Hepatiidi C kvalitatiivne analüüs

Share Tweet Pin it

Jäta kommentaar 7,180

Polümeraasi ahelreaktsiooni kvalitatiivne analüüs - C-hepatiidi PCR-i määramine määrab kindlaks HCV olemasolu või puudumise organismis. Laboratoorsetes tingimustes uuritakse RNA struktuuri, mis sisaldab viirust. Viiruse C avastamise korral on vaja läbi viia ravikuuri, sest maksa tähelepanuta jäetud seisund põhjustab tõsiseid tagajärgi. Kõrgekvaliteetne PCR viiakse läbi ka pärast taastumist, et kinnitada antikehade puudumist. Määratud tavapäraseks kontrollimiseks. PCR (kvalitatiivne), mis põhjustab vereseerumis madalat kontsentratsiooni, ei pruugi midagi tuvastada, kuna diagnostilise süsteemil on oma tundlikkuse piirväärtused. Haiguse esialgse või kerge vormi korral viiakse PCR ultra-diagnostika läbi ultra-tundlikes seadmetes.

Mis on RNA viirus?

C-hepatiidi viiruse (või C-hepatiidi viiruse RNA) termin RNA on maksahaigus ise. Viirus C seostub organismi tervete rakkudega sissetungimise kaudu. Aja jooksul levib kogu keha, on vaja ainult sattuda verdesse. Selle tulemusel tungib patogeen maksa sisse, kaitseb selle rakke ja teeb kõvasti tööd. Maksa rakud (hepatotsüüdid) töötavad selle mõju all, muutuvad ja sellest surevad nad. Mida kauem on viirus C maksas, seda suurem on rakkude arv. Aja jooksul arendada ohtlikke haigusi, mis põhjustavad pahaloomulise degeneratsiooni ja surma.

Maksa infektsioon selle tüüpi viirusega ei pruugi ilmneda väljastpoolt. Paljude aastate või aastakümnete vältel tunneb nakatunud inimene täiesti tervislikku seisundit ja sagedamini näitab patoloogiat ainult juhusliku uurimisega. Hepatiidi veres annetamisel uuritakse osa inimese RNA (ribonukleiinhappe) ahelast, mis on inimese geeni osa (DNA). Laboratoorsete uuringute tulemusi ei tohiks kasutada enesehoolduseks, sest see on ainult näitaja. Täpne pilt ja täiendav diagnoos on arsti poolt paremini kindlaks määratud.

Kui see on valmis: teadustöö näited

HCV kinnitamisel viiakse läbi PCR analüüs (polümeraasi ahelreaktsioon). PCR-uuringud aitavad patogeenset materjali leida RNA struktuuris ja määrata tõhus ravi. Nimetatud järgmistel juhtudel:

  • maksa põletiku tunnuste avastamine;
  • profülaktika uuringud ennetamiseks;
  • kokkupuutuvate inimeste uurimine;
  • segapärase hepatiidi diagnoos (peamise patogeeni kindlaksmääramine);
  • viiruse paljunemisvõime taseme kindlaksmääramine kroonilises vormis;
  • maksa tsirroos;
  • et määrata ettenähtud ravi tõhusus.
Teadusuuringute PCR näeb ette arsti, et määrata kindlaks hepatiidi raviskeemi efektiivsus.

PCR-i kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs on olemas. Kvantitatiivne PCR näitab RNA protsentuaalset suhet viiruse kandjate hulka veres ja kvalitatiivne viiruse olemasolu või puudumine. Kvalitatiivne positiivne näitaja (C-hepatiidi RNA olemasolu) vajab ka kvantitatiivseid uuringuid. Hepatiidi põhjustava toimeaine kõrge kontsentratsioon seondub selle ülekandumise riskiga, teiste nakatamisega. Madal arv on paremini ravitav. RNA viiruste hulk veres ei ole seotud haiguse intensiivsusega. PCR-analüüs tehakse ka interferoonravi puhul, et määrata ravikuuri kestus ja keerukus.

Hepatiit C kõrge kvaliteediga PCR-analüüsi omadused

Polümeraasi ahelreaktsiooni indeksiga kvalitatiivne analüüs määratakse kõikidele patsientidele, kellel on veres C-hepatiidi antikehad. Haigestunud ja taastunud isikud peavad katse uuesti proovima. Soovitatav on läbida B-hepatiidi test, siis positiivse järelduse korral ja hepatiit D. Samuti tuleks kvalitatiivselt analüüsitud reaktsioon viia läbi koos teiste vereanalüüsidega. Analüüsid näitavad täielikku pilti viiruse levikust.

Katsetulemustest nähtub, et ainult C-hepatiidi positiivne test on nähtav või negatiivne, see tähendab viiruse olemasolu või puudumine. Kui väljund on "tuvastatud", siis viirus on ja on endiselt aktiivne. Nimetus "ei tuvastata" tähistab viiruse või selle väikese koguse puudumist. Selle indikaatoriga tuleks meeles pidada, et diagnostiliste süsteemide analüütiline tundlikkus on erinev ja et RNA hepatiit C võib ikkagi veres olla, kuid ei avaldu analüüsis.

Eriti tundlik PCR-meetod ultrahepatiit C avaldub isegi vähesel määral. Kasutatakse fluorestsentsi hübridisatsiooni uuringut, mis on mitu korda kõrgem kui tavalised PCR-süsteemid. Seda meetodit kasutatakse mitmel juhul:

  • kahtlustatud peidetud C-hepatiidi vormid;
  • PCR-diagnostika ei kinnita patogeeni, kuid seal on antikehi;
  • tagasinõudmise korral;
  • varajase nakkuse tuvastamiseks.
Tagasi sisukorra juurde

Dekodeerimisanalüüs

HCV dekodeerimine PCR-iga mõjutab lõplikku otsust diagnoosi andmisel eelkõige ultrametodmeetodil. Selle uuringu peamine puudus on proovi ja materjalide steriilsete tingimuste rangelt kinnipidamine. Väike kõrvalekalle mõnikord annab ebaõigeid analüütilisi järeldusi, raskendab diagnoosi ja järgnevat ravi. Hepatiidi RNA määramiseks PCR-i analüüs ei pruugi alati kindlalt näidata haiguse pilti, mõnikord on mõnikord ebatäpsed ja mõlemas suunas.

Hepatiidi viiruse diagnoosimisel soovitatakse kasutada terviklikku uuringut.

Näitajate norm

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüsi puhul peetakse uuringu tulemuste kohaselt viiruse hepatiit C JgM antikehade puudumist. Samal ajal näitavad seroloogilise analüüsi tulemused, et C-viiruse antikehade esinemine on samuti normaalne. Kvalitatiivne määratlus ei näita haiguse intensiivsust, see näitab ainult R-hepatiidi C põhjustatud agensit. Seda analüüsi korratakse pärast ravi, et kinnitada tegelikku taastumist.

Kõrvalekalded

Kui JgM antikehad esinevad HCV RNA-le, siis see viitab arenevale infektsioonile. Samaaegselt haigus jätkub ägedalt või krooniliselt, avaldub erinevates etappides. Kui antikehade arvu vähenemist registreeritakse, näitab analüüs, et ravitulemused saadi taastumise ajal. Diagnoosides leitakse ainult väga haruldasi valepositiivseid juhtumeid. Neid leidub naistel raseduse ajal ja teiste nakkushaigustega inimestel.

PCR-diagnostika kasutamine

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) molekulaarbioloogias on eksperimentaalne meetod viiruste avastamiseks. See võimaldab märkimisväärselt suurendada teatud nukleiinhappefragmentide (DNA) kontsentratsiooni bioloogilise materjali proovides, mis võimaldab neid (tuvastada) ja lugeda.

Analüüs viiakse läbi järgmiselt. Toru sisestatakse geneetiline materjal (vereproov), mis võib potentsiaalselt sisaldada soovitud geeni. Samuti on paigutatud praimerid - soovitud geeni väikese pikkusega keemiliselt sünteesitud segmendid.

Samuti lisatakse anumasse DNA või RNA polümeraas, see suudab moodustada nukleiinhappeahela, mis on täielikult originaaliga identne. Saadud kompositsioon süstitakse ja moodustatakse neli vaba nukleotiidi - spetsiaalne ehitusmaterjal RNA või DNA jaoks, millest üks sisaldab radioaktiivseid fosforiosakesi.

Saadud segu kuumutatakse temperatuurini 95-96 ° C, mistõttu koondatakse kaks tavaliselt harjunud DNA-heelikku. Siis ravimit jahutatakse, millal praimerid ise kinnitavad viiruse genoomi soovitud piirkonnale, takistades uuesti RNA (või DNA) kahekordse heeliksi moodustumist.

Jahutamise käigus otsib polümeraas vaba nukleotiidide ahelat. Selle ensüümi toimimiseks on vaja nukleotiidide ahelat. Kuna polümeraas libiseb mööda DNA ahelat (nagu köites olev rõngas), pole see võimeline töötama topeltheeliksiga.

Seejärel viiakse läbi korduv küttetsükkel, mille tõttu nukleotiidide ahelad on eraldatud. Kõigil nimetatud PCR-i tsüklitel suureneb hepatiidi soovitud geeni proovis sisalduv kogus eksponentsiaalselt ja ülejäänud geneetiline materjal toodetakse (kasvab) lineaarselt.

Pärast lahuse puhastamist nukleotiidijääkidest ja DNA ahela elektroforeesi eraldamist molekulmassi parameetriga saab hõlpsasti kindlaks teha, kas uuritavas proovis on soovitud geen või mitte.

PCR-i eelised

PCR-i abil tehtavad laboriuuringud võimaldavad saada rohkem teavet kui viiruse RNA olemasolu. Radioaktiivse kiirguse taseme parameetri määramisel on võimalik kindlaks teha, kui palju geneetiline materjal oli algselt uuritavas proovis. Hepatiidi korral määrake viiruse koormuse näitaja.

Selle meetodi teine ​​eelis on CR reaktsiooni tundlikkus väga kõrge. See on palju kõrgem kui klassikalised viiruste avastamise meetodid. Ideaalis piisab, kui soovitud geeni identifitseerimiseks PCR-i jaoks on ainult üks viirus proovis.

Lisaks on PCR täiesti spetsiifiline. Selle praimerid on konstrueeritud nii, et need vastavad täielikult soovitud geenide ainulaadsetele piirkondadele, millele pole teistsugust järjestust. Nagu sõrmejäljed on unikaalsed, on igas geenis unikaalsed nukleotiidjärjestused.

PCR-i kvalitatiivne analüüs

Kvalitatiivne analüüs võimaldab tuvastada ainult viiruse esinemist veres. See test tuleb läbi viia kõikide patsientide puhul, kellel leiti veres C-hepatiidi antikehi. Selle tulemuseks võib olla ainult üks kahest väärtusest: "tuvastatud" või "ei tuvastatud". Tervislikul inimesel ei tohiks norm (kontrollväärtus) olla "avastatud".

Selliste kvalitatiivsete uuringute tulemuste eriline tõlgendamine on järgmine:

  • Tulemuseks on "tuvastatud". See tähendab, et võetud bioloogilise materjali analüüsitavas proovis leiti C-hepatiidi viiruse jaoks spetsiifilise RNA fragmenti. Seega on tõsiasi, et patsient on nakatunud C-hepatiidi viirusega. ja see nakatab sel ajal uusi maksarakke.
  • Tulemuseks on "ei tuvastatud." Selline otsus näitab, et selles laboris saadud bioloogilise materjali analüüsitud proovis ei leitud ühtegi RNA fragmenti, mis on spetsiifiline C-hepatiidi viiruse suhtes. Teise võimalusena oli patogeeni infektsiooni RNA kontsentratsioon selles proovis väiksem kui testi tundlikkuse piirväärtus.

C-hepatiidi viiruse RNA akuutses faasis saab selliseid kvalitatiivseid uuringuid PCR-meetodiga tuvastada juba 1-2 nädala jooksul kohe pärast kehahaiguse nakatumist, st juba ammu enne hepatiidi antikehade tekkimist.

Selle uuringu ebaõigeid katse tulemusi saab järgmiselt:

  • saastunud biomaterjal;
  • hepariini esinemine patsiendi veres;
  • keemiliste või valguliste ainete (inhibiitorite) olemasolu proovis, mis mõjutavad PCRi erinevaid komponente.

PCR-i kvalitatiivse analüüsi läbiviimiseks ei ole patsiendile vaja spetsiaalset ettevalmistust uuringuks teha. Materjalina kasutatakse venoosset verd.

Tulemuste hindamine

Kvaliteetsetel PCR-testidel on teatav tundlikkus ning sõltuvalt uuringute täpsusest ja laboratooriumi varustuse tasemest võib varieeruda vahemikus 10-500 RÜ / ml.

See tähendab, et kui vereproovis esinev viirus on väga madalal kontsentratsioonil (vähem kui selle labori tundlikkuse läviväärtus), siis võib tulemuse määrata patsiendi patsiendil kui mitte tuvastatud. Sellepärast on viirusevastase raviga patsientidel, näiteks vähese viiremia (vähese viiruse kontsentratsiooni) korral PCR-i kvalitatiivse analüüsi läbiviimisel väga oluline teada selle diagnostilise süsteemi tundlikkuse lävi.

Diagnostika süsteemide variandid

Viroloogilise ravivastuse kontrollimiseks soovitatakse kasutada viirusevastaseks raviks diagnostilisi süsteeme, mille tundlikkuse lävi on vähemalt 50 RÜ / ml. Need kriteeriumid on täidetud näiteks Cobas Ampicolori HCV-testi analüsaatoritega (täpsusega kuni 50 RÜ / ml) ja RealBest'i HCV RNA-ga (tundlikkusega 15 RÜ / ml).

Vastavalt Maailma Tervishoiuorganisatsiooni soovitustele on C-hepatiidi lõpliku diagnoosimise kindlakstegemiseks vaja aluseks võtta ainult C-viiruse RNA kolmekordset avastamist patsiendi seerumiproovides teiste hepatiidi markerite sortide puudumisel.

Lisaks PCR meetoditele kasutatakse ka TMA analüüsi (transkriptsiooni amplifikatsiooni meetodit) HCV RNA tuvastamiseks patsientidel. Sellel on parim tundlikkusläve (5-10 RÜ / ml), kuid meie riigis selline katsemeetod pole veel väga levinud.

Avastatavate viiruse modifikatsioonide hulk

Selline C-hepatiidi viiruse RNA esinemise seerumis kvalitatiivne määramine võimaldab kindlaks teha selle viiruse mitu genotüüpi. Praegu teab teaduses rohkem kui kuus selle viiruse genotüüpe, samuti umbes 10 selle haiguse alatüüpi.

Meie riigis on levinud viirused 1, 2, 3 genotüübid. Laboratooriumid võivad avastada järgmisi genotüüpe: 1a ja 1b, 2a, 2b ja 2c, samuti 3, 4, 5a ja 6, sõltumata alatüüpidest. Kõigi viiruse modifikatsioonide puhul on avastamise spetsiifilisus 100%.

PCR kvantitatiivne analüüs

Kvantitatiivse PCR-testi abil määratakse hepatiidi viiruse kontsentratsioon vereproovides (viiruskoormus). See vireemia katse (viiruse kontsentratsioon) võimaldab määrata kindlaksmääratud hulga teatud geneetilise materjali (kõige viirusliku RNA) ühikute arvu. Sellisel juhul määrake selle kontsentratsioon 1 ml, mis vastab 1 cu. vaata

Analüüsi kvantitatiivsed parameetrid on esitatud joonistel, selleks kasutatakse mõõtühikuna rahvusvahelist ühikut (RÜ) milliliitri kohta (ml), mida nimetatakse IU / ml. Praegu mõnedes laborites võib viiruse hulga määrata teistes üksustes: koopiate arv milliliitri kohta on näidatud koopiate / ml.

  • Kuupäevad: C-hepatiidi puhul viiakse selline PCR kvantitatiivne analüüs vahetult enne ravi alustamist. Siis 1., 4., 12. ja 24. nädalal. 12. nädala hindamine on soovituslik, see võimaldab kindlaks määrata ravi efektiivsuse.
  • Analüüsi ettevalmistamine. PCR-i kvantitatiivse analüüsi läbiviimiseks ei ole patsiendile ette nähtud spetsiaalset ettevalmistust uuringuks. Pool tundi enne proovide võtmist ei tohiks suitsetada. Laboratoorsel materjalil kasutatakse venoosset verd.

Tulemuste hindamine

Erinevate laboratoorsete testimissüsteemide jaoks on selle indikaatori jaoks erinevad ümberarvestuskoefitsiendid IU / ml kohta. Keskmiselt võtavad nad konversiooni parameetrit, mille korral 4 koopiat / ml = 1 RÜ / ml. Näiteks kui labor annab tulemuseks PCR analüüsi 2,4 * 10 6 koopiat / ml, siis tuleb see parameeter jagada 4-ks ja saame 6 * 10 5 RÜ / ml.

800 000 RÜ / ml koormust peetakse kõrgeks, mis vastab ligikaudu 3000 000 koopiat / ml. Mõnede autorite arvates vastab madal vireemia kvantitatiivse PCR parameetritele alla 400 000 RÜ / ml.

Kvantitatiivse testi tulemusena ei saa lõplikke tulemusi esitada digitaalse väärtuse kujul, vaid: "mõõtepiirkonna all" või "ei leitud".

  • Hindamine: "allpool mõõtepiirkonda." See viitab sellele, et kvantitatiivne test ei suutnud tuvastada C-hepatiidi viiruslikku RNA-d, kuid viirus ise on organismis väga madala kontsentratsiooniga. Seda tõendab täiendav kvalitatiivne test, mis kinnitab viiruse olemasolu.
  • Hinnang: pole tuvastatud. See tulemus näitab, et viiruse RNA proovis ei leitud kvantitatiivset testi.

Viirusliku koormuse parameeter määrab ennekõike haiguse nakkushaiguse astme, patsiendi "nakkavuse" taseme. Mida kõrgem on patsiendi viiruse kontsentratsioon, seda suurem on tõenäosus selle üle anda teistele inimestele. Näiteks seksuaalvahekorras koos haigete inimestega või vertikaalselt. See kvantitatiivne näitaja aitab samuti kindlaks teha patsiendi ravi efektiivsust.

Kõhukinnisuse kvantitatiivse analüüsi läbiviimine on viirusevastase ravi seisukohast oluline, hinnates selle edukust ja planeerides ravikuuri kestust. Seega võib ravi kestus olla lühenenud, kui organism ravib kiirelt reageerivalt ravi ja madala vireemia tasemega.

Kui kvantitatiivne PCR parameeter aeglaselt väheneb, tuleb viirusevastast ravi pikendada või modifitseerida. Kui viiruse koormuse tase on madal, siis on see teraapia soodne tegur, kuid kui see on kõrgendatud, siis kasutatav ravimeetod on ebaefektiivne ja ravimeid või nende kasutamise viise tuleb muuta.

Diabeet C-hepatiidi PCR-iga

Mitte igaüks ei tea, miks nad kasutavad C-hepatiidi PCR-diagnoosimeetodit. Üks kõige levinumaid haiguste rühmi on seedetrakti nakkushaigused. Kõige sagedamini on mürgis (haavandid), soolestik (koliit, enteriit) ja maks (hepatiit).

Kõigi eespool loetletud elundite seas on suurimaks koormuseks maks. Keha sees on maksa roll äärmiselt oluline:

  1. Peaaegu kõik metaboolsed reaktsioonid leiavad aset maksas (siin moodustuvad kõik olulised komponendid, mis võimaldavad organismil täielikult toimida).
  2. Maks on peamine detoksifitseerimisorgan. Selle abiga (eriti läbi sapi) eemaldatakse paljud substraadid, mis võivad põhjustada joobeseisundit ja põhjustada tõsiseid tagajärgi.

Kahjuks ei jälgi paljud inimesed oma tervist, sest maksa hakkab kannatama. Erinevate etioloogiate (viirusne, toksiline) hepatiit areneb tavaliselt.

Hepatiidi määratlus

Viiruslik hepatiit on oluline koht maksahaiguste seas. Haiguse kulgu tõsidus, ravi keerukus paneb nad selle organi teise olemuse patoloogiasse esikohale.

Kogu hepatiit jaguneb ägedaks ja krooniliseks. A-ja B-hepatiit on klassifitseeritud ägedaks. Kroonilise C-hepatiidi hulgas esineb esmakordselt.

See haigus on põhjustatud C-hepatiidi viirusest. Selle haiguse iseloomulik tunnus on see, et haigus võib kesta pikka aega ilma kliiniliste ilminguteta.

See edastatakse peamiselt vere kaudu. Verejooksuga siseneb viirus maksa, kus see hakkab rakkudes paljunema. Virioni akumuleerumise tagajärjel tekib nakatunud hepatotsüütide hävitamine. Selle tagajärjel hakkavad tootma antikehad, mis hakkavad hepatotsüütide jääke rünnakuma. Selle tulemusena on aja jooksul arenenud maksarakkude kogum, mis süvendab haiguse kulgu.

Kuna haigus on asümptomaatiline või asümptomaatiline ning kliinilised sümptomid ilmnevad ainult märkimisväärse raku kahjustusega, nõuab see haigus diagnoosimeetodite loomist, et tuvastada selle olemasolu ja võtta asjakohaseid meetmeid.

Hepatiidi C diagnoos: kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed analüüsid

Praegu kasutatakse hepatiit C diagnoosimiseks selliste meetoditega nagu maksa biopsia, immunogramm.

Need võimaldavad teil otseselt määrata nakatunud hepatotsüütide (maksa biopsia proov) olemasolu või spetsiifilisi antikehi mõjutatud rakkude vastu (immunogramm). Siiski on olemas meetod, mis võimaldab usaldusväärselt tuvastada viiruse olemasolu. See PCR on polümeraasi ahelreaktsioon.

Selle meetodi olemus seisneb selles, et teatavatel tingimustel tekib RNA ahelate tootmine. See on tingitud asjaolust, et veres on viiruse osakeste fragmendid või biopsia. Kui nendega ühendatakse mõned molekulid keskkonnas, tekib viiruse RNA-le täiendavate ahelate süntees. Järgnevas analüüsis ja võrdluses C-hepatiidi viiruse teadaoleva nukleotiidjärjestusega on võimalik kindlaks teha, kas viirus on organismis ja kas maksakahjustus on olemas.

PCR viiakse läbi pärast spetsiifiliste antikehade tuvastamist veres hepatiidi viiruse suhtes. Pärast testi tulemust tehakse - RNA on "tuvastatud" või "ei tuvastatud". Vahel võib ta öelda, et "pole piisavalt materjali" - antud juhul on vaja hepatiidi C analüüsi korrata.

Kui viirusosakeste arv on väiksem kui nõutav minimaalne kogus, siis võime öelda, et hepatiit puudub ja geneetiline materjal võib minimaalse hulga geneetilisest materjalist mimikri või mõne nukleotiidjärjestusega, mis võib kokku puutuda viirusega, "segamini ajada".

  1. PCRiga võib negatiivset tulemust täheldada, kui veres on tõesti viiruse osakesed, kuid need on nii väikesed (nakatumine toimus hiljuti või analüüsidele eelnes pikaajaline ja intensiivne viirusevastane ravi), et katsesüsteem lihtsalt ei suutnud nende kontsentratsiooni õigesti määrata. RNA - "ei tuvastatud."
  2. Kui PCRil on positiivne tulemus, on veres nii palju viiruse osakesi, et nende arv ületab katsesüsteemi madalama tundlikkuse läve. Sellisel juhul on oht nakkusprotsessi tekkeks (või see on juba üsna kaugele jõudnud). Tavaliselt on viiruse suur hulk juba ravi ja järgneva maksa siirdamise näide.

Mõnikord võib test osutuda vale-positiivseks või vale-negatiivseks.

Hepatiidi vales negatiivne PCR-i tulemus on täheldatav, kui reaktsioonikeskkonnas on mõningaid komponente, mis takistavad viiruse osakeste koopiate moodustumist. Seetõttu ei ole võimalik saada tõelist pilti vere seisundist, mis aitab kaasa viiruse läbimisele ja haiguse progresseerumisele. Hepariini esinemine veres võib samuti mõjutada reaktsiooni (vähendades vere suhtelist viskoossust). Analüüsi väär tõlgendamine on võimalik isegi siis, kui uuritava materjali transportimise ja ladustamise tingimused ei olnud täidetud.

Valepositiivsed tulemused, kui diagnoositakse C-hepatiit, tekitab PCR kõige sagedamini tuberkuloosi või töökeskkonna saastumist. Lisaks sellele võib positiivseid tulemusi täheldada teiste hepatiidi viiruste rühmade juuresolekul (ristreaktsiooni tõttu).

PCR-i kvalitatiivne analüüs hepatiit C avastamiseks

Paljude krüoglobuliinide sisaldus veres mõjutab otseselt ka PCR-i käitumist. Sellepärast on enne C-hepatiidi testi tegemist hädavajalik määrata nende kontsentratsioon veres, et tuvastada tulemuse moonutamine eelnevalt ja vältida selle tekkimist.

Pärast neid katseid selgub, kas veres on viirusosakesed. Nende määramisel on soovitatav kohe alustada viirusevastast ravi, et protsessi progresseerumist aeglustada. Erinevalt B-hepatiidist ei ole C-hepatiidi raviks täielikku ravi; haigus läheb ainult varjatud staadiumisse ja hakkab kulgema aeglasemalt. Maksakahjustus on paratamatu. Protsessi viimasel etapil, kui maks ei suuda enam funktsiooni toime tulla, võib see olla vajalik selle siirdamiseks.

Ravi toimub peamiselt kahel ravimil - interferoonil ja ribaviriinil.

Tõestasid oma efektiivsust hepatotsüütide lagunemise protsessi aeglustamisel. Lisaks sellele on infusioonravi ette nähtud maksa töö hõlbustamiseks.

Kõik patsiendid, kellel on veres leiduva viiruse osakeste arvu suurenemine, registreeritakse tingimata hepatoloogiga. Mitu korda aastas on soovitatav läbi viia ennetav kontroll, et teha kindlaks protsessi progressioon ja siirdamise indikaatorite õigeaegne tuvastamine. Lisaks on võimalik hepatoprotektoreid kasutada, kuigi arstide arvamused erinevad mõnevõrra. Mõned usuvad, et need ravimid võimaldavad teil protsessi peatada ja kaitsta endiselt kahjustamata hepatotsüüte; teised on veendunud, et nende võtmine pole mõtet ja intensiivne viirusevastane ravi tuleb läbi viia.

Seega kuulub C-hepatiit haiguste kategooriasse, mille tuvastamisel esineb mõningaid raskusi. Diagnostikameetodite parandamine ja õigeaegsed ennetavad uuringud vähendavad selle haiguse esinemist. Oluline on selle haiguse ennetamine. Vältida tuleks kontakti verega, keelduda ravimite võtmisest, ainult siis, kui haigus likvideeritakse. Ennetuse ja ravi peamine eesmärk on patsiendi teadlik suhtumine oma tervisele.

PCR ei tuvastanud C-hepatiidi

C-hepatiidi PCR-analüüs on veenisisene vereproov, et määrata hepatiidi RNA viirus selles geneetilises tasemes. Analüüs sai oma nime lähtuvalt uurimismeetodist.

PCR on polümeraasi ahelreaktsioon, mida kasutatakse seerumi C-hepatiidi olemasolu kindlakstegemiseks. Tulemus võib olla positiivne ja negatiivne.

PCR-meetodi eelised

Sellel diagnostilisel meetodil on järgmised eelised:

  1. PCR-meetod võimaldab määrata järgmised tulemused:
    • RNA viiruse olemasolu;
    • kiirguse aste;
    • originaal geneetiline teave;
    • geneetiliste andmete unikaalsus ja ainulaadsus.
  2. Võite kasutada kõiki vajalikke kliinilisi materjale:
    • veri;
    • plasma;
    • uriin;
    • kehavedelikud ja väljaheidet;
    • röga ja teised.
  3. Erinevalt teistest proovidest saate üheaegselt määrata rohkem kui ühe mikroorganismi veres.
  4. Tulemuste saamine 24 tunni jooksul.
  5. Analüüsimise säilitamise ja transportimise lihtsustatud meetodid, patogeenid määratakse isegi surnud keskkonnas.
  6. PCR-i unikaalsus võimaldab tuvastada teatavaid mikroorganisme, mis ei kuulu ühegi teise proovi suhtes.
  7. Reaktiivide tundlikkus on kõrge, katse on kõige täpsem sellisena.

PCR kvalitatiivse analüüsi omadused

Kvalitatiivne test viiakse läbi, et määrata viiruse olemasolu veres ja saada negatiivset või positiivset tulemust.

Seda tüüpi diagnoosi näide on patsiendi kehas hepatiit C antikehade tuvastamine.

Võimalikud tulemused:

  • tuvastatud (positiivne);
  • pole tuvastatud (negatiivne).

Kvaliteedikontroll ei sobi patsientidele, kellel on väga väike viiruse sisaldus veres, seega on see teatud tundlikkus.

C-hepatiidi viiruse tuvastamine võib tekkida mõne nädala jooksul pärast organismi nakatamist isegi selle patogeeni antikehade puudumisel. See tulemus näitab hepatiit C iseloomuliku RNA fragmendi olemasolu organismis ja veregrupis.

Patsienti peetakse nakatunud selle viirusega ja leiab veelgi patogeensete rakkude levikut organismis.

Tulemus "ei tuvastatud"

See suvand näitab, et katsetatava bioloogilise materjali proovis ei ole C-hepatiidi suhtes spetsiifilisi RNA fragmente. See on negatiivne tulemus.

Katse tundlikkus ei näita RNA fragmentide vähest sisaldust, seega ei ole "tuvastatud" tulemus alati usutav.

Tulemuste tõlgendamise tunnused

Tulemuste tõlgendamise peamine omadus on PCR-meetodi läve tundlikkus.

See sõltub järgmistest näitajatest:

  • uuringu täpsus;
  • kasutatava seadme tüüp ja kvaliteet.

Märgitakse, et tundlikkus võib varieeruda vahemikus 10-500 RÜ / ml. Sellest järeldub, et kui uuritava patsiendi kehas esineb viirus kontsentratsioonis vähem kui 10 RÜ / ml, näitab test tulemust "ei leitud". Kuid see ei tähenda, et patogeen on täiesti puudulik.

Diagnostika süsteemide variandid

Praegu on diagnostiliste süsteemide jaoks järgmised valikud:

  1. Kui viirusevastane ravi patsient võtab vere, tuleb kasutada diagnostilisi süsteeme, mille tundlikkus on vähemalt 50 RÜ / ml. Selleks kasutatakse järgmisi analüsaatoreid:
    • Cobas Ampicolor HCV-test;
    • RealBest HCV RNA.
  2. C-hepatiidi lõpliku diagnoosimise tagamiseks on vaja RNA viirust tuvastada kolme erineva bioloogilise materjali proovis. Neid soovitusi koostab Maailma Terviseorganisatsioon. Kui tulemus on kolm korda negatiivne, ei kinnitata diagnoosi.
  3. Praegu on lisaks PCR-meetodile veel täpsem test, mida nimetatakse TMA-le (transkriptsioonilise võimendamise meetod). Selle tundlikkuse tase on palju kõrgem kui teistes diagnoosimeetodites.

Avastatavate viiruse modifikatsioonide hulk

Geneetilise arengu staadiumis on teada viiruse modifitseerimise mitut tüüpi ja variante.

Laboratoorne diagnostika meie riigis absoluutne täpsus võib määrata järgmised genotüübid:

PCR kvantitatiivse analüüsi tunnused

Kvantitatiivne analüüs on C-hepatiidi viiruse määratlus inimkehas. Uuringu kestel määratakse lähteaine RNA ja viiruse koormus PCR abil. Vastasel juhul võime öelda, et test võimaldab teil tuvastada, kui palju viirusrakke on bioloogilises vedelikus. Selle uuringu puhul kasutatakse ainult venoosset verd. Spetsiifilist katse ettevalmistust ei ole.

Kvantitatiivne analüüs võimaldab jälgida juba alustatud ravi etappi ja hinnata selle efektiivsust. Hindamiseks võetakse katseandmeid enne terapeutilist sekkumist ja selle ajal. Saadud tulemuste abil on võimalik ennustada haiguse kulgu.

Valitud ravimeetodi edukus pärast 3 kuud peaks RNA kogust mitu korda vähenema. Vastavalt soovitustele viiakse kvantitatiivne analüüs läbi ühe, seejärel kolme ja kuue kuu järel. Viimane ravi tulemuse tulemus peaks olema negatiivne.

Kvantitatiivse PCR-testi tulemused

Meie riigis on kvantitatiivse PCR-testi tulemusena hinnata kahte võimalust:

  • koopiate arv bioloogilise vedeliku milliliitri kohta;
  • rahvusvaheliste ühikute arv milliliitri kohta.

Rahvusvaheliste üksuste saamiseks jagatakse eksemplaride arv 4-ga.

On kaks koormust või vireemiat:

  • kõrge PCRiga üle 800 000 RÜ / ml;
  • madal PCRiga alla 400 000 RÜ / ml.

Kvantitatiivse testi tulemus annab kaks võimalust:

  • "Mõõtepiirkonna all";
  • "Ei leitud" (negatiivne).

Hinnang: "mõõtepiiri all"

Selline järeldus tehakse siis, kui kvantitatiivne RNA test ei tuvasta rakkude lähtematerjalis C-hepatiidi põhjuslikku ainet, kuid viirus on endiselt veres. Analüüsi usaldusväärsust kinnitab kvalitatiivne meetod, kuna kvantitatiivse testi tundlikkuse künnis ei pruugi avastada patogeeni väikseid väärtusi ja kontsentratsioone.

Hinnang: "ei tuvastatud"

Selline järeldus tehakse siis, kui diagnoosi ajal lähtematerjalis avastatud hepatiidi C RNA viiruseid ei leitud. See on negatiivne tulemus.

Kvantitatiivse PCR-testi analüüsi tulemuste tõlgendamine

Kasutades viiruskoormuse indikaatorit, määrake:

  • haiguse hooletuse määr;
  • kuidas on patsient nakkav;
  • viirusevastase ravi efektiivsus.

Mida kõrgem on C-hepatiidi viiruse tase kehas, seda ohtlikum on patsient teistele inimestele ja tema haigus on progressiivsem.

Hepatiit C PCR on oluline diagnostiline meetod, eriti terapeutiliste sekkumiste ajal. Tänu saadud negatiivsetele või positiivsetele tulemustele on võimalik hinnata nende efektiivsust, täielikult patsiendi raviks või ravi kestuse vähendamiseks.

Autor: Petrunina Svetlana Sergeevna,
intensiivravi osakonna õde
spetsialiseerumine - äge mürgitus, elustamine,
spetsiaalselt saidile moizhivot.ru

Kasulikud videod polümeraasi ahelreaktsiooni kohta

Gastroenteroloogid teie linnas

Vali linn:

Polümeraasi ahelreaktsiooni kvalitatiivne analüüs - C-hepatiidi PCR-i määramine määrab kindlaks HCV olemasolu või puudumise organismis. Laboratoorsetes tingimustes uuritakse RNA struktuuri, mis sisaldab viirust. Viiruse C avastamise korral on vaja läbi viia ravikuuri, sest maksa tähelepanuta jäetud seisund põhjustab tõsiseid tagajärgi. Kõrgekvaliteetne PCR viiakse läbi ka pärast taastumist, et kinnitada antikehade puudumist. Määratud tavapäraseks kontrollimiseks. PCR (kvalitatiivne), mis põhjustab vereseerumis madalat kontsentratsiooni, ei pruugi midagi tuvastada, kuna diagnostilise süsteemil on oma tundlikkuse piirväärtused. Haiguse esialgse või kerge vormi korral viiakse PCR ultra-diagnostika läbi ultra-tundlikes seadmetes.

Mis on RNA viirus?

C-hepatiidi viiruse (või C-hepatiidi viiruse RNA) termin RNA on maksahaigus ise. Viirus C seostub organismi tervete rakkudega sissetungimise kaudu. Aja jooksul levib kogu keha, on vaja ainult sattuda verdesse. Selle tulemusel tungib patogeen maksa sisse, kaitseb selle rakke ja teeb kõvasti tööd. Maksa rakud (hepatotsüüdid) töötavad selle mõju all, muutuvad ja sellest surevad nad. Mida kauem on viirus C maksas, seda suurem on rakkude arv. Aja jooksul arendada ohtlikke haigusi, mis põhjustavad pahaloomulise degeneratsiooni ja surma.

Maksa infektsioon selle tüüpi viirusega ei pruugi ilmneda väljastpoolt. Paljude aastate või aastakümnete vältel tunneb nakatunud inimene täiesti tervislikku seisundit ja sagedamini näitab patoloogiat ainult juhusliku uurimisega. Hepatiidi veres annetamisel uuritakse osa inimese RNA (ribonukleiinhappe) ahelast, mis on inimese geeni osa (DNA). Laboratoorsete uuringute tulemusi ei tohiks kasutada enesehoolduseks, sest see on ainult näitaja. Täpne pilt ja täiendav diagnoos on arsti poolt paremini kindlaks määratud.

Kui see on valmis: teadustöö näited

HCV kinnitamisel viiakse läbi PCR analüüs (polümeraasi ahelreaktsioon). PCR-uuringud aitavad patogeenset materjali leida RNA struktuuris ja määrata tõhus ravi. Nimetatud järgmistel juhtudel:

  • maksa põletiku tunnuste avastamine;
  • profülaktika uuringud ennetamiseks;
  • kokkupuutuvate inimeste uurimine;
  • segapärase hepatiidi diagnoos (peamise patogeeni kindlaksmääramine);
  • viiruse paljunemisvõime taseme kindlaksmääramine kroonilises vormis;
  • maksa tsirroos;
  • et määrata ettenähtud ravi tõhusus.

Teadusuuringute PCR näeb ette arsti, et määrata kindlaks hepatiidi raviskeemi efektiivsus.

PCR-i kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs on olemas. Kvantitatiivne PCR näitab RNA protsentuaalset suhet viiruse kandjate hulka veres ja kvalitatiivne viiruse olemasolu või puudumine. Kvalitatiivne positiivne näitaja (C-hepatiidi RNA olemasolu) vajab ka kvantitatiivseid uuringuid. Hepatiidi põhjustava toimeaine kõrge kontsentratsioon seondub selle ülekandumise riskiga, teiste nakatamisega. Madal arv on paremini ravitav. RNA viiruste hulk veres ei ole seotud haiguse intensiivsusega. PCR-analüüs tehakse ka interferoonravi puhul, et määrata ravikuuri kestus ja keerukus.

Hepatiit C kõrge kvaliteediga PCR-analüüsi omadused

Polümeraasi ahelreaktsiooni indeksiga kvalitatiivne analüüs määratakse kõikidele patsientidele, kellel on veres C-hepatiidi antikehad. Haigestunud ja taastunud isikud peavad katse uuesti proovima. Soovitatav on läbida B-hepatiidi test, siis positiivse järelduse korral ja hepatiit D. Samuti tuleks kvalitatiivselt analüüsitud reaktsioon viia läbi koos teiste vereanalüüsidega. Analüüsid näitavad täielikku pilti viiruse levikust.

Katsetulemustest nähtub, et ainult C-hepatiidi positiivne test on nähtav või negatiivne, see tähendab viiruse olemasolu või puudumine. Kui väljund on "tuvastatud", siis viirus on ja on endiselt aktiivne. Nimetus "ei tuvastata" tähistab viiruse või selle väikese koguse puudumist. Selle indikaatoriga tuleks meeles pidada, et diagnostiliste süsteemide analüütiline tundlikkus on erinev ja et RNA hepatiit C võib ikkagi veres olla, kuid ei avaldu analüüsis.

Eriti tundlik PCR-meetod ultrahepatiit C avaldub isegi vähesel määral. Kasutatakse fluorestsentsi hübridisatsiooni uuringut, mis on mitu korda kõrgem kui tavalised PCR-süsteemid. Seda meetodit kasutatakse mitmel juhul:

  • kahtlustatud peidetud C-hepatiidi vormid;
  • PCR-diagnostika ei kinnita patogeeni, kuid seal on antikehi;
  • tagasinõudmise korral;
  • varajase nakkuse tuvastamiseks.

Dekodeerimisanalüüs

Hepatiit C viiruse RNA määramine polümeraasi ahelreaktsiooni abil.

HCV dekodeerimine PCR-iga mõjutab lõplikku otsust diagnoosi andmisel eelkõige ultrametodmeetodil. Selle uuringu peamine puudus on proovi ja materjalide steriilsete tingimuste rangelt kinnipidamine. Väike kõrvalekalle mõnikord annab ebaõigeid analüütilisi järeldusi, raskendab diagnoosi ja järgnevat ravi. Hepatiidi RNA määramiseks PCR-i analüüs ei pruugi alati kindlalt näidata haiguse pilti, mõnikord on mõnikord ebatäpsed ja mõlemas suunas.

Hepatiidi viiruse diagnoosimisel soovitatakse kasutada terviklikku uuringut.

Näitajate norm

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüsi puhul peetakse uuringu tulemuste kohaselt viiruse hepatiit C JgM antikehade puudumist. Samal ajal näitavad seroloogilise analüüsi tulemused, et C-viiruse antikehade esinemine on samuti normaalne. Kvalitatiivne määratlus ei näita haiguse intensiivsust, see näitab ainult R-hepatiidi C põhjustatud agensit. Seda analüüsi korratakse pärast ravi, et kinnitada tegelikku taastumist.

Kõrvalekalded

Kui JgM antikehad esinevad HCV RNA-le, siis see viitab arenevale infektsioonile. Samaaegselt haigus jätkub ägedalt või krooniliselt, avaldub erinevates etappides. Kui antikehade arvu vähenemist registreeritakse, näitab analüüs, et ravitulemused saadi taastumise ajal. Diagnoosides leitakse ainult väga haruldasi valepositiivseid juhtumeid. Neid leidub naistel raseduse ajal ja teiste nakkushaigustega inimestel.

Hepatiit C PCR uuring: tüübid, näidustused, transkriptsioon

Viiruse hepatiit C on tõsine haigus, mis tekib maksakahjustusega. Kaheksakümmend protsenti patsientidest muutub see krooniliseks. Viirus levib maksarakkudes - hepatotsüütides - ja põhjustab nende surma. Surnud kude asendatakse sidekoe fookustega, areneb fibroos.

Mis areng maksa fibroos ei suuda täita oma ülesannet, hakkab tsirroosi, mis on ohtlik selle tüsistused: kasvavat survet värativeeni, seedetrakti verejooks, halvenenud vere hüübimist, vaimseid muutusi tõttu kahjustada aju tuumade mürgiseid aineid.

Haiguse põhjuseks on viiruse nakatumine Flaviviridae perekonnast, mis kuulub RNA viiruste tüübi hulka. See tähendab, et geneetiline materjal, millega sünteesitakse patogeeni valgud, kodeeritakse ribonukleiinhappemolekulis. Infektsioon toimub vere kaudu, seksuaalselt ja rasedast naisest lootele. Kahjuks võib nakkuse ja antikehade tootmise algusest piisava ajaga edasi liikuda - kahe nädala kuni kuue kuu jooksul. See ei võimalda nakkuse tuvastamist immuunanalüüsi meetodil ja ravi alustamist ravi alustamiseks.

Mis on PCR-analüüs?

PCR on molekulaaranalüüsi meetod, mis võimaldab tuvastada patogeeni geneetilist materjali juba esimesel nädalal pärast infektsiooni, kasutades polümeraasi ahelreaktsiooni. Uuringul on kõrge spetsiifilisus, täpsus ja see võimaldab mitte ainult määrata viiruse olemasolu või puudumist, vaid ka selle kontsentratsiooni ja genotüüpi.

Uuringuks võetakse patsiendi veri, milles võib potentsiaalselt paikneda viiruse RNA. Verele lisatakse praimerid - väikese pikkusega soovitud geeni kunstlikult sünteesitud piirkonnad ja RNA polümeraas on spetsiaalne ensüüm, mis suurendab korduvalt patogeeni geneetilist materjali. Spetsiaalse seadme kasutamisel viiakse läbi mitu kütte- ja jahutustsüklit. Seejärel analüüsitakse materjali ja võrreldakse viiruse tuntud geene, mille põhjal tehakse järeldus infektsiooni esinemise või puudumise kohta.

C-hepatiidi PCR-analüüsi tüübid

On olemas kolm tüüpi PCR analüüsi:

  1. PCR-i kvalitatiivne analüüs. Uuringu esimene etapp. See võimaldab tuvastada viiruse geneetilise materjali veres.

  • PCR kvantitatiivne analüüs. Võimaldab määrata viiruse koormuse - patogeeni geneetilise materjali kontsentratsiooni ühes milliliitris veres. See uuring viiakse läbi enne ravikuuri algust ja seejärel esimesel, neljandal, kaheteistkümnendal ja (kui see on pikk) ravi kahekümne neljandal nädalal, et hinnata selle efektiivsust.

  • Genotüüpimine Hepatiidi C põhjustav põhjustab sageli ja kiiresti mutante. Selles viiruse genotüübis leidus planeedil seitse varianti. Venemaal on levinud esimene, teine ​​ja kolmas tüüp. Igal genotüübil on erinev resistentsus ravile, näiteks esimese tüübi ravi efektiivsus on kuuskümmend protsenti, teisel ja kolmandal juhul on see arv kaheksakümmend viis. Seega, selleks, et valida sobivad ravimid ja määrata piisava kestusega ravikuur, on vaja täpselt määrata, millist tüüpi viirust patsient nakatub.
  • C-hepatiidi PCR-analüüsi näited

    PCR uuring määratakse järgmistel juhtudel:

    • kokkupuude haigega, kellel võib nakkust esineda;
    • positiivne ensüümi immuunanalüüs;
    • tsirroosi tunnused: maksa suuruse muutused, põrna suurenemine, nahaaluse venoosse põrnakujulise näo tekkimine;
    • maksakahjustuse sümptomite ilmnemine: valu paremal kõhul, naha kollasus;
    • ALAT ja ASAT aktiivsuse suurenemine vere biokeemilises analüüsis;
    • enne viiruskoormuse määramist ravi alustamiseks;
    • viirusevastase ravi efektiivsuse jälgimine;
    • pärast ravi, et kontrollida relapsi;
    • diagnoositud hepatiit B juuresolekul, et välistada segatüüpi maksakahjustus.

    C-hepatiidi PCR-uuringute selgitus

    Hepatiidi C dekodeerimise PCR-analüüs ja ensüümi immuunanalüüs tuleks teha hepatoloog või nakkushaiguste spetsialist. PCR-i tulemuste analüüsimine on vajalik kombinatsioonis vere biokeemilise analüüsi, biopsia ja ultraheli andmetega. Ainult kvalifitseeritud arst oskab analüüsida uuringute tulemusi ja määrata nende alusel õige ravi.

    Kvalitatiivse analüüsi dekodeerimine.

    Analüüsitud bioloogilises materjalis leiti patogeeni geneetiline materjal. Infektsioon on kinnitatud.

    Infektsioon puudub või patogeeni RNA kogus on tundlikkuse piirist madalam.

    Kvantitatiivse analüüsi dekodeerimine.

    Normaalne tase tervetele inimestele. See tähendab, et uuritavas materjalis ei ole C-hepatiidi RNA-d ega selle kontsentratsioon on uuringu tundlikkuse piirist madalam.

    RNA kontsentratsioon on alla kvantifitseerimise vahemiku. Neid tulemusi tõlgendatakse väga hoolikalt, korreleerige neid teiste uuringute andmetega, sageli uuesti õppige.

    Viirusekoormuse tase antud kontsentratsioonil peetakse madalaks. Tavaliselt tähendab viiruse vähenemine seda, et ravi on edukas.

    Rohkem kui 8 x 10 5 RÜ / ml

    Viirusekoormuse tase antud kontsentratsioonil peetakse kõrgeks.

    Rohkem kui 2,4 * 10 ^ 7 RÜ / ml

    RNA kogus on üle kvantifitseerimisvahemiku ülempiiri. Seda tulemust ei saa teha viirusliku koormuse astme kohta. Sellistel juhtudel korratakse katset vereproovi lahjendamisega.

    Genotüübi dekodeerimine.

    Tuvastatud genotüübi tuvastatud RNA

    Biomaterjalis tuvastati teatud genotüübi ja alatüübi C-hepatiidi viirus. Tulemus on kodeeritud rooma numbrite ja ladina tähtedega, näiteks - 1a, 2b. Kokku on seitse genotüüpi ja kuuskümmend seitse alamtüüpi, kuid Venemaal on ainult kolm esimest tüüpi.

    Hepatiit C viiruse RNA avastati

    Venemaal leiti haruldast genotüüpi veres olevat RNA-d, mida ei saa seostada esimese, teise või kolmanda tüübiga. Rohkem teadusuuringuid on vaja.

    See tulemus näitab, et patsient on tervislik või et patogeeni RNA on liiga väike.

    On võimalik, et C-hepatiidi PCR-analüüs on negatiivne ja ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs tuvastab viiruse vastased antikehad. See tähendab, et patsiendil oli äge hepatiit C ja ta taastati iseendale. Umbes 20 infektsiooni juhtumit põhjustab spontaanne taastumine, kui patsiendi organismil on infektsioonile piisavalt vastupanu.

    Kuigi PCR on väga täpne analüüs, võib selle tulemusi moonutada järgmistel juhtudel:

    • vere transporditi laborisse sobimatutesse tingimustesse, temperatuur oli rikutud;
    • biomaterjaliproov oli saastunud;
    • oli veres hepariini ja teiste antikoagulantide jääkide jäljed;
    • Leiti, et uurijad on inhibiitorid - ained, mis aeglustavad või peatavad polümeraasi ahelreaktsiooni.

    PCR-i eelised muude meetodite puhul

    1. Diagnoos alguses. PCR tuvastab põhjustava toimeaine geneetilise materjali. Immunofluorestsentsanalüüsi abil saab määrata ainult immunoglobuliine - aineid, mis organism tekitab infektsiooni suhtes. C-hepatiidi nakatumise korral võib intervall infektsiooni ja immuunvastuse alguse vahel olla mitu nädalat ja kuud, sel ajal on ELISA ebaefektiivne. PCR annab vastuse esimesel nädalal pärast infektsiooni.

  • Väike vea tõenäosus. Uuritavas materjalis määratakse geneetilise materjali pindala, mis on iseloomulik ainult ühele patogeenide tüübile. See kõrvaldab valed tulemused. Kui ELISA-vead on võimalikud, kuna sama tüüpi antikehi saab erinevate viiruste vastu vabastada - neid antikehi nimetatakse ristantikehadeks.

  • Kõrge tundlikkus. PCR võimaldab tuvastada haigusetekitaja RNA isegi minimaalsetes kogustes. See võimaldab tuvastada varjatud nakkusi.
  • Kuidas valmistuda vereannetamiseks PCR-uuringute jaoks

    C-hepatiidi PCR analüüsiks kogutakse venoosse verega verd. Tavaliselt võetakse patsiendi veeni korraga kaks vere osa: esimene saadetakse PCR-ile ja teine ​​ELISA-ga. Seda tehakse selleks, et täpsemalt hinnata, kui palju patsient on nakatunud viirusega ja kuidas immuunsus selle vastu võideldes.

    Tavaliselt peab patsient järgima järgmisi reegleid:

    • hommikul võetakse vereanalüüs;
    • Viimase toidukordi ja vereannetuse vaheline intervall peaks olema kaheksa kuni kümme tundi;
    • kaks või kolm päeva enne analüüsi on vaja loobuda praetud ja rasvases toidus ja alkoholis;
    • 24 tundi enne analüüsi peaks patsient vältima füüsilist koormust: ärge kandke raskusi, ärge minge jõusaali või basseini.

    PCR ei tuvastanud C-hepatiidi

    "Hepatiit C viiruse (HVC) geenide identifitseerimine patsiendi veres on selle nakkusliku patoloogia laboratoorse diagnoosi teine ​​etapp. Selle patogeeni tuvastamiseks, millel puudub rakumembraan ja järelikult pinnaantigeenid, kasutatakse polümeraasi ahelreaktsiooni meetodit. Selle meetodi abil määratakse molekul otseselt, kus kogu selle geneetiline teave on kodeeritud - RNA.

    RNA - Ribonukleiinhape koos DNA-ga on osa kõigi elusorganismide rakkudest. C-hepatiidi viirus sisaldab RNA molekuli ja on võimeline selle muteeruma.

    HVC genoomi test on tavaliselt välja kirjutatud pärast üldist, biokeemilist vereanalüüsi ja positiivset vastust antikehadele (anti-HVC).

    Mida see tähendab?

    HVC-vastaste antikehade uurimine on skriinimine, st seda saab kasutada inimeste suurte populatsioonide uurimiseks (arstid, rasedad, haiglahaiged, doonorid, süstivad uimastitarbijad, HIV-nakkusega inimesed). Anti-HVC laboranalüüsi negatiivne tulemus näitab, et patsiendi veres ei tuvastatud viiruse immuunvastust. Sellistel juhtudel saab negatiivset tulemust:

    Kui inimene pole kunagi olnud nakatunud hepatiit C vastu

    Kui laborikatsete süsteemi tundlikkus oli madalam HVC-vastase kontsentratsioonist.

    Kui nakkus tekkis vähem kui 2 kuud tagasi ja HVV-vastane veri ei piisa, et määrata. Kui inimtegurite tõttu on vale negatiivne reaktsioon.

    Kui tulemuseks on see, et patsiendil leiti HVC-vastased antikehad, tähendab see seda, et C-hepatiidi viirus oli uuringu ajal patsiendi kehas või mõni aeg tagasi veres. Anti-HVC-ga positiivse tulemuse korral on vaja täiendavaid laboratoorseid uuringuid, mis tuvastavad patogeeni enda geneetilise materjali, määravad kindlaks tema geenide kontsentratsiooni (viiruse koormus, vireemia) ja genotüübi loomist.

    Hepatiit C viiruse RNA analüüs

    Laboratoorsetes tingimustes võib HVC genoomi tuvastada mitmete uuringute abil:

    hargnenud DNA (p-DNA);

    transkriptsiooni amplifikatsioon (TMA);

    polümeraasi ahelreaktsioon (PCR).

    P-DNA meetod on odav ja hõlbus viis viiruse genoomi avastamiseks paljudes uuritud inimestest. Selle peamine puudus on madal tundlikkus: see näitab HVC ainult siis, kui selle kontsentratsioon ületab 500 RÜ / ml.

    Transkriptsioonilise amplifitseerimise meetod tuvastab seerumis viiruse nukleiinhapped. Analüüsil on suur tundlikkus (5-10 RÜ / ml), kuid see ei ole veel piisavalt integreeritud üldlevinud laboripraktikasse.

    Venemaal PCR-meetod on kõige suurema tundlikkusega (50-60 RÜ / ml) kõige tavalisem ja ligipääsetav laborianalüüs.

    PCR-uuring tehakse igas kliinilises laboris, millel on asjakohane akrediteering. Selle diagnostilise meetodi väga oluline nüanss, mis mõjutab analüüsi tulemust, on laboris kasutatava katsesüsteemi tundlikkus. Näiteks võimaldab diagnostiline tundlikkus 60 RÜ / ml, nagu Invitro Laboratories'is, viirusliku RNA avastamist 3 kuud pärast nakatumist. Katsesüsteemi madalal tundlikkusel ei pruugi patogeeni geene isegi 4 kuud pärast nakatumist avastada.

    Hepatiit C viiruse RNA: PCR-meetod

    PCR-meetodil on mitmeid eeliseid teiste HVC geenide tuvastamisel tehtavate laboratoorsete testide järele:

    kõrge tundlikkus. Meetod võimaldab määrata patogeeni geneetilist materjali isegi selle minimaalse kontsentratsiooniga proovis;

    suur spetsiifilisus. Määrab konkreetse genotüübi viiruse geenide seas erinevate DNA-de ja teiste patogeenide RNA-de, mis võimaldab patogeeni genotüpiseerimist;

    hoidmise kiirus. Patogeeni pika protsessi puudumine lühendab tulemuse saavutamise aega kuni mitu tundi; analüüsi universaalsus.

    Universaalne uurimisprotseduur võimaldab ühe inimese vereproovi samaaegset kasutamist erinevate patogeenide geneetilise materjali avastamiseks. Need eelised võimaldavad pidada PCR-i viirusliku hepatiit C laboratoorsel diagnoosimisel "kullastandardiks" koos anti-HVC ensüümi immunoloogilise testiga.

    PCR on uuring, mida kasutatakse indiviidi veres HVC geenide määramiseks. Uuring koosneb mitmest etapist:

    Biomaterjali proovide võtmine.

    RNA koopiate kontsentratsiooni suurendamine korduvalt valitud proovis.

    Geneetilise materjali avastamine spetsiaalsete katsesüsteemide abil.

    Pärast patsiendi venoosse vere võtmist viiakse läbi kunstlikult HVC geenide mitmekordse replikatsiooni (amplifitseerimine, kopeerimine) protsessi käivitamine.

    Selleks, et mõnel juhul muuta mitu korda tuumamaterjali koos biomaterjaliga. Kui katseklaasis oleva RNA koopiate arv jõuab soovitud väärtusele, viiakse patogeenide tuvastamine läbi spetsiaalse katse diagnostika.

    kvalitatiivne (tuvastab viiruse olemasolu),

    kvantitatiivne (määrab viiruse geenide kontsentratsiooni mahuühiku kohta)

    genotüpiline (määrab patogeeni genotüübi).

    Hepatiit C RNA: kvalitatiivne analüüs

    Kvaliteetse PCR-i ülesanne on kindlaks määrata HVC esinemine esitatud biomaterjalis. See uuring viiakse tavaliselt läbi haiguse diagnoosimise või veo tuvastamiseks. Määrake see pärast HVC-vastase antikeha tuvastamist ELISA-ga.

    Hepatiidi C diagnoosimiseks piisab, kui tuvastada HCV geenimaterjal kvalitatiivselt, st loendamata selle kontsentratsiooni veres. Kvaliteetse PCR-i tulemus võib olla: "RNA tuvastatakse" või "RNA ei tuvastata".

    Meetodi täpsus vastab 95% -le. Samal ajal jõuab testi diagnostika iseenesest täpselt 100% ja laboratoorseteks uuringuteks on alati 5% inimfaktor. Vale negatiivse analüüsi vältimiseks, eriti madala vireemiaga inimestel, on uuringus kasutatud diagnostilise süsteemi kõrge tundlikkus vajalik. Katsesüsteemi tundlikkus ei tohiks olla väiksem kui 60 RÜ / ml.

    Hepatiit C RNA: kvantitatiivne analüüs

    Kvantitatiivne analüüs on ette nähtud, kui peate teadma vireemia taset inimkehas. Selle uuringu tegemise näpunäited on järgmised:

    kõrge kvaliteediga PCR-i positiivne tulemus tingis viiruse antikehade tuvastamise;

    patoloogia faas;

    hepatiidi viiruse koormuse määramine;

    kombineeritud viirusevastaste ravimite valik;

    viroloogilise vastuse jälgimine viirusevastasele ravile;

    ägeda hepatiit C ülemineku tõenäosuse hindamine kroonilisele.

    Analüüsi tulemus väljendatakse IU / ml (rahvusvahelised ühikud 1 ml seerumis) või koopiate / ml (viiruse geenide koopiate arv 1 ml seerumis). Kvantitatiivne PCR ei ole normaalne: tavaliselt ei tohiks tuvastada HVC geeni inimveres. Uuringu tulemusi võrreldakse võrdlusväärtustega, mis on kehtestatud erineva viirusliku koormuse taseme jaoks.

    Seega näitavad näitajad (RÜ / ml):

    alla 4 x 10 x 5 peetakse madalaks vireemiaks;

    alates 4 × 10 * 5 kuni 8 × 10 * 5 - keskmine;

    üle 8 × 10 * 5 - kõrge.

    Rohkem viiruse RNA koopiaid veres, seda agressiivsem haigus ja seda suurem on viiruse ülekandumise risk teistele inimestele. Kuid viiruse koormuse tase pole ainus näitaja, mis mõjutab patoloogia raskust ja patsiendi edasist prognoosimist: samuti on oluline patogeeni genotüüp.

    Õige ravirežiimi määramiseks on vajalik genotüübi määramine. Samuti määrab see kindlaks patsiendi tervise ja elu prognoosi. Näiteks põhjustab viiruse genotüüp 3 sageli maksa fibroosi või maksatsirroosi, võrreldes genotüübi 1 kandjatega.

    C-hepatiit: analüüsid ja transkriptsioon

    RNA C-hepatiidi diagnoosimist ei saa teha ainult PCR-i kvalitatiivse ja / või kvantitatiivse analüüsi tulemustega: HVC määramine ja viiruse koormuse määramine ei ole piisav, et välja pakkuda piisavat viirusevastast ravi. Potentsiaalset patsienti tuleb uurida põhjalikult (kliiniliselt, laboratoorselt, instrumenteeritud), et saada objektiivne pilt patoloogilisest olukorrast. Hepatiidi C diagnoosi tuvastamiseks määrake õigesti uuringute kogum, mille tulemusi saab õigesti arendada ainult arst.


    Seotud Artiklid Hepatiit