PCR testid

Share Tweet Pin it

Polümeraasi ahelreaktsiooni peetakse üheks kõige täpsemateks ja kiireks diagnoosimeetodiks paljude nakkushaiguste korral. Samuti on kriminalistik edukalt rakendatud, et lihtsustada kurjategijate tuvastamisprotsessi. Selle abil on isapuhkus kindlaks määratud väga täpselt.

PCR-meetodi olemus

Igal elusorganismil, sealhulgas bakteritel ja viirustel, on unikaalsed geenid, mis kuuluvad konkreetse järjestuse DNA või RNA struktuuri. PCR-uuringu käigus kopeeritakse geneetilist materjali DNA polümeraasi ja spetsiaalsete temperatuuride tsüklite korral korduvalt.

Polümeraasi ahelreaktsioonil on kaks peamist meetodit:

  1. Klassikaline meetod on patogeeni geneetilise materjali valimine elektroforeesiga;
  2. PCR "reaalajas".

Meetod koosneb kolmest põhietappist:

  • Proovide ettevalmistamine;
  • DNA amplifikatsioon;
  • Kahtlustatava patogeeni geneetilise materjali tuvastamine (identifitseerimine).

Uuringu läbiviimiseks tuleb PCR labor jagada kolmeks tsooniks, iga reaktsiooni etapp viiakse läbi rangelt selle jaoks ette nähtud ruumis. Igas tsoonis peaks olema varustus vajalike seadmete, jaoturite, tarbekaupadega, ainult selles ruumis kasutatud kaitseriietus.

Pärast proovide registreerimist ja märgistamist valatakse proovi ettevalmistusruumis kindlaksmääratud temperatuuri ja spetsiaalsete reaktiividega kokkupuutest uuritavast materjalist patogeenide DNA või RNA. Seejärel algab amplifikatsiooniprotsess - luues mitmeid unikaalse DNA fragmendi koopiaid. See koosneb kolmest põhietappist:

  • DNA denatureerimine - kõrgtemperatuuri (95 kraadi) mõjul lahutab DNA topelhereliks 2 ketist.
  • Primer Annealing - spetsiifilised sünteetilised ühendid (praimerid), mis on identsed geeniteabega soovitud nukleiinhappefragmentide otstes, on kinnitatud DNA ahela terminitele. Praimeri kinnitamiseks vajalik temperatuur on konkreetse juhtumi puhul individuaalne, see on vahemikus 50 kuni 65 ° C.
  • DNA polümeraasi ensüümi abil on kahe praimeri vahel 70-72 kraadi, DNA sarnane sektsioon (amplikon) on lõpule viidud. "Ehitusmaterjalina" lisatakse torusse spetsiaalseid aineid.

Amplifikatsioonitsüklit korratakse mitu korda, mistõttu ekstraheeritakse DNA korduvalt, mis lihtsustab selle identifitseerimise protsessi. Identifitseerimist saab teostada visuaalselt pärast amplifitseerimisprotsessi elektroforeesi protseduuri agaroosgeelis või automaatselt, kasutades reaalajas toimivat tehnikat.

PCR uuringus "reaalajas" amplifikatsioon ja tuvastamine toimuvad samaaegselt eriseadmetes. See meetod on kõige eelistatavam, kuna uurimus viiakse läbi suletud torudes, vähendades saastumise ohtu ja sellest tulenevalt valepositiivsete tulemuste väljaandmist.

Meetodi plussid ja miinused

  • Erinevalt pika klassikalisest mikrobioloogilisest meetodist toimub uuring vaid mõne tunni jooksul;
  • Kõrge spetsiifilisus 95% kuni 100%, sest soovitud DNA fragment on iga konkreetse mikroorganismi puhul unikaalne;
  • Meetodi kõrge tundlikkus on patogeeni võimalik tuvastada, isegi kui see on esindatud uuritavas proovis ainult ühe rakuga;
  • Identifitseerige patogeen võib olla nii kvalitatiivne kui ka kvantitatiivne meetod. See on väga oluline tinglikult patogeensete mikroorganismide eraldamisel, mis vähesel määral ei põhjusta haigusi;
  • Võime määrata patogeeni (C-hepatiit, HIV-infektsioon) genotüüp. See on vajalik võimalike komplikatsioonide mõistlikuks raviks ja prognoosimiseks;
  • Võime tuvastada haiguse geneetiline eelsoodumus, takistades seeläbi selle arengut;
  • Võib tuvastada praktiliselt iga nakkuse allika ja kaasaegsed meetodid võimaldavad ka uuritavas proovis oleva mikrofloora kogumi avastamist, näiteks tupe biocenosis.
  • Võimalus saada nii valepositiivse kui ka vale-negatiivse valimi, kui valimi võtmise eeskirju ei järgita ning uuringu käigus tehakse vigu;
  • Kõrge hinna analüüs.

Taotlus

Peaaegu iga proovi saab uurida PCR abil (veri, uriin, tserebrospinaalvedelik, emakakaela kanalis ja kuse-, juuksefolliikulisse, sperma jne). Seda meetodit kasutatakse laialdaselt STD-de diagnoosimiseks (gonorröa, klamüüdia, ureaplasmoos, mükoplasmoos, trikhomoniaas). Seda saab kasutada tuberkuloosi, difteeria, kopsupõletiku, viirusliku hepatiidi, HIV-nakkuse, toksiplasmuse, tsütomegaloviiruse ja herpese infektsiooni, salmonelloosi jne tekitajate kindlakstegemiseks.

Polümeraasi ahelreaktsiooni kasutatakse isalikuks saamiseks, võrdledes vanema ja lapse DNA-d, tuvastades geneetilised kõrvalekalded ja organismi pärilik eelsoodumus erinevate haiguste korral.

Analüüsi ettevalmistamine

  • Vere soovitatakse annetada rangelt tühja kõhuga.
  • Enne emakaõõnde limaskestalt või emakakaelasest kanalisatsioonist tuleb hoiduda seksist kolme päeva jooksul, analüüs tuleks teha mitte varem kui üks kuu pärast antibiootikumravi lõppu, vastasel juhul võib see tulemus valepositiivseks. PCR-meetodiga tuvastatakse ka surnud patogeen, mistõttu on parem uurida pärast rakkude täielikku uuenemist.
  • Uriini tuleb koguda steriilses anumas.

Vastus saadakse enamasti paari päeva jooksul sõltuvalt labori suutlikkusest.

Dekodeerimise tulemused

Kvalitatiivse tehnika kasutamisel võib olla ainult kaks võimalikku vastust: positiivne või negatiivne. Positiivne tulemus näitab eritunud mikroorganismi esinemist proovis, negatiivne näitab puudumist.

Kvantitatiivse tulemuse peaks hindama raviarst, individuaalset lähenemist rakendatakse igal konkreetsel juhul. Spetsialist, võttes arvesse saadud vastust, otsustab ravimise vajaduse, ravimite annuse ja haiguse vormi ja staadiumi küsimuse.

Geneetiline profiil (trombofiilia eelsoodumus, rinnanäärmevähk) pärast tulemuse dekribreerimist saab arst hinnata haiguse tekkimise ohu määra, samuti eritoidu erikorda, ennetusmeetmeid.

Kas leht kasulik? Jagage seda oma lemmikvõrgus!

Mis on PCR-analüüs ja viiruse koormus?

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on labori meetod DNA ja RNA määramiseks. Esmakordselt katsetasid seda peaaegu pool sajandit tagasi Ameerika Carey Mullis. See ülitundlik analüüs võimaldab tuvastada genoomi kandjat ühe allika molekuliga, mis sisaldub veres, süljas või nahas.

PCR-meetodil on suurepärased väljavaated, mida kasutatakse mitte ainult meditsiinis, vaid ka geenitehnoloogia ja kohtuekspertiisi valdkonnas. Sellega kloonida ja luua uusi DNA tüüpe, määrates kindlaks sugulussuhte määra. Kurjategija tuvastatakse kuriteo areenil leiduv epiteeli tükk.

Hepatiidi PCR-analüüs - mida nad teevad ja miks?

Miks on C-hepatiidi kahtluseks vajalik PCR-analüüs, mis see on?

Hepatiit C viirus on RNA viirus, mis sisaldab 6 genotüüpi ja kuni 500 alamtüüpi. Kõigist hepatiitest on sellel viirusel kõrgeim mutatsioonivõime ja ülemäärane immuunsüsteemi kaitsev barjäär. Hepatiidi juhtumite koguarvust põhjustas C-viirus 70% kroonilise vormi ja 30% tsirroosi ja maksavähi juhtumitest.

Meetodi olemus: uuritavas geenis osalev osa spetsiifiliste ensüümide ja seisundite abil, mis on sunnitud in vitro mitmekordistama. PCR analüüs võimaldab kindlaks teha viirustüve, ilma milleta ei ole võimalik tõhusat ravi teha: iga genotüüp on viirusevastaste ravimite suhtes erinevalt tundlik. Kasutatakse kahte tüüpi PCR-i:

Viirusevastane ravi vajab pidevat seiret, et ravi kohe kohandada, ning selleks kasutatakse ka polümeraasi ahelreaktsiooni.

Kvalitatiivne ja kvantitatiivne PCR

Hepatiidi C kvalitatiivne PCR annab vastuse: kas patsiendi veres on viiruse C tüvi ja milline neist. Genotüpiseerimine on vajalik diagnoosi selgitamiseks, haiguse prognoosimiseks ja ravi määramiseks.

Vastavalt aktsepteeritud klassifikatsioonile on geen tähistatud numbriga ja alamtüüp on väike ladina täht.

Looduslikest ainetest lähtuv spetsiaalne preparaat.

Ravimi hind

Ravi ülevaated

Esimesed tulemused tunnevad pärast nädala manustamist.

Lisateavet ravimi kohta

Ainult 1 kord päevas, 3 tilka

Kasutusjuhend

Genotüübi C viiruse tabeli dekodeerimine:

  • Genotüüp 1a, 1b, 1c
  • Genotüüp 2a, 2b, 2c, 2 d
  • Genotüübid 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotüübid 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotüüp 5 a
  • Genotüüp 6 a

Kõige tavalisemad genotüübid 1,2,3. Venemaal on kõige sagedasemad viiruse C viiruse 1a, 1b, 2 ja 3 tüved.

Viiruse 1b genotüüp on raskem kui teistel ravida, muutub see 90% krooniliseks, millest 30% taastuvad kui maksavähk või tsirroos.

Genotüüpide 2a ja 3a krooniline tase on 33-50%, mis reageerib viirusevastasele ravile.

Viiruse olemasolu kinnitamisel tehakse hepatiit C kohta kvantitatiivne PCR-test, mida kasutatakse patsiendi laboriproovis sisalduvate RNA molekulide arvutamiseks.

Dekodeerimisanalüüs

Kvaliteetse PCR-i analüüsil on kaks vastust:

PCR negatiivne tähendab seda, et patogeen ei leita vereproovides.
Positiivne vastus viitab vastupidi: leitakse üht või teist viiruse C genotüübi RNA.

Tulemuse tõenäosus on 95%. Ülejäänud 5% on inimest põhjustatud viga. See võimalus on lubatud uuringu kõrgete nõuete tõttu:

  • reagentide ladustamise reeglid;
  • meditsiinitöötajate asjakohane kvalifikatsioon;
  • biomaterjalide puhtus.

PCR-komplekt omab 100% -list diagnostilist täpsust.

Hepatiidi C RNA kvantitatiivne PCR võimaldab patsiendi kehal viiruslikku koormust määrata. Tema abiga:

  • on kindlaks määratud haiguse staadium (äge, krooniline);
  • määrab viirusevastase ravi efektiivsuse;
  • Uuritakse vajadust maksa biopsia järele.

Mõnel juhul patsient ei tunne haigusnähte, samas kui HCV-nakkus tuvastatakse PCR-meetodil. See tähendab, et haigus on varases arengujärgus või kroonilises vormis. Diagnoosi selgitamiseks viirusevastase ravi varajaseks alustamiseks on vaja täiendavaid uuringuid.

C-hepatiit viiruskoormus

Viiruslik koormus näitab maksa viiruse aktiivsust, kui aktiivselt selle paljunemist esineb.

Mis see on?

PCR kvantitatiivset hepatiiti C mõõdetakse rahvusvahelistes ühikutes 1 ml või IU / ml kohta, mis tähendab, kui palju koopiaid teatud viiruse C tüve ribonukleiinhapetest leitakse 1 ml veres testitavas veres.

Mis on kõrge, mis on madal?

Viiruse koormusanalüüs võimaldab määrata viirusliku RNA olemasolu kontsentratsioonil 50 IU / ml. Normaalne viiruse koormus on see, kui PCR-iga ei tuvastata HCV RNA molekuli.

Viiruslik koormustabel:

  • madal kontsentratsioon 600 RÜ / ml 3 x 104 RÜ / ml;
  • keskmine kontsentratsioon alates 3 * 104 IU / ml kuni 8 * 105 mm;
  • kõrge tase üle 8 * 105 IU / ml.

Madal viiruse koormus on signaal, et terapeutiline ravi valitakse õigesti, ning hepatiidi C ravi paranemise prognoos.

Suure kontsentratsiooniga viiruserakud näitavad, et haigus on ägeda faasi. Patsiendi veri on ohtlik infektsiooniallikas.

Viiruslik koormus, mille näitajad on keskmise tasemega, iseloomustavad kas HWS kroonilist staadiumi või võivad olla kaks arengusuunda: suurendada või vähendada.

Selle valmimisel viiakse pärast 6 kuud kontrolli PCR-i läbi.

PCR-diagnostika maksumus

Muret tekitavad järgmised sümptomid:

  • üldine nõrkus;
  • naha värvimuutus, silmaklaas, tühjendus;
  • iiveldus;
  • söögiisu vähenemine;
  • lihaste ja liigeste valu;
  • raskustunne paremal hüpohondriumil;
  • ASAT ja ALAT sisalduse suurenemine veres.

Kokkupuude nakatunud patsientidega on soovitatav ka preoperatiivse perioodi jooksul hemodialüüs.

Valitsuse kliinikud teevad tasuta PCR-i vereanalüüsi, kui nakkushaiguse spetsialist või hepatoloog on pöördunud.

PCR-diagnostika tasulisi teenuseid pakuvad kõik suuremad Vene linnad. Hind sõltub katse tüübist, saadaolevast seadmest, ajastusest ja muudest teguritest.

Kvaliteetne PCR-analüüs Moskvas ja Peterburis maksab 600 kuni 900 rubla. Piirkondades - 300-800 rubla.

Hepatiit C viiruskoormuse määramine läheb maksma 17000-22000 rubla. Teiste infektsioonide puhul on kvantitatiivsete uuringute hind 1200-10000 rubla.

PCR-meetodi eelised ja puudused

Millised on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi eelised võrreldes teiste diagnostiliste meetoditega?

  1. Lai valik rakendusi. Kasutades PCR-d, kasutades standardvarustust, saate tuvastada mis tahes viiruse.
  2. Patogeeni kindlaksmääramise täpsus. Erinevate ensüümide kombinatsioonide ja analüüsimeetodite kasutamisel saavutatakse näidustusega nakkuse uuringu 100% täpsustus.
  3. Kõrge tundlikkus. See meetod võimaldab tuvastada ühe viiruse molekuli esinemist veres.
  4. Tõhusus. Kvalitatiivne analüüs on valmis mõne tunni tagant, kvantitatiivne - kahe päeva jooksul.
  5. Viiruse diagnoosimine inkubatsiooniperioodil. PCR-i ajal ei määra patogeeni mitte antikehade esinemine, kui organismil on immuunvastus, vaid enne patoloogilise protsessi algust, mis hõlbustab ravi.

PCR puudused tulenevad selle eelistest:

  • analüüsi puhtus nõuab laboratooriumis kõige kõrgemat puhtust, kaasa arvatud õhk, nii et välimine DNA ei satu uuritavasse proovi;
  • kõrge nõuded biomaterjalide kogumise ja analüüsimisega tegelevatele töötajatele.

PCR-uuringute abil hepatiit C diagnoosimine

Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) kasutatakse üha sagedamini kliinilises praktikas erinevate viirushaiguste põhjuste kindlakstegemiseks, sealhulgas viirushepatiidi C diagnoosimiseks.

Hepatoloogide nõuanne

2012. aastal tekkis C-hepatiidi ravis läbimurre. Uued otsese toimega viirusevastased ravimid töötati välja, mis 97% tõenäosusega vabastab teid täielikult haigusest. Nüüdsest peetakse hepatiit C ametlikuks ravikeskkonnas täielikult ravitavaks haiguseks. Venemaa Föderatsioonis ja SRÜ riikides on ravimid esindatud sofosbuviiri, daclatsviri ja ledipasviiriga. Praegu on turul palju võltsinguid. Hea kvaliteediga ravimeid saab osta ainult litsentseeritud ettevõtetelt ja asjakohastest dokumentidest.
Minge ametliku tarnija veebilehele >>

Selle diagnoosi jaoks kasutatakse PCR-i aktiivselt mitmesugustes muudatustes. PCR abil C-hepatiidi korral on võimalik tuvastada hepatiit C viiruse RNA olemasolu patsiendi veres ja teha täpselt diagnoos.

Analüüsi variatsioonid

PCR-tehnika sai arstidele kättesaadavaks mitu aastakümmet tagasi. See põhineb viiruse või bakteriaalse RNA või DNA spetsiifilise fragmendi mitmekordseks kopeerimiseks, millele järgneb avastamine (selle fragmendi äratundmine) patsiendi vereseerumis.

PCR-uuringute jaoks on põhimõtteliselt erinevad meetodid: kvantitatiivsed ja kvalitatiivsed.

Kvalitatiivne meetod võimaldab vastata ainult küsimusele: kas bioloogiline materjal (seerum, sülg, seemnevedelik jne) sisaldab teatud viiruse geneetilisi materjale?

Kvantitatiivne meetod võimaldab omakorda määrata selle geneetilise materjali koguse, mis on mõnel juhul vajalik haiguse staadiumi määramiseks või ravimi efektiivsuse hindamiseks.

PCR-i kvalitatiivne versioon haiguses

Selle haiguse PCR-analüüsi kvalitatiivse variandi kasutamine võimaldab tuvastada viirusliku hepatiidi C RNA olemasolu patsiendi bioloogilistes vedelikes (vere seerum, sülg jne). Sellisel juhul võib analüüsi tulemus olla ainult kahest tüübist: positiivne või negatiivne. Sellisel juhul on väga oluline, et see oleks õige dekodeerimine.

  • viirusliku hepatiit C RNA määramise positiivne tulemus ütleb arstile, et kõnealune viirus on uuritavas bioloogilises vedelikus. Seega on patsient nendega nakatunud ja seetõttu on võimalik viirusliku hepatiidi C diagnoosimine, kuid alati on oluline meelde jätta valepositiivsete tulemuste võimaluse;
  • PCR-analüüsi negatiivne tulemus viitab sellele, et uuritud bioloogilises vedelikus oli C-hepatiidi viiruse RNA puudumine või uuritavas vedelikus olnud RNA molekulide sisaldus liiga väike ja paiknes PCR-meetodi tundlikkuse piirist allpool. Negatiivne tulemus ei pruugi alati viiruse puudumist veres näidata. Vale negatiivse analüüsi võimalust peaks raviarst alati kaaluma.

Hepatiidi C-hepatiidi ägeda kuju kujunemisega võib kõrge kvaliteediga PCR-uuringute läbiviimine tuvastada haiguse fakti juba varem kui 1-3 nädalat pärast viiruse sisestamist inimese kehasse.

Valenegatiivsed tulemused võivad tuleneda järgmisest:

  • saastunud ainete bioloogiline materjal (veri);
  • hepariini kasutamine vere hüübimise vältimiseks torus või selle kasutamine patsiendi poolt;
  • ainete tungimine keskkonnast katsematerjale, mis blokeerivad PCRis kasutatavaid ensüüme.

Enne PCR diagnostika kvalitatiivse meetodi läbimist ei pea patsient vastama spetsiaalsetele soovitustele. Selleks peate analüüsimiseks võtma veri patsiendi veeni.

Kvantitatiivne PCR-valik

PCR-i kvantitatiivse analüüsi kasutamine võimaldab kindlaks teha mitte ainult viiruse olemasolu veres, vaid ka viiruse osakeste kogust igas bioloogilises vedelikus (nn viiruskoormus). Sellise PCR-i abil saate määrata teatud koguses tsirkuleeriva hepatiit C viiruse RNA koopiate arvu.

Seda tüüpi PCR-i tulemus on väljendatud numbrilistes väärtustes, kus seade on rahvusvaheline ühik milliliitri kohta - RÜ / ml.

Seda tüüpi PCR-diagnoosi viiakse läbi viirusliku hepatiit C ravimisel teatud päevadel. Esimene viirusliku koormuse määratlus esineb haiglasse sisenemise korral haiglasse. Täiendav analüüs viiakse läbi 1., 4., 12. ja 24. nädalal alates ravimite kasutamise algusest. Juba 12. nädalal võime öelda, kas ravi on efektiivne või mitte.

Hiljuti lugesin artiklit, milles räägitakse uimastite kompleksi "SOFOSBUVIR" kasutamisest DAKLATASVIR "hepatiit C raviks. Selle kompleksi abil saate alati HEPATITIS C. vabaneda.

Mind ei kasutanud mingit teavet usaldades, kuid otsustasin seda kontrollida ja tellida. Need ravimid ei ole odavad, kuid elu on kallim! Ma ei tundnud vastuvõtust kõrvaltoimeid, ma juba arvasin, et kõik oli asjatu, kuid kuu aega hiljem läbisin testid ja PCR-i ei tuvastatud, seda ei tuvastatud pärast kuut ravi. Dramaatiliselt paranenud meeleolu oli taas soov elada ja nautida elu! Ma võttis ravimeid 3 kuud ja selle tulemuseks oli viirus. Proovige seda ja teie, ja kui keegi huvitab, siis link allolevale artiklile.

Spetsiaalselt ette valmistada patsient uuring ei ole vajalik. Analüüsipäeval soovitatakse mitte suitsetada. Katsematerjalina kasutatakse veeni vett.

Pärast kvantitatiivset PCR-i läbiviimist on vaja saadud tulemusi tõlkida. Mõistet "norm" sellistel juhtudel ei eksisteeri. Kodeerimiseks kasutatakse spetsiaalselt indikaatorite väljatöötatud skaalat:

  • Tulemused: ei avastatud - RNA C-hepatiidi patsiendi veeniverd tuvastamata (negatiivne tulemus) või see sisaldab väga väikest kogust mitte lubades meetod selle tuvastamiseks (5 RÜ / ml - positiivse testi Sellised viiruse hulk suuresti. madal. See on näitaja ravi efektiivsusest ja haiguse edukast käigust;
  • katse tulemus:> 8 * 10 5 ME / ml - positiivne testi tulemus. Koormus on väga kõrge. Halb haiguse prognoos ja vajadus parandatud või asendatud ravimite järele.

On oluline meeles pidada, et saadud viiruskoormuse tase ei kajasta patoloogia raskust ja maksa hävimise taset. Selleks on olemas ka muud biokeemiliste uuringute meetodid. Ravimeetodite õigeks valimiseks on vaja teada C-hepatiidi viiruse genotüüp.

Mis näitab viiruse koormust:

  1. Bioloogilistes vedelikes, eriti veres, viiruse osakeste suur kontsentratsioon seondub kõrge riskiga viiruse ülekandmisel suguvahekorras või raseduse ajal emalt lootele.
  2. Viiruslike osakeste arv peegeldab kasutatud ravimite efektiivsust ja võimaldab teil otstarbekalt valida ravimeid ja annuseid.

Ultra-tundlik PCR diagnostika meetod

Täna on C-hepatiidi viiruse määramiseks võimalik läbi viia nn ultra-PCR-i. Seda meetodit nimetatakse PCRiks reaalajalise hübridisatsiooni-fluorestsentsuuringuga.

Kui on märgitud ultra PCR:

  1. Haigus peidetud vormidega patsientide puhul viirusliku hepatiit C kahtluse korral.
  2. Juhtudel, kui patsiendil on C-hepatiidi viiruse antikehad, kuid seda ei kinnita PCR-diagnostika abil.
  3. Hinnata ravi efektiivsust ja kinnitada taastumise fakti.
  4. Selle skriinimismeetodina haiguse varajaseks avastamiseks elanike hulgas.

Uuringuks kasutati tavaliselt patsiendi venoosset verd. Ultra-meetodi tundlikkus on väiksem kui 10 IU / l, mis on mitu korda kõrgem kui PCR-diagnostika tavalised kvantitatiivsed ja kvalitatiivsed variandid. Ultra PCR-i manustatakse nakkushaiguse arsti või hepatoloogi poolt.

Ravi diagnoosimise ja hindamise oluline samm on ultra-PCR-i tulemuste õige tõlgendamine. Tasub alati meeles pidada, et valede negatiivsete ja valepositiivsete tulemuste saamiseks on väike tõenäosus.

Selliste olukordade kõrvaldamiseks on vaja välistada vereproovide ja laboratoorsete materjalide saastumine. Ultra-PCR-i abil on võimalik vältida olukordi, mis põhjustavad vale negatiivseid tulemusi ja seeläbi raskendavad diagnoosi.

Kvantitatiivse PCR-analüüsi eesmärk on määrata kontsentratsioon

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on täna üks kõige tõhusamaid diagnostilisi meetodeid.

See annab kõige täpsemaid ja usaldusväärsemaid tulemusi.

Uuringu materjal on:

PCR abil on diagnoositud ka latentsed nakkused, eriti sugulisel teel levivad nakkused.

Selle analüüsi põhiolemus on avastada uuritavas materjalis patogeeni genoomi DNA molekulide korduv süntees.

PCR-i abil saab diagnoosida bakteriaalseid, viiruslikke, algloomseid ja seeninfektsioone.

Selle uuringu maksimaalne viga ei ületa 5%.

Lisaks sellele saab selle tulemusi juba katsetamise päeval.

PCR-iga on analüüsimiseks kaks tüüpi:

Biomaterjali haigusjuhu avastamiseks viiakse läbi kvalitatiivne meetod.

PCR kvantitatiivne analüüs

Polümeraasi ahelreaktsioon - laborianalüüsi meetod.

PCR-test on laialdaselt kasutatav meditsiinis.

See on selle suure täpsuse tõttu.

Meetodi aluseks on mikroorganismide DNA määramine.

Reeglina tehke laboris PCR-diagnostika.

Kui PCR-i määrdeid ja verd on vaja kvantitatiivselt analüüsida

Seda meetodit kasutatakse uroloogias, günekoloogias, venereoloogias.

Enamasti on see vajalik diagnoosimiseks.

PCR-i testimise abil saate tuvastada selliseid haigusi nagu:

  • Gonorröa
  • Süüfilis
  • Ureaplasmoos
  • Chlamydia
  • Trikhomoniaas
  • Inimese papilloomiviirus.

Seda meetodit kasutatakse ka doonorvere valmistamisel.

See aitab vältida nakatunud verd ületamise ohtu.

PCR-i kvantitatiivne analüüs on suunatud patogeeni kontsentratsiooni kindlaksmääramisele organismis, st patsiendi "nakatumise" taseme hindamine.

Kvantitatiivne PCR on viirusliku hepatiit C labori diagnoosimiseks asendamatu meetod.

Sellega määratakse kindlaks viiruse patsiendi veres paikneva RNA sisu, väljendades seda IU (rahvusvahelised ühikud) või koopiaid 1 ml kohta.

Juhtudel, kui C-hepatiit on juba diagnoositud, viiakse PCR kvantitatiivne analüüs läbi vastavalt järgmisele skeemile:

Kas on vaja mingil viisil valmistada ette kvantitatiivset PCR-analüüsi?

Ei, antud juhul erikoolitust pole vaja.

Ainus tingimus on hoiduda suitsetamisest 30 minutit enne vere annetamist.

PCR kvantitatiivne: C-hepatiit

C-hepatiit on nakkushaigus, mis mõjutab peamiselt maksa.

Nakkus tungib läbi vere.

Selle haiguse põhjustaja identifitseerimiseks kasutatakse kvantitatiivset PCR-i testi.

See määrab patogeeni kontsentratsiooni patsiendi veres.

Haiguse ulatuse kindlaksmääramiseks tee RNA hepatiit C kvantitatiivselt.

Kõige sagedamini tehakse C-hepatiidi PCR pärast vastavate antikehade avastamist.

Pärast seda tehakse katse 4, 12, 24 nädalal ja seejärel aasta jooksul.

PCR-i kvantitatiivse analüüsi tulemused hepatiit C diagnoosimisel

Oluline on PCRi analüüsimiseks õige materjali edastamine.

Kuid peate suutma tulemusi õigesti dešifreerida.

Kuidas tõlgendada PCR-i kvantitatiivse analüüsi tulemusi hepatiit C diagnoosimisel ja määrata selle ravi efektiivsus?

Väärib märkimist, et C-hepatiidi viirus on äärmiselt heterogeenne ja väliskeskkonnale vastupidav.

Väikese kontsentratsiooniga veres ei ole selle ülekandmine vertikaalselt või seksuaalse kontakti kaudu tõenäoline.

Sellistel juhtudel esineb nakkust ja haigusi sagedamini nõrgestatud immuunsüsteemiga inimestel.

Või kaasnevad kuseteede infektsioonhaigused (HIV, suguelundite infektsioonid).

Venerologist, PCR-i kvantitatiivse analüüsi edastamiseks

Pidage meeles! Andmete dekrüpteerimine peaks toimuma ainult arstiga.

Võimalik on saada vale tulemus.

See sõltub sellest, kuidas materjali transporditi, töökohta, kus vere uurimiseks võeti, analüüsi tehnoloogia rikkumine.

Seetõttu peaksite labori valimisel maksimaalselt tähelepanu pöörama.

Smear PCR kvantitatiivne klamüüdia

Enne kui võtate selle infektsiooni jaoks PCR-testi, peate teadma, kuidas analüüsimiseks ette valmistada.

Tähelepanu! Naised ei võta menstruaaltsüklis materjali.

Vahetatavat tampooni tuleks võtta ainult siis, kui järgitakse teatavaid eeskirju:

  • Ärge kasutage vaginaalseid suposiite enne katset.
  • Vältige seksuaalvahekorda analüüsi ajal
  • Kaks nädalat enne teadusuuringute teate saamist antibiootikume

Emakas, mis on võetud tupest.

Mehed teevad kaabitsust ureetrast.

Materjal võetakse spetsiaalse steriilse sondi abil, mille järel see pannakse steriilsesse torusse.

Tulemuseks võib olla:

  • Negatiivne - biomaterjalist infektsioon puudub;
  • Positiivne - krambid esinevad ududes.

Kvantitatiivne PCR analüüs: HPV 21 tüüp

Selle meetodi abil saate kohe määrata viiruse tüübi.

Seda tüüpi HPV on tavaline.

HPV on üle 100 liigi.

Enamik neist mõjutavad nahka, ülejäänud limaskestade membraane.

On liike, mis võivad põhjustada vähktõbe, nagu näiteks emakakaelavähk.

Emakakaelas sisalduvate epiteelirakkude kogumise analüüsi analüüs.

Tulemused võivad olla järgmised:

  • Riski ei leitud 0-3 Lg (HPV / 105)
  • Düsplaasia ilmnemise võimalus 3-5 Lg (HPV / 105)
  • Düsplaasia suur tõenäosus 5 ja kõrgem Lg (HPV / 105)

DNA PCR: tuvastatud

PCR-analüüsi tulemus on positiivne - patsiendi bioloogilisest materjalist leiti mikroorganismi DNA fragmendid.

Kui saate selle tulemuse, alustage ravi niipea kui võimalik.

On juhtumeid, mille tulemus on positiivne, kuid inimene tunneb end normaalselt ja haiguse tunnuseid pole.

See võib tähendada, et haigus on algstaadiumis.

Sel juhul peate konsulteerima arstiga ja alustama ravi.

Tähelepanu! Analüüsi tulemus ei ole diagnoos. Ravi režiimi peab määrama arst.

Vajadusel määrab spetsialist korduvaid uuringuid,

Millisele arstile pöörduda PCR-i kvantitatiivse analüüsi jaoks

Koguselise PCR analüüsi tegemiseks peate ühendust võtma kliinikusse.

Kaasaegne laboriseade tagab täpse PCR-analüüsi.

Venereoloogi külaskäigul saate libiseda.

Arst uurib ja võtab materjali teadustööks.

Pärast tulemuse saamist aitab spetsialist tulemuse dešifreerida ja määrata vajaliku ravikuuri.

Hankige terviklik konsultatsioon kogenud venereoloogi, PCR-i kvantitatiivse analüüsi ja efektiivse raviga, võite pöörduda meie tasustatud KVD-iga.

Pea meeles, et kvaliteetne ja õigeaegne diagnoos on võti edukaks raviks ja teie taaskasutamise võimalus.

Kuidas on kvantitatiivne
PCR-analüüs ütleb
Meditsiinitalituse kolonelleitnant
Doctor Lenkin Sergey G.

Vajadusel võta ühendust selle artikli autoriga - 15-aastane kogemus Moskva uroloog, venereoloog, uroloog, mis sisaldab kvantitatiivset PCR-analüüsi, sealhulgas C-hepatiiti.

  • veri
  • uriin
  • eesnäärme mahl
  • seemnevedelik
  • kvalitatiivne ja kvantitatiivne
  • Enne ravimi alustamist
  • 1 nädal pärast ravi alustamist
  • 4. ravinädalal
  • 12.nädalal - sel ajal võimaldab PCR kvantitatiivne määramine hinnata haiguse ravi efektiivsust
  • 24. ravinädalal - lõplik uuring, mis kinnitab taastumist
  • Vireemia või viiruse koormuse tase (viiruse kontsentratsioon veres) on 800 000 RÜ / ml.

Nende tulemuste saamine tähendab haiguse ägedat faasi või viiruse taasaktiveerimist.

See näitaja viitab inimese nakkavusele, "nakatumisele". Asjaolu, et viiruse nakatumise oht on temast praegu väga suur.

  • Indikaator 400 000 RÜ / ml viitab väikesele viiruse sisaldusele.

Seda võib täheldada kõrge kehasäästlikkuse tasemega.

Selle tulemusena välditakse viiruse reproduktsiooni ja aktiivsust. Või taastudes tänu tõhusale ravile.

Mõnel juhul näitavad analüüsi tulemused näitajat "mõõtepiirkonna all".

See tähendab, et viiruse kontsentratsioon veres on tühine.

Kuid siiski esineb kehas viirus, mis kinnitab kvaliteetset PCR-i.

Kande "Not detected" analüüsi tulemuste vorm näitab, et patsiendi veres pole viirust.

PCR-i kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs hepatiit C jaoks: negatiivne, positiivne transkript

C-hepatiit on viiruse maksahaigus, mis on põhjustatud flaviviiruse HCV-st (ingliskeelne sõna "hepatiit C-viirus"), mille struktuur sisaldab ribonukleiinhappemolekuli (RNA). RNA kannab viiruse geneetilist koodi. Selle olemasolu võimaldab hepatiidi C PCR-i analüüsi.

HCV oht inimesele seisneb selles, et nn seroloogiline aken (infektsiooni aeg ja immuunsüsteemi reaktsiooni ilmnemine) võib olla üsna pikk - mitme nädala kuni kuue kuu jooksul.

See ei tuvasta nakkusi ega alusta ravi õigeaegselt.

Sõltuvalt organismi individuaalsetest omadustest võib HCV kandja esineda akuutses vormis ja esineda kroonilise haigusena, mis nõuab pikka ja kulukat ravi. Kui tuvastatakse HCV-vastased antikehad, tehakse laboratoorsed testid, sealhulgas PC-viirushepatiid C-ga. Seda katset tehakse kõigile inimestele, kelle veres on leitud HCV-vastased antikehad.

Mis on PCR-analüüs?

PCR-i laboratoorsed analüüsid hepatiit C jaoks - bioloogilise materjali uurimine, et tuvastada flavaviiruse esinemine.

Polümeraasi ahelreaktsioon (lühendina tähistab) näitab keha viirusliku kahjustuse kvantitatiivset väärtust, selle kvalitatiivseid omadusi ning RNA-viirust sisaldava genotüübi.

Nende põhjal ja täiendavate analüüside põhjal määratakse kindlaks ravi meetod ja kestus ning epidemioloogiline tegur (teisele kandjale edastamise oht).

Mis on hepatiit C RNA analüüs?

Hepatiit C PCR nimetatakse ka RNA analüüsiks (HCV RNA), kuna Flavaviirus sisaldab RNA osakest, mille virioni suurus on 30-60 nm. Selle mikroorganismi üks omadusi on mutatsioonide suur kalduvus.

Igale viiruse alamliigile (genotüübile) on erinev vastupanu, mis põhjustab patsiendi jaoks erinevaid ravimeetodeid ja edasise prognoosi olemust.

Bioloogiline materjal (venoosne veri) antakse tühja kõhuga ja seda reeglina testib reaalajaline PCR meetod (väga tundlik reaalajaline diagnostika, mille madalam tuvastuspiir on 15 IU / ml, kasutades suletud automatiseeritud süsteeme).

On ka muid katseid, näiteks COBAS AMPLICOR, mille tundlikkus on 50-100 RÜ / ml. Iga laboriuuringu jaoks on oluline tundlikkuse künnis, st reagendi võime tuvastada viiruse miinimumkontsentratsioon bioloogilises materjalis.

Hepatiit C analüüsi tüübid PCR abil

Hepatiit C PCR sisaldab kolme olulist komponenti:

  • kvalitatiivne analüüs;
  • kvantitatiivne analüüs;
  • genotüpiseerimine.

Need testid võimaldavad teil määrata viiremia olemust ja patogeeni geneetilisi omadusi. Sõltuvalt diagnostilise süsteemi tundlikkusest tehakse uuring üks kord ja mõnikord tehakse teine ​​katse tundlikuma reagendiga tulemuste kinnitamiseks või täpsustamiseks.

Hepatiidi C kõrge kvaliteediga PCR

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüsi teine ​​tavaline nimetus on hepatiit C PCR-analüüs kvalitatiivne. Katse standardne tundlikkus, mis võimaldab tuvastada viiruse kahjustusi, on vahemikus 10-500 RÜ / ml.

Hepatiidi C negatiivne PCR-analüüs näitab, et viiruse kontsentratsioon patsiendi veres on alla diagnostilise süsteemi tundlikkuse läve.

Kui kõrgekvaliteetne PCR annab vastuse "ei tuvastatud", siis on edasiseks raviks oluline teada reaktiivi tundlikkuse künnis.

Flavaviiruse valkude fraktsioonid ilmuvad palju hiljem.

C-hepatiit, kvantitatiivne PCR

PCR-hepatiidi C kvantitatiivne näitaja on viiruse koormus, mis peegeldab kehas flavaviiruse RNA kontsentratsiooni taset. See on näitaja, mis näitab, kui palju viiruse RNA fragmente on võetud vere kuupsentimeetri kohta. Hepatiit C RNA PCR-i tulemused tavapärases süsteemis kvantitatiivses testis on näidatud rahvusvaheliste ühikutes milliliitri kohta (RÜ / ml) ja neid saab registreerida erineval viisil, näiteks 1,7 miljonit või 1,700,000 RÜ / ml.

Hepatiidi C kvantitatiivne PCR-diagnostika tuleb patsientidele enne viirusevastase ravi alustamist ja 12. ravinädalal, et hinnata valitud HCV-ga tegelemise meetodi tulemusi. Viiruslik koormus võimaldab kindlaks teha kolm olulist haigusseisundit:

  • nakkavus, st viiruse edasikandumise oht ühelt kandjalt teisele (mida kõrgem on flavaviiruse RNA kontsentratsioon, seda suurem on tõenäosus nakatada teist inimest, näiteks seksuaalse kontakti kaudu);
  • ravi meetod ja tõhusus;
  • viirusevastase ravi kestus ja prognoos (seda kõrgem on viiruskoormus, seda kauem ravi kestab).

Hepatiidi C kvantitatiivne PCR-diagnostika sõltub laboratoorse testi tüübist ja selle tundlikkuse piirist. Norma alumist piiri peetakse näitajaks kuni 600 000 RÜ / ml, keskmine väärtus jääb vahemikku 600 000-700 000 RÜ / ml. 800 000 RÜ / ml ja kõrgemate tulemuste hulka peetakse RNA-d sisaldava viiruse kõrge taseme.

Genotüüpimine

Tänu kõrgele HCV mutatsioonilisele aktiivsusele looduses, on katsetamisel oluline kindlaks teha, milline viiruse genotüüp on patsiendi veres. Kokku on planeedil registreeritud 11 C-hepatiidi viiruse genotüüpi, mis sisaldavad paljusid alamliike (alatüüpe). Vene Föderatsiooni territooriumil jagunesid 1,2 ja 3.

Kuna C-hepatiidi C PCR RNA koos genotüpiseerimisega on väga oluline analüüsi komponent võimaldab arstil määrata viiruse resistentsust (resistentsust), valida sobivad ravimid ja määrata ravikuur.

Genotüpiseerimine võimaldab ka kaudselt määrata maksa seisundit. Näiteks kaasneb HCV-i 3 genotüübiga sageli steatoos, milles rasv kogub elundi rakkudes.

C-hepatiidi PCR-i vereanalüüs peaks andma näitaja, mis määrab genotüübi. Laboratoorsed reaktsioonid võivad öelda, et "ei ole kirjutatud" - ja see tähendab, et viirus on inimveres, mida katsesüsteem ei tuvasta. See võib viidata sellele, et antud geograafilises piirkonnas ei ole genotüüp tüüpiline. Antud juhul peaksite analüüsi korrata diagnostilise süsteemi suurema tundlikkusega.

C-hepatiidi PCR-analüüsi dekodeerimine

C-hepatiidi PCR kvantitatiivne dekrüpteerimine võib põhineda ülalnimetatud andmetel. Laboratoorsete testide tulemuste saamisel kirjutavad tavaliselt järgmised andmed:

  • "Leitud" / "ei leitud" (kõrgekvaliteetne C-hepatiidi PCR);
  • RNA-d sisaldavate fraktsioonide arv, näiteks 831,680 ME / ml (kvantitatiivne PCR-analüüs);
  • arv, mis määrab HCV genotüübi, näiteks - 1, 2, 3, 4;
  • Katse nimi on enamasti reaalajas.

Kõige olulisem PCR-i hepatiidi C analüüsiks detekteerimisel on teine ​​lõik, mis näitab viiruse koormust, mis määrab ravi prognoosi, meetodi ja kestuse.

Kui hepatiit C PCR-test on negatiivne ja ELISA on positiivne - mida see tähendab?

Laboratoorsete analüüside dekodeerimiseks on oluline pöörduda hepatoloogi või nakkushaiguste spetsialisti poole, kes selgitab saadud teavet vastavalt diagnostilise süsteemi tüübile ja selle tundlikkuse piirväärtusele. Meditsiinipraktikas on palju andmeid vereanalüüside kohta, mis võivad inimesi meditsiinilise hariduse puudumisel eksitada.

Näiteks kui hepatiit C-vastane PCR-test on negatiivne ja ELISA on positiivne, võib see tähendada, et patsiendi veres ei esine HCV-d praegu, kuid varem oli ta saanud hepatiidi C ägedat kuju. Arvatakse, et positiivne ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) näitab, et on veres antikehad, mis on toodetud pärast viiruse sissetungi minevikus. Kuid tänapäeva meditsiinipraktikas peetakse ELISA-analüüsi ebapiisavalt usaldusväärseks ja see annab sageli ebatüüpilisi tulemusi, nii et arstid kasutavad seda primaarse sõeluuringuna. Haiguse diagnoosimisel lähtuvad spetsialistid täpselt PCR-testiga.

Kasulik video

Järgnev video annab väga üksikasjaliku ja huvitava kirjelduse PCR-meetodi olemusest, kuidas analüüsimine toimub:

Järeldus

PCR-i analüüsimiseks C-hepatiidi korral võetakse tavaliselt verevere. Enamasti on bioloogilise materjali kahekordne kogus - ELISA ja otseselt PCR-testi jaoks. Korrektsete katsetulemuste jaoks on vajalik vastavus bioloogilise materjali laboriproovide võtmise põhireeglitele:

  • analüüsitava veri on tühja kõhuga esimesel poolel;
  • jahu ja vereproovi võtmine peaks võtma vähemalt 8 tundi;
  • Alkoholi ja praetud toidud tuleks enne testi sooritamist välja jätta;
  • päeva jooksul enne vere annetamist on vajalik vältida suurt füüsilist koormust.

Vereanalüüsi tulemused on tavaliselt järgmisel päeval valmis.

Kvantitatiivne pcr

Kvantitatiivne PCR (kvantitatiivne PCR, qPCR) on reaalajaline kvantitatiivne PCR (reaalajaline polümeraasi ahelreaktsioon, kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon, qPCR).

Kvantitatiivne PCR (Kreeka polümeerid - mis koosnevad paljudest osadest, erinevad; Lat. Re- - prefiks, mis näitab toimingu kordumist ja aktiveerivat toimet) - PCR-i variant, milles registreeritakse pidevalt reaktsiooni kineetika, mis võimaldab kvantifitseerida teatud nukleotiidide DNA järjestuste sisu keerulises molekulide segus.

Selle meetodi esimest varianti pakkus välja P. Holland et al. 1991 (meetod "TaqMan"). Protokolli kohaselt lisatakse lisaks tavalistele kahele praimerile reaktsioonisegule 5'-otsas märgistatud 5'-otsaga fluorofooriga märgistatud oligonukleotiidsond, mis sisaldab tsentraalset või 3'-osalist fluorestsentsusummuti, mis iga selle reaktsiooni tsükli käigus lõõgastub amplikoni keskosaga (2) selle kahe võimendi vahel praimerid. Sondit ei kasutata praimerina, kuna 3'-terminaalne hüdroksüülrühm on blokeeritud ortofosfaadiga. Reaktsiooni ajal termostabiilne Taq polümeraas väljub sondi dupleksist ja seejärel 5'-3'-eksonukleaasi aktiivsuse tõttu lahutab see oma 5'-terminaalse nukleotiidi, mis on märgistatud fluorofooriga. Mida kõrgem on amplifitseeritud nukleotiidjärjestuse kontsentratsioon reaktsioonisegus, seda väiksem on tsüklite arv fluorestsentsi intensiivsuses proovi vabastatud fluorofooris, mis ületab summutiga vaba proovivõtturi põhitaset. Sellest hetkest (tsüklite arvu künnis) saab jälgida fluorofoori tegelikku kogunemist reaktsioonisegus kineetikas.

Kvantitatiivsete PCR-meetodite abil leitakse geenide kvalitatiivseid muutusi: punktmutatsioonid, deletsioonid ja insertsioonid. Kuid mõne päriliku haiguse korral ilmnevad vastavad sümptomid teatud geenide annuse muutuse suhtes.

Tüüpiline näide pärilikust haigusest, mis on põhjustatud inimese genoomi osa kromosoomi 21 koopiate arvu muutusest, on Downi sündroom. Tsütogeneetiliselt võib seda haigust diagnoosida kromosoomi 21 trisoomiaga või selle kromosoomi osa suurte translokatsioonide esinemisega teistele, kahe normaalse kromosoomi esinemise tausta suhtes. 21. Kirjeldatakse Downi sündroomi kliinilisi juhtumeid, kus karüotüüpis ei ole nähtavaid muutusi. Selle põhjuseks on kromosoomi 21 väikese osa kordamine. Selliste mutatsioonide identifitseerimine on võimatu kasutada traditsioonilisi tsütogeneetilisi meetodeid. Kuid kvantitatiivse PCR-i kasutamisel muutub kromosoomi 21 vastava osa annuse ühe ja poole suurendamine täiesti reaalseks.

Kvantitatiivse PCR-i läbiviimist iseloomustavad kaks tunnust. Esiteks viiakse PCR läbi deoksüribonukleosiidi trifosfaatide või praimerite juuresolekul, mis on märgistatud radioaktiivse või fluorestsentsmärgisega, et kindlaks määrata moodustunud PCR produkti kogus. Teiseks, PCR-i ajal on vaja reaktsiooni lõpule viia piisavalt varakult, kuni moodustub liiga palju PCR-tooteid. Selle põhjuseks on asjaolu, et viimasel küllastamisetapil, kui PCR-tooted muutuvad liiga paljudeks, muutuvad reaktsiooni piiravad ühikud substraadid (deoksüribonukleosiidi trifosfaadid) ja ensüüm ise, mille jaoks molekulid muutuvad PCR-toodete jaoks liiga palju matriits-DNAks. Sellistes tingimustes ei kaasne järgmise PCR-tsükli lõpetamisega enam PCR-toodete arvu kahekordistamist ning erinevate proovide vahel on väikesed kvantitatiivsed erinevused, mis on PCR-i varases staadiumis üsna selgelt tuvastatud pärast mitu tsüklit.

Algosioon autosoomsetes geenides heterosügootsete või lokaliseeritavate deletsioonide tuvastamiseks põhineb ectopic mRNA-ga pöördtranskriptsioonil saadud cDNA või patsiendi koe või rakukultuuri isoleeritud mRNA-d, mis ekspresseerib seda geeni PCR-i jaoks. Vastupidiselt tavapärasele homoloogile on mutatsiooniga cDNA molekulis deletsiooniga piirnevad eksonid üksteise lähedal. Kui järjestused nendest geenipiirkondadest valitakse PCR-i oligoprimeriteks, siis kasutatakse ainult mutantset cDNA mallina deletsiooni külgnevate eksonide praimerite väikese regiooni amplifitseerimiseks. Tavalises cDNA järjestuses võib see piirkond olla liiga suur, et amplifikatsioon toimuks. Praktiliselt heterosügootide tuvastamiseks ulatuslike intrageensete jaotuste abil teostatakse multipleksne PCR, kasutades oligoprimersüsteemi, mis võimendab fragmente, mis täielikult kattuvad kogu cDNA molekuliga. Deletsioonide olemasolu registreeritakse ebatavalise suurusega amplifikatsiooniproduktide ilmumisega.

Vt ka reverse transkriptsioon - reaalajaline polümeraasi ahelreaktsioon.

Biotehnoloogia VZ sõnastik Tarantula: tähestikuline indeks Ligustamise meetodid "naabruskonnas", lähedase ligandi meetod (proximity ligation test, PLA) Molekulaarsed majakad (molekulaarsed majakad) MUTATIONS DOT: TEADMISTE MUTATSIOONIDE MÄÄRAMISE MEETODID

PCR-diagnostika võimaldab mitte ainult määrata B-hepatiidi viiruse olemasolu veres ja selle etioloogias, vaid ka hinnata selle aktiivsust. Viiruslike koormuste tuvastamine on eriti oluline efektiivse ravi valimisel, kui see on liiga kõrge, siis taaskasutamise tõenäosus väheneb. Mis on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi olemus?

PCR-i diagnostika põhiolemus

Hepatiidi korral tehakse diagnoosi tagamiseks PCR-i. Selle meetodi abil saate tuvastada viiruse DNA, samuti määrata selle kogus veres.

In vivo perioodi lõpus võib tuvastada DNA viiruse veres hepatiidi PCR meetodil, sel ajal võib HBsAg tuvastada transaminaaside taseme tõusu taustal, pärast mida ilmneb HBeAg.

Kvalitatiivse definitsiooni abil saate diagnoosi täpselt kindlaks määrata, hepatiiti esineb või puudub. Tavaliselt ei tohiks veres olla DNA-d. Kvantitatiivne meetod võimaldab määrata haiguse arengu intensiivsust ja viiruse paljunemist.

Analüüs on väga tundlik ja usaldusväärne. Bioloogilise materjalina võta venoosne veri. Tänu kaasaegsele tehnoloogiale võib PCR tuvastada viiruse kontsentratsioonis 5 × 103-104 koopiat / ml veres. Analüüsi tulemuste kohaselt on normatiivne teadmine võimalik viraalset koormust hinnata ja ennustada ravi.

See on tähtis! See viiruse DNA aitab kaasa tsirroosi ja muude krooniliste maksahaiguste tekkele.

DNA tuvastamine PCR-ga on vajalik järgmistel juhtudel:

Kahtlused lõpliku analüüsi koostamisel pärast katset. Haiguse ägeda faasi kindlaksmääramine. Hepatiidi varjatud vormide tuvastamine. Tõhususe hindamine pärast viirusevastast ravi.

Kuidas PCR-i diagnostikast saadud tulemusi dešifreerida?

PCR kvantitatiivne

Kvantitatiivse hindamise abil saate määrata ainult viiruse olemasolu, aga ka viiruse koormus, kui PCR näitab positiivset tulemust.

Selle teabe väljaselgitamiseks on vaja kvantitatiivset meetodit:

Haiguse arengu intensiivsus. Ravi efektiivsus. Viirusvastaste ravimite suhtes resistentsuse väljaarendamine.

Kvantifitseerimine on kroonilise hepatiidi diagnoosimisel väga oluline. Sellisel juhul ei jää kõik näitajad tavapärasesse vahemikku. Transaminaaside tase tõuseb, viiruse aktiivsuse indeks on suurem kui 4 ja viiruse DNA kontsentratsioon on suurem kui 105 koopiat DNA / ml kohta. Kui viiruse kontsentratsioon on madalam ja transaminaaside tase on normaalne, siis võime rääkida passiivsest kandjast.

Enne viirusevastase ravi määramist on hädavajalik määrata PCR-de diagnostika, nimelt kvantitatiivne uuring, viiruskoormus.

Kas analüüs tehakse iga 3 kuu järel ja kui viiruse koormus suureneb 10 korda, siis võime rääkida viiruse resistentsusest ravile.

Kvantitatiivne analüüs annab väga olulist teavet, sest saate määrata, kui palju patogeeni DNA on veres. Mida suurem on selle kogus, seda suurem on viiruskoormus ja seda suurem on patsiendi seisund. Viiruslikku koormust vähendades pärast ravi alustamist saab hinnata selle efektiivsust. Mõningatel juhtudel on hepatiidi PCR näide täiendavateks uuringuteks, nagu näiteks maksa biopsia. Kõrgendatud ALAT taseme korral viiakse läbi PCR. Testide dekrüptimine on järgmine: kui viiruse koormus on rohkem kui 105 koopiat DNA / ml kohta ja ALAT tase ületab normi, kuid mitte rohkem kui 2 korda üle poole aasta, siis vajab selline patsient biopsia. Tugeva põletiku või fibroosiga on näidustatud viirusevastane ravi. Kui ALAT tase ületab normi rohkem kui 2 korda suure viiruse koormusega, siis tuleb ravi kohe ilma täiendava diagnostikavaldita ette kirjutada.

Ainult head spetsialistid suudavad kvantitatiivse PCRi tulemusi õigesti dešifreerida.

PCR-kvaliteet

Kvalitatiivne analüüs võimaldab määrata B-hepatiidi olemasolu veres. Tavaliselt ei tohiks see olla. Selle meetodiga saate diagnoosi täpselt kindlaks teha.

Kvaliteetne PCR-analüüs annab 100% täpse tulemuse.

Ükski teine ​​meetod ei paku selliseid usaldusväärseid andmeid. Enam kui pooled juhtudest, kui diagnoos on möödunud, tuvastatakse viiruse DNA tuvastamisel antigeeni puudumisel. On väga oluline diagnoosida haiguse alguses.

On tõestatud, et kui B-hepatiidi viiruse DNA aktiivselt paljuneb inimese kehas kahe kuu jooksul, muutub see haigus krooniliseks. Kui me hakkame viiruse vastu võitlema juba esimeste nädala jooksul pärast nakatumist, on täieliku taastumise võimalused väga suured.

Kuidas on uuringu tulemuste dekodeerimine kvalitatiivse meetodi abil?

Dekodeerimise analüüs on väga lihtne:

Tavaliselt peaks tulemus olema negatiivne, see tähendab, et viiruse DNA ei tuvastatud. Positiivne tulemus viitab hepatiidi esinemisele.

Analüüs aitab tuvastada viirust, määrata selle genotüüp ja alustada õigeaegset ravi. Sageli esineb DNA juuresolekul koos kvalitatiivse hindamisega ka kvantitatiivset analüüsi.

Kuidas uuringut ette valmistada?

Hepatiidi analüüsimisel PCR-diagnostika abil võetakse vere verega. Seda on kõige parem uurida hommikul, kuna veri tuleb alati annetada tühja kõhuga (pärast viimast toidukorra peab vähemalt 8 tundi läbima).

Selleks, et analüüs oleks võimalikult usaldusväärne, peab patsient olema teadlik mõnest tegurist, mis võib lõpptulemust mõjutada:

Enne veenist veri annetamist peate 20 minutiks puhkama. Lisaks antakse analüüsi tühja kõhuga, nii et veel 12 tundi te ei saa alkoholi juua, suitsetada, sportida ja süüa rasvaseid toite. Mõned ravimid, mida patsient peab võtma, võivad mõjutada lõpptulemust. Laboritehnik peaks olema teadlik uimastiravi juhtumitest. Kui veri tuleb alla 5-aastasele lapsele annetada, siis on sel juhul vaja seda jooma iga 10 minuti järel, pool tundi enne diagnoosi klaasi keedetud vees.

On väga oluline läbi viia PCR kliinikus, mis on hästi toiminud. Tõepoolest, hoolimata asjaolust, et PCR-iga määratakse viiruse olemasolu täpsusega kuni 100%, võib see näitaja langeda kuni 95% -ni, kui arvestada inimteguriga.

Kvalifitseerimata tehnikud või halva maine võib põhjustada vale tulemusi.


Seotud Artiklid Hepatiit