Mis on PCR-analüüs ja viiruse koormus?

Share Tweet Pin it

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on labori meetod DNA ja RNA määramiseks. Esmakordselt katsetasid seda peaaegu pool sajandit tagasi Ameerika Carey Mullis. See ülitundlik analüüs võimaldab tuvastada genoomi kandjat ühe allika molekuliga, mis sisaldub veres, süljas või nahas.

PCR-meetodil on suurepärased väljavaated, mida kasutatakse mitte ainult meditsiinis, vaid ka geenitehnoloogia ja kohtuekspertiisi valdkonnas. Sellega kloonida ja luua uusi DNA tüüpe, määrates kindlaks sugulussuhte määra. Kurjategija tuvastatakse kuriteo areenil leiduv epiteeli tükk.

Hepatiidi PCR-analüüs - mida nad teevad ja miks?

Miks on C-hepatiidi kahtluseks vajalik PCR-analüüs, mis see on?

Hepatiit C viirus on RNA viirus, mis sisaldab 6 genotüüpi ja kuni 500 alamtüüpi. Kõigist hepatiitest on sellel viirusel kõrgeim mutatsioonivõime ja ülemäärane immuunsüsteemi kaitsev barjäär. Hepatiidi juhtumite koguarvust põhjustas C-viirus 70% kroonilise vormi ja 30% tsirroosi ja maksavähi juhtumitest.

Meetodi olemus: uuritavas geenis osalev osa spetsiifiliste ensüümide ja seisundite abil, mis on sunnitud in vitro mitmekordistama. PCR analüüs võimaldab kindlaks teha viirustüve, ilma milleta ei ole võimalik tõhusat ravi teha: iga genotüüp on viirusevastaste ravimite suhtes erinevalt tundlik. Kasutatakse kahte tüüpi PCR-i:

Viirusevastane ravi vajab pidevat seiret, et ravi kohe kohandada, ning selleks kasutatakse ka polümeraasi ahelreaktsiooni.

Kvalitatiivne ja kvantitatiivne PCR

Hepatiidi C kvalitatiivne PCR annab vastuse: kas patsiendi veres on viiruse C tüvi ja milline neist. Genotüpiseerimine on vajalik diagnoosi selgitamiseks, haiguse prognoosimiseks ja ravi määramiseks.

Vastavalt aktsepteeritud klassifikatsioonile on geen tähistatud numbriga ja alamtüüp on väike ladina täht.

Looduslikest ainetest lähtuv spetsiaalne preparaat.

Ravimi hind

Ravi ülevaated

Esimesed tulemused tunnevad pärast nädala manustamist.

Lisateavet ravimi kohta

Ainult 1 kord päevas, 3 tilka

Kasutusjuhend

Genotüübi C viiruse tabeli dekodeerimine:

  • Genotüüp 1a, 1b, 1c
  • Genotüüp 2a, 2b, 2c, 2 d
  • Genotüübid 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotüübid 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotüüp 5 a
  • Genotüüp 6 a

Kõige tavalisemad genotüübid 1,2,3. Venemaal on kõige sagedasemad viiruse C viiruse 1a, 1b, 2 ja 3 tüved.

Viiruse 1b genotüüp on raskem kui teistel ravida, muutub see 90% krooniliseks, millest 30% taastuvad kui maksavähk või tsirroos.

Genotüüpide 2a ja 3a krooniline tase on 33-50%, mis reageerib viirusevastasele ravile.

Viiruse olemasolu kinnitamisel tehakse hepatiit C kohta kvantitatiivne PCR-test, mida kasutatakse patsiendi laboriproovis sisalduvate RNA molekulide arvutamiseks.

Dekodeerimisanalüüs

Kvaliteetse PCR-i analüüsil on kaks vastust:

PCR negatiivne tähendab seda, et patogeen ei leita vereproovides.
Positiivne vastus viitab vastupidi: leitakse üht või teist viiruse C genotüübi RNA.

Tulemuse tõenäosus on 95%. Ülejäänud 5% on inimest põhjustatud viga. See võimalus on lubatud uuringu kõrgete nõuete tõttu:

  • reagentide ladustamise reeglid;
  • meditsiinitöötajate asjakohane kvalifikatsioon;
  • biomaterjalide puhtus.

PCR-komplekt omab 100% -list diagnostilist täpsust.

Hepatiidi C RNA kvantitatiivne PCR võimaldab patsiendi kehal viiruslikku koormust määrata. Tema abiga:

  • on kindlaks määratud haiguse staadium (äge, krooniline);
  • määrab viirusevastase ravi efektiivsuse;
  • Uuritakse vajadust maksa biopsia järele.

Mõnel juhul patsient ei tunne haigusnähte, samas kui HCV-nakkus tuvastatakse PCR-meetodil. See tähendab, et haigus on varases arengujärgus või kroonilises vormis. Diagnoosi selgitamiseks viirusevastase ravi varajaseks alustamiseks on vaja täiendavaid uuringuid.

C-hepatiit viiruskoormus

Viiruslik koormus näitab maksa viiruse aktiivsust, kui aktiivselt selle paljunemist esineb.

Mis see on?

PCR kvantitatiivset hepatiiti C mõõdetakse rahvusvahelistes ühikutes 1 ml või IU / ml kohta, mis tähendab, kui palju koopiaid teatud viiruse C tüve ribonukleiinhapetest leitakse 1 ml veres testitavas veres.

Mis on kõrge, mis on madal?

Viiruse koormusanalüüs võimaldab määrata viirusliku RNA olemasolu kontsentratsioonil 50 IU / ml. Normaalne viiruse koormus on see, kui PCR-iga ei tuvastata HCV RNA molekuli.

Viiruslik koormustabel:

  • madal kontsentratsioon 600 RÜ / ml 3 x 104 RÜ / ml;
  • keskmine kontsentratsioon alates 3 * 104 IU / ml kuni 8 * 105 mm;
  • kõrge tase üle 8 * 105 IU / ml.

Madal viiruse koormus on signaal, et terapeutiline ravi valitakse õigesti, ning hepatiidi C ravi paranemise prognoos.

Suure kontsentratsiooniga viiruserakud näitavad, et haigus on ägeda faasi. Patsiendi veri on ohtlik infektsiooniallikas.

Viiruslik koormus, mille näitajad on keskmise tasemega, iseloomustavad kas HWS kroonilist staadiumi või võivad olla kaks arengusuunda: suurendada või vähendada.

Selle valmimisel viiakse pärast 6 kuud kontrolli PCR-i läbi.

PCR-diagnostika maksumus

Muret tekitavad järgmised sümptomid:

  • üldine nõrkus;
  • naha värvimuutus, silmaklaas, tühjendus;
  • iiveldus;
  • söögiisu vähenemine;
  • lihaste ja liigeste valu;
  • raskustunne paremal hüpohondriumil;
  • ASAT ja ALAT sisalduse suurenemine veres.

Kokkupuude nakatunud patsientidega on soovitatav ka preoperatiivse perioodi jooksul hemodialüüs.

Valitsuse kliinikud teevad tasuta PCR-i vereanalüüsi, kui nakkushaiguse spetsialist või hepatoloog on pöördunud.

PCR-diagnostika tasulisi teenuseid pakuvad kõik suuremad Vene linnad. Hind sõltub katse tüübist, saadaolevast seadmest, ajastusest ja muudest teguritest.

Kvaliteetne PCR-analüüs Moskvas ja Peterburis maksab 600 kuni 900 rubla. Piirkondades - 300-800 rubla.

Hepatiit C viiruskoormuse määramine läheb maksma 17000-22000 rubla. Teiste infektsioonide puhul on kvantitatiivsete uuringute hind 1200-10000 rubla.

PCR-meetodi eelised ja puudused

Millised on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi eelised võrreldes teiste diagnostiliste meetoditega?

  1. Lai valik rakendusi. Kasutades PCR-d, kasutades standardvarustust, saate tuvastada mis tahes viiruse.
  2. Patogeeni kindlaksmääramise täpsus. Erinevate ensüümide kombinatsioonide ja analüüsimeetodite kasutamisel saavutatakse näidustusega nakkuse uuringu 100% täpsustus.
  3. Kõrge tundlikkus. See meetod võimaldab tuvastada ühe viiruse molekuli esinemist veres.
  4. Tõhusus. Kvalitatiivne analüüs on valmis mõne tunni tagant, kvantitatiivne - kahe päeva jooksul.
  5. Viiruse diagnoosimine inkubatsiooniperioodil. PCR-i ajal ei määra patogeeni mitte antikehade esinemine, kui organismil on immuunvastus, vaid enne patoloogilise protsessi algust, mis hõlbustab ravi.

PCR puudused tulenevad selle eelistest:

  • analüüsi puhtus nõuab laboratooriumis kõige kõrgemat puhtust, kaasa arvatud õhk, nii et välimine DNA ei satu uuritavasse proovi;
  • kõrge nõuded biomaterjalide kogumise ja analüüsimisega tegelevatele töötajatele.

Hepatiit B viiruse DNA, kvalitatiivne määramine

Tähestiku otsing

Mis on B-hepatiidi DNA, kvalitatiivne määratlus?

HBV on keeruline DNA-d sisaldav viirus ja kuulub Orthohepadnavirus perekonna Hepadnaviridae perekonda.

Hepatiit B - anthroponotic nakkuse, eelistatavalt parenteraalse nakatumise mehhanism, mis võib toimuda viirushaiguse kandjat, ägeda ja kroonilise maksahaiguse ja seda iseloomustab võimalikku arendamist ägeda maksapuudulikkuse, krooniline hepatiit, maksatsirroos ja primaarse maksavähi (hepatotsellulaarne kartsinoom).

Inimkeha nakatumine leiab aset HBV otsese sissetungimise kaudu verd (mis tahes invasiivsete sekkumiste, vere ja selle preparaatide transfusiooniga) või limaskestade ja naha kaudu sünnituse ajal seksuaalsete ja lähedaste leibkontaktide ajal. Kui maks, siis HBV tungib hepatotsüüdi, kus see hakkab kiiresti paljunema.

Nakkusprotsessi areng võib toimuda kahel viisil: kopeeritav ja integreeriv. Infektsiooni replikatsioonivorm põhjustab ägedat või kroonilist hepatiiti ja maksa tsirroosi, samal ajal kui integreeruv vorm viib "tervisliku" viiruse infektsiooni, mitteaktiivse kroonilise hepatiidi, maksatsirroosi ja primaarse hepatokartsinoomi arenemiseni.

HBV infektsiooni seroloogiline diagnoosimine ja prognoos põhineb viiruse antigeenide ja selle antikehade tuvastamisel. Kuid selgub, et B-hepatiidi viiruse populatsioonis on leitud piisavalt mutantseid tüvesid (HBeAg-negatiivsed), mida tavaliste seroloogiliste testidega ei leita. Seepärast on HBV nakkuse diagnoosimiseks PCR-meetod väga oluline.

Miks on tähtis teha B-hepatiidi viiruse DNA, kvalitatiivne määratlus?

PCR võimaldab määrata B-hepatiidi viiruse DNA katsematerjalis nii kvalitatiivselt kui ka kvantitatiivselt. Kvalitatiivne määramine B-hepatiidi viiruse materjalis (täisveri, seerum, plasma, maksa biopsia) kinnitab viiruse esinemist patsiendil ning seeläbi kindlaks haiguse patogeneesi. Kvantitatiivne määramise meetod viiruse DNA plasmas toodud oluline informatsioon haiguse intensiivsus ravi efektiivsust ja resistentsuse arenemine viirusevastaseid ravimeid. Viiruse replikatsiooni hindamiseks on kindlasti vajalik HBV-ga seonduv PCR. HBeAg puudumisel tuvastatakse 50% patsientidest seerumi viiruse DNA. HBV DNA tuvastamine veres on äärmiselt oluline ägeda HBV prognoosimiseks. Kindlaks tehtud, et HBV DNA püsivust rohkem kui 8 nädalat pärast haiguspuhangut näitab krooniliseks protsessi, samas kõrvaldamise viiruse DNA esimese 2 nädala jooksul haiguse korreleerub taastus täielikult.

B-hepatiidi viiruse DNA kvantitatiivne määramine PCR abil.

Analüütilised näitajad: B-hepatiidi viiruse (hepatiit B viirus) DNA tuvastamine polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodil vereplasmas.

Identifitseeritud fragment on hepatiit B viiruse struktuurvalgu geeni ainulaadne DNA järjestus, mille spetsiifilisus on 98%. Detektsiooni tundlikkus on 5 ui töödeldud (DNA eraldamise) proovis vähemalt 80 viiruseosakest.

Seega on materjali HBV DNA määramine kõige olulisem analüüs, mis koos teiste laboriuuringutega võimaldab infektsiooni diagnoosida, nakkusprotsessi olemust määrata, ravi osutamise kriteeriumina ja selle tõhususe hindamist.

Milliste haiguste korral on B-hepatiidi viiruse DNA tehtud, kvalitatiivne määratlus?

Analüüsi näitajad:

Ennetavad sõeluuringud (B-hepatiidi viiruse DNA on ägeda infektsiooni varaseim marker).

Uuringud HBsAg-negatiivse infektsiooniga.

Kontaktisikute küsitlused.

Segatud etioloogia hepatiidi diagnoosimine - juhtiva viiruse tuvastamine.

Viiruse aktiivse replikatsiooni astme tuvastamine kroonilises seisundis.

Ravi kontroll.

Nõrkus, halb enesetunne, väsimus, isutus, iiveldus, kõhuõõne nõrkus, suurenenud maks ja valu lihastes ja liigeses.

Iiveldus, sügelus, põrna laienemine, veresoonte "ämblikud", mõnel juhul peopesade ja jalgade punetus.

Hepatiit B PCR

Kaasaegsete hepatiit B (HBV) ravimite olemasolu, millel on selged näidustused nende manustamiseks, vajab diagnoosi täpset ja kiiret kontrollimist. Kuid haiguse esimestel nädalatel ja piiratud immuunanalüüsi analüüsimeetodite nappide kliiniliste andmete tõttu väheneb diagnoosimise määr.

Markerite olemasolu anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe abil saate kinnitada HBV-d või tuvastada eelneva haiguse fakti. Kuid on võimalik kindlaks teha aktiivsete viirusosakeste olemasolu veres ja nende arvu arvutamiseks uuringu ajal PCR abil - kvantitatiivne reaalajaline test hepatiit B tuvastamiseks. See meetod, võrreldes ELISA diagnostikameetoditega, lahendab diagnoosimisprobleeme ja võimaldab teil prognoosida haiguse kulgu saamise ajal viirusevastased ravimid.

Haiguste diagnoosimise alused

B-hepatiidi diagnoos põhineb kliiniliste ilmingute, ensüümi immunoloogilise analüüsi ja uurimisvahendite hindamisel. Haigus tekib pärast inkubatsiooniperioodi ägedas faasis ja sõltub infektsiooni annusest ja ravi efektiivsusest kroonilises staadiumis. Ravi peamine eesmärk on vältida kroonimist, see tähendab kõikide viiruse osakeste eemaldamist verest. Selle haiguse kliiniline liikumine on ravivaks järgneva vireemiaga.

Nakkuse kõrvaldamise fakti tuleb tõestada kvantitatiivse uurimismeetodiga.

Kuna mis tahes kvalitatiivse ensüümi immunoloogiline analüüs võimaldab HBV diagnoosida kaudselt, see tähendab, et see ei näita patogeeni esinemist kehasiseses keskkonnas, vaid iseloomustab infektsiooni immuunvastust, jälgides ravimi efektiivsust ja ravi raskuse tõestamist. Seetõttu peab hepatiit B patsiendil või tema kasuks diagnoosikriteeriumide olemasolul viima läbi polümeraasi ahelreaktsiooni viiruse osakeste arvu määramiseks veres. Diagnostiline kiirus on infektsiooni DNA koopiate puudumine.

Diagnostikameetodi kirjeldus

B-hepatiidi PCR-diagnoosimise väga tundlik meetod kuulub geneetiliselt muundatud molekulaarbioloogiliste uuringute kategooriasse. Läbi selle määrab patsiendi bioloogilises materjalis viiruse DNA kogus ja lubatud kiirus. Saadud tulemuste põhjal on kindlaks tehtud viirusosakeste arv mahuühiku kohta. Diagnostikatesti materjaliks on patsiendi venoosne veri. Uuringu tulemuseks on chüüsi seerumi võimaliku mõju tõttu tühja kõhu tarbimine.

Saadud tulemused tuleb arstile anda täiendava taktika tõlgendamiseks ja kindlaksmääramiseks. Isekodeerimine ei kujuta endast diagnostilist väärtust.

PCR-meetodil saadud viiruse osakeste arvu tulemus on suurem kui ensüümi immuunanalüüside väärtus. Kuna reaalaja režiimis olev analüüs näitab haiguse põhjustatavat toimet veres, on selle teabe sisu suurem kui teised. Kui ELISA viitab ainult antikehade olemasolule, mida täheldatakse alates 4-nädalasest inkubatsiooniperioodist ja kestab rohkem kui 8 nädala jooksul pärast viiruse eliminatsiooni verest, siis ilmneb selgelt, et polümeraasi ahelreaktsioon kinnitab haiguse aktiivset kulgu või selle ravi, iseloomustab ettenähtud ravimi dünaamikat.

Polümeraasi ahelreaktsioon koos patogeeni osakeste kvantitatiivse määramisega lahendab diagnoosiküsimusi ravi taastumise kasuks või ravi jätkamise tõttu selle tõhususe puudumise tõttu. Meetod on HBV viiruse jaoks võimalikult spetsiifiline ja eristatav vastuvõetava täpsusega.

Näitajad ja tulemuslikkuse eesmärgid

B-hepatiidi kvantitatiivne analüüs on kõige usaldusväärsem ja võimaldab kinnitada ELISA meetodil saadud andmeid. Ta määratakse siis, kui:

  1. ELISA positiivse diagnostilise tulemuse saamine;
  2. patsiendi ravi viirusliku maksakahjustuse diagnoosiga;
  3. hepatiidi kombineeritud etioloogia diagnoosimisel;
  4. vajadusel patsiendi viiruskoormus.

Kuna ensüümi immuunanalüüsi meetodit kasutatakse nakkushaiguste spetsialistide praktikas ulatuslikumalt, võib mõningaid kerget haigust põdevaid patsiente ravida, ilma et oleks vaja arvutada viiruskoormust. Kuid üldiselt peetakse PCR-i üldiselt Hepatoloogia diagnostika "kullastandardiks", kuna selle tulemuse ainulaadsuse tõttu kõrvaldatakse mitmed organisatsioonilised probleemid. Seetõttu on patsiendi suunal kvantitatiivse analüüsi jaoks järgmised eesmärgid:

  • andmete saamine patsiendi veres olevate viirusosakeste arvu kohta;
  • hepatiidi ägeda kulgemise kinnitamine ja kroonilise haiguse õigeaegne kontroll;
  • positiivsete ELISA testide varjatud viiruse kandjate pidev tuvastamine, nende vireemia jälgimine;
  • viirusevastase ravimi väljakirjutamise, selle kombinatsiooni ja lõpetamise kohta.

Kvantitatiivse PCR-i testi kõige olulisemaks eesmärgiks on HBV tuvastamine tuvastada võimalikud ravi kombinatsioonid. Kõrge viiruskoormuse korral annab analüüsi tulemus spetsialistile võimaluse jätkata ravimite kombinatsiooni. Ravi ajal on PCR-i tulemuse põhjal lihtne kindlaks määrata ettenähtud farmakoloogilise ravi efektiivsus. Immunferensioloogiliste meetodite andmete põhjal on võimatu õigeaegselt kindlaks määrata ravi fakti ja selle praeguse efektiivsuse. Seetõttu on enne retsepti alustamist ägeda hepatiidi, latentse viirusnakkuse ja kõrge vireemia ja kroonilise HBV-ravi jaoks vajalik kvantitatiivne reaalajaline analüüs.

Kvantitatiivsete PCR-testi tulemuste tõlgendamine

Koguselise PCR-testi tulemuste tõlgendamine peaks toimuma patsiendi raviarst. On vaja hinnata diagnostilist indikaatorit ja määrata terapeutilist taktikat.

Standardanalüsaator on võimeline tootma kvantitatiivset indikaatorit, mis kajastab uuritud venoosse veres sisalduva viiruse DNA koopiate arvu. Mõõtühikud - koopiad / ml, IU / ml (koopiad milliliitri kohta, rahvusvahelised ühikud milliliitri kohta). Tulemuste tõlgendamine on esitatud tabelis, kus on näidatud erinevad mõõtühikud.

Hepatiidi C kvalitatiivne analüüs

Jäta kommentaar 7,180

Polümeraasi ahelreaktsiooni kvalitatiivne analüüs - C-hepatiidi PCR-i määramine määrab kindlaks HCV olemasolu või puudumise organismis. Laboratoorsetes tingimustes uuritakse RNA struktuuri, mis sisaldab viirust. Viiruse C avastamise korral on vaja läbi viia ravikuuri, sest maksa tähelepanuta jäetud seisund põhjustab tõsiseid tagajärgi. Kõrgekvaliteetne PCR viiakse läbi ka pärast taastumist, et kinnitada antikehade puudumist. Määratud tavapäraseks kontrollimiseks. PCR (kvalitatiivne), mis põhjustab vereseerumis madalat kontsentratsiooni, ei pruugi midagi tuvastada, kuna diagnostilise süsteemil on oma tundlikkuse piirväärtused. Haiguse esialgse või kerge vormi korral viiakse PCR ultra-diagnostika läbi ultra-tundlikes seadmetes.

Mis on RNA viirus?

C-hepatiidi viiruse (või C-hepatiidi viiruse RNA) termin RNA on maksahaigus ise. Viirus C seostub organismi tervete rakkudega sissetungimise kaudu. Aja jooksul levib kogu keha, on vaja ainult sattuda verdesse. Selle tulemusel tungib patogeen maksa sisse, kaitseb selle rakke ja teeb kõvasti tööd. Maksa rakud (hepatotsüüdid) töötavad selle mõju all, muutuvad ja sellest surevad nad. Mida kauem on viirus C maksas, seda suurem on rakkude arv. Aja jooksul arendada ohtlikke haigusi, mis põhjustavad pahaloomulise degeneratsiooni ja surma.

Maksa infektsioon selle tüüpi viirusega ei pruugi ilmneda väljastpoolt. Paljude aastate või aastakümnete vältel tunneb nakatunud inimene täiesti tervislikku seisundit ja sagedamini näitab patoloogiat ainult juhusliku uurimisega. Hepatiidi veres annetamisel uuritakse osa inimese RNA (ribonukleiinhappe) ahelast, mis on inimese geeni osa (DNA). Laboratoorsete uuringute tulemusi ei tohiks kasutada enesehoolduseks, sest see on ainult näitaja. Täpne pilt ja täiendav diagnoos on arsti poolt paremini kindlaks määratud.

Kui see on valmis: teadustöö näited

HCV kinnitamisel viiakse läbi PCR analüüs (polümeraasi ahelreaktsioon). PCR-uuringud aitavad patogeenset materjali leida RNA struktuuris ja määrata tõhus ravi. Nimetatud järgmistel juhtudel:

  • maksa põletiku tunnuste avastamine;
  • profülaktika uuringud ennetamiseks;
  • kokkupuutuvate inimeste uurimine;
  • segapärase hepatiidi diagnoos (peamise patogeeni kindlaksmääramine);
  • viiruse paljunemisvõime taseme kindlaksmääramine kroonilises vormis;
  • maksa tsirroos;
  • et määrata ettenähtud ravi tõhusus.
Teadusuuringute PCR näeb ette arsti, et määrata kindlaks hepatiidi raviskeemi efektiivsus.

PCR-i kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs on olemas. Kvantitatiivne PCR näitab RNA protsentuaalset suhet viiruse kandjate hulka veres ja kvalitatiivne viiruse olemasolu või puudumine. Kvalitatiivne positiivne näitaja (C-hepatiidi RNA olemasolu) vajab ka kvantitatiivseid uuringuid. Hepatiidi põhjustava toimeaine kõrge kontsentratsioon seondub selle ülekandumise riskiga, teiste nakatamisega. Madal arv on paremini ravitav. RNA viiruste hulk veres ei ole seotud haiguse intensiivsusega. PCR-analüüs tehakse ka interferoonravi puhul, et määrata ravikuuri kestus ja keerukus.

Hepatiit C kõrge kvaliteediga PCR-analüüsi omadused

Polümeraasi ahelreaktsiooni indeksiga kvalitatiivne analüüs määratakse kõikidele patsientidele, kellel on veres C-hepatiidi antikehad. Haigestunud ja taastunud isikud peavad katse uuesti proovima. Soovitatav on läbida B-hepatiidi test, siis positiivse järelduse korral ja hepatiit D. Samuti tuleks kvalitatiivselt analüüsitud reaktsioon viia läbi koos teiste vereanalüüsidega. Analüüsid näitavad täielikku pilti viiruse levikust.

Katsetulemustest nähtub, et ainult C-hepatiidi positiivne test on nähtav või negatiivne, see tähendab viiruse olemasolu või puudumine. Kui väljund on "tuvastatud", siis viirus on ja on endiselt aktiivne. Nimetus "ei tuvastata" tähistab viiruse või selle väikese koguse puudumist. Selle indikaatoriga tuleks meeles pidada, et diagnostiliste süsteemide analüütiline tundlikkus on erinev ja et RNA hepatiit C võib ikkagi veres olla, kuid ei avaldu analüüsis.

Eriti tundlik PCR-meetod ultrahepatiit C avaldub isegi vähesel määral. Kasutatakse fluorestsentsi hübridisatsiooni uuringut, mis on mitu korda kõrgem kui tavalised PCR-süsteemid. Seda meetodit kasutatakse mitmel juhul:

  • kahtlustatud peidetud C-hepatiidi vormid;
  • PCR-diagnostika ei kinnita patogeeni, kuid seal on antikehi;
  • tagasinõudmise korral;
  • varajase nakkuse tuvastamiseks.
Tagasi sisukorra juurde

Dekodeerimisanalüüs

HCV dekodeerimine PCR-iga mõjutab lõplikku otsust diagnoosi andmisel eelkõige ultrametodmeetodil. Selle uuringu peamine puudus on proovi ja materjalide steriilsete tingimuste rangelt kinnipidamine. Väike kõrvalekalle mõnikord annab ebaõigeid analüütilisi järeldusi, raskendab diagnoosi ja järgnevat ravi. Hepatiidi RNA määramiseks PCR-i analüüs ei pruugi alati kindlalt näidata haiguse pilti, mõnikord on mõnikord ebatäpsed ja mõlemas suunas.

Hepatiidi viiruse diagnoosimisel soovitatakse kasutada terviklikku uuringut.

Näitajate norm

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüsi puhul peetakse uuringu tulemuste kohaselt viiruse hepatiit C JgM antikehade puudumist. Samal ajal näitavad seroloogilise analüüsi tulemused, et C-viiruse antikehade esinemine on samuti normaalne. Kvalitatiivne määratlus ei näita haiguse intensiivsust, see näitab ainult R-hepatiidi C põhjustatud agensit. Seda analüüsi korratakse pärast ravi, et kinnitada tegelikku taastumist.

Kõrvalekalded

Kui JgM antikehad esinevad HCV RNA-le, siis see viitab arenevale infektsioonile. Samaaegselt haigus jätkub ägedalt või krooniliselt, avaldub erinevates etappides. Kui antikehade arvu vähenemist registreeritakse, näitab analüüs, et ravitulemused saadi taastumise ajal. Diagnoosides leitakse ainult väga haruldasi valepositiivseid juhtumeid. Neid leidub naistel raseduse ajal ja teiste nakkushaigustega inimestel.

Pcr hepatiidi kvaliteedile

PCR-diagnostika võimaldab mitte ainult määrata B-hepatiidi viiruse olemasolu veres ja selle etioloogias, vaid ka hinnata selle aktiivsust. Viiruslike koormuste tuvastamine on eriti oluline efektiivse ravi valimisel, kui see on liiga kõrge, siis taaskasutamise tõenäosus väheneb. Mis on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi olemus?

PCR-i diagnostika põhiolemus

Hepatiidi korral tehakse diagnoosi tagamiseks PCR-i. Selle meetodi abil saate tuvastada viiruse DNA, samuti määrata selle kogus veres.

In vivo perioodi lõpus võib tuvastada DNA viiruse veres hepatiidi PCR meetodil, sel ajal võib HBsAg tuvastada transaminaaside taseme tõusu taustal, pärast mida ilmneb HBeAg.

Kvalitatiivse definitsiooni abil saate diagnoosi täpselt kindlaks määrata, hepatiiti esineb või puudub. Tavaliselt ei tohiks veres olla DNA-d. Kvantitatiivne meetod võimaldab määrata haiguse arengu intensiivsust ja viiruse paljunemist.

Analüüs on väga tundlik ja usaldusväärne. Bioloogilise materjalina võta venoosne veri. Tänu kaasaegsele tehnoloogiale võib PCR tuvastada viiruse kontsentratsioonis 5 × 103-104 koopiat / ml veres. Analüüsi tulemuste kohaselt on normatiivne teadmine võimalik viraalset koormust hinnata ja ennustada ravi.

See on tähtis! See viiruse DNA aitab kaasa tsirroosi ja muude krooniliste maksahaiguste tekkele.

DNA tuvastamine PCR-ga on vajalik järgmistel juhtudel:

Kahtlused lõpliku analüüsi koostamisel pärast katset. Haiguse ägeda faasi kindlaksmääramine. Hepatiidi varjatud vormide tuvastamine. Tõhususe hindamine pärast viirusevastast ravi.

Kuidas PCR-i diagnostikast saadud tulemusi dešifreerida?

PCR kvantitatiivne

Kvantitatiivse hindamise abil saate määrata ainult viiruse olemasolu, aga ka viiruse koormus, kui PCR näitab positiivset tulemust.

Selle teabe väljaselgitamiseks on vaja kvantitatiivset meetodit:

Haiguse arengu intensiivsus. Ravi efektiivsus. Viirusvastaste ravimite suhtes resistentsuse väljaarendamine.

Kvantifitseerimine on kroonilise hepatiidi diagnoosimisel väga oluline. Sellisel juhul ei jää kõik näitajad tavapärasesse vahemikku. Transaminaaside tase tõuseb, viiruse aktiivsuse indeks on suurem kui 4 ja viiruse DNA kontsentratsioon on suurem kui 105 koopiat DNA / ml kohta. Kui viiruse kontsentratsioon on madalam ja transaminaaside tase on normaalne, siis võime rääkida passiivsest kandjast.

Enne viirusevastase ravi määramist on hädavajalik määrata PCR-de diagnostika, nimelt kvantitatiivne uuring, viiruskoormus.

Kas analüüs tehakse iga 3 kuu järel ja kui viiruse koormus suureneb 10 korda, siis võime rääkida viiruse resistentsusest ravile.

Kvantitatiivne analüüs annab väga olulist teavet, sest saate määrata, kui palju patogeeni DNA on veres. Mida suurem on selle kogus, seda suurem on viiruskoormus ja seda suurem on patsiendi seisund. Viiruslikku koormust vähendades pärast ravi alustamist saab hinnata selle efektiivsust. Mõningatel juhtudel on hepatiidi PCR näide täiendavateks uuringuteks, nagu näiteks maksa biopsia. Kõrgendatud ALAT taseme korral viiakse läbi PCR. Testide dekrüptimine on järgmine: kui viiruse koormus on rohkem kui 105 koopiat DNA / ml kohta ja ALAT tase ületab normi, kuid mitte rohkem kui 2 korda üle poole aasta, siis vajab selline patsient biopsia. Tugeva põletiku või fibroosiga on näidustatud viirusevastane ravi. Kui ALAT tase ületab normi rohkem kui 2 korda suure viiruse koormusega, siis tuleb ravi kohe ilma täiendava diagnostikavaldita ette kirjutada.

Ainult head spetsialistid suudavad kvantitatiivse PCRi tulemusi õigesti dešifreerida.

PCR-kvaliteet

Kvalitatiivne analüüs võimaldab määrata B-hepatiidi olemasolu veres. Tavaliselt ei tohiks see olla. Selle meetodiga saate diagnoosi täpselt kindlaks teha.

Kvaliteetne PCR-analüüs annab 100% täpse tulemuse.

Ükski teine ​​meetod ei paku selliseid usaldusväärseid andmeid. Enam kui pooled juhtudest, kui diagnoos on möödunud, tuvastatakse viiruse DNA tuvastamisel antigeeni puudumisel. On väga oluline diagnoosida haiguse alguses.

On tõestatud, et kui B-hepatiidi viiruse DNA aktiivselt paljuneb inimese kehas kahe kuu jooksul, muutub see haigus krooniliseks. Kui me hakkame viiruse vastu võitlema juba esimeste nädala jooksul pärast nakatumist, on täieliku taastumise võimalused väga suured.

Kuidas on uuringu tulemuste dekodeerimine kvalitatiivse meetodi abil?

Dekodeerimise analüüs on väga lihtne:

Tavaliselt peaks tulemus olema negatiivne, see tähendab, et viiruse DNA ei tuvastatud. Positiivne tulemus viitab hepatiidi esinemisele.

Analüüs aitab tuvastada viirust, määrata selle genotüüp ja alustada õigeaegset ravi. Sageli esineb DNA juuresolekul koos kvalitatiivse hindamisega ka kvantitatiivset analüüsi.

Kuidas uuringut ette valmistada?

Hepatiidi analüüsimisel PCR-diagnostika abil võetakse vere verega. Seda on kõige parem uurida hommikul, kuna veri tuleb alati annetada tühja kõhuga (pärast viimast toidukorra peab vähemalt 8 tundi läbima).

Selleks, et analüüs oleks võimalikult usaldusväärne, peab patsient olema teadlik mõnest tegurist, mis võib lõpptulemust mõjutada:

Enne veenist veri annetamist peate 20 minutiks puhkama. Lisaks antakse analüüsi tühja kõhuga, nii et veel 12 tundi te ei saa alkoholi juua, suitsetada, sportida ja süüa rasvaseid toite. Mõned ravimid, mida patsient peab võtma, võivad mõjutada lõpptulemust. Laboritehnik peaks olema teadlik uimastiravi juhtumitest. Kui veri tuleb alla 5-aastasele lapsele annetada, siis on sel juhul vaja seda jooma iga 10 minuti järel, pool tundi enne diagnoosi klaasi keedetud vees.

On väga oluline läbi viia PCR kliinikus, mis on hästi toiminud. Tõepoolest, hoolimata asjaolust, et PCR-iga määratakse viiruse olemasolu täpsusega kuni 100%, võib see näitaja langeda kuni 95% -ni, kui arvestada inimteguriga.

Kvalifitseerimata tehnikud või halva maine võib põhjustada vale tulemusi.

HBV on keeruline DNA-d sisaldav viirus ja kuulub Orthohepadnavirus perekonna Hepadnaviridae perekonda.

Hepatiit B - anthroponotic nakkuse, eelistatavalt parenteraalse nakatumise mehhanism, mis võib toimuda viirushaiguse kandjat, ägeda ja kroonilise maksahaiguse ja seda iseloomustab võimalikku arendamist ägeda maksapuudulikkuse, krooniline hepatiit, maksatsirroos ja primaarse maksavähi (hepatotsellulaarne kartsinoom).

Inimkeha nakatumine leiab aset HBV otsese sissetungimise kaudu verd (mis tahes invasiivsete sekkumiste, vere ja selle preparaatide transfusiooniga) või limaskestade ja naha kaudu sünnituse ajal seksuaalsete ja lähedaste leibkontaktide ajal. Kui maks, siis HBV tungib hepatotsüüdi, kus see hakkab kiiresti paljunema.

Nakkusprotsessi areng võib toimuda kahel viisil: kopeeritav ja integreeriv. Replitsceruv kujul infektsiooni põhjustab ägeda või kroonilise hepatiidi ja maksatsirroosi, arvestades integreeriv - töötada välja "terve" viirusinfektsiooni, kroonilise mitteaktiivsete hepatiit, maksatsirroos ja esmaste maksarakuline vähk.

HBV infektsiooni seroloogiline diagnoosimine ja prognoos põhineb viiruse antigeenide ja selle antikehade tuvastamisel. Kuid selgub, et B-hepatiidi viiruse populatsioonis on leitud piisavalt mutantseid tüvesid (HBeAg-negatiivsed), mida tavaliste seroloogiliste testidega ei leita. Seepärast on HBV nakkuse diagnoosimiseks PCR-meetod väga oluline.

PCR-i kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs hepatiit C jaoks: negatiivne, positiivne transkript

C-hepatiit on viiruse maksahaigus, mis on põhjustatud flaviviiruse HCV-st (ingliskeelne sõna "hepatiit C-viirus"), mille struktuur sisaldab ribonukleiinhappemolekuli (RNA). RNA kannab viiruse geneetilist koodi. Selle olemasolu võimaldab hepatiidi C PCR-i analüüsi.

HCV oht inimesele seisneb selles, et nn seroloogiline aken (infektsiooni aeg ja immuunsüsteemi reaktsiooni ilmnemine) võib olla üsna pikk - mitme nädala kuni kuue kuu jooksul.

See ei tuvasta nakkusi ega alusta ravi õigeaegselt.

Sõltuvalt organismi individuaalsetest omadustest võib HCV kandja esineda akuutses vormis ja esineda kroonilise haigusena, mis nõuab pikka ja kulukat ravi. Kui tuvastatakse HCV-vastased antikehad, tehakse laboratoorsed testid, sealhulgas PC-viirushepatiid C-ga. Seda katset tehakse kõigile inimestele, kelle veres on leitud HCV-vastased antikehad.

Mis on PCR-analüüs?

PCR-i laboratoorsed analüüsid hepatiit C jaoks - bioloogilise materjali uurimine, et tuvastada flavaviiruse esinemine.

Polümeraasi ahelreaktsioon (lühendina tähistab) näitab keha viirusliku kahjustuse kvantitatiivset väärtust, selle kvalitatiivseid omadusi ning RNA-viirust sisaldava genotüübi.

Nende põhjal ja täiendavate analüüside põhjal määratakse kindlaks ravi meetod ja kestus ning epidemioloogiline tegur (teisele kandjale edastamise oht).

Mis on hepatiit C RNA analüüs?

Hepatiit C PCR nimetatakse ka RNA analüüsiks (HCV RNA), kuna Flavaviirus sisaldab RNA osakest, mille virioni suurus on 30-60 nm. Selle mikroorganismi üks omadusi on mutatsioonide suur kalduvus.

Igale viiruse alamliigile (genotüübile) on erinev vastupanu, mis põhjustab patsiendi jaoks erinevaid ravimeetodeid ja edasise prognoosi olemust.

Bioloogiline materjal (venoosne veri) antakse tühja kõhuga ja seda reeglina testib reaalajaline PCR meetod (väga tundlik reaalajaline diagnostika, mille madalam tuvastuspiir on 15 IU / ml, kasutades suletud automatiseeritud süsteeme).

On ka muid katseid, näiteks COBAS AMPLICOR, mille tundlikkus on 50-100 RÜ / ml. Iga laboriuuringu jaoks on oluline tundlikkuse künnis, st reagendi võime tuvastada viiruse miinimumkontsentratsioon bioloogilises materjalis.

Hepatiit C analüüsi tüübid PCR abil

Hepatiit C PCR sisaldab kolme olulist komponenti:

  • kvalitatiivne analüüs;
  • kvantitatiivne analüüs;
  • genotüpiseerimine.

Need testid võimaldavad teil määrata viiremia olemust ja patogeeni geneetilisi omadusi. Sõltuvalt diagnostilise süsteemi tundlikkusest tehakse uuring üks kord ja mõnikord tehakse teine ​​katse tundlikuma reagendiga tulemuste kinnitamiseks või täpsustamiseks.

Hepatiidi C kõrge kvaliteediga PCR

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüsi teine ​​tavaline nimetus on hepatiit C PCR-analüüs kvalitatiivne. Katse standardne tundlikkus, mis võimaldab tuvastada viiruse kahjustusi, on vahemikus 10-500 RÜ / ml.

Hepatiidi C negatiivne PCR-analüüs näitab, et viiruse kontsentratsioon patsiendi veres on alla diagnostilise süsteemi tundlikkuse läve.

Kui kõrgekvaliteetne PCR annab vastuse "ei tuvastatud", siis on edasiseks raviks oluline teada reaktiivi tundlikkuse künnis.

Flavaviiruse valkude fraktsioonid ilmuvad palju hiljem.

C-hepatiit, kvantitatiivne PCR

PCR-hepatiidi C kvantitatiivne näitaja on viiruse koormus, mis peegeldab kehas flavaviiruse RNA kontsentratsiooni taset. See on näitaja, mis näitab, kui palju viiruse RNA fragmente on võetud vere kuupsentimeetri kohta. Hepatiit C RNA PCR-i tulemused tavapärases süsteemis kvantitatiivses testis on näidatud rahvusvaheliste ühikutes milliliitri kohta (RÜ / ml) ja neid saab registreerida erineval viisil, näiteks 1,7 miljonit või 1,700,000 RÜ / ml.

Hepatiidi C kvantitatiivne PCR-diagnostika tuleb patsientidele enne viirusevastase ravi alustamist ja 12. ravinädalal, et hinnata valitud HCV-ga tegelemise meetodi tulemusi. Viiruslik koormus võimaldab kindlaks teha kolm olulist haigusseisundit:

  • nakkavus, st viiruse edasikandumise oht ühelt kandjalt teisele (mida kõrgem on flavaviiruse RNA kontsentratsioon, seda suurem on tõenäosus nakatada teist inimest, näiteks seksuaalse kontakti kaudu);
  • ravi meetod ja tõhusus;
  • viirusevastase ravi kestus ja prognoos (seda kõrgem on viiruskoormus, seda kauem ravi kestab).

Hepatiidi C kvantitatiivne PCR-diagnostika sõltub laboratoorse testi tüübist ja selle tundlikkuse piirist. Norma alumist piiri peetakse näitajaks kuni 600 000 RÜ / ml, keskmine väärtus jääb vahemikku 600 000-700 000 RÜ / ml. 800 000 RÜ / ml ja kõrgemate tulemuste hulka peetakse RNA-d sisaldava viiruse kõrge taseme.

Genotüüpimine

Tänu kõrgele HCV mutatsioonilisele aktiivsusele looduses, on katsetamisel oluline kindlaks teha, milline viiruse genotüüp on patsiendi veres. Kokku on planeedil registreeritud 11 C-hepatiidi viiruse genotüüpi, mis sisaldavad paljusid alamliike (alatüüpe). Vene Föderatsiooni territooriumil jagunesid 1,2 ja 3.

Kuna C-hepatiidi C PCR RNA koos genotüpiseerimisega on väga oluline analüüsi komponent võimaldab arstil määrata viiruse resistentsust (resistentsust), valida sobivad ravimid ja määrata ravikuur.

Genotüpiseerimine võimaldab ka kaudselt määrata maksa seisundit. Näiteks kaasneb HCV-i 3 genotüübiga sageli steatoos, milles rasv kogub elundi rakkudes.

C-hepatiidi PCR-i vereanalüüs peaks andma näitaja, mis määrab genotüübi. Laboratoorsed reaktsioonid võivad öelda, et "ei ole kirjutatud" - ja see tähendab, et viirus on inimveres, mida katsesüsteem ei tuvasta. See võib viidata sellele, et antud geograafilises piirkonnas ei ole genotüüp tüüpiline. Antud juhul peaksite analüüsi korrata diagnostilise süsteemi suurema tundlikkusega.

C-hepatiidi PCR-analüüsi dekodeerimine

C-hepatiidi PCR kvantitatiivne dekrüpteerimine võib põhineda ülalnimetatud andmetel. Laboratoorsete testide tulemuste saamisel kirjutavad tavaliselt järgmised andmed:

  • "Leitud" / "ei leitud" (kõrgekvaliteetne C-hepatiidi PCR);
  • RNA-d sisaldavate fraktsioonide arv, näiteks 831,680 ME / ml (kvantitatiivne PCR-analüüs);
  • arv, mis määrab HCV genotüübi, näiteks - 1, 2, 3, 4;
  • Katse nimi on enamasti reaalajas.

Kõige olulisem PCR-i hepatiidi C analüüsiks detekteerimisel on teine ​​lõik, mis näitab viiruse koormust, mis määrab ravi prognoosi, meetodi ja kestuse.

Kui hepatiit C PCR-test on negatiivne ja ELISA on positiivne - mida see tähendab?

Laboratoorsete analüüside dekodeerimiseks on oluline pöörduda hepatoloogi või nakkushaiguste spetsialisti poole, kes selgitab saadud teavet vastavalt diagnostilise süsteemi tüübile ja selle tundlikkuse piirväärtusele. Meditsiinipraktikas on palju andmeid vereanalüüside kohta, mis võivad inimesi meditsiinilise hariduse puudumisel eksitada.

Näiteks kui hepatiit C-vastane PCR-test on negatiivne ja ELISA on positiivne, võib see tähendada, et patsiendi veres ei esine HCV-d praegu, kuid varem oli ta saanud hepatiidi C ägedat kuju. Arvatakse, et positiivne ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) näitab, et on veres antikehad, mis on toodetud pärast viiruse sissetungi minevikus. Kuid tänapäeva meditsiinipraktikas peetakse ELISA-analüüsi ebapiisavalt usaldusväärseks ja see annab sageli ebatüüpilisi tulemusi, nii et arstid kasutavad seda primaarse sõeluuringuna. Haiguse diagnoosimisel lähtuvad spetsialistid täpselt PCR-testiga.

Kasulik video

Järgnev video annab väga üksikasjaliku ja huvitava kirjelduse PCR-meetodi olemusest, kuidas analüüsimine toimub:

Järeldus

PCR-i analüüsimiseks C-hepatiidi korral võetakse tavaliselt verevere. Enamasti on bioloogilise materjali kahekordne kogus - ELISA ja otseselt PCR-testi jaoks. Korrektsete katsetulemuste jaoks on vajalik vastavus bioloogilise materjali laboriproovide võtmise põhireeglitele:

  • analüüsitava veri on tühja kõhuga esimesel poolel;
  • jahu ja vereproovi võtmine peaks võtma vähemalt 8 tundi;
  • Alkoholi ja praetud toidud tuleks enne testi sooritamist välja jätta;
  • päeva jooksul enne vere annetamist on vajalik vältida suurt füüsilist koormust.

Vereanalüüsi tulemused on tavaliselt järgmisel päeval valmis.

Hepatiit B PCR

PCR-diagnostika võimaldab mitte ainult määrata B-hepatiidi viiruse olemasolu veres ja selle etioloogias, vaid ka hinnata selle aktiivsust. Viiruslike koormuste tuvastamine on eriti oluline efektiivse ravi valimisel, kui see on liiga kõrge, siis taaskasutamise tõenäosus väheneb. Mis on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi olemus?

PCR-i diagnostika põhiolemus

In vivo perioodi lõpus võib tuvastada DNA viiruse veres hepatiidi PCR meetodil, sel ajal võib HBsAg tuvastada transaminaaside taseme tõusu taustal, pärast mida ilmneb HBeAg.

  • Kvalitatiivse definitsiooni abil saate diagnoosi täpselt kindlaks määrata, hepatiiti esineb või puudub. Tavaliselt ei tohiks veres olla DNA-d.
  • Kvantitatiivne meetod võimaldab määrata haiguse arengu intensiivsust ja viiruse paljunemist.

Analüüs on väga tundlik ja usaldusväärne. Bioloogilise materjalina võta venoosne veri. Tänu kaasaegsele tehnoloogiale võib PCR tuvastada viiruse kontsentratsioonis 5 × 10 3 -10 4 koopiat / ml veres. Analüüsi tulemuste kohaselt on normatiivne teadmine võimalik viraalset koormust hinnata ja ennustada ravi.

See on tähtis! See viiruse DNA aitab kaasa tsirroosi ja muude krooniliste maksahaiguste tekkele.

DNA tuvastamine PCR-ga on vajalik järgmistel juhtudel:

  1. Kahtlused lõpliku analüüsi koostamisel pärast katset.
  2. Haiguse ägeda faasi kindlaksmääramine.
  3. Hepatiidi varjatud vormide tuvastamine.
  4. Tõhususe hindamine pärast viirusevastast ravi.

Kuidas PCR-i diagnostikast saadud tulemusi dešifreerida?

PCR kvantitatiivne

Kvantitatiivse hindamise abil saate määrata ainult viiruse olemasolu, aga ka viiruse koormus, kui PCR näitab positiivset tulemust.

Selle teabe väljaselgitamiseks on vaja kvantitatiivset meetodit:

  1. Haiguse arengu intensiivsus.
  2. Ravi efektiivsus.
  3. Viirusvastaste ravimite suhtes resistentsuse väljaarendamine.

Kvantifitseerimine on kroonilise hepatiidi diagnoosimisel väga oluline. Sellisel juhul ei jää kõik näitajad tavapärasesse vahemikku. Transaminaaside tase tõuseb, viiruse aktiivsuse indeks on suurem kui 4 ja viiruse DNA kontsentratsioon on suurem kui 105 koopiat DNA / ml kohta. Kui viiruse kontsentratsioon on madalam ja transaminaaside tase on normaalne, siis võime rääkida passiivsest kandjast.

Enne viirusevastase ravi määramist on hädavajalik määrata PCR-de diagnostika, nimelt kvantitatiivne uuring, viiruskoormus.

Kas analüüs tehakse iga 3 kuu järel ja kui viiruse koormus suureneb 10 korda, siis võime rääkida viiruse resistentsusest ravile.

  • Kvantitatiivne analüüs annab väga olulist teavet, sest saate määrata, kui palju patogeeni DNA on veres. Mida suurem on selle kogus, seda suurem on viiruskoormus ja seda suurem on patsiendi seisund.
  • Viiruslikku koormust vähendades pärast ravi alustamist saab hinnata selle efektiivsust.
  • Mõningatel juhtudel on hepatiidi PCR näide täiendavateks uuringuteks, nagu näiteks maksa biopsia. Kõrgendatud ALAT taseme korral viiakse läbi PCR. Testide dekrüptimine on järgmine: kui viiruse koormus on üle 10 5 koopia DNA / ml ja ALAT tase ületab normi, kuid mitte rohkem kui 2 korda poolaasta jooksul, siis vajab selline patsient biopsia. Tugeva põletiku või fibroosiga on näidustatud viirusevastane ravi. Kui ALAT tase ületab normi rohkem kui 2 korda suure viiruse koormusega, siis tuleb ravi kohe ilma täiendava diagnostikavaldita ette kirjutada.

Ainult head spetsialistid suudavad kvantitatiivse PCRi tulemusi õigesti dešifreerida.

PCR-kvaliteet

Kvalitatiivne analüüs võimaldab määrata B-hepatiidi olemasolu veres. Tavaliselt ei tohiks see olla. Selle meetodiga saate diagnoosi täpselt kindlaks teha.

Kvaliteetne PCR-analüüs annab 100% täpse tulemuse.

Ükski teine ​​meetod ei paku selliseid usaldusväärseid andmeid. Enam kui pooled juhtudest, kui diagnoos on möödunud, tuvastatakse viiruse DNA tuvastamisel antigeeni puudumisel. On väga oluline diagnoosida haiguse alguses.

On tõestatud, et kui B-hepatiidi viiruse DNA aktiivselt paljuneb inimese kehas kahe kuu jooksul, muutub see haigus krooniliseks. Kui me hakkame viiruse vastu võitlema juba esimeste nädala jooksul pärast nakatumist, on täieliku taastumise võimalused väga suured.

Kuidas on uuringu tulemuste dekodeerimine kvalitatiivse meetodi abil?

Dekodeerimise analüüs on väga lihtne:

  • Tavaliselt peaks tulemus olema negatiivne, see tähendab, et viiruse DNA ei tuvastatud.
  • Positiivne tulemus viitab hepatiidi esinemisele.

Analüüs aitab tuvastada viirust, määrata selle genotüüp ja alustada õigeaegset ravi. Sageli esineb DNA juuresolekul koos kvalitatiivse hindamisega ka kvantitatiivset analüüsi.

Kuidas uuringut ette valmistada?

Hepatiidi analüüsimisel PCR-diagnostika abil võetakse vere verega. Seda on kõige parem uurida hommikul, kuna veri tuleb alati annetada tühja kõhuga (pärast viimast toidukorra peab vähemalt 8 tundi läbima).

Selleks, et analüüs oleks võimalikult usaldusväärne, peab patsient olema teadlik mõnest tegurist, mis võib lõpptulemust mõjutada:

  • Enne veenist veri annetamist peate 20 minutiks puhkama.
  • Lisaks antakse analüüsi tühja kõhuga, nii et veel 12 tundi te ei saa alkoholi juua, suitsetada, sportida ja süüa rasvaseid toite.
  • Mõned ravimid, mida patsient peab võtma, võivad mõjutada lõpptulemust. Laboritehnik peaks olema teadlik uimastiravi juhtumitest.
  • Kui veri tuleb alla 5-aastasele lapsele annetada, siis on sel juhul vaja seda jooma iga 10 minuti järel, pool tundi enne diagnoosi klaasi keedetud vees.

On väga oluline läbi viia PCR kliinikus, mis on hästi toiminud. Tõepoolest, hoolimata asjaolust, et PCR-iga määratakse viiruse olemasolu täpsusega kuni 100%, võib see näitaja langeda kuni 95% -ni, kui arvestada inimteguriga.

Kvalifitseerimata tehnikud või halva maine võib põhjustada vale tulemusi.

B-hepatiidi viiruse (ELISA ja PCR) uuringud

B-hepatiidi viiruse antigeen (HBsAg)

B-hepatiidi pinnaantigeen seerumis tavaliselt puudub.
Hepatiit B pinnaantigeeni (HBsAg) avastamine seerumis kinnitab B-hepatiidi viiruse ägedat või kroonilist nakkust.

Ägeda haiguse korral tuvastatakse HBsAg seerumis viimase inkuaarse perioodi 1-2 nädala jooksul ja kliinilise perioodi esimesed 2-3 nädalat. HBsAg tsirkuleerumine veres võib olla piiratud mõne päevaga, nii et peaksite püüdma patsiente varakult esialgselt uurida. ELISA meetod võimaldab avastada HBsAg rohkem kui 90% patsientidest. Peaaegu 5% -l patsientidest ei leia kõige tundlikumad uurimismeetodid HBsAg-d, sellistel juhtudel kinnitab viirusliku hepatiidi B etioloogiat HBcAg-vastase JgM või PCR-i olemasolu.

Seerumi HBsAg kontsentratsioon B-hepatiidi kõigi vormide raskusastmetel haiguse kõrgusel on märkimisväärne kõikumiste hulk, kuid on kindel korrektsus: ägeda perioodi jooksul on seerumi HBsAg kontsentratsiooni ja haiguse tõsidus vahel pöördeline seos.

HBsAg kõrge kontsentratsioon on levinud kergete ja mõõdukate haigusseisundite korral. Raskete ja pahaloomuliste vormide korral on HBsAg kontsentratsioon veres sageli madal ja 20% -l raskekujuliste vormide ja 30% -l patsientidest, kellel on pahaloomuline antigeen veres, ei pruugi üldse tuvastada. HBsAg-vastase antikehaga patsientidel peetakse selle tausta välimust ebasoodsaks diagnostiliseks märgiks; see määratakse kindlaks hepatiit B pahaloomulistes vormides.

B-hepatiidi ägedal käigus väheneb HBsAg kontsentratsioon veres, kuni selle antigeeni täielik kadumine muutub. Enamikus patsientidest kaob HBsAg 3 kuu jooksul pärast ägeda infektsiooni tekkimist.

Akuutse perioodi 3. nädala lõpuks HBsAg kontsentratsiooni vähenemine üle 50% viitab tavaliselt infektsiooni protsessi lõpuleviimisele. Tavaliselt patsientidel, kelle haigus on kõrgem HBsAg kontsentratsioonist, tuvastatakse see veres mitu kuud.
HBsAg madala kontsentratsiooniga patsientidel kaob palju varem (mõnikord mitu päeva pärast haiguse algust). Üldiselt on HBsAg detekteerimise aeg vahemikus mitu päeva kuni 4-5 kuud. HBsAg maksimaalne ägeda hepatiidi B käigus avastamise aeg ei ületa 6 kuud haiguse alguse hetkest.

HBsAg-i võib reeglina leida tervetel inimestel profülaktilistes või juhuslikes uuringutes. Sellistel juhtudel uuritakse muid viirusliku hepatiidi B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG ja anti-HBeAg-vastaseid markereid ja uuritakse maksafunktsiooni.

Kui negatiivseid tulemusi on vaja teha, on korduvad HBsAg-uuringud.
Kui korduvad üle 3-kuulised vereanalüüsid avastavad HBsAg-i, liigitatakse see patsient viirusliku hepatiit B-ga krooniliseks patsiendiks.
HBsAg esinemine on üsna tavaline. Maailmas on üle 300 miljoni vedaja ja meie riigis on umbes 10 miljonit vedaja.
HBsAg-i vereringe lõpetamine järgneva serokonversiooniga (anti-HB-de teke) näitab alati kehas olevat taastumist.

HBsAg-i vereanalüüsi kasutatakse järgmistel eesmärkidel:

  • ägeda hepatiidi B diagnoosimiseks:
    • inkubatsiooniperiood;
    • äge haigus;
    • varane taastumine;
  • kroonilise viirushepatiidi B diagnoosimiseks;
  • haiguste puhul:
    • püsiv krooniline hepatiit;
    • maksa tsirroos;
  • riskigruppide patsientide skriinimiseks ja tuvastamiseks:

  • sagedaste hemotransfusioonidega patsiendid;
  • kroonilise neerupuudulikkusega patsiendid;
  • mitme hemodialüüsi teel;
  • immuunpuudulikkuse seisundiga patsiendid, sealhulgas AIDS.
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemused on väljendatud kvalitatiivselt - positiivsed või negatiivsed. Negatiivne tulemus viitab seerumi HBsAg puudumisele. Positiivne tulemus - HBsAg identifitseerimine näitab ägeda viirusliku hepatiidi B ja ka kroonilise viirusliku hepatiit B inkubatsiooni või ägedat perioodi.

    B-hepatiidi viiruse JgG (anti-HBcAg JgG) tuumase antigeeni antikehad

    Tavaliselt puudub seerumi anti-HBcAg sisaldus seerumis.
    Anti-HBcAg JgG-ga patsientidel ilmnevad viirusliku hepatiit B ägedal perioodil ja nad püsivad kogu elu vältel. Anti-HBcAg JgG on ülekantud HBV juhtiv marker.

    Anti-HBcAg JgG vereanalüüsid kasutatakse diagnoosimiseks:

  • krooniline viirushepatiit B HBs antigeeni manulusel seerumis;
  • viiruslik hepatiit B
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemus väljendatakse kvalitatiivselt - positiivne või negatiivne. Negatiivne tulemus viitab seerumi anti-HBcAg JgG puudumisele. Positiivne tulemus - anti-HBcAg JgG tuvastamine näitab ägeda infektsiooni, paranemise või eelnevalt viiruse viiruse hepatiidi B

    Hepatiit B viiruse "e" antigeen (HBeAg)

    Tavaliselt puudub HBeAg seerumis.
    Enamiku ägeda viirusliku hepatiit B patsientide seerumis võib tuvastada HBeAg-i. Tavaliselt kaob see HBs-antigeeni sisaldavas veres. HBeAg kõrge tase haiguse esimestel nädalatel või selle avastamine enam kui 8 nädala jooksul põhjustab kroonilise infektsiooni kahtlust.

    Seda antigeeni tuvastavad sageli viirusliku etioloogia krooniline aktiivne hepatiit. Eriti huvipakkuv HBeAg määratlus on asjaolu, et selle tuvastamine iseloomustab nakkusprotsessi aktiivset replikatsioonifaasi. On tõendatud, et kõrge HBeAg kontsentratsioon vastab kõrgele DNA polümeraasi aktiivsusele ja iseloomustab viiruse aktiivset replikatsiooni.

    HBeAg esinemine veres näitab selle kõrge nakkavust, st aktiivse B-hepatiidi nakkuse esinemine organismis, mida uuritakse, ja see tuvastatakse ainult juhul, kui HB-de antigeen on veres. Kroonilise aktiivse hepatiidiga patsientidel kasutatakse viirusevastaseid ravimeid ainult siis, kui HBeAg tuvastatakse veres. HBeAg - antigeen - ägeda faasi marker ja hepatiit B viiruse replikatsioon.

    HBe antigeeni olemasolu vereproovi kasutatakse diagnoosimiseks:

  • viirusliku hepatiidi B inkubatsiooniperiood;
  • viirusliku hepatiidi B prodromaalne periood;
  • viirusliku hepatiidi B ägeda perioodi;
  • krooniline püsiv viiruslik hepatiit B
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemus väljendatakse kvalitatiivselt - positiivne või negatiivne. Negatiivne tulemus viitab seerumi HBeAg puudumisele. Positiivne tulemus - HBeAg tuvastamine viitab ägeda viirusliku hepatiidi B inkubatsioonile või akuutsele perioodile või viiruse jätkuvale replikatsioonile ja patsiendi nakkavusele.

    B-hepatiidi viiruse (anti-HBeAg) antigeeni "e" antikehad

    HBeAg-vastane antikeha seerumis tavaliselt puudub. HBeAg-vastaste antikehade ilming näitab tavaliselt intensiivset B-hepatiidi viiruse eemaldamist ja patsiendi kerget infektsiooni.

    Need antikehad ilmnevad ägeda perioodi jooksul ja püsivad kuni 5 aastat pärast infektsiooni. Kroonilise püsiva hepatiidi korral leitakse HBsAg-iga patsiendi veres HBeAg-vastane antikeha. Serokonversioon, st HBeAg-i üleminek HBeAg-le kroonilise aktiivse hepatiidi vastu on enamasti prognostiliselt soodne, kuid sama serokonversioon ei paranda raskeid tsirroosseid maksa transformatsioone.

    HBeAg-vastase antikeha olemasolu vereanalüüse kasutatakse järgmistel juhtudel viirushepatiidi B diagnoosimisel:

  • haiguse algfaasi kindlakstegemine;
  • äge infektsioon;
  • varane taastumine;
  • taastusravi;
  • hilise etapi taastumine.
  • hiljuti ülekantud viirushepatiidi B diagnoos;
  • kroonilise püsiva viirusliku hepatiidi B diagnoos
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemus väljendatakse kvalitatiivselt - positiivne või negatiivne. Negatiivne tulemus viitab HBeAg antikehade puudumisele seerumis. Positiivne tulemus on HBeAg antikehade tuvastamine, mis võib viidata ägeda viirusliku hepatiidi B esialgsele staadiumile, ägeda nakkusperioodi vältel, rekonstruktsiooni varase seisundi taastumisel, paranemisel, hiljuti üle viiruse hepatiit B või püsiv viiruslik hepatiit B.

    Kroonilise hepatiit B esinemise kriteeriumid on:

  • HBV DNA tuvastamine või perioodiline tuvastamine veres;
  • pidev või perioodiline ALAT / AST aktiivsuse suurenemine veres;
  • maksa biopsia histoloogilises uuringus kroonilise hepatiidi morfoloogilised tunnused.
  • B-hepatiidi viiruse tuvastamine PCR-ga (kvalitatiivselt)

    B-hepatiidi viirus veres ei ole tavaliselt olemas.
    B-hepatiidi viiruse kvalitatiivne määramine PCR-meetodil veres võimaldab tuvastada viiruse olemasolu patsiendi kehas ja seega seeläbi haiguse etioloogiat.

    See uuring annab kasulikku teavet ägeda viirusliku hepatiidi B diagnoosimiseks haiguse inkubatsioonil ja varases arengujärgus, kui patsiendi peamised seroloogilised markerid veres puuduvad. HBeAg puudumisel tuvastatakse 50% patsientidest seerumi viiruse DNA. PCR-meetodi analüütiline tundlikkus on vähemalt 5 μl viiruse osakestest, viimane DNA avastamise proov, spetsiifilisus 98%.

    See meetod on oluline kroonilise HBV diagnoosimiseks ja jälgimiseks. B-hepatiidi viiruse krooniline kandja on põhjustanud ligikaudu 5-10% tsirroosi ja teiste krooniliste maksahaiguste juhtumitest. Selliste haiguste aktiivsuse markerid on HBeAg ja B-hepatiidi viiruse DNA sisaldus veres.

    PCR-meetod võimaldab määrata B-hepatiidi viiruse DNA nii kvalitatiivselt kui kvantitatiivselt veres. Mõlemal juhul on määratletud fragmendiks hepatiit B viiruse struktuurvalgu geeni ainulaadne DNA järjestus.

    B-hepatiidi viiruse DNA tuvastamine biomaterjalides, kasutades PCRi, on vajalik:

  • küsitavate seroloogiliste testide tulemuste lahendamine;
  • haiguse ägeda faasi avastamine võrreldes eelmise nakatumise või kokkupuutega;
  • kontrollida viirusevastase ravi efektiivsust.
  • B-hepatiidi viiruse DNA kadumine verest on tähtis ravi efektiivsus

    B-hepatiidi viiruse tuvastamine PCR abil (kvantitatiivne)

    See meetod annab olulist teavet haiguse arengu intensiivsuse, ravi tõhususe ja aktiivsete ravimite resistentsuse arengu kohta.
    Seerumis PCR-ga viirusliku hepatiidi diagnoosimiseks kasutatakse katsesüsteeme, mille tundlikkus proovis on 50-100 koopiat, mis võimaldab viirust tuvastada kontsentratsioonil 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 koopiat / ml. Viiruse replikatsiooni hindamiseks on kindlasti vajalik viirusliku hepatiit B PCR.

    HBeAg puudumisel tuvastatakse 50% patsientidest seerumi viiruse DNA. Seerumi, lümfotsüütide ja hepatobioptaatide kasutamine võib olla B-hepatiidi viiruse DNA tuvastamiseks vajalik materjal.

    • Vireemia taseme hindamine on järgmine:
    • vähem kui 2,10 ^ 5 koopiat / ml (vähem kui 2,10 ^ 5 IU / ml) - madal vireemia;
    • alates 2.10 ^ 5 koopiat / ml (2.10 ^ 5 RÜ / ml) kuni 2.10 ^ 6 koopiat / ml (8.10 ^ 5 RÜ / ml) - keskmine vireemia;
    • rohkem kui 2,10 ^ 6 koopiat / ml - kõrge vireemia.

    On olemas seos ägeda viirushepatiidi B ja HBV DNA kontsentratsiooni vahel patsiendi veres. Vireemia madala taseme korral on infektsiooni kroniseerimise protsess peaaegu null, keskmine - protsess on kroonineeritud 25-30% patsientidest ja kõrge vireemia korral muutub äge viirushepatiit B enamasti krooniliseks.

    Kroonilise HBV interferoon-alfa raviks tuleb arvestada aktiivse viiruse replikatsiooni markerite esinemisega (HBV HBV, HBeAg ja HBV DNA tuvastamine seerumis viimase 6 kuu jooksul).

    Ravi efektiivsuse hindamise kriteeriumid on HBeAg ja HBV DNA kadumine veres, millega tavaliselt kaasneb transaminaaside taseme normaliseerimine ja haiguse pikaajaline taandareng, 80% -l patsientidest kaob vererõhk viienda ravikuu jooksul verest. Vireemia keskmise taseme vähendamine kolmanda päeva jooksul alates ravi algusest 85% või rohkem võrreldes algväärtusega on kiire ja õiglaselt täpne kriteerium ravi efektiivsuse ennustamiseks.


    Seotud Artiklid Hepatiit