uurida põhjalikult (kliiniliselt, laboratoorselt, instrumenteeritud), et saada objektiivne pilt patoloogilisest olukorrast. Hepatiidi C diagnoosi tuvastamiseks määrake õigesti uuringute kogum, mille tulemusi saab õigesti arendada ainult arst.

    C-hepatiidi PCR-i kvalitatiivne analüüs

    Hepatiit on tõsine haigus, millel on palju põhjuseid. Selle arengu alus on maksa otsene või kaudne kahjustus. Arvestades selle tähtsust kogu organismi jaoks, saab ainult arvata, kui raske on patoloogia. Käesolevas artiklis uurime üksikasjalikult hepatiidi C kursuse tunnuseid ja laboratoorset diagnoosimist.

    Selle haiguse põhjus on viirusne agens, mis viitab RNA-d sisaldavatele patogeenidele. Sellel on oma eripära - võime muteeruda, st muuta oma struktuuri. Selle tagajärjel põeb infektsioon immuunsüsteemi rünnakust ja põhjustab enamikul juhtudest maksa kroonilist põletikku.

    Võttes arvesse viiruse erinevate alatüüpide olemasolu, peaks ravimite valimine põhinema genotüpiseerimise tulemustel. Vaatamata haiguse ja HCV struktuuri pikaajalisele uuringule ei ole veel võimalik välja töötada spetsiifilist vaktsiini haiguse jaoks.

    Varasema diagnoosimise raskused seisnevad hepatiidi asümptomaatilises suunas, mille tagajärjel viibib inimene arst tsirroosi ajal. Selle haiguse tuvastamiseks on vaja regulaarseid terviseuuringuid. Vere laboratoorsete uuringute abil on võimalik tuvastada HCV-d ja vältida teiste saastumist. Fakt on see, et nakkuse kandja võib pikka aega patoloogiat unustada ja jätkata viiruse edastamist tervetele inimestele.

    Edastamise viisid

    Enamikul juhtudel levib viirus läbi vere, kuna see sisaldab kõige rohkem patogeensete ainete kontsentratsiooni. Seega nakatumine edastatakse:

    • hemodialüüsi teel;
    • nakatunud nõelaga;
    • võitluses, kui nahk on vigastatud, ja vere kokkupuude toimub;
    • vereülekanne (vereülekanne).

    Infektsiooni tõenäosus intiimsuses on ebaoluline, sest sperma ja tupe väljalangemine sisaldavad väheses koguses patogeene. Nakatumise oht on oluliselt suurenenud, rikkudes sellega suguelundite limaskestade terviklikkust. Seda täheldatakse agressiivsel ja anaalseks.

    Mis puudutab vertikaalset edastusviisi, siis seda tehakse tööprotsessis. Loote rinnaga toitmise perioodil ei pruugi patogeen sisestada platsenta embrüost. Loodusliku sünnituse ajal suunatakse patogeenne aine lapsele, kui nahk on vigastatud, kui täheldatakse kokkupuudet emade verega.

    Pärast patogeeni tungimist tervislikule organismile algab antikehade süntees, mis kaitsevad nakkust ja kuuluvad immuunsüsteemi. Neid leidub ELISA esialgses uuringus.

    Patsiendi diagnoosi kinnitamiseks tehakse polümeraasi ahelreaktsioon. See on patogeense toimeaine geneetilise materjali analüüs ja viiruse koormuse määramine.

    Hepatiidi C laboratoorsed diagnoosid

    Laboratoorsed diagnoosid algavad ensüümi immuunanalüüsiga. Selle peamine ülesanne on avastada patogeeni vastu toodetud antikehasid. Selle efektiivsus on peaaegu 95%. Tänu sellele uuringule on viiruse kandja võimalik kindlaks määrata prekliinilises faasis ja saata selle edasiseks uurimiseks.

    ELISA kvalitatiivne analüüs näitab immunoglobuliinide esinemist või puudumist patsiendi veres. Selle tulemus võib olla positiivne või negatiivne. Esimene vastus on saadetud, saadeti järgmine eksam - PCR. Selle hind sõltub reaktiivide ja labori kvaliteedist. Polümeraasi ahelreaktsiooni maksumus võib ulatuda 4000 rubla juurde.

    PCR-funktsioonid

    Kasutades polümeraasi ahelreaktsiooni, võimaldab isegi väike kogus bioloogilist materjali hinnata viiruse koormust veres, see tähendab patogeenide kontsentratsiooni arvutamiseks ühe milliliitri vedeliku kohta.

    PCR-i tulekuga on hepatiidi diagnoos muutunud palju lihtsamaks. Analüüs võimaldab kindlaks teha HCV RNA, et kindlaks teha nakkusprotsessi faas ja viiruse kandja nakkuslikkus.

    Geneetiline diagnoos on mitu liiki:

    1. Hepatiit C PCR-i kvalitatiivne analüüs - kinnitab HCV olemasolu või puudumist isiku veres:
    2. mille abil saate arvutada viiruste kontsentratsiooni ja kindlaks teha haiguse staadium. Tulemuseks on IU / ml või koopiad / ml (olenevalt laborist);
    3. genotüpiseerimine - vajalik HCV genotüübi määramiseks. See on vajalik ravimite täpse valimise jaoks, mis on käesoleval juhul kõige tõhusamad. Analüüs kaudselt näitab patoloogilise protsessi raskust maksas. Seega, patogeeni kolmanda genotüübiga vaadeldakse kõige sagedamini steatoosi, mille aluseks on rasvade kogunemine hepatotsüütides (selle rakkudes). Lisaks sellele mõjutab viiruse tüüp terapeutilise ravikuuri tulemust ja kestust.

    C-hepatiidi PCR-i kvalitatiivne analüüs

    Kõigepealt uuritakse laboratooriumis bioloogilist materjali HCV RNA olemasolu kohta. On oluline meeles pidada, et C-hepatiidi kvalitatiivsel analüüsil on teatav tundlikkus ja seetõttu ei pruugi see alati õige vastuse anda. Sellisel juhul soovitatakse laboratoorne diagnostika uuesti läbi viia, kasutades teisi reaktiive.

    Usaldusväärsete tulemuste saamiseks tuleks kasutada katsesüsteeme, mille tundlikkus on vähemalt 50 RÜ / ml.

    Diagnostiline tulemus võib olla kas "positiivne" või "negatiivne". Kui patogeeni ei leita verest, on uuring lõpule viidud. Kui proovi tuvastatakse patogeenset ainet, siis mõõdetakse viiruse koormus.

    Kui protsessi rikutakse, saadakse valenegatiivne vastus, näiteks aktiivsed komponendid, mis takistavad patogeeni koopiate konstrueerimist keskkonda. Seega ei ole võimalik tõestada verepildi, mistõttu inimese infektsiooni ei diagnoosita.

    Valepositiivseid tulemusi on võimalik saada, kui bioloogilise materjali kogumise toru ja uuringu keskkond on saastunud. Lisaks sellele on sellise analüüsi vastus võimalik segatüüpi infektsioonidega, kui maksa mõjutavad mitmed viirused, näiteks C- ja D-hepatiit.

    Kvalitatiivsete uuringute näitajad

    Arst võib välja kirjutada patsiendi kvalitatiivse uuringu hepatiit C viiruse RNA identifitseerimise kohta:

    • positiivse või kahtlase ensüümi immuunanalüüsi vastuse saamisel;
    • diagnoosi kontrollimiseks;
    • viiruse koormus;
    • haigusseisundi kindlaksmääramine;
    • segainfektsiooni diagnoosimine. C-hepatiit nakatab sageli maksa samaaegselt "D-viirusega";
    • terapeutilise taktika määramine, võttes arvesse põhjustava toimeaine genotüübi;
    • viirusevastaste ravimitega ravi ajal muutuste dünaamika hindamine.

    Polümeraasi ahelreaktsiooni eelised hõlmavad järgmist:

    1. tehnika ülitundlikkus, mis võimaldab tuvastada nakkuste faktilist staadiumi;
    2. patogeeni geneetilise materjali identifitseerimine, mitte selle antikehad;
    3. võimalust luua patogeense toimeaine alamtüüp;
    4. diagnoosimise kiire kiirus, sest see ei nõua toitainekeskkonna materjali külvamist ja piisab spetsiifiliste katsesüsteemide kasutamisest. Isik saab tulemuse 5 tunni pärast;
    5. mitmekülgsus. Analüüs võimaldab kindlaks teha mis tahes geneetilist materjali (RNA, DNA). Seetõttu võib arst kinnitada C-hepatiidi ja teiste haiguste tüüpe (B);
    6. võime tuvastada latentset infektsiooni.

    Kvantitatiivsed uuringud

    Polümeraasi ahelreaktsiooni abil vere uuringus võib arvutada patogeenide arvu fikseeritud bioloogilise materjali koguses. Indikaator on esitatud RÜ / ml kohta. Analüüsi abil on võimalik määrata patsiendi nakatumise määr, kindlaks määrata nakkusprotsessi staadium ja hinnata ka ravimi teraapia efektiivsust.

    PCR põhjal otsustab spetsialist, millised ravimite annused võivad patogeenide paljunemist blokeerida. Lisaks määratakse viirusevastase ravi kestus ja elu prognoos. On oluline meeles pidada, et testimissüsteemidel on kõrge tundlikkus, seega võimaldab meetod kinnitada inimese infektsiooni prekliinilises staadiumis.

    Genotüüpimine

    Võttes arvesse patogeeni võime muteeruda, on selle genotüüp vajalik ravivõtmise taktikaks ja viirusevastaste ravimite valimiseks. Näiteks B-hepatiidi HCV 1 ravi kestab 48 nädalat, kusjuures ainult 60% juhtudest täheldati positiivset suundumust. Genotüübid 2 ja 3 on soodsamad prognoosid. Viirusevastaseid ravimeid on ette nähtud 8 kuud ja nende efektiivsus jõuab 85% -ni.

    Statistika kohaselt on enamikul juhtudel HCV 1, 2 ja 3 registreeritud Vene Föderatsioonis.

    Laboratooriumi testide dekodeerimiseks võib selle vastuse näidata - "pole kirjutatud". See tähendab, et viirus tsirkuleerib patsiendi vereringesüsteemi ja seda ei saa testimissüsteem tunnustada. Antud juhul tehtud analüüsi tulemus näitab, et patogeen ei ole antud geograafilise piirkonna jaoks tüüpiline.

    Kuidas saada usaldusväärseid tulemusi?

    Et kvalitatiivne PCR-uuring PCR-i tuvastamiseks C-hepatiidi tekitaja jaoks näitas õigeid tulemusi, tuleb labori diagnostikat ette valmistada:

    1. vereproovi võtmine toimub tühja kõhuga ja "näljane" tühimik ei tohiks olla lühem kui 8 tundi;
    2. kaks päeva enne uuringut on soovitatav lõpetada alkohoolsete jookide joomine ja loobuda vürtsikastest, rasvunud ja suitsutatud roogadest;
    3. tühistada verehüübimist vähendavaid ravimeid, näiteks hepariini. Kui need ravimid on välja kirjutatud tervislikel põhjustel, peate sellest teatama arstile. Lisaks peab spetsialist olema teadlik teiste ravimite lubamisest, mis võivad mõjutada laboriuuringute tulemusi;
    4. Bioloogilise materjali kogumise eelõhtul ei tohiks füsioterapeutilisi protseduure läbi viia ning neid ei tohiks mõjutada tõsiselt füüsilist koormust.

    Analüüsi tulemusi võib mõjutada mitte ainult veri annetav inimene, vaid ka muud tegurid, nimelt:

    • halva kvaliteediga vereproovi võtmine;
    • bioloogilise materjali transportimise soovituste mittetäitmine;
    • laboritöötajate ebapiisav koolitus;
    • uurimismetoodika mittevastavus;
    • antikoagulantide (hepariini) sisseviimine vereproovi võtmise eel. See rühma ravimid vähendavad hüübimist, aeglustades seega reagentide tööd.

    Erinevates laborites võib diagnostiline vastus veidi erineda, kuid need vead ei mõjuta uuringu lõpptulemust.

    Erilist tähelepanu pööratakse katsesüsteemide tüüpidesse, mida laboris kasutatakse. Tihti eelistatakse kõrge tundlikkusega reaktiive. See on oluline madala viiruskoormusega patsientide jaoks, kuna seda on raske tuvastada.

    Kui tihti tehakse laborikatset?

    Primaarne polümeraasi ahelreaktsioon viiakse läbi inimestel, kes on hepatiidi patogeeni immunoloogiliste analüüside abil avastatud. Sellisel juhul määratakse kindlaks isiku nakatumise fakt ja haiguse staadium. Lisaks võimaldab analüüs analüüsida viiruse alamtüüpi, mis on eriti tähtis ravimite valimisel.

    Järgmine kohustuslike laboratoorsete uuringute periood on 3 kuud viirusevastase ravi algusest peale. Diagnostika võimaldab hinnata ravimite efektiivsust, reguleerida annust või asendada need.

    Lisaks põhilistele testidele võib PCR-i täiendavalt teha 4 ja 24 nädala jooksul alates ravi algusest. Haiguse positiivset prognoosi kinnitab viiruse koormuse langus pärast kolme ravikuumi. Näiteks peaks see vähenema 1 miljonilt RÜ / ml kuni mitusada tuhandeni.

    Kui patogeensete ainete kontsentratsioon veres jääb samal tasemel või veidi suureneb, viitab see viirusevastaste ravimite ebaefektiivsusele ja nõuab nende asendamist. PCR-i kasutamine ravi lõpus on võimalik kinnitada patsiendi taastumist.

    Laboratoorse diagnostika tulemuste korrektseks tõlgendamiseks on vaja konsulteerida hepatoloogide või nakkushaiguste spetsialistiga. Võttes arvesse ELISAs vale vastuse sagedust, kasutatakse analüüsi ainult esialgse sõeluuringu jaoks. Patsiendi kasutatud polümeraasi ahelreaktsiooni põhjalikumaks uurimiseks.

    Kas te arvate endiselt, et hepatiit C ravimine on raske?

    Otsustades asjaolu, et te loete nüüd neid jooni - võit võitluses maksahaiguste vastu pole veel teie poolel... Ja kas olete juba mõelnud interferoonravi? See on arusaadav, sest hepatiit C on väga raske haigus, sest maksa korralik toimimine on tervise ja heaolu võti. Iiveldus ja oksendamine, kollakas või hallikas nahk, mõru maitse suus, tumedad uriinid ja kõhulahtisus... Kõik need sümptomid on teile tuttavad mitte kuulda. Kuid ehk on õige mitte mõjutada mõju, vaid põhjus?

    Tänapäeval on uued põlvkonnad Sofosbuvir ja Daclatsvir kaasaegsed uimastid 97-100% -lt hepatiit C-i raviks. Uued ravimid saab Venemaalt India farmatseutilise hiiglaskonna Zydus Heptiza ametlikust esindajast. Tellitud ravimid toimetatakse kulleriga 4 päeva jooksul, maksmine saabub kättesaamistõendiga. Hankige tasuta konsultatsioon tänapäevaste uimastite kasutamise kohta, samuti saate teada omandamise viiside kohta, saate seda tarnija Zyduse ametlikul veebisaidil Venemaal.

    Hepatiit C PCR uuring: tüübid, näidustused, transkriptsioon

    Viiruse hepatiit C on tõsine haigus, mis tekib maksakahjustusega. Kaheksakümmend protsenti patsientidest muutub see krooniliseks. Viirus levib maksarakkudes - hepatotsüütides - ja põhjustab nende surma. Surnud kude asendatakse sidekoe fookustega, areneb fibroos.

    Mis areng maksa fibroos ei suuda täita oma ülesannet, hakkab tsirroosi, mis on ohtlik selle tüsistused: kasvavat survet värativeeni, seedetrakti verejooks, halvenenud vere hüübimist, vaimseid muutusi tõttu kahjustada aju tuumade mürgiseid aineid.

    Haiguse põhjuseks on viiruse nakatumine Flaviviridae perekonnast, mis kuulub RNA viiruste tüübi hulka. See tähendab, et geneetiline materjal, millega sünteesitakse patogeeni valgud, kodeeritakse ribonukleiinhappemolekulis. Infektsioon toimub vere kaudu, seksuaalselt ja rasedast naisest lootele. Kahjuks võib nakkuse ja antikehade tootmise algusest piisava ajaga edasi liikuda - kahe nädala kuni kuue kuu jooksul. See ei võimalda nakkuse tuvastamist immuunanalüüsi meetodil ja ravi alustamist ravi alustamiseks.

    Mis on PCR-analüüs?

    PCR on molekulaaranalüüsi meetod, mis võimaldab tuvastada patogeeni geneetilist materjali juba esimesel nädalal pärast infektsiooni, kasutades polümeraasi ahelreaktsiooni. Uuringul on kõrge spetsiifilisus, täpsus ja see võimaldab mitte ainult määrata viiruse olemasolu või puudumist, vaid ka selle kontsentratsiooni ja genotüüpi.

    Uuringuks võetakse patsiendi veri, milles võib potentsiaalselt paikneda viiruse RNA. Verele lisatakse praimerid - väikese pikkusega soovitud geeni kunstlikult sünteesitud piirkonnad ja RNA polümeraas on spetsiaalne ensüüm, mis suurendab korduvalt patogeeni geneetilist materjali. Spetsiaalse seadme kasutamisel viiakse läbi mitu kütte- ja jahutustsüklit. Seejärel analüüsitakse materjali ja võrreldakse viiruse tuntud geene, mille põhjal tehakse järeldus infektsiooni esinemise või puudumise kohta.

    C-hepatiidi PCR-analüüsi tüübid

    On olemas kolm tüüpi PCR analüüsi:

    1. PCR-i kvalitatiivne analüüs. Uuringu esimene etapp. See võimaldab tuvastada viiruse geneetilise materjali veres.

  • PCR kvantitatiivne analüüs. Võimaldab määrata viiruse koormuse - patogeeni geneetilise materjali kontsentratsiooni ühes milliliitris veres. See uuring viiakse läbi enne ravikuuri algust ja seejärel esimesel, neljandal, kaheteistkümnendal ja (kui see on pikk) ravi kahekümne neljandal nädalal, et hinnata selle efektiivsust.

  • Genotüüpimine Hepatiidi C põhjustav põhjustab sageli ja kiiresti mutante. Selles viiruse genotüübis leidus planeedil seitse varianti. Venemaal on levinud esimene, teine ​​ja kolmas tüüp. Igal genotüübil on erinev resistentsus ravile, näiteks esimese tüübi ravi efektiivsus on kuuskümmend protsenti, teisel ja kolmandal juhul on see arv kaheksakümmend viis. Seega, selleks, et valida sobivad ravimid ja määrata piisava kestusega ravikuur, on vaja täpselt määrata, millist tüüpi viirust patsient nakatub.
  • C-hepatiidi PCR-analüüsi näited

    PCR uuring määratakse järgmistel juhtudel:

    • kokkupuude haigega, kellel võib nakkust esineda;
    • positiivne ensüümi immuunanalüüs;
    • tsirroosi tunnused: maksa suuruse muutused, põrna suurenemine, nahaaluse venoosse põrnakujulise näo tekkimine;
    • maksakahjustuse sümptomite ilmnemine: valu paremal kõhul, naha kollasus;
    • ALAT ja ASAT aktiivsuse suurenemine vere biokeemilises analüüsis;
    • enne viiruskoormuse määramist ravi alustamiseks;
    • viirusevastase ravi efektiivsuse jälgimine;
    • pärast ravi, et kontrollida relapsi;
    • diagnoositud hepatiit B juuresolekul, et välistada segatüüpi maksakahjustus.

    C-hepatiidi PCR-uuringute selgitus

    Hepatiidi C dekodeerimise PCR-analüüs ja ensüümi immuunanalüüs tuleks teha hepatoloog või nakkushaiguste spetsialist. PCR-i tulemuste analüüsimine on vajalik kombinatsioonis vere biokeemilise analüüsi, biopsia ja ultraheli andmetega. Ainult kvalifitseeritud arst oskab analüüsida uuringute tulemusi ja määrata nende alusel õige ravi.

    Kvalitatiivse analüüsi dekodeerimine.

    Analüüsitud bioloogilises materjalis leiti patogeeni geneetiline materjal. Infektsioon on kinnitatud.

    Infektsioon puudub või patogeeni RNA kogus on tundlikkuse piirist madalam.

    Kvantitatiivse analüüsi dekodeerimine.

    Normaalne tase tervetele inimestele. See tähendab, et uuritavas materjalis ei ole C-hepatiidi RNA-d ega selle kontsentratsioon on uuringu tundlikkuse piirist madalam.

    RNA kontsentratsioon on alla kvantifitseerimise vahemiku. Neid tulemusi tõlgendatakse väga hoolikalt, korreleerige neid teiste uuringute andmetega, sageli uuesti õppige.

    Viirusekoormuse tase antud kontsentratsioonil peetakse madalaks. Tavaliselt tähendab viiruse vähenemine seda, et ravi on edukas.

    Rohkem kui 8 x 10 5 RÜ / ml

    Viirusekoormuse tase antud kontsentratsioonil peetakse kõrgeks.

    Rohkem kui 2,4 * 10 ^ 7 RÜ / ml

    RNA kogus on üle kvantifitseerimisvahemiku ülempiiri. Seda tulemust ei saa teha viirusliku koormuse astme kohta. Sellistel juhtudel korratakse katset vereproovi lahjendamisega.

    Genotüübi dekodeerimine.

    Tuvastatud genotüübi tuvastatud RNA

    Biomaterjalis tuvastati teatud genotüübi ja alatüübi C-hepatiidi viirus. Tulemus on kodeeritud rooma numbrite ja ladina tähtedega, näiteks - 1a, 2b. Kokku on seitse genotüüpi ja kuuskümmend seitse alamtüüpi, kuid Venemaal on ainult kolm esimest tüüpi.

    Hepatiit C viiruse RNA avastati

    Venemaal leiti haruldast genotüüpi veres olevat RNA-d, mida ei saa seostada esimese, teise või kolmanda tüübiga. Rohkem teadusuuringuid on vaja.

    See tulemus näitab, et patsient on tervislik või et patogeeni RNA on liiga väike.

    On võimalik, et C-hepatiidi PCR-analüüs on negatiivne ja ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs tuvastab viiruse vastased antikehad. See tähendab, et patsiendil oli äge hepatiit C ja ta taastati iseendale. Umbes 20 infektsiooni juhtumit põhjustab spontaanne taastumine, kui patsiendi organismil on infektsioonile piisavalt vastupanu.

    Kuigi PCR on väga täpne analüüs, võib selle tulemusi moonutada järgmistel juhtudel:

    • vere transporditi laborisse sobimatutesse tingimustesse, temperatuur oli rikutud;
    • biomaterjaliproov oli saastunud;
    • oli veres hepariini ja teiste antikoagulantide jääkide jäljed;
    • Leiti, et uurijad on inhibiitorid - ained, mis aeglustavad või peatavad polümeraasi ahelreaktsiooni.

    PCR-i eelised muude meetodite puhul

    1. Diagnoos alguses. PCR tuvastab põhjustava toimeaine geneetilise materjali. Immunofluorestsentsanalüüsi abil saab määrata ainult immunoglobuliine - aineid, mis organism tekitab infektsiooni suhtes. C-hepatiidi nakatumise korral võib intervall infektsiooni ja immuunvastuse alguse vahel olla mitu nädalat ja kuud, sel ajal on ELISA ebaefektiivne. PCR annab vastuse esimesel nädalal pärast infektsiooni.

  • Väike vea tõenäosus. Uuritavas materjalis määratakse geneetilise materjali pindala, mis on iseloomulik ainult ühele patogeenide tüübile. See kõrvaldab valed tulemused. Kui ELISA-vead on võimalikud, kuna sama tüüpi antikehi saab erinevate viiruste vastu vabastada - neid antikehi nimetatakse ristantikehadeks.

  • Kõrge tundlikkus. PCR võimaldab tuvastada haigusetekitaja RNA isegi minimaalsetes kogustes. See võimaldab tuvastada varjatud nakkusi.
  • Kuidas valmistuda vereannetamiseks PCR-uuringute jaoks

    C-hepatiidi PCR analüüsiks kogutakse venoosse verega verd. Tavaliselt võetakse patsiendi veeni korraga kaks vere osa: esimene saadetakse PCR-ile ja teine ​​ELISA-ga. Seda tehakse selleks, et täpsemalt hinnata, kui palju patsient on nakatunud viirusega ja kuidas immuunsus selle vastu võideldes.

    Tavaliselt peab patsient järgima järgmisi reegleid:

    • hommikul võetakse vereanalüüs;
    • Viimase toidukordi ja vereannetuse vaheline intervall peaks olema kaheksa kuni kümme tundi;
    • kaks või kolm päeva enne analüüsi on vaja loobuda praetud ja rasvases toidus ja alkoholis;
    • 24 tundi enne analüüsi peaks patsient vältima füüsilist koormust: ärge kandke raskusi, ärge minge jõusaali või basseini.

    Seotud Artiklid Hepatiit