C-hepatiidi PCR analüüs

Share Tweet Pin it

Hepatiidi diagnoos sisaldab mitmeid viiruse olemasolu kindlakstegemiseks veres. Üks haiguse avastamise viise on selline uurimismeetod nagu C-hepatiidi PCR. Miks on hepatiidi PCR analüüsi oluline nii, nagu seda tehakse ja detekteeritakse?

Mis see on?

Polümeraasi ahelreaktsiooni või PCR-i kasutatakse maohaavandi, koliidi, enteriidi diagnoosimiseks. Kuid selle peamine eelis seisneb selles, et see aitab organismil tuvastada nii C-hepatiidi viirust kui ka selle antikehasid, millel on võime mitte põhjustada immuunsüsteemi reaktsioone nende muteerumise võime tõttu.

Uuring ja selle olemus seisneb teatud tingimuste loomises, mille alusel toimub hepatiidi RNA ahelreaktsioon. Kui leitakse kokkulangevus võrreldes C-hepatiidi viiruse nukleotiidijärjestusega, siis see näitab, et veres leidub viiruse osakesi, ja maksa levivad protsessid. Kui viiruse kogus on alla teatud taseme, tehakse negatiivne diagnoos ja kui see on kõrgem, siis on see positiivne.

Hepatiidi PCR-meetodil kasutatakse kahte tüüpi vereanalüüse: kvantitatiivne analüüs ja kvalitatiivne analüüs.

Nagu eespool mainitud, määrab kvantitatiivne PCR hepatiidi viiruse RNA kontsentratsiooni. Lisaks on ta võimeline andma teavet intensiivsuse kohta, millega patoloogia areneb, ja ettenähtud ravi tõhusust. Hepatiidi C kvantitatiivne analüüs on äärmiselt tähtis, kuna see määrab vastupanuvõime viirusevastaste ravimite toimele ja võimaldab teil ravi kohandada.

Pärast seda, kui patsient läbib ravikuuri, aitab PCR määrata kohtumiste järjekorda. Mõnel juhul on vaja täiendavaid uuringuid. Näiteks kui ALP tase on suurenenud (kuid mitte rohkem kui 2 korda kuue kuu jooksul) ja analüüsi transkriptsioon viitab viiruse koormusele üle 105 RÜ / ml, antakse patsiendile biopsia. Kui PCR kvantitatiivne analüüs näitab tugevat põletikku ja fibroosi, on patsiendile ette nähtud ravi viirusevastaste ravimitega.

Olukorra puhul, kus suur arv viiruseosakesi on kombineeritud kõrge ALT-ga, tuleb patsienti kohe ravida ilma täiendavate diagnostiliste abinõudeta.

Võtke see test ja teada, kas teil on probleeme maksaga.

Hepatiidi veres kvantitatiivse analüüsi abil saab kvalifitseeritult kvalifitseeritud ja kogenud spetsialistid dešifreerida ja tänapäevased tehnoloogiad aitavad seda teha vähese viiruse kontsentratsiooniga veres.

PCR-i kvalitatiivne analüüs on mõeldud kindlaks tegema ja kinnitama viiruse tegelikku olemasolu organismis. See viiakse läbi, kui hepatiidi antikehad tuvastatakse veres. See on hepatiidi kvalitatiivne analüüs, mis tagab tulemuse täpsuse 100% võrra ja võimaldab teil diagnoosida haiguse varajastes staadiumides, mis võimaldab alustada võitlust hepatiidi vastu juba esimestel nädalatel pärast nakatamist ja suurendab täielikku taastumist (haiguse B korral).

PCR-i eelised

PCR uuringus ja hepatiidi vereanalüüsi detekteerimisel saate määrata ka patogeeni genotüübi. Kuid kokku on 6 viiruse genotüüpi ja suur hulk alatüüpe, kuid meie piirkonnas on sagedased 1, 2 ja 3 genotüübid.

Seda tüüpi diagnoosi muud eelised on:

  • saadud indikaatorite kõrge täpsus ja väike vea tõenäosus nendes;
  • kõrge viiruse osakeste tundlikkuse tase veres;
  • võimalus mitme haigusetekitaja identifitseerimiseks korraga;
  • kõrge antigeense varieeruvusega patogeensete intratsellulaarsete mikroorganismide diagnoosimine;
  • hepatiidi analüüsi dekodeerimisega töötades võimaldab teil tuvastada varjatud praeguseid infektsioone.

Kes on määratud

Hepatiidi PCR-analüüsi läbivad järgmised inimesed:

  • rasedad naised;
  • tervishoiutöötajad;
  • potentsiaalne veri ja doonorid;
  • need, kellel on haiguse iseloomulikud tunnused;
  • HIV-nakkusega inimesed;
  • uimastisõltlased;
  • promiscuous.

Kuidas toimub analüüs ja selleks on vajalik koolitus?

Vereproovi võtmine PCR-i jaoks toimub veenist. Tavaliselt toimub see hommikul enne seda, kui inimene on söönud, sest pärast toidukorda söömist peab vähemalt 8 tundi läbima. Äärmuslikel juhtudel võib verd kontrollida päeva või õhtul, kuid analüüsi ja toidutarbimise vaheline ajavahemik peab olema vähemalt 5 tundi.

Inimtegur võib tulemusi kvantitatiivselt mõjutada: nende täpsus väheneb mõnel juhul 100% -lt 95% -le, seetõttu on vaja ette valmistada vere annetamist. Analüüsimiseks kasutatava biomaterjali kvaliteet on asjakohane, kui patsient järgib järgmisi reegleid:

  • enne vere andmist võite jooma ainult puhta veega;
  • kaks päeva enne uuringut on vaja keelduda praetud ja rasvase toidu ning alkohoolsete jookide vastuvõtmisest;
  • üks päev enne labori visiiti peaks lõpetama ravimite võtmise. Kui see ei ole võimalik, on tingimata teatada laboritehnikule ja ravivabale arstile;
  • päev enne, kui peate vältima stressirohke olukordi ja füüsilist koormust;
  • ultraheli-, röntgeni- ja instrumentaalanalüüse ei tohiks teha vahetult enne vereannetamist;
  • analüüsi tunni pärast tuleb hoiduda suitsetamisest;
  • 20 minutit enne vere annetamist peate häirima, rahunema ja välja hingama.

Kui laps alla 5-aastase lapse saab uuringu, peavad lapsevanemad tagama, et ta jookseb keedetud vett iga 10 minuti järel pool minutit enne biomaterjali võtmist.

Saadud andmete dekrüpteerimine

Analüüsi dekodeerimist võib esitada sõnadega (kvalitatiivse uuringu puhul), näiteks "ei tuvastatud" ega "allpool muutuste ulatust". Esimesel juhul näitab see, et infektsiooni ei leitud. Teises - viirus olemas, kuid väikestes kogustes. Selline olukord nõuab uuesti teadusuuringuid.

Viiruslik koormus määratakse infektsioosse RNA koguse järgi ja seda nimetatakse IU / ml või koopiateks / ml.

C-hepatiidi kvantitatiivse analüüsi normaalne indikaator (norm) on vahemikus 1,8x102 kuni 2,4x107 RÜ / ml.

Viiruse kontsentratsioon veres võib olla:

  • madal: 600 IU / ml kuni 3x10 4 / ml;
  • keskmine: alates 3x10 4 RÜ / ml kuni 8 x 105 RÜ / ml;
  • kõrge: rohkem kui 8x10 5 RÜ / ml.

Hepatiidi PCR-i kvantitatiivne ja kvalitatiivne analüüs võimaldab kindlaks teha viiruse olemasolu organismis ja selle kontsentratsiooni taset. Mitmemõõtmeline ahelreaktsioon suudab diagnoosida haigust oma varases staadiumis, kuid selleks on vaja patsiente võimalikult kiiresti pöörduda arstide poole ja aidata rangelt järgida arsti soovitusi.

Analüüsi teostamine PCR abil: protseduuri kirjeldus

Polümeraasi ahelreaktsioon on teada 30 aastat. Seda kasutatakse laialdaselt paljudes valdkondades, alates arheoloogia ja geneetika.

See on PCR-meetod, mis aitab luua isadust, kuid seda kasutatakse sageli inimeste organismi erinevate nakkushaiguste tuvastamiseks.

Kuidas PCR-analüüs läbi viiakse ja mis see on? Püüame neile küsimustele üksikasjalikult vastata.

PCR analüüs - mis see on?

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on molekulaarse geneetilise diagnostika kõrge täpsusega meetod, mis võimaldab tuvastada inimestel mitmesuguseid nakkushaigusi ja pärilikke haigusi nii akuutses kui ka kroonilises staadiumis ning juba ammu enne haiguse ilmnemist.

PCR-meetod on täiesti spetsiifiline ja korrektne, ei saa anda valepositiivseid tulemusi. See tähendab, et kui infektsiooni ei esine, ei näita analüüs kunagi seda, mis see on. Seepärast on diagnoosimise heakskiitmine sageli sageli põhjustav toimeaine ja selle laadi kindlakstegemiseks täiendav PCR-analüüs.

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) 1983. aastal, välja töötanud Carey Mulllis (USA), kellele 1993. aastal sai ta Nobeli preemia keemias.

Mis on selle meetodi eelis?

Selle meetodiga diagnoosimine võimaldab leida patogeeni otseselt uuritavates materjalides sisalduvas geenis. See on kõige täpsem analüüs suguelundite infektsioonide, varjatud nakkuste, erinevate sugulisel teel levivate haiguste kohta.

Erinevused PCR-diagnostika muudest laboriuuringute meetoditest on järgmised:

  • selle meetodi eesmärk on identifitseerida patogeen ise;
  • PCR-diagnostika eristatakse nende mitmekülgsuse tõttu: mitmete patogeenide tuvastamiseks;
  • haigused on piisav ainult patsiendi bioloogiline proov;
  • meetod on väga tundlik ja sellega ei kaasne muid ristreaktsioone.

Lisaks on PCR-i diagnostika eeliseks see, et patsiendi bioloogiline materjal sobib analüüsiks: vere, genitaalide, uriini, sperma väljutamise.

Milliseid infektsioone saab PCR-i abil tuvastada?

Organismis võib esineda suur hulk patogeene, sealhulgas "peidetud", mis ei avaldu pikka aega.

PCR-i rasvaanalüüs võimaldab selliste nakkuste avastamist:

PCR-i katsematerjaliks on tavaliselt röga, sülg, urine ja veri. Enne analüüsimist peate hoolikalt selle ette valmistama, olles eelnevalt konsulteerinud arstiga.

PCR-i vereeritakse tavaliselt tühja kõhuga. Hea tulemused näitavad analüüsi, kui uuringu materjal võetakse emakakaelasest või kusejõust. Sellisel juhul on parim PCR-diagnostika viimine hiljemalt üks päev pärast vahekorda.

PCR-sordid

PCR-i kasutatakse paljudes valdkondades analüüsimiseks ja teaduslikes katsetes. On olemas erinevad analüüsimeetodid:

  1. PNR-ga (pöördtranskriptsiooniga PCR, RT-PCR (inglise keeles)) kasutatakse RNA raamatukogust teadaoleva järjestuse amplifitseerimiseks, isoleerimiseks või identifitseerimiseks.
  2. Inverteeritud PCR (Inverse PCR (Eng.)) - kasutatakse, kui soovitud järjestuses on teada ainult väike osa. See meetod on eriti kasulik, kui on vaja kindlaks määrata naaberjärjestused pärast DNA sisestamist genoomi.
  3. Liigendatud PCR-i (lestatud PCR) abil kasutatakse kõrvalsaaduste reaktsioonide arvu vähendamiseks. Kasutatakse kahte paari praimereid ja tehakse kaks järjestikust reaktsiooni.
  4. Asümmeetriline PCR (Asymmetric PCR) viiakse läbi, kui on vaja põhiliselt ühe originaalse DNA ahela võimendamist. Kasutatakse mõnes järjestuse ja hübridiseerimise katsetes.
  5. Kvantitatiivne PCR (kvantitatiivne PCR, Q-PCR (Eng.)) Või reaalajaline PCR-i kasutatakse, et otseselt jälgida konkreetse PCR-produkti koguse mõõtmist igas reaktsioonitsüklis.
  6. Samm PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - selle lähenemisviisi kasutamine vähendab praimerite mittespetsiifilise seondumise mõju.
  7. Kontsernispetsiifiline PCR (rühm-spetsiifiline PCR) - PCR seotud seotud järjestuste jaoks ühe või eri liikide vahel, kasutades nende järjestuste jaoks konservatiivseid praimereid.

Kui maatriksi nukleotiidjärjestus on osaliselt või teadmata, on võimalik kasutada degenereeruvaid praimereid, mille järjestus sisaldab degenereerunud positsioone, milles võib asuda mis tahes alused. Näiteks võib praimerjärjestus olla:... ATH..., kus H on A, T või C.

Milliseid bioloogilisi materjale uuritakse?

PCR-uuringute materjal, milles võib tuvastada võõraste bakteriaalsete DNA-de või viiruse DNA või RNA, võib koosneda erinevast bioloogilisest keskkonnast ja inimese vedelikest:

  1. Uriin Seda saab kasutada urogenitaaltrakti nakatamiseks meestel ja kuseteede organitel naistel (meeste puhul kasutatakse uriini materjalina, mis asendab epiteeli kaabitsa).
  2. Flegm. Seda kasutatakse tuberkuloosi diagnoosimiseks ja harvemini klamüüdia ja mükoplasmoosi hingamisteede diagnoosimiseks. Röga koguses 15-20 ml kogutakse steriilses (ühekordseks kasutamiseks) pudelis.
  3. Bioloogilised vedelikud. Eesnäärme mahl, pleura, tserebrospinaalne, amnion, liigesevedelik, bronhoalveolaarne lava, sülg kogutakse vastavalt näidustustele.
  4. Limaskestade epiteliaalsed sabastused. Tavaliselt kasutatakse sugulisel teel levivate haiguste (STL) diagnoosimiseks, nagu näiteks gonorröa, klamüüdia, mükoplasmoos, ureaplasmoos, trikhomoniaas, gardnerelleis, herpeedilised ja muud limaskestad mõjutavad infektsioonid.
  5. Biopsia. Kõige sagedamini kasutatavad mao ja kaksteistsõrmiksoole biopsia Helicobacter pylori nakkuse tuvastamiseks.
  6. Veri, plasma, seerum. Kasutatakse B, C, D, G viiruste, herpese, CMV, HIV, inimese geenide PCR analüüsiks.

Kuidas analüüsiks valmistuda?

PCR-i tulemuse usaldusväärsus sõltub otseselt uuritava materjali tarnimise õigsusest. Materjal ei tohiks olla saastunud, vastasel juhul ei ole uuringu tulemus objektiivne. Enne PCR analüüsi esitamist on kõige olulisemad soovitused järgmised nõuded:

  1. Uriin viiakse hommikul steriilsesse anumasse.
  2. Hommikust tuleb võtta tühja kõhuga infektsiooni vereproov.
  3. Seksuaalset tegevust pole vaja analüüside tegemisele eelnenud päeval näidata.

Analüüsi tulemus on valmis 1,5-2 päeva pärast protseduuri. On olukordi, kus tulemust saab koostada samal päeval.

CRP analüüsi dekodeerimine

Esitatud uurimistöö tõlgendamise protsess eristub selle lihtsusest. PCR analüüsi tulemusi saab saada 1,5-2x päeval pärast materjali tarnimist. Mõnel juhul on tulemus juba esimesel päeval valmis ja see võib tähendada:

  • Negatiivne tulemus näitab, et diagnoositavas materjalis puuduvad nakkushaigused.
  • Pcr positiivne tähendab, et patogeenide DNA või RNA esineb inimkehas.

Mõnel juhul annake mikroorganismide kvantitatiivset määramist. See kehtib eriti tingitult patogeensete mikroorganismide põhjustatud haiguste puhul. Kuna need bakterid avaldavad negatiivset mõju ainult ülemääraste koguste korral.

Samuti on PCR-i kvantitatiivne analüüs terapeutiliste taktikute valikul ja viiruslike infektsioonide nagu HIV ja hepatiidi viiruste raviks.

Kui täpselt on infektsioonide PCR-diagnoos?

PCR-meetod eristub suure täpsuse, spetsiifilisuse ja tundlikkusega. See tähendab, et see analüüs on võimeline:

  • täpselt kindlaks määrata nakkuse olemasolu või puudumine;
  • täpselt täpsustada, millist infektsiooni (spetsiifilisust);
  • avastada infektsioon isegi bioloogilises materjalis mikroobide DNA-ga väga väikestes kogustes
  • mis on uuritud (tundlikkus).

PCR analüüs: hind ja kellaaeg

Konkreetse analüüsi hind sõltub sellest, millist infektsiooni olete kontrollinud. Ligikaudsed hinnad ja tingimused:

  1. STI: 300-500 rubla, aeg - 1 päev;
  2. Epsteini-Barri viirus, inimese papilloomiviirus, herpes, tsütomegaloviirus: 300-500 rubla, aeg - 1 päev;
  3. Hepatiit A, B, C, D, G: kvalitatiivne analüüs 650 rubla, kvantitatiivne analüüs 2000 rubla. Tingimused - kuni 5 päeva;
  4. Hepatiit C viiruse antikehad, kokku (anti-HCV) - 420 rubla;
  5. Hepatiit C viiruse antikehad, IgM (anti-HCV IgM) - 420 rubla;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubla, tähtajad - 1 päev;
  7. HIV (antikehad ja antigeenid) - 380 rubla;
  8. HIV RNA, kvalitatiivselt - 3500 rubla;
  9. HIV RNA, kvantitatiivselt - 11 000 rubla.

Raha säästmiseks võite valida fikseeritud analüüsipartii. Seda teenust osutab suurem osa kliinikutest, kus analüüsi on võimalik edastada ERP-meetodiga (invitro, onkleinikumid jne).

PCR-diagnostika kasutamine

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) molekulaarbioloogias on eksperimentaalne meetod viiruste avastamiseks. See võimaldab märkimisväärselt suurendada teatud nukleiinhappefragmentide (DNA) kontsentratsiooni bioloogilise materjali proovides, mis võimaldab neid (tuvastada) ja lugeda.

Analüüs viiakse läbi järgmiselt. Toru sisestatakse geneetiline materjal (vereproov), mis võib potentsiaalselt sisaldada soovitud geeni. Samuti on paigutatud praimerid - soovitud geeni väikese pikkusega keemiliselt sünteesitud segmendid.

Samuti lisatakse anumasse DNA või RNA polümeraas, see suudab moodustada nukleiinhappeahela, mis on täielikult originaaliga identne. Saadud kompositsioon süstitakse ja moodustatakse neli vaba nukleotiidi - spetsiaalne ehitusmaterjal RNA või DNA jaoks, millest üks sisaldab radioaktiivseid fosforiosakesi.

Saadud segu kuumutatakse temperatuurini 95-96 ° C, mistõttu koondatakse kaks tavaliselt harjunud DNA-heelikku. Siis ravimit jahutatakse, millal praimerid ise kinnitavad viiruse genoomi soovitud piirkonnale, takistades uuesti RNA (või DNA) kahekordse heeliksi moodustumist.

Jahutamise käigus otsib polümeraas vaba nukleotiidide ahelat. Selle ensüümi toimimiseks on vaja nukleotiidide ahelat. Kuna polümeraas libiseb mööda DNA ahelat (nagu köites olev rõngas), pole see võimeline töötama topeltheeliksiga.

Seejärel viiakse läbi korduv küttetsükkel, mille tõttu nukleotiidide ahelad on eraldatud. Kõigil nimetatud PCR-i tsüklitel suureneb hepatiidi soovitud geeni proovis sisalduv kogus eksponentsiaalselt ja ülejäänud geneetiline materjal toodetakse (kasvab) lineaarselt.

Pärast lahuse puhastamist nukleotiidijääkidest ja DNA ahela elektroforeesi eraldamist molekulmassi parameetriga saab hõlpsasti kindlaks teha, kas uuritavas proovis on soovitud geen või mitte.

PCR-i eelised

PCR-i abil tehtavad laboriuuringud võimaldavad saada rohkem teavet kui viiruse RNA olemasolu. Radioaktiivse kiirguse taseme parameetri määramisel on võimalik kindlaks teha, kui palju geneetiline materjal oli algselt uuritavas proovis. Hepatiidi korral määrake viiruse koormuse näitaja.

Selle meetodi teine ​​eelis on CR reaktsiooni tundlikkus väga kõrge. See on palju kõrgem kui klassikalised viiruste avastamise meetodid. Ideaalis piisab, kui soovitud geeni identifitseerimiseks PCR-i jaoks on ainult üks viirus proovis.

Lisaks on PCR täiesti spetsiifiline. Selle praimerid on konstrueeritud nii, et need vastavad täielikult soovitud geenide ainulaadsetele piirkondadele, millele pole teistsugust järjestust. Nagu sõrmejäljed on unikaalsed, on igas geenis unikaalsed nukleotiidjärjestused.

PCR-i kvalitatiivne analüüs

Kvalitatiivne analüüs võimaldab tuvastada ainult viiruse esinemist veres. See test tuleb läbi viia kõikide patsientide puhul, kellel leiti veres C-hepatiidi antikehi. Selle tulemuseks võib olla ainult üks kahest väärtusest: "tuvastatud" või "ei tuvastatud". Tervislikul inimesel ei tohiks norm (kontrollväärtus) olla "avastatud".

Selliste kvalitatiivsete uuringute tulemuste eriline tõlgendamine on järgmine:

  • Tulemuseks on "tuvastatud". See tähendab, et võetud bioloogilise materjali analüüsitavas proovis leiti C-hepatiidi viiruse jaoks spetsiifilise RNA fragmenti. Seega on tõsiasi, et patsient on nakatunud C-hepatiidi viirusega. ja see nakatab sel ajal uusi maksarakke.
  • Tulemuseks on "ei tuvastatud." Selline otsus näitab, et selles laboris saadud bioloogilise materjali analüüsitud proovis ei leitud ühtegi RNA fragmenti, mis on spetsiifiline C-hepatiidi viiruse suhtes. Teise võimalusena oli patogeeni infektsiooni RNA kontsentratsioon selles proovis väiksem kui testi tundlikkuse piirväärtus.

C-hepatiidi viiruse RNA akuutses faasis saab selliseid kvalitatiivseid uuringuid PCR-meetodiga tuvastada juba 1-2 nädala jooksul kohe pärast kehahaiguse nakatumist, st juba ammu enne hepatiidi antikehade tekkimist.

Selle uuringu ebaõigeid katse tulemusi saab järgmiselt:

  • saastunud biomaterjal;
  • hepariini esinemine patsiendi veres;
  • keemiliste või valguliste ainete (inhibiitorite) olemasolu proovis, mis mõjutavad PCRi erinevaid komponente.

PCR-i kvalitatiivse analüüsi läbiviimiseks ei ole patsiendile vaja spetsiaalset ettevalmistust uuringuks teha. Materjalina kasutatakse venoosset verd.

Tulemuste hindamine

Kvaliteetsetel PCR-testidel on teatav tundlikkus ning sõltuvalt uuringute täpsusest ja laboratooriumi varustuse tasemest võib varieeruda vahemikus 10-500 RÜ / ml.

See tähendab, et kui vereproovis esinev viirus on väga madalal kontsentratsioonil (vähem kui selle labori tundlikkuse läviväärtus), siis võib tulemuse määrata patsiendi patsiendil kui mitte tuvastatud. Sellepärast on viirusevastase raviga patsientidel, näiteks vähese viiremia (vähese viiruse kontsentratsiooni) korral PCR-i kvalitatiivse analüüsi läbiviimisel väga oluline teada selle diagnostilise süsteemi tundlikkuse lävi.

Diagnostika süsteemide variandid

Viroloogilise ravivastuse kontrollimiseks soovitatakse kasutada viirusevastaseks raviks diagnostilisi süsteeme, mille tundlikkuse lävi on vähemalt 50 RÜ / ml. Need kriteeriumid on täidetud näiteks Cobas Ampicolori HCV-testi analüsaatoritega (täpsusega kuni 50 RÜ / ml) ja RealBest'i HCV RNA-ga (tundlikkusega 15 RÜ / ml).

Vastavalt Maailma Tervishoiuorganisatsiooni soovitustele on C-hepatiidi lõpliku diagnoosimise kindlakstegemiseks vaja aluseks võtta ainult C-viiruse RNA kolmekordset avastamist patsiendi seerumiproovides teiste hepatiidi markerite sortide puudumisel.

Lisaks PCR meetoditele kasutatakse ka TMA analüüsi (transkriptsiooni amplifikatsiooni meetodit) HCV RNA tuvastamiseks patsientidel. Sellel on parim tundlikkusläve (5-10 RÜ / ml), kuid meie riigis selline katsemeetod pole veel väga levinud.

Avastatavate viiruse modifikatsioonide hulk

Selline C-hepatiidi viiruse RNA esinemise seerumis kvalitatiivne määramine võimaldab kindlaks teha selle viiruse mitu genotüüpi. Praegu teab teaduses rohkem kui kuus selle viiruse genotüüpe, samuti umbes 10 selle haiguse alatüüpi.

Meie riigis on levinud viirused 1, 2, 3 genotüübid. Laboratooriumid võivad avastada järgmisi genotüüpe: 1a ja 1b, 2a, 2b ja 2c, samuti 3, 4, 5a ja 6, sõltumata alatüüpidest. Kõigi viiruse modifikatsioonide puhul on avastamise spetsiifilisus 100%.

PCR kvantitatiivne analüüs

Kvantitatiivse PCR-testi abil määratakse hepatiidi viiruse kontsentratsioon vereproovides (viiruskoormus). See vireemia katse (viiruse kontsentratsioon) võimaldab määrata kindlaksmääratud hulga teatud geneetilise materjali (kõige viirusliku RNA) ühikute arvu. Sellisel juhul määrake selle kontsentratsioon 1 ml, mis vastab 1 cu. vaata

Analüüsi kvantitatiivsed parameetrid on esitatud joonistel, selleks kasutatakse mõõtühikuna rahvusvahelist ühikut (RÜ) milliliitri kohta (ml), mida nimetatakse IU / ml. Praegu mõnedes laborites võib viiruse hulga määrata teistes üksustes: koopiate arv milliliitri kohta on näidatud koopiate / ml.

  • Kuupäevad: C-hepatiidi puhul viiakse selline PCR kvantitatiivne analüüs vahetult enne ravi alustamist. Siis 1., 4., 12. ja 24. nädalal. 12. nädala hindamine on soovituslik, see võimaldab kindlaks määrata ravi efektiivsuse.
  • Analüüsi ettevalmistamine. PCR-i kvantitatiivse analüüsi läbiviimiseks ei ole patsiendile ette nähtud spetsiaalset ettevalmistust uuringuks. Pool tundi enne proovide võtmist ei tohiks suitsetada. Laboratoorsel materjalil kasutatakse venoosset verd.

Tulemuste hindamine

Erinevate laboratoorsete testimissüsteemide jaoks on selle indikaatori jaoks erinevad ümberarvestuskoefitsiendid IU / ml kohta. Keskmiselt võtavad nad konversiooni parameetrit, mille korral 4 koopiat / ml = 1 RÜ / ml. Näiteks kui labor annab tulemuseks PCR analüüsi 2,4 * 10 6 koopiat / ml, siis tuleb see parameeter jagada 4-ks ja saame 6 * 10 5 RÜ / ml.

800 000 RÜ / ml koormust peetakse kõrgeks, mis vastab ligikaudu 3000 000 koopiat / ml. Mõnede autorite arvates vastab madal vireemia kvantitatiivse PCR parameetritele alla 400 000 RÜ / ml.

Kvantitatiivse testi tulemusena ei saa lõplikke tulemusi esitada digitaalse väärtuse kujul, vaid: "mõõtepiirkonna all" või "ei leitud".

  • Hindamine: "allpool mõõtepiirkonda." See viitab sellele, et kvantitatiivne test ei suutnud tuvastada C-hepatiidi viiruslikku RNA-d, kuid viirus ise on organismis väga madala kontsentratsiooniga. Seda tõendab täiendav kvalitatiivne test, mis kinnitab viiruse olemasolu.
  • Hinnang: pole tuvastatud. See tulemus näitab, et viiruse RNA proovis ei leitud kvantitatiivset testi.

Viirusliku koormuse parameeter määrab ennekõike haiguse nakkushaiguse astme, patsiendi "nakkavuse" taseme. Mida kõrgem on patsiendi viiruse kontsentratsioon, seda suurem on tõenäosus selle üle anda teistele inimestele. Näiteks seksuaalvahekorras koos haigete inimestega või vertikaalselt. See kvantitatiivne näitaja aitab samuti kindlaks teha patsiendi ravi efektiivsust.

Kõhukinnisuse kvantitatiivse analüüsi läbiviimine on viirusevastase ravi seisukohast oluline, hinnates selle edukust ja planeerides ravikuuri kestust. Seega võib ravi kestus olla lühenenud, kui organism ravib kiirelt reageerivalt ravi ja madala vireemia tasemega.

Kui kvantitatiivne PCR parameeter aeglaselt väheneb, tuleb viirusevastast ravi pikendada või modifitseerida. Kui viiruse koormuse tase on madal, siis on see teraapia soodne tegur, kuid kui see on kõrgendatud, siis kasutatav ravimeetod on ebaefektiivne ja ravimeid või nende kasutamise viise tuleb muuta.

Mis on PCR-analüüs ja viiruse koormus?

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on labori meetod DNA ja RNA määramiseks. Esmakordselt katsetasid seda peaaegu pool sajandit tagasi Ameerika Carey Mullis. See ülitundlik analüüs võimaldab tuvastada genoomi kandjat ühe allika molekuliga, mis sisaldub veres, süljas või nahas.

PCR-meetodil on suurepärased väljavaated, mida kasutatakse mitte ainult meditsiinis, vaid ka geenitehnoloogia ja kohtuekspertiisi valdkonnas. Sellega kloonida ja luua uusi DNA tüüpe, määrates kindlaks sugulussuhte määra. Kurjategija tuvastatakse kuriteo areenil leiduv epiteeli tükk.

Hepatiidi PCR-analüüs - mida nad teevad ja miks?

Miks on C-hepatiidi kahtluseks vajalik PCR-analüüs, mis see on?

Hepatiit C viirus on RNA viirus, mis sisaldab 6 genotüüpi ja kuni 500 alamtüüpi. Kõigist hepatiitest on sellel viirusel kõrgeim mutatsioonivõime ja ülemäärane immuunsüsteemi kaitsev barjäär. Hepatiidi juhtumite koguarvust põhjustas C-viirus 70% kroonilise vormi ja 30% tsirroosi ja maksavähi juhtumitest.

Meetodi olemus: uuritavas geenis osalev osa spetsiifiliste ensüümide ja seisundite abil, mis on sunnitud in vitro mitmekordistama. PCR analüüs võimaldab kindlaks teha viirustüve, ilma milleta ei ole võimalik tõhusat ravi teha: iga genotüüp on viirusevastaste ravimite suhtes erinevalt tundlik. Kasutatakse kahte tüüpi PCR-i:

Viirusevastane ravi vajab pidevat seiret, et ravi kohe kohandada, ning selleks kasutatakse ka polümeraasi ahelreaktsiooni.

Kvalitatiivne ja kvantitatiivne PCR

Hepatiidi C kvalitatiivne PCR annab vastuse: kas patsiendi veres on viiruse C tüvi ja milline neist. Genotüpiseerimine on vajalik diagnoosi selgitamiseks, haiguse prognoosimiseks ja ravi määramiseks.

Vastavalt aktsepteeritud klassifikatsioonile on geen tähistatud numbriga ja alamtüüp on väike ladina täht.

Looduslikest ainetest lähtuv spetsiaalne preparaat.

Ravimi hind

Ravi ülevaated

Esimesed tulemused tunnevad pärast nädala manustamist.

Lisateavet ravimi kohta

Ainult 1 kord päevas, 3 tilka

Kasutusjuhend

Genotüübi C viiruse tabeli dekodeerimine:

  • Genotüüp 1a, 1b, 1c
  • Genotüüp 2a, 2b, 2c, 2 d
  • Genotüübid 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotüübid 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotüüp 5 a
  • Genotüüp 6 a

Kõige tavalisemad genotüübid 1,2,3. Venemaal on kõige sagedasemad viiruse C viiruse 1a, 1b, 2 ja 3 tüved.

Viiruse 1b genotüüp on raskem kui teistel ravida, muutub see 90% krooniliseks, millest 30% taastuvad kui maksavähk või tsirroos.

Genotüüpide 2a ja 3a krooniline tase on 33-50%, mis reageerib viirusevastasele ravile.

Viiruse olemasolu kinnitamisel tehakse hepatiit C kohta kvantitatiivne PCR-test, mida kasutatakse patsiendi laboriproovis sisalduvate RNA molekulide arvutamiseks.

Dekodeerimisanalüüs

Kvaliteetse PCR-i analüüsil on kaks vastust:

PCR negatiivne tähendab seda, et patogeen ei leita vereproovides.
Positiivne vastus viitab vastupidi: leitakse üht või teist viiruse C genotüübi RNA.

Tulemuse tõenäosus on 95%. Ülejäänud 5% on inimest põhjustatud viga. See võimalus on lubatud uuringu kõrgete nõuete tõttu:

  • reagentide ladustamise reeglid;
  • meditsiinitöötajate asjakohane kvalifikatsioon;
  • biomaterjalide puhtus.

PCR-komplekt omab 100% -list diagnostilist täpsust.

Hepatiidi C RNA kvantitatiivne PCR võimaldab patsiendi kehal viiruslikku koormust määrata. Tema abiga:

  • on kindlaks määratud haiguse staadium (äge, krooniline);
  • määrab viirusevastase ravi efektiivsuse;
  • Uuritakse vajadust maksa biopsia järele.

Mõnel juhul patsient ei tunne haigusnähte, samas kui HCV-nakkus tuvastatakse PCR-meetodil. See tähendab, et haigus on varases arengujärgus või kroonilises vormis. Diagnoosi selgitamiseks viirusevastase ravi varajaseks alustamiseks on vaja täiendavaid uuringuid.

C-hepatiit viiruskoormus

Viiruslik koormus näitab maksa viiruse aktiivsust, kui aktiivselt selle paljunemist esineb.

Mis see on?

PCR kvantitatiivset hepatiiti C mõõdetakse rahvusvahelistes ühikutes 1 ml või IU / ml kohta, mis tähendab, kui palju koopiaid teatud viiruse C tüve ribonukleiinhapetest leitakse 1 ml veres testitavas veres.

Mis on kõrge, mis on madal?

Viiruse koormusanalüüs võimaldab määrata viirusliku RNA olemasolu kontsentratsioonil 50 IU / ml. Normaalne viiruse koormus on see, kui PCR-iga ei tuvastata HCV RNA molekuli.

Viiruslik koormustabel:

  • madal kontsentratsioon 600 RÜ / ml 3 x 104 RÜ / ml;
  • keskmine kontsentratsioon alates 3 * 104 IU / ml kuni 8 * 105 mm;
  • kõrge tase üle 8 * 105 IU / ml.

Madal viiruse koormus on signaal, et terapeutiline ravi valitakse õigesti, ning hepatiidi C ravi paranemise prognoos.

Suure kontsentratsiooniga viiruserakud näitavad, et haigus on ägeda faasi. Patsiendi veri on ohtlik infektsiooniallikas.

Viiruslik koormus, mille näitajad on keskmise tasemega, iseloomustavad kas HWS kroonilist staadiumi või võivad olla kaks arengusuunda: suurendada või vähendada.

Selle valmimisel viiakse pärast 6 kuud kontrolli PCR-i läbi.

PCR-diagnostika maksumus

Muret tekitavad järgmised sümptomid:

  • üldine nõrkus;
  • naha värvimuutus, silmaklaas, tühjendus;
  • iiveldus;
  • söögiisu vähenemine;
  • lihaste ja liigeste valu;
  • raskustunne paremal hüpohondriumil;
  • ASAT ja ALAT sisalduse suurenemine veres.

Kokkupuude nakatunud patsientidega on soovitatav ka preoperatiivse perioodi jooksul hemodialüüs.

Valitsuse kliinikud teevad tasuta PCR-i vereanalüüsi, kui nakkushaiguse spetsialist või hepatoloog on pöördunud.

PCR-diagnostika tasulisi teenuseid pakuvad kõik suuremad Vene linnad. Hind sõltub katse tüübist, saadaolevast seadmest, ajastusest ja muudest teguritest.

Kvaliteetne PCR-analüüs Moskvas ja Peterburis maksab 600 kuni 900 rubla. Piirkondades - 300-800 rubla.

Hepatiit C viiruskoormuse määramine läheb maksma 17000-22000 rubla. Teiste infektsioonide puhul on kvantitatiivsete uuringute hind 1200-10000 rubla.

PCR-meetodi eelised ja puudused

Millised on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi eelised võrreldes teiste diagnostiliste meetoditega?

  1. Lai valik rakendusi. Kasutades PCR-d, kasutades standardvarustust, saate tuvastada mis tahes viiruse.
  2. Patogeeni kindlaksmääramise täpsus. Erinevate ensüümide kombinatsioonide ja analüüsimeetodite kasutamisel saavutatakse näidustusega nakkuse uuringu 100% täpsustus.
  3. Kõrge tundlikkus. See meetod võimaldab tuvastada ühe viiruse molekuli esinemist veres.
  4. Tõhusus. Kvalitatiivne analüüs on valmis mõne tunni tagant, kvantitatiivne - kahe päeva jooksul.
  5. Viiruse diagnoosimine inkubatsiooniperioodil. PCR-i ajal ei määra patogeeni mitte antikehade esinemine, kui organismil on immuunvastus, vaid enne patoloogilise protsessi algust, mis hõlbustab ravi.

PCR puudused tulenevad selle eelistest:

  • analüüsi puhtus nõuab laboratooriumis kõige kõrgemat puhtust, kaasa arvatud õhk, nii et välimine DNA ei satu uuritavasse proovi;
  • kõrge nõuded biomaterjalide kogumise ja analüüsimisega tegelevatele töötajatele.

PCR testid

Polümeraasi ahelreaktsiooni peetakse üheks kõige täpsemateks ja kiireks diagnoosimeetodiks paljude nakkushaiguste korral. Samuti on kriminalistik edukalt rakendatud, et lihtsustada kurjategijate tuvastamisprotsessi. Selle abil on isapuhkus kindlaks määratud väga täpselt.

PCR-meetodi olemus

Igal elusorganismil, sealhulgas bakteritel ja viirustel, on unikaalsed geenid, mis kuuluvad konkreetse järjestuse DNA või RNA struktuuri. PCR-uuringu käigus kopeeritakse geneetilist materjali DNA polümeraasi ja spetsiaalsete temperatuuride tsüklite korral korduvalt.

Polümeraasi ahelreaktsioonil on kaks peamist meetodit:

  1. Klassikaline meetod on patogeeni geneetilise materjali valimine elektroforeesiga;
  2. PCR "reaalajas".

Meetod koosneb kolmest põhietappist:

  • Proovide ettevalmistamine;
  • DNA amplifikatsioon;
  • Kahtlustatava patogeeni geneetilise materjali tuvastamine (identifitseerimine).

Uuringu läbiviimiseks tuleb PCR labor jagada kolmeks tsooniks, iga reaktsiooni etapp viiakse läbi rangelt selle jaoks ette nähtud ruumis. Igas tsoonis peaks olema varustus vajalike seadmete, jaoturite, tarbekaupadega, ainult selles ruumis kasutatud kaitseriietus.

Pärast proovide registreerimist ja märgistamist valatakse proovi ettevalmistusruumis kindlaksmääratud temperatuuri ja spetsiaalsete reaktiividega kokkupuutest uuritavast materjalist patogeenide DNA või RNA. Seejärel algab amplifikatsiooniprotsess - luues mitmeid unikaalse DNA fragmendi koopiaid. See koosneb kolmest põhietappist:

  • DNA denatureerimine - kõrgtemperatuuri (95 kraadi) mõjul lahutab DNA topelhereliks 2 ketist.
  • Primer Annealing - spetsiifilised sünteetilised ühendid (praimerid), mis on identsed geeniteabega soovitud nukleiinhappefragmentide otstes, on kinnitatud DNA ahela terminitele. Praimeri kinnitamiseks vajalik temperatuur on konkreetse juhtumi puhul individuaalne, see on vahemikus 50 kuni 65 ° C.
  • DNA polümeraasi ensüümi abil on kahe praimeri vahel 70-72 kraadi, DNA sarnane sektsioon (amplikon) on lõpule viidud. "Ehitusmaterjalina" lisatakse torusse spetsiaalseid aineid.

Amplifikatsioonitsüklit korratakse mitu korda, mistõttu ekstraheeritakse DNA korduvalt, mis lihtsustab selle identifitseerimise protsessi. Identifitseerimist saab teostada visuaalselt pärast amplifitseerimisprotsessi elektroforeesi protseduuri agaroosgeelis või automaatselt, kasutades reaalajas toimivat tehnikat.

PCR uuringus "reaalajas" amplifikatsioon ja tuvastamine toimuvad samaaegselt eriseadmetes. See meetod on kõige eelistatavam, kuna uurimus viiakse läbi suletud torudes, vähendades saastumise ohtu ja sellest tulenevalt valepositiivsete tulemuste väljaandmist.

Meetodi plussid ja miinused

  • Erinevalt pika klassikalisest mikrobioloogilisest meetodist toimub uuring vaid mõne tunni jooksul;
  • Kõrge spetsiifilisus 95% kuni 100%, sest soovitud DNA fragment on iga konkreetse mikroorganismi puhul unikaalne;
  • Meetodi kõrge tundlikkus on patogeeni võimalik tuvastada, isegi kui see on esindatud uuritavas proovis ainult ühe rakuga;
  • Identifitseerige patogeen võib olla nii kvalitatiivne kui ka kvantitatiivne meetod. See on väga oluline tinglikult patogeensete mikroorganismide eraldamisel, mis vähesel määral ei põhjusta haigusi;
  • Võime määrata patogeeni (C-hepatiit, HIV-infektsioon) genotüüp. See on vajalik võimalike komplikatsioonide mõistlikuks raviks ja prognoosimiseks;
  • Võime tuvastada haiguse geneetiline eelsoodumus, takistades seeläbi selle arengut;
  • Võib tuvastada praktiliselt iga nakkuse allika ja kaasaegsed meetodid võimaldavad ka uuritavas proovis oleva mikrofloora kogumi avastamist, näiteks tupe biocenosis.
  • Võimalus saada nii valepositiivse kui ka vale-negatiivse valimi, kui valimi võtmise eeskirju ei järgita ning uuringu käigus tehakse vigu;
  • Kõrge hinna analüüs.

Taotlus

Peaaegu iga proovi saab uurida PCR abil (veri, uriin, tserebrospinaalvedelik, emakakaela kanalis ja kuse-, juuksefolliikulisse, sperma jne). Seda meetodit kasutatakse laialdaselt STD-de diagnoosimiseks (gonorröa, klamüüdia, ureaplasmoos, mükoplasmoos, trikhomoniaas). Seda saab kasutada tuberkuloosi, difteeria, kopsupõletiku, viirusliku hepatiidi, HIV-nakkuse, toksiplasmuse, tsütomegaloviiruse ja herpese infektsiooni, salmonelloosi jne tekitajate kindlakstegemiseks.

Polümeraasi ahelreaktsiooni kasutatakse isalikuks saamiseks, võrdledes vanema ja lapse DNA-d, tuvastades geneetilised kõrvalekalded ja organismi pärilik eelsoodumus erinevate haiguste korral.

Analüüsi ettevalmistamine

  • Vere soovitatakse annetada rangelt tühja kõhuga.
  • Enne emakaõõnde limaskestalt või emakakaelasest kanalisatsioonist tuleb hoiduda seksist kolme päeva jooksul, analüüs tuleks teha mitte varem kui üks kuu pärast antibiootikumravi lõppu, vastasel juhul võib see tulemus valepositiivseks. PCR-meetodiga tuvastatakse ka surnud patogeen, mistõttu on parem uurida pärast rakkude täielikku uuenemist.
  • Uriini tuleb koguda steriilses anumas.

Vastus saadakse enamasti paari päeva jooksul sõltuvalt labori suutlikkusest.

Dekodeerimise tulemused

Kvalitatiivse tehnika kasutamisel võib olla ainult kaks võimalikku vastust: positiivne või negatiivne. Positiivne tulemus näitab eritunud mikroorganismi esinemist proovis, negatiivne näitab puudumist.

Kvantitatiivse tulemuse peaks hindama raviarst, individuaalset lähenemist rakendatakse igal konkreetsel juhul. Spetsialist, võttes arvesse saadud vastust, otsustab ravimise vajaduse, ravimite annuse ja haiguse vormi ja staadiumi küsimuse.

Geneetiline profiil (trombofiilia eelsoodumus, rinnanäärmevähk) pärast tulemuse dekribreerimist saab arst hinnata haiguse tekkimise ohu määra, samuti eritoidu erikorda, ennetusmeetmeid.

Kas leht kasulik? Jagage seda oma lemmikvõrgus!

Hepatiit C PCR

Jäta kommentaar 15 344

C-hepatiit on üks viiruslikke haigusi, mis on kõige ohtlikumad ja raskesti diagnoositavad. Selle haiguse kindlakstegemiseks kasutatakse hepatiidi C PCR-meetodit. See on uus kõrgtehnoloogiline meetod, mis võimaldab teil uurida geneetilist materjali elu olemasolu kohta kõige väiksemates osakestes (molekulides) ja väikseimates kogustes. Hepatiidi viirus on väga vastupidav, võib elada keskkonnas pikka aega ja on inimese kehas hästi tõestatud.

Mis on PCR?

Täna on suur hulk erinevaid haigusi. Ja mitte nende meetodite määramiseks väiksem arv. Kuna nakkusetekitajad on õppinud keskkonnas juurduma ja kergesti arenema, kasutatakse nende diagnoosimiseks uusimaid tehnoloogiaid. Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on kiirem ja täpsem meetod, mille abil püütakse leida haiguse põhjustaja, suurendades oluliselt hepatiidi viiruse DNA osa proovis. Tema sõnad kirjutavad tihti: otsin nõela heinakuhjas ja seejärel ehitab nõelakardini.

PCR meetodi tüübid

Eraldage hepatiidi kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs. Selleks, et teha kindlaks, kas viirus on organismis, ja need, kes on leidnud hepatiit C antikehade leidnud, viivad läbi kvaliteetset katset. Dekodeerimise analüüs annab tulemuse: "positiivne"; "Negatiivne". Negatiivne tähendus tähendab, et kas inimene on tervislik või veres puuduvad ained ja neid ei leita. Seepärast on mõneks ajaks väärt läbiviimise uuesti läbi viia.

Positiivne tulemus viitab nakkuse olemasolule. See on peaaegu alati täpne väärtus. Ebaõiged tulemused sõltuvad tavaliselt inimfaktorist (ebaõige ladustamine või meetodi reeglite mittetäitmine). Kui määr on, on tulemus negatiivne. Enne testimist ei ole erireegleid, lihtsalt võtke vere verest.

Kui leitakse, viiakse läbi kvantitatiivne analüüs (viiruskoormus) - see annab numbrilised väärtused: kui palju hepatiidi viiruse RNA on praegu uuritava materjali ettenähtud mahus. Infektsiooni aktiivse arengu korral saab seda nakatunud inimesel tuvastada 1-2 nädala jooksul. Verd vaadatakse tavaliselt ka seetõttu, et agendid ringlevad selles vabalt.

Kvantitatiivse PCR-analüüsi tunnused

Kvantitatiivse analüüsi erinevus on see, et kõik see ei edasta. Kvalitatiivne - määrab kindlaks olemasolu ja kvantitatiivne - aitab kinnitada "hepatiidi viiruse" järeldust, haiguse kulgu prognoosi ja määrata ravikuuri. Kui efektiivne ravi on, on RNA-de arv enne ravi ja selle ajal. Samuti aitab see määrata ravimite annuste määramist.

Näidustused

Tavaliselt toodetakse seda enne ravi alustamist. Peamised näited võivad olla:

  • viiruse koormuse määramine ja viirusevastase ravi kontroll;
  • kõrge kvaliteediga PCR-i leitud hepatiit C antikehad;
  • ägeda ja kroonilise C-hepatiidi avastamine;
  • segatüüpi hepatiidi olemasolu;
  • ravi planeerimisel;
  • kui kvalitatiivne uuring ikkagi leiab haiguse olemasolu pärast kaheteistkümnendat ravinädalat.

Vaadake ka, milline on hepatiidi viiruskoormus: madala teraapiaga tehakse edukalt; suurenenud - ravi ei ole tõhus ja seda tuleb muuta.

Mis toimub haiguse erinevatel etappidel?

Selle haiguse erinevatel etappidel viiakse läbi uuringuid, et anda ülevaade ravi eelistest ja selle kestuse planeerimisest. Hea ravivastuse korral on see lühenenud. Vastasel juhul on viiruse aeglane äravõtmine ravikuuri pikenenud. Hepatiidi PCR-i tegema 1,4, 12, 24 ravinädalat. Kui näitajad ei lange pärast 12 nädala möödumist, järeldavad nad, et ravi ei sobi selle organismi jaoks. Seda analüüsi kasutatakse, et määrata, kui aktiivne nakkus on ja kuidas see tõenäoliselt selle edastab. Näiteks raseduse ajal on oht nakatada last. Pärast ravi tuleb kindlaks teha haiguse kordumise oht.

Dekrüpteerimine

Uuringu läbiviimise järel saab analüüsida mitte numbritega, vaid sõnadega: "allpool mõõtepiirkonda" ja "ei tuvastatud". Kvantitatiivne PCR on tundlikum kvalitatiivsemalt. Järeldus "ei tuvastatud" võib öelda, et infektsiooni ei leitud. "Mõõtmispiirkonna all" - test ei leidnud viirust, kuid see on väikse väärtusega. Sellises olukorras tee teine ​​uuring.

Viiruslik koormus on infektsioosse RNA arvu kindlaksmääramine määratud kogus veres (kvantitatiivselt 1 ml = 1 kuupsentimeetrit). Valmistatud rahvusvahelistes mõõtmistes IU / ml. Eraldatud laborid tähistavad koopiaid / ml. Erinevad katsesüsteemid suudavad dešifreerida komponentide tõlkimist rahvusvahelistesse väärtustesse omal moel. Tabel 1. Viiruse RNA kvantitatiivse analüüsi detekteerimine

C-hepatiidi kvantitatiivse analüüsi määr

Kui inimene on tervislik, on norm "ei tuvastatud". Haiglates inimestel on viiruse annuse vähendamine tulemustes logaritmilise üksuse kohta normaalne, mis väljendub nullide arvu vähenemises analüüsis ühega (näiteks 1 x 106 IU / ml kuni 1 x 105 IU / ml). Viiruse kontsentratsiooni vahemik, mis määrab amplifikatsiooni, jääb vahemikku 1,8 * 102-2,4 * 107 IU / ml. Tulemuste käsitlemine:

  • madal kontsentratsioon - 600 IU / ml kuni 3 * 104 IU / ml;
  • keskmine - alates 3 x 104 IU / ml kuni 8 x 105 IU / ml;
  • kõrge - üle 8 * 105 IU / ml.
Tagasi sisukorra juurde

Kõrvalekalded

Kui katsetulemuste muutused ei ületa normi, võib see tähendada haiguse tagastamist ja viiruse paljunemist. Teatavad tegurid võivad mõjutada ebausaldusväärse tulemuse saamist, näiteks proovide saastumist; hepariini sisaldus veres ja ained, mis aeglustavad PCR komponentide toimet; labori vigu; katse eeskirjade eiramine.

Samuti võib see tulemus mitmel laboril erineda, ehk oli olemas erinev uurimismeetod. Selleks, et teada saada, kuidas maksa on mõjutatud, ja selle haiguse ohtu, ei piisa hepatiidi kvantitatiivse PCR-i läbiviimiseks. Lisaks tehakse biokeemilisi protseduure ja biopsiaid.

Ravi planeerimisel viirus on genotüüpitud. Kuna hepatiit C on võimeline muutuma, on mitu rühma. Erinevat liiki ravi võib varieeruda. On olukordi, kus esineb mitu liiki, kuid analüüs näib olevat valitsev. Seejärel tehke test uuesti.

Meetodi eelised

PCR-meetod võimaldab esitada arvamuse ja määrata õige ravi. Tehnoloogia eelised:

  • Tulemuste kiirus - ei nõua patogeeni liikide eristamist ja kasvatamist. Protsessi automatiseerimine võimaldab teil töödelda ja uurida materjali tulemusega 4-5 tundi.
  • Patogeeni määramise otsene - DNA erilise osa leidmine viitab otseselt haiguse esinemisele. Näiteks ELISA - leiab valgu markerid (bakterite jäätmed), mis ei anna täpseid tõendeid haiguse esinemise kohta.
  • Spetsiifilisus - uuritakse ainet, mis on iseloomulik ainult konkreetsele patogeenile, mis välistab reaktsiooni valetele reageerivatele ainetele.
  • Tundlikkus - võib tuvastada väikseima viiruse koguse.
  • Universaalsus - põhineb spetsiifiliste organismide DNA fragmentide või RNA leidmisel. See võimaldab läbi viia ühe biomaterjaliga seotud ainete diagnostika, kui teised meetodid on võimetud.
  • Avastab mitte ainult ilmseid, vaid ka latentseid infektsioone, mis on efektiivsed raskesti kasvatatavate, mitte kasvavate, püsivate ainete uurimiseks.
  • https://www.youtube.com/watch?v=lBi-d6jAKxQ

Selle uuringu abil saab igaüht diagnoosida haiguse puudumise kontrollimiseks. Kuid usaldusväärsete faktide korral peate rangelt järgima juhiseid. PCR-i kasutatakse erinevates valdkondades: kohtuekspertiisi, isaduse määramiseks, erinevate viiruste diagnoosimiseks, ravimite allergiate avastamiseks, geenide kloonimiseks, mutageneesiks, DNA järjestamiseks.

PCR kvantitatiivne analüüs

Kvantitatiivse PCR-i meetod on laboratoorne uuring, mis võimaldab tuvastada patogeeni ja määrata selle kogus organismis. See meetod võimaldab mitte ainult tuvastada mikroorganismi, vaid ka mõista, kas see võib põhjustada haiguse.

Eriti oluline on PCR-i kvantitatiivne analüüs viirusnakkuste diagnoosimisel ja ravil.

See on tähtis! Standardse PCR-iga ei ole patogeenide kvantitatiivne määramine võimalik.

See analüüs ei sobi oportunistlike patogeenide tekitavate haiguste täpseks diagnoosimiseks.

PCR kvantitatiivne analüüs: meetodi olemus

PCR või polümeraasi ahelreaktsioon tuvastab mikroorganismide DNA ja RNA materjali fragmendid.

Analüüs on efektiivne kõigi mikroorganismide tüüpide tuvastamiseks:

Uuringus on DNA või RNA saitide selektiivne kopeerimine ensüümide mõjul.

See võimaldab määrata patogeeni isegi materjali madala sisaldusega. Koguseline PCR loeb pärast iga kopeerimise tsüklit. Selle tagajärjel muutub analüüsi lõpus teadlik kehas olev nakkuskoormus.

PCR kvantitatiivne analüüs: kasu

Võrreldes teiste laboratoorsete uuringutega on meetodil mitmeid positiivseid omadusi:

  • Kiire analüüsi olemasolu - 24 tunni jooksul
  • Spetsiifilisus - PCR näitab täpselt soovitud mikroorganismi
  • Kõrge tundlikkus - vaid mõned patogeensed rakud
  • Võime arvutada mikroorganismide arvu
  • Võite määrata patogeeni spetsiifilise tüve
  • PCR tuvastab enne immuunvastust mikroorganismid.
  • Võime välja selgitada ravi efektiivsust

Nende tegurite kombinatsioon teeb PCR-i suure täpsusega laboranalüüsi kvantitatiivse analüüsi. Uuringud, mis on läbi viidud haiguse mis tahes etapis. Koguselise PCR-i teine ​​eelis on võime uurida mis tahes tüüpi materjale. Analüüsiks kasutatakse vere-, uriini-, limaskestade, spermat, koeproove.

Meetodi puuduseks võib pidada suhteliselt kõrget hinda. Selle põhjuseks on analüüsi jaoks vajalike seadmete kõrge hind.

PCR: kvantitatiivne meetod hepatiit C diagnoosimiseks

Standardsed seroloogilised meetodid ei võimalda määrata viiruse hulka organismis. Selliste testidega tutvumiseks ei ole haiguse kulgemise etapp võimalik. Kui PCR-test tehakse, tuvastab kvantitatiivne meetod viirusliku koormuse täpselt.

Selle testi abil saate määrata, kas viirus võib põhjustada maksakudede olulist kahjustamist.

Pidage meeles! Mida madalam on viiruse sisaldus veres, seda väiksem on nende seksuaalpartneriga nakatumise oht.

C-hepatiidi korral viiakse kvantitatiivne PCR enne ravi alustamist ja pärast 12-nädalast ravi. Viiruslikku koormust peetakse kõrgeks, kui see on üle 800 × 10 3 või 800 000 ME / ml.

Kui uuringu tulemused ületavad 1 * 10 7 ME / ml, tähendab see väga suurt viirusisaldust.

Sellised tulemused ravi taustal näitavad valitud ravitõrje ebaefektiivsust. Kui pärast ravimi alustamist vähendatakse kvantitatiivse PCR-i tiitreid, tähendab see, et ravi on efektiivne. Kursuse efektiivsust ja selle korrigeerimist võib teha ainult raviarst.

C-hepatiidi kvantitatiivne PCR nõuab biokeemiliste vere parameetrite samaaegset uurimist. On vajalik jälgida maksa transaminaaside taset ja hinnata maksakahjustusi.

PCR kvantitatiivne meetod viiakse läbi meie kliiniku laboris. Uuringu tulemuste kohaselt saate arstiabi.

PCR-i kvantitatiivse analüüsi edastamiseks võite meie kliinikus võtta ühendust meiega.


Eelmine Artikkel

C-hepatiidi viiruse antikeha

Järgmine Artikkel

B-hepatiit ja rasedus

Seotud Artiklid Hepatiit