ELISA viirushepatiidi jaoks

Share Tweet Pin it

Jäta kommentaar 2929

Viiruse hepatiidi tuvastamiseks organismis kasutatakse laialdaselt ensüümi immunoloogiat, mis põhineb antikehade ja ensüümide määramisel kontsentratsioonil ja antigeenide tüübil. Korraldatakse laboratoorsete uuringute kaupa, millel on väga täpsed näidustused. Sõltuvalt antikehade arvust ja klassist muutub ensüümi värvus ja kontsentratsioon, mis kasutab ELISA-d ja vastavalt sellele arst diagnoosib haigust.

Mis on ELISA?

Viirusliku hepatiidi esinemine patsiendi kehas määratakse kindlaks, kasutades selleks seroloogilist vereanalüüsi meetodit HCV viiruse ja markerite (kehade ja antikehade) olemasolu kohta, viidates sellele. Ensüüm-seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) uurib erinevaid viirusi, madala molekulmassiga ühendeid, makromolekule, nende kvalitatiivseid ja kvantitatiivseid näitajaid, kasutades nende antigeenide reaktsiooni manifestatsiooni. Selleks kasutage signaali registreerimise märgisena ensüümi. Seda kasutatakse üha enam meditsiinis, kuna ELISA selgelt leiab selgelt määratletud antigeenid, segamata neid teistega, on kõrge tundlikkus viirushepatiidi invasiooni esinemise suhtes.

Analüüs tuleb võtta tühja kõhuga.

Selle diagnoosi puuduseks on suutmatus tuvastada haiguse põhjusi, kuna see meetod näitab ainult organismi immuunsüsteemi reaktsiooni. Analüüsi tulemusi mõjutab varasem vaktsineerimine. 8 tundi enne analüüsi on soovitatav hoiduda söömisest, nikotiinist, alkoholist. ELISA testi aluseks on organismi ensümaatiline ja immuunvastus viirusele. Bioloogilised molekulid seob rakku ja selle elemente, mikroorganisme, avastavad viiruse, seejärel töötavad ensüümid, mis võimaldavad teil väljendada immuunvastust nähtavas ja mõõdetavas parameetris.

Analüüsi näitajad

Viiruslik hepatiit organismis võib põhjustada vähki ja maksatsirroosi. Ajakohase diagnoosi tähtsus on vaieldamatu. Esmane diagnoosimeetod on ELISA test, mis määrab kõrge täpsusega HCV viiruse (IgM ja IgG) olemasolu ja selle mikroelementide aktiivsuse. Viiruse hepatiidi passi kohustuslikud testid:

  1. Riskirühmade (narkomaanid, AIDS-i inimesed, meditsiini- ja õiguskaitseorganite töötajad) inimesed.
  2. Ägeda või kroonilise hepatiidi inimesed.
  3. Raseduse planeerimine ja raseduse kavandamine.

ELISA tunnistab haigust igal etapil. Analüüsi tulemused on keskmiselt valmis 2 päeva jooksul.

Analüüsi olulisust määravad kriteeriumid

ELISA test määrab IgG, IgM, IgA antikehade olemasolu. Viirusliku hepatiidi diagnoosimisel ei pööra arst tähelepanu nende tüübile, kuna sellise HCV viiruse sellise ilmnemise esinemine näitab juba haiguse ägedat või kroonilist staadiumi. Haiguse varajastes staadiumides suureneb IgM tase (5 päeva pärast nakatamist); 15.-20. päeval ilmnevad IgG antikehad ja võivad püsida inimveres pikka aega isegi pärast ravimist; IgA - ilmub 10-14 päeva pärast, väheneb pärast ravi.

Kui IgG ja IgA avastatakse pärast ravimite kasutamist ja nende tase püsib sama kiirusega - kandjal on krooniline hepatiidi vorm. Katsetamise oluline kriteerium on olemasolevate antikehade klassi ja nende koguse selge määratlus. Selle põhjal saab teada mitte ainult haiguse esinemist, vaid ka selle arenguetappi. Selliste elementide avastamine patsiendi veres võimaldab määrata õige ja õigeaegse ravi, et hoida ära tõsiseid tagajärgi.

Kuidas seda teha?

Eraldage otsene ja mitte otsene ELISA test. Stage direct:

  1. Bioloogilise materjali kogumine ja selle paigaldamine spetsiaalsetele aukudele.
  2. 15-30 minuti jooksul antigeenid on kinnitatud süvendite pinnale.
  3. Antikehade lisamine leitud antigeeni süvenditesse. Kõik jäeti 1-5 tunniks.
  4. Eemaldage ühendamata antigeenid (süvendite sisu valades).
  5. Loputage auke spetsiaalse lahusega.
  6. Lisage süvendisse ensüümi lahus. Jäta 30 minutit - 1 tund.
  7. Kolorimeetria kasutamine (värvi tuvastamine ja süvendi sisu värvuse kontsentratsioon, võrdlus näitajatega, mis on otseselt proportsionaalsed viiruse kontsentratsiooniga).
Kaudse ELISA diagnoosi kasutamine annab täpsema tulemuse.

Kaudne ELISA meetod toimub leitud antigeenide märgistamata antikehade kasutamisel ja seejärel neile märgistatud ainete lisamisega. Esiteks võetakse verega patsient ja levib läbi süvendeid 15-30 minutit. (antikehad on kinnitatud aukudega). Siis sisestatakse neile märgimata antikehad 1-5 tunni jooksul (moodustatakse antikehade seos antigeenidega - immuunkompleks). Seejärel valatakse süvenditest välja mittepühendatud mikroelemendid ja pestakse spetsiaalse lahusega. Järgmisel etapil lisab laboritehnik 15-30 minuti jooksul süvenditesse märgistatud mikroelemente. (see seostab märgistamata märgisega koos kompleksi "antikeha-antikeha-antigeeni" moodustamisega). Lisad (lahtised) eemaldatakse jälle vedeliku eemaldamise ja pesemise ajal. Järgmine on ensüüm, mis muudab värvi 5-30 minutit. kaevudes viibides ja värvide andmeid võrreldakse tabelite näitajate andmetega. Kaudne ELISA on täpsem.

Mida näitab ELISA viiruslik hepatiit?

ELISA võimaldab avastada infektsiooni (kõik tüüpi hepatiidi viirused, HIV, herpese, süüfilis, tsütomegaloviirus, leetrid, punetised, mumpsi viirus, Epstein-Barri viirus) tuvastamine, autoimmuunhaiguste, vähirakkude marker. Näitab reproduktiivsete funktsioonide (muutused testosterooni, prolaktiini, östradiooli ja progesterooni), kilpnäärme rikete, helmintüüpide, klamidioosi vastu. Kasutatav ureaplasmoosi, köha köha, Dange viiruse, Lääne-Niiluse viiruse, Borrelia avastamise tuvastamiseks. Mõistete loend on kõrge, sisaldab palju pealkirju.

Tulemuste kinnitamine

HCV viiruse antigeeni määramine ELISA-ga annab 98% täpsuse. Seda kasutatakse ka bioloogilise materjali uuesti testimiseks eelnevate näitajatega. IgM antigeenide esinemine ei ole akuutse hepatiidi näitaja ja vajab täiendavaid uuringuid. Kui ELISA testi korratakse, langevad tulemused kokku 90-100%. Minimaalse lahknevuse korral on indikaatoriks keskmine väärtus. Maksimaalse täpsuse tagamiseks annavad arstid paralleele vere biokeemilise analüüsi läbiviimiseks. Ensüümimanuste määramiseks tulemuste testimiseks võite kasutada muid diagnostilisi meetodeid.

B-hepatiidi sisu ja diagnoosimine

Niipea, kui lava muutub kollatõukaks, muutuvad põsed ja limaskestad kollaseks, tervislik seisund halveneb järsult. Oluline on rõhutada, et maks suureneb ja ulatub kaldakaarast allapoole. Naha värvumine kollase varjega toimub järk-järgult. Maksaensüümide hulk suureneb veres ja tümooli proov ei muutu.

Haiguse diagnoosimine: põhimeetodid ja kontseptsioonid

Hepatiit B diagnoos viiakse läbi mitmel viisil:

1. Alustuseks peab arst võtma anamneese ja korraldama isiku põhjalikku uuringut. Uuringu käigus pööratakse suurt rõhku sellistele hetkedele nagu:

  • kas narkootikumide või muude veenisiseste vahendite kasutuselevõtmine;
  • kas olid vereülekanded;
  • kas tehti kirurgilisi sekkumisi;
  • kas on olemas naha terviklikkuse kahjustus;
  • millised on seksuaalsuhted;
  • kas patsiendil oli kokkupuude B-hepatiidi või selle kandjaga.

Kui mõni neist esemest on aset leidnud, siis täpsustatakse, kui kaua. Tüüpiliselt tekib infektsioon 6-nädalase kuni kuus kuud enne hepatiidi esimeste sümptomite ilmnemisel.

2. B-hepatiidi laboratoorsed diagnoosid, antigeenide vere ELISA analüüs ja hepatiit B antikehade analüüs. Sellise uuringu eesmärk on tuvastada 3 antigeeni:

  • HBsAg (antigeen, pinnapealselt paiknev)
  • HBcAg (asub sees)
  • HBeAg (omavahel ühendatud eelmise antigeeniga). Seda haigust iseloomustab nende antigeenide varane tuvastamine veres.

Inimesed, kes põevad hepatiit B ja sisaldavad neid antigeene veres, on väga nakkavad. Nad on võimelised nakatama teisi inimesi. Kui HBsAg puudub inimese veres, näitab see, et ta on tervislik. Kui inimene on haige, siis hakkab organism isoleerima olemasolevate antigeenide antikehi.

3. B-hepatiidi diagnoosimine, kasutades PCR-tehnikat, mis on kavandatud HBV DNA avastamiseks vereringesüsteemis. Kui tulemus on positiivne, siis on patsiendil hepatiit haige. HBV DNA analüüsi nimetatakse kvaliteediks. Samuti on olemas kvantitatiivne PCR. Kvantitatiivne PCR annab võimaluse tuvastada koormus hepatiidi viiruse esinemisega. Mis on viiruse koormus? See on HBV DNA koopiate arv 1 ml veres. Hepatiidi kvantitatiivne analüüs näitab viiruse aktiivsust.

4. Biokeemia vereanalüüs. See analüüs hõlmab maksa poolt toodetud ensüümide arvu määramist. Selliste ensüümide hulka kuuluvad ALT, AST. Need asuvad maksarakkude sees - hepatotsüüdid. Kui maksarakud on kahjustatud, vabanevad ensüümid ja sisenevad verdesse. Positiivset analüüsi loetakse ainult siis, kui maksaensüümide arv ületab normi. Uuring näitab, kas maksas esinevad põletikulised protsessid ja nende aktiivsus.

5. Ultraheliuuring, elastomeetria jne Hepatiidi diagnoosimine võib toimuda mitte-laboratoorselt. Ultraheli abil uuritakse kõhuõõnde. Ultraheli annab selge pildi maksa ja selle anumate põletikulises protsessis. Tõhusalt juhtides maksa elastomeetrit. Elastomeetriline meetod annab ülevaate fibroosi tasemest maksa koes.

6. Kõige olulisem analüüs on B-hepatiidi antigeenide olemasolu punaliblede massis. Kui need on olemas, siis näitab see infektsiooni esinemist inimese kehas.

7. Laboratoorsed hepatiidi diagnoosimise tüübid sisaldavad antigeenide ja antikehade määramist erütrotsüütide massis. Kõige tavalisem HBsAg esineb hepatiidi inkubatsiooniperioodil vereringesüsteemis. Isik ei tea oma haiguse arengust ja vere muutused on juba käimas. Kui hepatiit on äge, kaob HBsAg verest. Kollakujulise perioodi esimese kuu jooksul ei esine tavaliselt HBsAg-i ning selle antigeeni antikehad hakkavad vereringesüsteemis kujunema 90 päeva pärast nakatamist.

Positiivne antikeha test ei tähenda, et inimesel on hepatiit. On võimalik, et ta oli eelnevalt kandnud hepatiiti ilma D-agensita. Kui pärast ravi ei ole patsiendi veres HBsAg-i, kuid on olemas antikehad, näitab see hea prognoosi, mis näitab, et patsient taastub. Kui patsiendil esineb krooniline või raske hepatiit, võivad antikehad ilmneda juba pikemaajalise pikema perioodi esimestel päevadel.

Usaldusväärne ekvivalent on anti-HBc IgM veres. Need on tuvastatud eelkäija perioodi lõpus. Nad esindavad kogu ilmsete ilmingute perioodi. Kui analüüs sisaldab anti-HBc IgM-i, tähendab see seda, et viirus jätkab paljunemist. Taastumise korral kaob anti-HBc IgM. Haiguse äge faas võib tekitada anti-HBc IgG analüüsi. Neid tuvastatakse kogu inimese elus.

Kui hepatiidi (eriti autoimmuunne) inkubatsiooniperiood on lõppenud, hakkab HBeAg veres ilmnema. Nad teavitavad nakkuslike osakeste aktiivsest jaotumisest ja suurenemisest. Niipea kui kollane periood hakkab, HBeAg kaob. See asendatakse anti-HBe-ga. Anti-HBe näitab, et infektsiooni aktiivsus väheneb ja peagi saabub taastumine. Kuid viiruse reproduktsioon ei lõpe!

Äge hepatiit võib muutuda krooniliseks. Sellest räägitakse sellest, mida räägitakse veres HVеАg. Kui see on olemas, tähendab see, et protsessi muutmise krooniline vorm on tõenäoline. HeVag'i esinemine viitab väga nakkavale patsiendile.

Tuleb meeles pidada, et hepatiit B laboratoorsed diagnoosid, mis annab HBsAg-ile negatiivse tulemuse, ei välista diagnoosi ennast. Oluline oluline element on anti-HBc-IgM sisaldus veres. Need antikehad kinnitavad haiguse täpsust. Kui vereanalüüs ei sisalda anti-HBc-IgM-i, võib see näidata HBV esinemist ja nende antikehade esinemine viitab nakkuse aktiveerumisele.

B-hepatiidi DNA-de tuvastamine

Kõige tähtsam uurimus viiruse DNA olemasolu kindlakstegemiseks on PCR. Analüüs viitab nakkusprotsessi aktiivsusele. Selle meetodiga saate teada haiguse prognoosi.

Kui hepatiit on soodsam, kaob HBV DNA vereproovist infektsiooniprotsessi algfaasis. Laboratoorne diagnoos PCR-vormis annab andmed ravi kvaliteedi kohta (kas konkreetse ravimi toime).

Et mõista, mida tuleks võtta ravimeetodite määramiseks, on vaja teha PCR-i kvantitatiivne meetod. Kvantitatiivne PCR annab tõendeid ravi positiivse reaktsiooni kohta.

Diagnoosimise alused

Sobiva diagnoosi tegemiseks on vajalikud järgmised eksamid:

  1. Igapäevane kontroll, palpatsioon.
  2. Maksa ultraheli.
  3. Biokeemiline vereanalüüs (korduvalt).
  4. HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc summaarne, HBV DNA-ga uuring.
  5. HBV ja HCV markerid (viiruslik hepatiit on välistatud).
  6. Maksevurk.
  7. Maksa biopsia. Spetsiaalse nõelaga on kõhu seina lõigatud ja histoloogiliseks uurimiseks eemaldatakse väike tükk maksast (tükk ei ole suurem kui pool grammi). Biopsia on viimane hepatiidi skriinimismeetod. Tänu sellele saate täpsemalt rääkida nakkusprotsessi aktiivsusest, maksafibroosist. Biopsia on kirurgiline protseduur. See võib põhjustada komplikatsioone, mistõttu seda sageli ei kasutata diagnoosimiseks.
  8. Fibroelastograafia. Seda saab kasutada maksa koe tiheduse hindamiseks. See meetod on sarnane ultraheliga. Uuringus kasutatakse spetsiaalset sensorit, mis on paigaldatud nahale maksa projektsioonis.
  9. Fibrotest. See põhineb teatud verearvu loendamisel.

Krooniline B-hepatiit

Krooniline hepatiit B jätkub järk-järgult:

1. etapp - viiruse replikatsioon. Viirus korrutab suurenenud aktiivsusega.

2. etapp - integratsioon. Viirus peatab korrutamise. Viiruse genoom hakkab integreeruma normaalsete maksarakkude, hepatotsüütide DNA-sse.

Viiruse progresseerumise määra kindlaksmääramiseks on oluline mõista protsessi tõsidust, tulemust, maksarakkude häiret. Kroonilise hepatiidi laboratoorsed diagnoosid põhinevad järgmisel:

Kui hepatiit HBeAg-positiivne (positiivne analüüs), siis on erütrotsüütide mass:

  • aretusetapis - HBsAg, HBeAg, anti-HBc IgM, anti-HBc (kogu), HBV DNA;
  • hepatotsüütide sisestamise etapis DNA - HBsAg, anti-HBe, anti-HBc (kogu), HBV DNA-st.

Kui hepatiit on seronegatiivne, esineb HBsAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc, HBV DNA veresoosis. Lisaks ei sõltu nende olemasolu mingil juhul nakkusprotsessi staadiumist.

Diferentsiagnostika

Diagnoosi andmisel on arst kohustatud eristama B-hepatiidi teiste haigustega - hepatiit A, C, E, D -ga. Lõplikku diagnoosi võib teha alles pärast seda, kui on kindlaks tehtud, et iga hepatiidi rakkudes on spetsiifilised markerid vere massil.

Hepatiit tuleb eristada teiste oluliste haigustega: ägedad hingamisteede viirusnakkused, sapikivid, toidumürgitus, soolepõletik, kõhuorganite kirurgiline patoloogia ja paljud teised haigused.

Autoimmuunne hepatiit

Autoimmuunse hepatiidi korral sisaldab diagnoos järgmisi olulisemaid uuringuid:

  1. Punaste vereliblede massi analüüs (OAK). Selgitus: autoimmuunse hepatiidi, leukotsüütide väikese sisalduse, trombotsüütide taseme ja ROE suurenemise korral täheldatakse veres aneemiat (normotsüütilist). Kuid võib oodata kõrgemat aneemia taset.
  2. Uriin Erinevad uriinianalüüsid: sisaldab valku, punaseid vereliblesid, bilirubiini.
  3. Biokeemia vereanalüüs. Väga asjakohane analüüs. Tõlgendus: suurenenud bilirubiinisisaldus, suurenenud arginaas, albumiini langus, γ-globuliini ja tümoli testi suurenemine. Sublimeti test on vähenenud. Mõningaid näitajaid saab suurendada 2 või enama korraga. See on positiivne test autoimmuunse hepatiidi raviks.
  4. Immunoloogiline analüüs. Dekodeerimine: T-lümfotsüütide supressorid vähenevad, luupus rakud esinevad erütrotsüütide massis, immunoglobuliinide arv kasvab, erütrotsüütide antikehad.

Hepatiidi positiivne test võib tuvastada seroloogilisel uurimismeetodil. Autoimmuunne hepatiit on heterogeenne haigus.

ELISA meetod hepatiidi tuvastamiseks

Tänapäevane ravim on tuntud paljude maksahaiguste tõttu. HCV (viirushepatiit C) on üks kõige tavalisemaid ja ohtlikumad, sest see nakkus tekib sageli asümptomaatiliselt ja põhjustab kriitilisi tüsistusi, isegi surma. Sellepärast on haiguse õigeaegne diagnoosimine ülimalt tähtis, mis toimub viiruse antikehade tuvastamiseks erinevate meetoditega, sealhulgas ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsiga (ELISA).

Hepatiidi diagnoosimise kohta HCV infektsioon

Laboratoorses diagnostikas kasutatakse hepatiit C (HCV nakkus) avastamiseks kahte liiki meetodeid:

  1. Seroloogiline, põhineb C-hepatiidi viiruse (anti-HCV) antikehade tuvastamisel, mida nimetatakse ka ELISA (ensüüm-seotud immunosorbentanalüüs). Selle eesmärk on tuvastada C-hepatiidi skriinimiseks ja diagnoosimiseks kasutatud anti-HCV (IgM ja IgG markerid). Mõlemat markerit võib erinevates kombinatsioonides tuvastada veres (plasma), mis nõuab õiget kliinilist tõlgendamist. HCV-vastase antikeha olemasolu kinnitamiseks tehakse RIBA (rekombinantne immunoblot) test.
  2. Molekulaarbioloogiline, mille eesmärk on tuvastada RNA viirus. HCV RNA test on ette nähtud järgmiste patsientide rühmade jaoks:
    • tuvastatud HCV-ga;
    • ilma tuvastatud HCV-vastase antikehaga, kuid kindlakstehtud epidemioloogilised ja kliinilised andmed vajavad HCV ägeda vormi väljajätmist.

Viiruse RNA võib verd tuvastada juba 14 päeva pärast nakatamist, see tähendab enne, kui ilmneb HCV-vastane antikeha, mis tekib esimese 2-3 kuu jooksul.

Diagnoosi lõplikuks kinnitamiseks (eriti kui tuvastatakse ainult üks kahest HCV-nakkuse markerist), soovitavad eksperdid teatud aja jooksul teha HCV- ja HCV-vastase RNA korduvaid katseid.

Hepatiidi tuvastamine ELISA abil

Viiruse hepatiidi, eriti asümptomaatiliste, anikteriliste vormide varase diagnoosi rakendamiseks seerumis tuvastatakse viiruslike valkude (antigeenid) olemasolu või nende antikehad (toodetud immuunsüsteemi kaudu, kui viirused sisenevad organismi) ensüümseotud immunosorbentanalüüsiga (ELISA). See on universaalne immunoloogilise diagnoosi meetod, selle olemus seisneb "antigeeni-antikeha" interaktsiooni uurimises. Laialdaselt kasutusel paljudes maailma riikides.

Hepatiidi määramine ELISA-ga võimaldab mitte ainult määrata täpset diagnoosi, vaid ka hinnata haiguse olemust, samuti valida sobiv ja tõhus ravi traditsiooniliste ravimitega (interferoon, ribaviriin), otsese toimega ravimid (Sofosbuvir, Daclatsvir) ja nende India ja Hiina toodangu geneerilised ravimid.

Kui võimalik, viirusliku hepatiidi diagnoosi ELISA-ga täiendab PCR (polümeraasi ahelreaktsioon), mis võimaldab kindlaks teha hepatiidi viiruste esinemist RNA-s.

Kui täpne on ensüümi immuunanalüüsi meetod

Ekspertiiside hinnangul on ELISA meetodi täpsus 95%, see tähendab, et 95 patsiendil 100 patsiendil, kes kasutavad ensüümi immunoloogilist analüüsi, võib HCV antikehade olemasolu ja hulga - IgM ja IgG tuvastada veres. Kui tulemus on positiivne, on võimalik diagnoosida HCV-i kokkupuude kehaga (mitte viirus ise, nimelt antikehade esinemine veres, mis võib olla juba ülekantud haiguse tagajärg).

Kuid vaatamata ensüümse immunosorbentanalüüsi (ELISA) suurele tundlikkusele 40% positiivse tulemusega patsientidest ei pruugi viirus olla avastatud, mis viitab kahtlase või valepositiivse tulemuse tekkimisele.

ELISA-testi tulemuste õigsuse kinnitamiseks kasutatakse RIBA meetodit (rekombinantset immunoblottimist), et täpsemalt uurida HCV antikehade avastamist.

Anti NCV põhikatse

Hepatiidi viiruste antikehade olemasolu määramiseks tehtavad tõhusad uuringud hõlmavad HCV-vastast südamikku, mida kasutatakse kinnitava testi järgselt, kui saadakse "ebaselgeid" tulemusi.

Kui seerumis tuvastatakse HCV-vastane tuum lahjendusega 1: 1000, siis tõenäoliselt diagnoositakse positiivne tulemus, st haigus esineb.

Kui proovid lahjendusega 1: 1000 on negatiivsed, lahjenduses 1: 200 on positiivne, on vaja uurida viiruse RNA olemasolu. Sellisel juhul ei ole HCV nakkus kõige tõenäolisem.

On oluline mõista, et HCV kroonilistes vormides tuvastatakse antikehad pidevalt ja eliminatsiooni käigus (eemaldatakse organismi rakud) viirus püsib 4-8 aastat või rohkem. Seetõttu ei anna HCV-i esinemine alati organismi infektsiooni ega võimalda teha objektiivseid järeldusi protsessi aktiivsuse kohta. Täpsete andmete saamiseks viiruse koormuse, maksakahjustuse astme, nakkuse kestuse ja haiguse ägedate ja krooniliste vormide vahelise erinevuse kohta on soovitatav kasutada erinevate HCV antikehade spektri määratlust peptiidid. Samuti on oluline jälgida nende kvantitatiivset ja kvalitatiivset dünaamikat.

Viirusliku hepatiidi uuringud inte meetodil

ELISA viirusliku hepatiidi diagnoosimisel. Ensüümide immuunanalüüs

Viirusliku hepatiidi spetsiifiline labori diagnostika põhineb immunokeemiliste ja molekulaarbioloogiliste bioloogiliste uurimismeetodite kasutamisel. Peamised immunokeemilised meetodid on radioisotoopide või radioimmuunse (RIA) ja immunoloogiline analüüs (ELISA). Immuunkeemilised diagnostikameetodid põhinevad antigeeni spetsiifilisel interaktsioonil - antikehal, millele järgneb komplemendi identifitseerimine erimärgiste abil. Kõige tavalisem ensüümi immunoloogiline analüüs.

Esimesed aruanded ensüümi immuunanalüüsi kasutamise kohta. 1971. aastal avaldati ühe meetodina ainete määratlemiseks kahe uurimisrühma poolt - B. Van Weemen, A. Schuurs ja E. Engvall, P. Perlmann. Ensüümi immunoloogiline analüüs põhineb järgmisel põhimõttel: tahkes faasis, mis kasutab peamiselt polüstüreeni tableti süvendite pinda, fikseeritakse nakkusohtliku aine või antikeha antigeen (sageli antikehade segu) antigeenidele. Seda antigeeni või antikehi, mis on fikseeritud tahkele faasile, nimetatakse immunosorbendiks.

Immunosorbendi ja testitava seerumi inkubeerimise tulemusena detekteeritava aine manulusel seotakse nad antigeeni-antikeha kompleksiga. Pärast pesuprotseduuri, mille jooksul seondumata antigeenid ja antikehad eemaldatakse, viiakse inkubeerimine konjugaadiga läbi. Konjugaadina HBsAg detekteerimisel kasutatakse anti-HB-sid, C-hepatiidi viiruse antikehade tuvastamisel antikehad inimese mädarõika peroksüdaasiga märgistatud immunoglobuliinide (viirusekonjugaadiga) antikehad. Sellise inkubatsiooni tulemusena leiab aset juba olemasolevate antigeenikomplekside kinnitumine - täiendavalt sisestatud konjugaadi antikeha. Pärast sidumata konjugaadi eemaldamist (pesemine) viiakse substraat süvenditesse. Peroksidaasi konjugaadi kasutamisel kasutatakse vesinikperoksiidi substraadina koos indikaatoriga, mida enim kasutatakse ortofenüleendiamiini (OPD) või tetrametüülbensidiini (TMB) puhul. Tulemust hinnatakse fotomeetriliselt.

Ensüümimmunotesti meetodi analüütiliste võimete kvaliteeti ja usaldusväärsust iseloomustavad mitmed kriteeriumid, mis hõlmavad tundlikkust, spetsiifilisust, täpsust ja reprodutseeritavust.

Tundlikkus on minimaalne aine kogus, mida saab tuvastada ensüümi immunoloogilise analüüsi abil. Sellisel juhul on selle meetodi tundlikkuse alumine piir - uuritava aine kontsentratsioon proovis, mis vastab määramatuse väikseimatele positiivsetele tulemustele, mis statistiliselt oluliselt erineb tahtlikult negatiivsete proovide näitajatest. IFTSi tundlikkus sõltub mitmest katsesüsteemi kujundusest (immunosorbendi sarnasusest, ekstraheerimis- ja puhversüsteemide kvaliteedist) seotud asjaoludest ning registreerimismeetodi lahutusest ja täpsusest.

Spetsiifilisus - võime täpselt määratleda komponendid, mille alusel määratakse kindlaks see ensüümi immunoloogiline analüüs. ELISA spetsiifilisus määratakse suuresti antikehade või antigeenide (st koostisega, mida kasutatakse immunosorbentina) tihedalt seotud ühendite ristreaktsioonina, samuti inkubeerimiskeskkonna (maatriksi efekti) koostis.

Korrektsus - sama kontrollproovi korduvate määramiste tulemuste keskmise väärtuse vastavus mõõdetud parameetri tegeliku väärtusega. ELISA-de määramise täpsus sõltub katsesüsteemi ja kontrollproovi kvaliteedist. Heade ELISA testimissüsteemide korral on õigsuse näitajad vahemikus 90-110%. ELISA-s biomeditsiiniliste uuringute tunnus on täpse väärtuse määramine, mistõttu võetakse arvesse mitme ekspertlabori keskmist väärtust. Korrektsuse statistiline kriteerium on aritmeetiline keskmine ja selle kõrvalekalle tegelikust väärtusest, väljendatuna protsendina.

Reprodutseeritavus - katsesüsteemi võime näidata samu väärtusi sama proovi korduvate uuringutega. Taasesitatavus sõltub nii juhuslikest vigadest (vigadest) reaktsiooni seadistamise protseduuri kui ka katsesüsteemide kvaliteedi ja tulemuste salvestamise meetodi täpsuse poolest. Arvatakse, et sama ettevõtte samade kontrollproovide reprodutseeritavus erinevates laborites ei tohiks ületada 15% variatsioonikordaja väärtust.

Viiruse hepatiidi markerite kindlaksmääramiseks on mitmed spetsiifilised ELISA-skeemid: a) otsene ensüümi immuunanalüüs; b) kaudne ensüümi immuunanalüüs; c) konkurentsi pärssimine; c) lõksu või hõivamise meetod.

Veel levinumini kasutatakse molekulaarbioloogilisi meetodeid viirusliku hepatiidi diagnoosimiseks, polümeraasi ahelreaktsiooni ja hübridiseerimist. Need meetodid, eriti PCR, võimaldavad tuvastada väga väikest kogust spetsiifilist viiruslikku DNA-d või RNA-d ja seega hinnata replikatsiooni ja mõnel juhul replikatsiooni aktiivsust.

C-hepatiidi vereanalüüs

C-hepatiit on üks kõige levinumaid maksahaigusi, mis ilmnevad C-hepatiidi viiruse (HCV) nakatumisel, mis siseneb kehasse eelkõige siis, kui see puutub kokku nakatunud inimese verest. Tekkis krooniline ja äge hepatiit C. 70-80 protsenti ägeda hepatiit C-ga patsientidest ei esine haiguse sümptomeid, kuid mõnel juhul on mõnda aega pärast nakatumist esinenud haiguse ilminguid, mis väljenduvad väsimuses, kõhuvalu, isutus, pimedus uriin, oksendamine, iiveldus, kerged väljaheited, ikterus, valu liigestes. Reeglina ilmnevad sümptomid 6-7 nädalat pärast nakatumist, kuid haiguse sümptomite ilmnemise kestus on 2 nädalast kuni kuus kuud. Kui ülaltoodud sümptomid ilmnevad, peate konsulteerima nakkushaiguste arstiga ja saama C-hepatiidi vereanalüüsi. Hepatiididiagnostika võib õigeaegselt tuvastada haiguse varases staadiumis ja oluliselt suurendada taaskasutamise tõenäosust.

Kui on planeeritud hepatiit C test

Olukorrad, kus on vaja hepatiit C testi:

  • raseduse ja pereplaneerimise ajal;
  • kroonilise või ägeda hepatiidi sümptomitega patsiendid;
  • inimene on ohus. Need on meditsiinitöötajad, vanglad, õiguskaitseametnikud, narkootikume kasutavad inimesed, paljud seksuaalpartnerid, AIDSi all kannatavad, hemodialüüsi ja teised.

Ettevalmistus hepatiit C analüüsiks

Hepatiit C analüüsi jaoks spetsiaalne ettevalmistus ei ole vajalik. Analüüsi jaoks võetakse veri veenist tühja kõhuga ja samaaegselt tuleb pärast viimast söögikorda läbida vähemalt kaheksa tundi.

Hepatiit C ELISA testid

Esimene analüüs, mis on tavaliselt ette nähtud hepatiit C diagnoosimiseks - ELISA test (ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs). Hepatiit C ELISA testid võivad tuvastada C-hepatiidi viiruse antikehade olemasolu (anti-HCVAb) veres. Kui ELISA testi tulemus on positiivne, siis näitab see organismi kokkupuudet C-hepatiidi viirusega, kuid 40% -l inimestelt, kellel on positiivne ELISA, ei tuvasta viirus oma veres. Seda nähtust nimetatakse valepositiivseks tulemuseks. Ka ELISA abil kontrollitakse doonorvere.

RIBA C-hepatiidi puhul

Hepatiidi C RIBA-testi kasutatakse positiivse ELISA-testi tulemuste kinnitamiseks. Rekombinantse immunoblottimise meetod (RIBA) on C-hepatiidi viiruse antikehade olemasolu täpsem uuring. C-hepatiidi viiruse esinemine organismis ei määra ka positiivset tulemust, vaid üksnes kinnitab antikehade esinemist.

Hepatiit C PCR testid

Selleks et tuvastada C-hepatiidi viiruste olemasolu veres (HCV RNA) ja diagnoosida, kasutavad nad sagedamini analüüsi polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodil. See uuring võimaldab suure täpsusega tuvastada isegi väikese koguse viiruse olemasolu veres. C-hepatiidi PCR analüüs võib viirust esineda juba 5 päeva pärast nakatamist, ammu enne antikehade ilmnemist. Kui PCR-analüüs on positiivne, tähendab see aktiivse nakkuse esinemist.

Sellised PCR-analüüsi variatsioonid on järgmised:

  • kvantitatiivne PCR, mis võimaldab kindlaks teha mitte ainult viiruse olemasolu, vaid ka viiruse koormust (viiruse kogus). See näitaja on ravi efektiivsuse määramisel väga tähtis.
  • genotüpiseerimine, millega määratakse kindlaks C-hepatiidi viiruse genotüüp, mis on oluline ravi kestuse ja taktika määramiseks. Seal on rohkem kui kümme hepatiit C viiruse genotüüpi, kuid kliinilises praktikas on piisav, et määratleda viis kõige tavalisemat tüüpi: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

PCR kvantitatiivne analüüs viiakse läbi:

  • koos kvalitatiivse positiivse testiga hepatiit C viiruse RNA esinemisele seerumis;
  • ravi täpseks hindamiseks;
  • et määrata patsiendi ravi taktikat.

Hepatiit C raskuse ja viiruse hulga vahel ei ole otsest seost veres. Viiruse kontsentratsioon mõjutab haiguse nakkavust, see tähendab, et mida suurem on viiruse hulk patsiendi veres, seda suurem on viiruse ülekandumise oht, näiteks seksuaalse kontakti kaudu või emalt lapsele. Ravi efektiivsus sõltub ka viiruse kontsentratsioonist. Ravi ajal on soodne tegur väike viiruskoormus ja väga kõrge on ebasoodne.

Genotüübi analüüsimine on tehtud:

  • koos kvalitatiivse positiivse testiga hepatiit C viiruse RNA esinemisele seerumis;
  • ravi täpseks hindamiseks;
  • määrata patsiendi ravi taktikat;
  • prognoosida nakkusprotsessi kestust;
  • et määrata haiguse progresseerumine.

Viiruse genotüübi tuvastamine on väga tähtis ravi kestuse kindlaksmääramiseks, mis on oluline, sest interferoonil on palju kõrvaltoimeid ja vähene patsiendi tolerantsus.

C-hepatiidi dekodeerimise analüüs

Tavaliselt puuduvad viiruse RNA, nende antikehad ja antigeenid. Antikehade esinemine veres näitab kroonilise või ägeda C-hepatiidi või taastumisperioodi olemasolu. Kui HCV RNA esineb veres, mis määratakse kindlaks PCR-analüüsiga, siis viitab see viiruse esinemisele veres.

Ebaõige katsemeetodi, transpordi ja verevigastuste korral võib PCR-analüüs mõnikord näidata valepositiivseid tulemusi. ELISA ja RIBA analüüsid haiguse varases staadiumis, kui organism ei ole veel piisavalt kogunud antikehi, võib näidata vale-negatiivset tulemust.

Kui hepatiit C testide dekodeerimisel saadakse positiivseid tulemusi, on vaja edaspidiseks diagnoosimiseks ja raviks nakkushaiguste spetsialisti ja gastroenteroloogiga ühendust võtta.

Segmendi neutrofiilid on langenud

Laste trombotsüüdid on normaalsed, kõrgendatud, alandatud

Kilpnääret stimuleeriv hormoon TGT

Hepatiidi diagnoosimine

Ükshaaval ei saa kindlaks teha hepatiidi olemasolu organismis, kuna haiguse inkubatsiooniperiood võib kesta kuni neli nädalat. Kui esinevad esimesed haigusnähud, ilmnevad kahjustatud organismis radikaalsed muutused vere koostises: biokeemiline analüüs näitab tõsist terviseprobleemi ja patogeense viiruse esinemist. Kuid lõpliku diagnoosi tegemiseks ei piisa hepatiidi verd annetamiseks, vaja on ka üksikasjalikku hepatiidi diagnoosimist.

Hepatiidi laboratoorsed diagnoosid

Soovitav on seda teha pärast inkubatsiooniperioodi lõppu, nii et arst saaks täpselt kindlaks teha kehas esineva maksahaiguse. Vastasel juhul ei anna ettenähtud ravi soovitud terapeutilist toimet ja isegi süvendab valitsevat kliinilist pilti.

Hepatiidi A diagnoosimine

Tavaliselt algab A-hepatiidi diagnoos patsienti puudutava üksikasjaliku küsitluse ja mitmete katsetega, mis tuleb läbi viia nii kiiresti kui võimalik. See on:

  • biokeemiline vereanalüüs;
  • täielik vereanalüüs;
  • PCR-meetod;
  • ELISA;
  • koagulogram.

Kui Botkin tõbi progresseerub, siis täheldatakse biokeemilise vereanalüüsi tulemuste põhjal bilirubiini, AlAT ja AsAT ebanormaalset hüpet, tümooli proov. Lisaks toodetakse spetsiifilist HAV-vastast IgM-i, mis on A-hepatiidi avatuse ümberlükkamatu fakt.
Üldiselt määrab vere analüüsi leukotsüütide vähenemise, ESR hüppe ja lümfotsütoosi. Kuid kõige usaldusväärsem meetod on PCR, mis määrab kindlaks patogeense viiruse RNA näitaja.
Lisaks arutleb arst haiguse sümptomeid, mille järel ta saab teha lõpliku diagnoosi ja murda kõige tõhusamale ravile. Instrumentaalse läbivaatuse vajadus on äärmiselt haruldane. Pärast edukat konservatiivset ravi haiglaravi ja karantiini tingimustes oodatakse lõplikku taastumist ja A-hepatiit ei taastu korduvalt.

B-hepatiidi diagnoosimine

B-hepatiidi viiruse olemasolu kindlaksmääramine on samuti võimalik laborikatsete tulemuste põhjal ning selleks on vaja esmalt hepatiidi vere annetamist. Looduslikult on patogeensel viirusel kolm peamist antigeeni - HBsAg, HBcAg ja HBeAg, mille antikehad toodetakse organismis. Selle kliinilise pildi peamine omadus on ELISA-ELISA, mis näitab ainult B-hepatiidi spetsiifilisi markereid.
Vahetult on vaja selgitada, et antigeen HBsAg esineb veres enne hepatiidi esimeste sümptomite ilmnemist ja see on ikterilise perioodi jooksul usaldusväärselt määratud. Kuid negatiivne test ei välista B-hepatiidi esinemist ja nõuab seega sama tõhusa polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodi kasutamist.
Kui teil on kahtlus, et hepatiit B on kohustuslik, soovitatakse biokeemilist vereanalüüsi, mida soovitatakse kõigepealt edasi anda. Maksa biopsia ja peritoneaalsete organite ultraheliuuringuid arutatakse individuaalselt, kuid kui haiguse ajalugu on selge, ei ole vaja kliinilise uuringu meetodeid.

Maksa ekrogramm autoimmuunse hepatiidi korral kroonilise hepatiidi faasis

Hepatiidi C diagnoosimine

Selle diagnoosi tegemiseks pole piisav, et hepatiit annaks verd, kuna viirus võib levinud kujul esineda kehas. Siiski on peamised laboratooriumitestid kõik ülaltoodud testid ja maksa biopsia täiendavad tulemused. See bioloogilise materjali mikroskoopiline uurimine (meie puhul maksa koe tükk) määrab patoloogilise protsessi ulatuse ja kofibroosi. Materjalide proovid viiakse läbi kohaliku anesteetikumi järgi, sellist protseduuri komplikatsioonid on meditsiinipraktikas väga haruldased.
Kui kahtlustatakse C-hepatiidi, on kliinilise läbivaatuse peamine meetod kõhukelme organite ultraheli. Põhjus on lihtne: haigus esineb tihti mõjutatud maksa visuaalsel muutusel, selle struktuuri ja suuruse muutuste tõttu. Nii saate määrata:

  • maksa, põrna, kõhunäärme ja sapipõie suurus;
  • patoloogilised muutused nendes elundites;
  • üldine verevool kõhuõõnes;
  • maksa biopsia teostamiseks optimaalne piirkond.

See kliinilise läbivaatuse meetod määrab kindlaks mikroorganismis kõik mikroorganismis esinevad fokaalpatoloogid mikroskoopiliselt. Kui maks on ekraanil hallil skaalal, on vaja kohest biopsiat, kuna halli värv näitab inimfiltri mõjutatud kudesid.

Hepatiidi ennetamine

Kuna haigus ei ilmne kohe, on see kaugel kõigist kliinilistest piltidest, mis viivad kohese ravi juurde. Patsient ei pruugi lihtsalt olla teadlik patogeense viiruse olemasolust organismis, mis omakorda levib kiiresti vereringesse ja nakatab terveid maksarakke.
Sellise traagilise saatuse vältimiseks on soovitatav järgida kõiki ennetusmeetmeid. Selline valvsus vähendab märkimisväärselt haigestumisharjumust ja aitab teil tulevikus säästa tõsistest terviseprobleemidest. Ennetamise põhieeskirjad on loetletud allpool:

  • pese oma käed pärast tänavat;
  • värske köögivilja ja puuviljade kvaliteetne töötlemine;
  • viia läbi kõik aastases ajagraafikus täpsustatud ennetavad vaktsineerimised;
  • selektiivne suhtumine seksuaalpartneritele;
  • vältida kontakti haigete inimestega;
  • kasutage ainult ühekordselt kasutatavaid süstlaid ja ole eriti vereülekande jaamades.

Samuti on soovitatav regulaarselt (üks kord kuus kuud) hepatiidi kaudu verd annetada, et veenduda, et viirus ei tungib organismi ega nakatata kunagi terveid maksarakke. Kui diagnoos on kindlaks määratud, tuleb kohe saada disainikonsultant ja järgida kõiki spetsialisti soovitusi.

Avaldamise autor:
Syropyatov Sergei Nikolajevitš
Haridus: Rostovi Riiklik Meditsiinikeskus (Rostovi Riiklik Meditsiinikeskus), Gastroenteroloogia ja Endoskoopia osakond.
Gastroenteroloog
Meditsiiniteaduste doktor

B-hepatiidi diagnoosimise meetodid

Viiruse hepatiit B (b) on üks levinumaid nakkushaigusi maksas. Venemaal on selle viirusega igal aastal umbes 50 tuhat inimest ja praegu on krooniliste infektsioonidega inimesi umbes kolm miljonit inimest.

Enamikul juhtudel puutub täiskasvanu immuunsüsteem HBV-ga üksinda. 10% juhtudest toimub infektsioon raskekujuliste sümptomiteta, ent voolab kroonilises staadiumis. Ligikaudu pooled asümptomaatilistest haigusjuhtudest langevad umbes veerandi võrra suuremad sümptomid. HBV sümptomaatilise pildi välise sarnasuse tõttu teiste hepatoviiruse tüüpidega on hepatiit B diagnoos terapeutiliste skeemide valimisel väga oluline.

B-hepatiidi erinevus teistest liikidest

Nagu iga teine ​​hepatiit, mõjutab HBV viirus enamikult maksa.

See raskendab terapeutiliste ainete valimist, sest antud juhul interferoonid kiirendavad ainult autoimmuunse tsütolüüsi. HBV ja teiste haiguste vahel esineb mõningaid erinevusi.

  1. Tõsist HBV ägeda vormi iseloomustab kiire, sümptomaatiliste sümptomitega areng peaaegu kohe pärast infektsiooni. Fulminantne (fulminantne) haigus toob kiiresti kaasa kooma ja surma, kuid sellised juhtumid õnneks on haruldased.
  2. Kui vastsündinu on nakatunud hepatiit B-ga, võite olla kindel, et haigus muutub krooniliseks.
  3. Täiskasvanutel, vastupidi, 90% juhtudest võib infektsioon olla täielikult lokaalne.
  4. Kui haigus on pikka aega asümptomaatiline, lõpeb see tavaliselt kroonilises vormis.
  5. Krooniline HBV on kõige sagedasem tsirroosi ja hepatotsellulaarse kartsinoomi (vähk) põhjus.
  6. HBV viirust peetakse üheks nakkuslikuks, kuna sellel on erakordne keskkonnas vastupidavus.
  7. HBV viiruse sarnasuse tõttu on B-hepatiidi vaktsineerimine erinevalt HCV-st olemas.

B-hepatiidi diagnoosimine

Praegu kasutatakse riigisiseses meditsiinis mitmeid hepatiidi B määramiseks olulisi laboratoorseid meetodeid. HBV diagnoos sisaldab:

  • HBV viiruse antikehade (anti-HBV) antikehade esinemise kindlakstegemiseks veres, mis praegu peetakse kõige usaldusväärsemaks, kiiremaks ja odavamaks, ensüümseotud immunosorbentanalüüs (ELISA);
  • viiruse DNA olemasolu vereanalüüs, kasutades polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR), mille tulemused võivad kindlaks teha viiruse olemasolu ja aktiivsuse (viiruse koormus);
  • vere biokeemiline analüüs bilirubiini, alkaalse fosfataasi, maksaensüümide (ALT ja AST) tasemel, mis võimaldab hinnata põletikulise protsessi esinemist maksas.

On selge, et arst edastab nendele testidele viite, kui patsiendi seisundi sümptomaatiline pilt ja tema ajaloo uuring viitavad HBV-nakkuse ideele või kroonilise protsessi seisundi jälgimisele.

Täiendavad diagnostikameetodid

Alles hiljuti peeti elundi biopsia kõige usaldusväärsemaks patoloogiliste muutuste määra kindlaksmääramiseks maksas. See on uuring spetsiifilise nõelaga perkutaanselt ekstraheeritud maksa fragmendi kohta.

Protseduur viiakse läbi kohaliku anesteesia abil ja põhjustab harva komplikatsioone, kuigi see viitab kirurgilistele sekkumistele.

Täna on palju kaasaegseid ja vähem traumeerivaid viise:

Viimased 2 testid põhinevad vereproovil mitmel indikaatoril, kasutades spetsiifilisi algoritme. Ja fibroelastograafia võimaldab määrata maksa parenhüümi tihedust, kasutades ultraheliga sarnast meetodit.

Kas B-hepatiidi diagnoos on vale?

B-hepatiidi diagnoosimine võib olla vale mitmete põhjuste tõttu:

  • bioloogilise materjali saastumine;
  • analüüsisüsteemi vead;
  • labori vigu.

Viimane kahjuks esineb väga sageli. Seetõttu ei ole piisav B-hepatiidi diagnoosimiseks tehtud ühekordse vereannetuse saamine.

Välismõju välistamiseks uuringu tulemuste põhjal tuleks analüüsi eelõhtul järgida järgmisi reegleid:

  1. Ärge sööge 12 tundi enne vere annetamist.
  2. Lõpeta suitsetamine poole tunni jooksul enne uuringut.
  3. Pool tundi enne testi katkes hoidumist liigse emotsionaalse ja füüsilise stressi eest.

Kasulik video

Millised testid peate hepatiidi diagnoosimiseks läbima, vaadake seda videot:

Viirusliku hepatiidi B ja C laboratoorsed diagnoosid

Laboratoorsete uuringute tulemused omavad tähtsat, kuid mitte juhtivat rolli viirusliku hepatiidi diagnoosimise ja selle etioloogia kindlakstegemisel.

Biokeemiline vereanalüüs

Patsientide vere biokeemiline analüüs on juba ammu kliiniliste laboratooriumide praktika alustanud. Bilirubiini, vadakuvalkude ja ensüümide vahetuste näitajate kogutud andmed võimaldavad tuvastada inimkehas esinevaid põletikulisi protsesse ja soovitavad nende lokaliseerimist. Need kriteeriumid ei ole spetsiifilised ja ei iseloomusta viirusliku hepatiidi etioloogiat, kuid on siiski olulised maksa funktsionaalse seisundi hindamiseks.

Bilirubiini vahetusindikaatorid.

Patsient saab hinnata bilirubiini metabolismi seisundit vere, uriini ja rooja biokeemilise analüüsi põhjal. Vaba bilirubiin on hemoglobiini derivaat, mis vabaneb punavereliblede hemolüüsi ajal. Füsioloogilistes tingimustes hemoleeritakse iga päev ligikaudu 1% tsirkuleerivatest erütrotsüütidest, mis moodustavad 200-250 mg bilirubiini. Bilirubiini peamine osa siseneb põrna ja luuüdi mononukleaarsete fagotsüütide süsteemi rakkudesse. Bilirubiin vees ei lahustu, mistõttu liigub veres mittespetsiifilised transportvalgud, albumiin. Vaba bilirubiin on toksiline ühend, mis on võimeline tungima hematoentsefaalbarjääri, põhjustades entsefalopaatiat. Bilirubiini detoksikatsioon toimub maksarakkudes, kus glükuroonhape on sellega seotud, moodustades bilirubiini glükuroniidid. Need ühendid ei ole enam mürgised ja vees lahustuvad, mis hõlbustab nende eemaldamist keha osana sapist. Soolestikus moodustuvad bakteriaalsete ensüümide toimel kaks bilirubiini lagunemisprodukti rühma - urobilinogeene ja sterkobinogeene, millest enamik eritub väljaheites. Normaalsetel füsioloogilistel tingimustel ei kaasne bilirubiini eemaldamisega neerud.
Bilirubiini tervetel inimverd sisaldub kontsentratsioonis 1,7-17,1 mmol / l ning sisaldab kahe fraktsiooni: lahustumatu bilirubiini seotud albumiiniga - kaudse bilirubiini ja lahustuva glucuronide bilirubiini - otsene bilirubiini. Tavaliselt on nende suhe 3: 1.
Hepatiidi korral kahjustatakse maksarakke ja selle tulemusena väheneb sapi tootmine. Lisaks põhjustab maksa parenhüümi kahjustuse tagajärg mitte ainult sapiteede kanalit, vaid ka verd. Need protsessid põhjustavad mõlema selle fraktsiooni mõlema vere bilirubiini koguhulka. Tuleb märkida, et lõpus predzheltushnogo perioodi mõnedel patsientidel on tavalise kogubilirubiini hakkab kasvama murdosa otsest bilirubiini, mis on varajane näitajaks tsütolüüsida protsesse maksas. Uriinis hakatakse tuvastama bilirubiini ja urobiliini ning sterkobiini kontsentratsioon käärhoonetes väheneb järsult (tabel 1).
Tabel 1. Bilirubiini metabolismi suhe normaalse ja maksa-kollasuse tekkes.

Seerumi bilirubiini üldsisaldus

1,7 - 17,1 umol / l

Otseseerumi bilirubiin

Kaudne seerumi bilirubiin

Uriini reaktsioon bilirubiinile ja urobiliinile

Erektsioonide reaktsioon sterkobiliinile

Tuleb märkida, et bilirubiini metabolismi indikaatorid viirusliku hepatiidi diagnoosimiseks mängivad rolli ainult kollatõve kujunemisel. Enamik viirusliku hepatiidi anikterilist vormi ja preiterterfaasi on enamasti tunnustamata.

Ensüümi aktiivsuse hindamine.

Määramine seerumis aminotransferaas aktiivsust ((ALAT) ja aspartaadi aminotransferaas (AST)) on väga tundlik näitaja Tsütolüüsi hepatotsüütide mis määrab juhtiv roll diagnoosimisel hepatiit erinevate etioloogiate. Tsütolüütilises protsessis, mis areneb viirusliku hepatiidiga patsiendi maksas, valitseb ALT "loputus", AST suurenemine on oluliselt väiksem (tabel 2).

Tabel 2. Ensüümi aktiivsuse kindlaksmääramine seerumis

Hepatiidi väärtused

Hepatotsüütide spetsiifilisus

Leeliseline fosfataas (SHF)

31-115 U / l lapsed: kuni 350 U / l

* väärtused on antud vastavalt KDL NPF "Liteh" poolt kasutatavate diagnostiliste testimissüsteemide soovitustele

Täiendava kinnituse gepatogennoy milline ensüümi aktiivsust saab määrata pechenochnospetsificheskih ensüümid -. Sorbitooldehüdrogenaasi, fruktoos-1-fosfataldolazy urokinaasi jne Nad paiknevad peamiselt hepatotsüüdides ja nende avastamine veres on unikaalselt seotud maksahaigus. Kuid need testid on tundlikumad ALT aktiivsuse määramise suhtes. ALAT ja AST aktiivsus peegeldab maksa põletiku raskust, kuid mitte hepatiidi etioloogiat.

Valkude proovid

Ägeda viirusliku hepatiidi korral jääb vereplasma proteiinisisaldus ja nende koostis peaaegu muutumatuks. Erandiks on tümooli test, mille väärtused on tavaliselt kuni 4 U ja tõusevad hepatiitini 6-8 RÜ-ni.

Kui CG staadiumis CP-l võib tekkida vereserumi albumiini kontsentratsiooni vähenemine, protrombiiniindeksi vähenemine (alla 70%), hepatotsellulaarse puudulikkuse sündroomi teistel hüübimisfaktorite kontsentratsiooni langus. Hepatiidi aktiivsuse lisanäitajad on kiirendatud ESR (~ 15 mm / h), gamma-globuliini kontsentratsiooni suurenemine seerumis.

Viirusliku hepatiidi seroloogiliste markerite tuvastamine

Hepatiidi viiruslikku olemust on võimalik kindlaks teha ja teavet selle etioloogia kohta saada ainult hepatiidi viiruste seroloogiliste markerite abil. Sellised markerid hõlmavad viiruse valke (antigeene), spetsiifilisi antikehi, mida organism toodab infektsiooni korral, ja viiruse nukleiinhappeid (DNA või RNA), mis esindavad selle genoomi.

Spetsiifiliste viiruslike või bakteriaalsete valkude (antigeenid) või antikehade tuvastamiseks peremeesorganismis ühe või teise patogeeni manulusel bioloogilistes kudedes ja vedelikes viidatakse immunoloogilistele laboratoorsete analüüside meetoditele. Viimastel aastakümnetel on immunoloogilised uurimismeetodid laialt levinud. Selle põhjuseks oli immunoloogia ja biotehnoloogia tihe liitmine, mis võimaldas välja töötada ja praktikas rakendada mitmesuguseid testimissüsteeme, mis põhinevad antigeeni antikeha vastastiktoimel. Viiruse hepatiidi puhul viitab ELISA kaudsetele patogeeni tuvastamise meetoditele, võimaldades tuvastada haiguse etioloogiat.

Suhteliselt hiljuti on kliiniliste diagnostiliste laborite praktikasse sisse viidud geniandiagnostika meetodid, mis võimaldavad geenide või mõttetute DNA ja / või RNA järjestuste avastamist ja iseloomustamist. Nende areng tuleneb polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) põhimõtte arendamisest 1983. aastal. Esimesed aruanded PCR-i praktilise rakendamise kohta ilmusid 1985. aastal ja sellest ajast peale on väljaannete arv, kus PCR-i kasutatakse üheks uurimismeetodiks, on üks maailma teadus-kirjanduse esimesi kohti. Need lähenemisviisid on rakendatavad nakkushaiguste genoomide avastamiseks ja uurimiseks, onkoloogiliste haiguste markerite avastamiseks, erinevate geneetiliste muutuste tuvastamiseks inimese genoomis, mis on seotud erinevate funktsionaalsete häiretega. Erinevalt ELISA-st viitab PCR-analüüs otsesetele meetoditele patogeeni avastamiseks kliinilises materjalis, mis võimaldab hinnata viiruseprotsessi aktiivsust ja tuvastada patogeeni levikut erinevates elundites ja kudedes.

Viirusliku hepatiidi B serodiagnostika

Hepatiit B viirus (hepatiit B viirus, HBV) kuulub Hepadnoviridae perekonda. Viiruse genoomi esindab osaliselt kahekordne 3200 bp suurune ümmargune DNA molekul. Valgusmikroskoobi all näeb HBV välja nurga all oleva osakese läbimõõduga 42 nm (Dane'i osake), mis koosneb tuumast - nukleoonist, mis on kujutatud iososedriga diameetriga 28 nm, mille sees on kaheahelaline DNA, terminaalne valk ja DNA polümeraasi ensüüm. Nukleoidvalk sisaldab HBcAg ja HBeAg. Väliskest (7 nm paksune) moodustab HBV pinnaantigeen - HBsAg (joonis 2, 3). B-hepatiidi viirus on pseudoretroviirus, s.t. selle DNA võib osaliselt sisestada hepatotsüütide genoomi.

Joon. 2. HBV virioni struktuuri skeem ja pinnaantigeeni komponendid. Pinna valgu (HBsAg) liigne tootmine põhjustab selle esinemise patsiendi seerumis vabas vormis.

Joon. 3. Daniini osakesed patsiendi seerumis (valguse mikroskoopia)

AVH-iga ja kroonilise hepatiidi ägenemise korral võib patsiendi hepatotsüütides ja seerumis avastada viirusosakesed. Kroonilise hepatiit B integratiivse vormi ja remissiooni staadiumis HBV seerumis ei tuvastata.

HBV infektsiooni labori diagnoosimise aluseks on viiruse nakkuse seroloogiliste markerite määramine: HBsAg, HBeAg, anti-HBc klass IgM ja IgG, anti-HBe ja anti-HBs, HBV DNA ja viiruse DNA polümeraasi aktiivsus. Sõltuvalt viirushepatiidi B käigust tundub seroloogiliste markerite muutuste spekter teistsugune (joonis 4, 5)

Joon. 4. Akuutse hepatiit B seroloogiliste markerite muutuste spekter eraldusjärgus

Joonis 5. Seroloogiliste markerite muutuste spekter kroonilise B-hepatiidi korral

HBsAg on HBV nakkuse peamine marker. Ägeda viiruse B korral (90-80%) võib HBsAg-i tuvastada inkubatsiooniperioodil, alates infektsiooni 3-5-ndast nädalast. Antigeenide tsirkulatsiooni keskmine kestus on 70-80 päeva. HBsAg kiire kadumine (kollatõbi esimestel päevadel) antiBB-de ilmnemisega on halb prognostiline märk. Kroonilises B-hepatiidis võib HBsAg tsirkuleerida patsiendi veres paljude aastate jooksul. Tuleb märkida, et praegu kasutatavatel meetoditel HBsAg, sealhulgas ELISA määramiseks, on tundlikkuse piirväärtus. Seepärast on hepatiidi kliiniliste tunnuste ja HBsAg puudumise korral seerumis vaja uurida teisi HBV infektsiooni markereid. HBsAg esinemine veres viitab viiruse esinemisele maksas ja on väga tõenäoline veres. Mitte iga HBsAg sisaldav seerum ei sisalda B-hepatiidi viirust. Mõnel juhul ei sisalda viiruse DNA täielikult hepatotsüütide DNA-d, vaid osaliselt ainult HBsAg-i sünteesi kodeerivat piirkonda. Neil juhtudel sünteesitakse HBsAg ilma virioni teiste komponentideta (st ilma teiste antigeenita). Arvatakse, et selline olukord tekib siis, kui "tervislik" kandja HBsAg.

B-hepatiidi viiruse HBeAg iseloomustab kõrge vere nakkavust, mis on HBV aktiivse replikatsiooni indikaator. HBeAg tsirkuleerub patsiendi veres ainult HBsAg manulusel. Kõhulihase perioodi esimesel nädalal tuvastatakse see 85-95% patsientidest. HBeAg detekteerimine kaheks kuuks või kauemaks on prognostiline märk kroonilise hepatiidi tekkest. Enamikul kroonilise hepatiidiga patsientidel, kellel on kõrge aktiivsus HBeAg-protsessis, püsib see pikka aega (kuni mitu aastat).

B-hepatiidi viiruse klassi M (anti-HBc IgM) nukleaarse antigeeni antikehad - HBV aktiivse replikatsiooni marker ja äge infektsioon. Tuvastati 1-2 nädalat pärast HBsAg avastamist ja püsib 2-18 kuud. Ägeda hepatiidi B patsientidel on 4-20% -l HBc-vastane IgM-i ainus infektsiooni marker. Kroonilise B-hepatiidiga patsientidel võib mõne vähese tiitrusega patsiendil avastada HBc-IgM-i kui akuutse infektsiooni ajal, kusjuures antikehade tiiter peegeldab hepatiidi raskust.

HBcAg klassi G (anti-HBc IgG) antikehad ilmnevad peaaegu samaaegselt anti-HBc IgM-iga. Reeglina jäävad nad kõikideks isikuteks, kellel on elu jooksul B-hepatiit. HBsAg-vastane antikeha levib 95% HBsAg kandjatest koos HBsAg-ga.

HBsAg-vastased antikehad (anti-HB-d) viitavad eelmisele infektsioonile või vaktsineerimisjärgsele immuunsusele (kaitse tase - 10 RÜ / ml). Need ilmnevad taastumisperioodil, 4 nädalat pärast HBsAg kadumist, saavutades maksimaalse kontsentratsiooni 1-2 aasta jooksul, millele järgneb ajakohane diagnostiliste meetodite abil avastamiseks ligipääsmatu taseme järkjärguline vähenemine. Mõnedel juhtudel võivad anti-HB-d elada kogu aeg. Hepatiit B-ga patsientide kliinilise paranemise taustal on anti-HB-de esinemine hea prognostiline märk. On oluline märkida, et ägeda HBV infektsiooni dünaamikas on "aken", kui HBsAg ei ole enam määratletud ja anti-HB-sid pole veel ilmnenud. Samal ajal tuvastatakse anti-HBc IgM ja IgG. Sellest järeldub, et on vaja uurida AVH-i patsiente anti-HBc-IgM-i suhtes isegi HBsAg ja anti-HBs-uuringu negatiivsete tulemustega.

HBeAg-vastased antikehad (anti-HBe) ilmuvad veres pärast HBeAg eliminatsiooni ja viiruse replikatsiooni viimist. B-hepatiidi ägeda perioodi 9. nädala lõpuks on enam kui 90% -l patsientidest anti-HBe. Taastumisaja jooksul võib anti-HBe kaob. Kuid anti-HBe olemasolu ei viita konkreetse seerumi nakkavuse puudumisele. On näidatud, et paljudel B-hepatiidi (umbes 10%) arengus esinevatel patsientidel esineb viiruse "immuunrõhu" all mutantvormid, mis "vältida" immuunsüsteemi ja ei ole kõrvaldatud. HB-vastase antikeha rakkudest eraldati mutant, mis ei suutnud toota HBeAg-i defektide tõttu eelregiooni piires ja mida nimetati HBeAg-negatiivseks. HBeAg-negatiivse mutandi välimus põhjustab maksakahjustuse progresseerumist viiruse replikatsiooni jätkamisega (HBV DNA olemasolu seerumis). HBeAg-negatiivse mutandi esmane nakkus suurendab oluliselt fulmitava hepatiidi riski.

Kirjeldatud hepatiit B markereid kontrollitakse ELISA abil. Antikehade (anti-HBe, anti-HBs, anti-HBc IgM, anti-HBc IgG) ja antigeenide (HBsAg, HBeAg) antikehade spekter võimaldab määrata B-hepatiidi diagnoosi ja määrata haiguse staadium (tabel 3). Selle meetodi puuduseks on see, et seda ei saa kasutada viiruse mutantvormide infektsioonil, immunosupressiooniga (vähipatsiendid, narkomaanid jne) ja organismis esineva patogeeni kvantitatiivseks hindamiseks. Nende probleemide lahendamine sai võimalikuks molekulaarbioloogiliste meetodite kasutuselevõtmise tulemusena kliiniliste diagnostiliste laborite praktikas.

Tabel 3. Hepatiit B viiruse nakkuse seroloogiliste markerite erinevad kombinatsioonid ja nende tõlgendamine

antiNBc
Igm

antivib
c summad

Genotsioloogiaga seotud meetodid, mis hõlmavad PCR-i, suurendavad oluliselt viiruse B laboratoorset diagnoosimist, võimaldades otseselt identifitseerida patogeeni, luua HBV koe ja rakusisese lokaliseerimise, tuvastada ja iseloomustada viiruse mutantseid vorme, hinnata vireemia taset haiguse ajal, sealhulgas viirusevastase ravi taustal.

Praegu on PCR-meetodil põhinevad laboratoorsed tingimused HBV DNA tuvastamiseks mitmesugused diagnostiliste testimissüsteemid - Roche, NPF Litekh, DNA tehnoloogia, LCR (ligaasi ahelreaktsioon) - Abbott, bDNA (meetod "erinevad" DNA-sondid) - kindel "Chiron". Need katsesüsteemid võimaldavad patogeeni olemasolu kvalitatiivsel määramisel bioloogilises materjalis: seerumis või plasmas, maksas koes, mononukleaarsetes rakkudes. Üks võimalus HBV DNA kvalitatiivseks määramiseks on in situ PCR-tehnoloogia (histoloogilistes sektsioonides), mis võimaldab kindlaks teha viiruse rakusisese lokaliseerimise hepatotsüütides.

Abbot kasutas LCR-i abil ainukese kaubandusliku testi süsteemi HBeAg-negatiivse hepatiidi B diferentsiaaldiagnostikas. Selle süsteemi oluliseks puuduseks on ainult üks paljudest mutatsioonidest, mis põhjustab HBeAg viiruse sünteesi puudumist. HBeAg-negatiivse B-hepatiidi viiruste jaoks iseloomulike geneetiliste muutuste kogu identifitseerimine on seni võimalik ainult viiruse genoomi PCR-amplifitseeritud fragmentide otsese järjestamise teel.

HBV DNA sisalduse kvantitatiivne iseloomustus kliinilistes proovides on oluline viirusevastase ravi efektiivsuse hindamiseks ja sellel on prognostiline tähtsus HBV krooniliseks määramiseks. Kui algselt madal vireemia (HBV DNA alla 500 fg / l) protsendi kroonilise akuutne hepatiit B nullilähedane, samas kontsentratsioonis DNA HBV vahemikus 500 kuni 2000 fg / ul krooniliseks protsessi täheldatakse 25-30% patsientidest, samas kõrgema vireemia patsient (üle 2000 fg / μl) äge hepatiit B muutub sageli krooniliseks.

Tuntud kommertskatsesüsteemid HBV DNA kontsentratsiooni hindamiseks rakendavad konkureeriva PCR analüüsi põhimõtet, millele järgneb hübridisatsioonikava amplifikatsiooniproduktide määramiseks (Roche, NPF Liteh). See lähenemisviis põhineb teadaoleva kontsentratsiooni siseanalüüsi kliinilisel proovil, mis on kvalitatiivselt erinev määratud maatriksist. Pärast PCR-i arvutamiseks arvutatakse HBV DNA kontsentratsioon katsematerjalis, lähtudes sisestandardi tuntud kontsentratsioonist ja sisestandardi ja määratud maatriksi amplifikatsioonikoguste kuhjumise suhetest.

Praegu arengus laboridiagnostikale hepatiidi meetodeid normaaltingimustes loomise suunas kaubandusliku testikomplektidega identifitseerimist kliiniliselt olulisi HBV mutanttüvesid, samuti uute optiliste seadmete (biosensorid) terviklike HBV infektsiooni diagnoosimiseks (viirusvalkude selle antikehad ja HBV DNA)

Hepatiit C seradiagnostika

C-hepatiidi viirus (hepatiit C viirus, HCV) on RAV, mis sisaldab Flaviviridae perekonda kuuluvaid hepatotroopseid ja lümfotroopseid viirusi. Viiruse genoomi esindab üheahelaline (+) RNA molekul, mille mõõtmed on umbes 9500 alust, mis kodeerivad struktuurseid ja mittestruktuurseid valke (joonis 6).

Joon. 6. HCV genoomse RNA skeem ja viiruse valgu süntees

Struktuursed valgud hõlmavad südamiku valku (tuum) ja ümbritsevaid glükoproteiine (E1 ja E2). Mittestruktuurne piirkond on valkude kompleks, millel on ensümaatiline aktiivsus, peamiselt RNA-sõltuv RNA polümeraas. Lisaks viiruslikele valkudele on virionist väljaspool ka lipiidmembraan, mis koosneb lipoproteiinide madala tihedusega peremeesorganismist (joonis 7).

Joon. 7. Hepatiit C viiruse struktuuri skeem.

Kuni 1990. aastani diagnoositi parenteraalset transmissiooni CGN-A-Ni-B, viiruse hepatiidi muude teadaolevate markerite puudumisel seerumi ALAT aktiivsuse suurenemise tõttu 6 kuud. Kuid mõnedel patsientidel, kellel on krooniline hepatiit C, ei suurene ALAT tase. C-hepatiidi tänapäevases diagnostikas on peamine roll HCV-vastaste antikehade määramisel ja HCV RNA tuvastamisel.

Erinevalt B-hepatiidist, milles on võimalik tuvastada viiruse antigeenid ja nende antikehad, võib hepatiit C abil tuvastada ainult antikehasid ELISA-ga. HCV antigeenid, kui nad sisenevad verd kogustes, mis on vaevu lõksus. Neid saab leida ainult maksakoes, kasutades immunohistokeemilisi uurimismeetodeid. See piirab oluliselt võime hinnata nakkusprotsessi kulgu ja aktiivsust.

HCV-vastane antikeha ei viita viiruse replikatsiooni jätkamisele ja võib olla nii praeguste kui ka minevikuinfektsioonide märguanne. Samuti on vaja arvestada, et HCV-doonorivastast antikeha, mis ei pruugi näidata HCV nakkust, saab tuvastada retsipientidel, kes on üle nakatunud verd. Kroonilise C-hepatiidiga patsientidel leitakse anti-HCV sisaldus veres mitte ainult vabas vormis, vaid ka tsirkuleerivate immuunkomplekside koostises.

Igale viiruslikule proteiinile, mis paikneb viiruse genoomi struktuurilises ja mittestruktuurilises piirkonnas, moodustuvad antikehad. See määrab nende erineva spetsiifilisuse ja seega erinevate diagnostilise teabe. Hepatiit C sõeluuringuks kasutatakse ELISA-meetodit ja kinnitava testi abil kasutatakse immunoblot-meetodit (RIBA). HCV-de tuvastamiseks on erinevad diagnostiliste testimissüsteemide põlvkonnad, mis erinevad nende tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest (tabel 4).

Tabel 4. Diagnostiliste ensüümide immunoloogilise testi süsteemide erinevate põlvkondade võrdlus HCV antikehade tuvastamiseks.

* 4. põlvkonna katsesüsteemid sisaldavad sünteetilisi ja rekombinantseid viiruslikke antigeene, mille suurused võivad erineda kolmanda põlvkonna fragmentidest.

Esimene diagnostilise testi süsteem, mis põhineb C-100-3 antikehade tuvastamisel, töötati välja 1989. aastal M. Houghtoni laboris ja sai kiiresti üldlevinud. See võimaldas püüda antikehi vööndis, mis iseloomustab ainult 12% viiruslikust valgusest mittestruktuurilises piirkonnas (NS3, NS4). Lisaks ei ühti kunstlik rekombinantse antigeen C-100-3 täielikult looduslike viirusvalkudega, mis määrab selle nõrga immunogeensuse. C-valgu (Ag-tuum) antikehad antigeeni C-100-3 abil ei jää üldse. See määrati kindlaks HCV-vastase antikehade määratluse madala spetsiifilisusega ja suure hulga vale-negatiivsete tulemustega, eriti kroonilise C-hepatiidiga patsientidel. Raske hüpergammaglobulineemiaga patsientidel on vastupidi C-100-3 test sageli valepositiivne.

Teise põlvkonna katsesüsteemid, mis ilmusid aastal 1991, võimaldavad hõivata antikehasid valkudele erinevates genoomi piirkondades, mitte ainult mittestruktuurilistes, vaid ka struktuurilistes piirkondades. Nende eeliseks olid eelkõige kõrge spetsiifilisus, samuti HCV antigeenide spektri täielikuma esindatuse võimalus. Teise põlvkonna katsesüsteemide kasutamine võimaldas märkimisväärselt parandada doonorite valimist ja vähendada transfusiooni järgse hepatiidi C tekke ohtu.

Teise põlvkonna katsesüsteemide kasutamisel ei välistata ka vale negatiivseid tulemusi, eriti HCV genotüüpidega patsientidel, mis on selles piirkonnas ebatavalised. Kolmanda ja neljanda põlvkonna kõige sobivamad katsesüsteemid, mida kasutatakse alates 1995. aastast kliinilises praktikas.

Kolmanda ja neljanda põlvkonna katsesüsteemid võimaldavad 99,8% -l juhtudest tuvastada HCV-vastast antikeha. Mõnel juhul ei pruugi HCV-vastased antikehad tuvastada näiteks siis, kui immuunvastus lükkub edasi, kui kasutatakse immunosupressiivset ravi või kui onkoloogilises haiguses, ravimite võtmisel jne esineb immunosupressioon. Valepositiivseid tulemusi on väga harva täheldatud. Nende välistamiseks analüüsitakse küsitavaid seerumeid RIBA või INNO LIA testides, mis tuvastavad iga HCV valgu antikehad. Hepatiidi C diagnoosimise ja patsientide seire määramine on sageli rasked, kui kasutatakse ainult klassikalisi laboratoorset diagnoosi meetodeid. Selle põhjuseks on HCV nakkuse käigu eripära, mille käigus võib täheldada järgmist: asümptomaatiline haiguse algfaasis; madal, sageli normaalne ALT tase; antikehade hilinenud ilmumine (kuni 2 aastat haiguse alguse tekkimisest); usaldusväärsete katsesüsteemide puudumine viirusvalkude avastamiseks. Molekulaardiagnostika hepatiit C juhtpositsiooni laboridiagnostikale HCV nakkuse hõivata genodiagnostic võimaldavaid meetodeid: otseselt tuvastada geneetilises materjalis viirus seerumis ja kudedes inimkeha (mononukleaarsetest rakkudest, hepatotsüütides, luuüdi, jne); hinnata viiruse replikatsiooni aktiivsust kudedes; kvantifitseerige viiruse kontsentratsiooni seerumis; tuvastama viiruse genotüübi ja jälgida HCV varieeruvust. HCV RNA tuvastamine seerumis on diagnoosi "kuldstandard", mis näitab jätkuvat HCV replikatsiooni. Vastavalt Maailma Terviseorganisatsiooni soovitusele võib hepatiit C diagnoosida, kui patsiendi seerumis on kolmekordne HCV RNA tuvastamine teiste hepatiidi markerite puudumisel. Hepatiidi ägedas faasis tuvastatakse RNA juba 1-2 nädala jooksul pärast nakatamist s.o. ammu enne HCV-i esilekerkimist. Kõigi HCV populatsiooni heterogeensuse korral on kõikidel viiruse geneetilistel variantidel genoomi 5'-mitteselemendatud piirkonnas konservatiivne piirkond, mille tuvastamisel põhinevad kõige tuntumad diagnostilised testimissüsteemid HCV RNA tuvastamiseks. Hiljuti peeti HCV RNA määramiseks kõige tundlikumaks testiks Amplicor HCV Roche'i test, mis näitas, et RNA on 700 koopiat milliliitri kohta. Abbotti LCx komplekti abil saab tuvastada 200 RNA / ml koopiat. BDNA Quantiplexi test (firma "Chiron") on praegu vähem tundlik, kuid on laialt levinud. Riigisisesed katsesüsteemid põhinevad HCV RNA määramisel kliinilises proovis RT-PCR-iga, kasutades sihtmärgiks viiruse genoomi konservatiivset 5'-mittesisaldatud piirkonna amplifikatsiooni (NPF Liteh, DNA-tehnoloogia). PCR võimaldab tuvastada HCV RNA mitte ainult vere seerumis, vaid ka maksa koes, mis on oluline HCV rolli kinnitamisel hepatotsellulaarse kartsinoomi moodustumisel. Selles patsiendikategoorias tuvastatakse HCV RNA hepatotsüütides ja seerumis anti-HCV ja HCV RNA puudumisel. HCV-infektsiooni kulgu iseloomustab mitmete ekstrahepaatiliste ilmingute areng, mis nõuab viiruse leviku jälgimist organismis. HCV RNA määratakse PCR-ga vere mononukleaarsetes rakkudes, krüopretsipitaatides, rakkude ajukoes, maksa biopsia ja lihaskoes. On metoodiline lähenemisviis, mis võimaldab mitte ainult määrata viiruse esinemist koes, vaid ka hinnata selle replikatsiooni aktiivsust - reaktsiooni (-) RNA ahelale. Kroonilise hepatiit C patsientide jälgimisel mängib olulist rolli patsiendi seerumi või vereplasma viiruse sisalduse kvantitatiivne hindamine ja HCV genotüübi määramine. Viirusevastase ravi kõige soodsam vastus on täheldatud madala vireemia ja 2. või 3. genotüübiga isikutel. Hea teadaolevate diagnostiliste testimissüsteemide alus HCV sisalduse määramiseks on lähenemine, mis põhineb HCV RNA ja sisestandardi konkurentsivõimelise võimendamise põhimõttel. Esiteks on need Roche ja NASBA HCV (Organon) Amplicor HCV monitori komplekti diagnostilised ettevõtted. Firma "Chiron" bDNA Quantiplex kvantitatiivsed testimissüsteemid, mis võimaldavad teil otseselt hinnata maatriksi kontsentratsiooni proovis salvestatud signaali intensiivsusega. Need katsesüsteemid eristatakse usaldusväärsuse, parema reprodutseeritavuse, kuid madalama tundlikkuse tasemega võrreldes amplifikatsioonidega. Ettevõtete Gen-Probe ja Bayer Diagnostics töötajad avaldasid HCV RNA kvantifitseerimise tulemusi, kasutades TMA-d (transkriptsiooni vahendatud võimendus) väga madala tundlikkuse lävega 50 koopiat / ml. Enamik kodumaiseid laboratoreid kasutavad HCV RNA kontsentratsiooni hindamiseks limiteeriva lahjendusmeetodi. See põhineb analüüsitava maatriksi laagerdamisel kontsentratsioonide kadumisel ja algkontsentratsiooni arvutamisel, mis põhineb amplifikatsiooni tulemustel, võrreldes kalibreerimiskõveraga. Kahjuks pole see meetod piisavalt õige, kuna see ei võta arvesse katseprooviga katseklaasis amplifitseerimisreaktsiooni summeerimise võimalust. Sellest hoolimata on meetod üsna lihtne täideviimiseks ja seda kasutatakse paljudes laborites "sisekasutuseks" (majas). HCV omaduse oluline tunnus on selle geneetiline heterogeensus, mis vastab nukleotiidide eriti kiirele nukleotiididele. Selle tulemusena moodustub suur hulk erinevaid genotüüpe ja alatüüpe. Simmondsi klassifikatsiooni järgi eristatakse 11 tüüpi (genotüübid 1-11), mis omakorda on jagatud HCV alatüüpideks (näiteks alatüübid 1a, 1c, 1c) alamtüübiks (näiteks alatüübid 1a, 1c, 1c). Eriti paljud HCV alatüübid on leitud Aafrikas ja Kagu-Aasias. See kinnitab kaudselt HCV olemasolu nendes piirkondades juba mitu sajandit. Nad arvavad, et HCV ilmnes hiljem Euroopas ja Põhja-Ameerikas, mis vastab tunduvalt väiksemale arvule alatüüpidele. Kliinilises praktikas on piisav eristada HCV 5 alatüüpi: 1a, 1b, 2a, 2b, 3a. Erinevate genotüüpide levimise geograafilised erinevused. Seega on Jaapanis, Taiwanis ja osaliselt Hiinas genotüübid 1b, 2a, 2b enamasti registreeritud. Tüüpi 1b nimetatakse isegi "jaapanlasena". Ameerika Ühendriikides on 1a - "Ameerika" genotüüp valitseb. Euroopa riikides valitseb genotüp HCV 1a, Lõuna-Euroopas suureneb oluliselt genotüübi 1b osakaal. Vene Föderatsiooni territooriumil on domineeriv genotüüp 1b, moodustades 80% viiruse populatsioonist, seejärel sagedus - 3a, 1a, 2a. Tavalise metoodika lähenemine HCV tüpiseerimiseks on tuvastada viiruse genoomi - 5 'tõlkimata, Cor, NS5A piirkondade konservatiivsetes piirkondades iseloomulikke geneetilisi muutusi (mutatsioonid). HCV kirjutades on amplifikatsiooni konserveerunud piirkondade viiruse genoomi ja analüüsi konkreetseid nukleotiidijärjestused meetodid: otsene sekveneerimine võimendati fragmendid järgnes PCR tüübispetsiifilistele spetsiifilisi praimereid RFLP (analüüs võimendatud fragmentideks restriktsiooniensüümide) reverse hübridiseerumisel tüübispetsiifilisest sondide (LiPA) SSCP (analüüs konformatsioonilises polümorfismi üheahelaline fragmendid DNA) HCV genotüübi loomiseks on loodud kaubanduslik InnoLiPA HCV testimissüsteem ("Innogenetics"), põhiliselt Mis põhineb reverse hübridiseerimise põhimõttel tüübispetsiifiliste sondidega (joonis 8). 1-1a genotüüp 2-1c genotüüp 3-2a genotüüp 4-1c + 3a genotüüp 5-2c genotüüp 6-1a + 2a genotüüp 7-negatiivne kontroll amplifikatsiooniga Pic. 8. kehtestamine genotüübiga C-hepatiidi viiruse abil test-süsteemi "InnoLipa ​​HCV" Mõnes suuremates keskustes teostada diagnostikamenetlustes algset HCV tüpiseerimine PCR tüübispetsiifilisest praimereid, DNA fragmendid restrictase analüüs (RFLP), üheahelaline konformatsioonilises analüüsi või DNA fragmentide (SSCP ) Seega NPF Litekh kliinilises ja diagnostilises laboris määratakse viiruse genotüüp PCR-SSCP-ga (joonis fig 9) või alleel-spetsiifiline amplifikatsioon vastavate praimeritega. Joonis 9. HCV RNA genotüpiseerimine SSCP analüüsi järgi: 1-5 genotüüp 1 kuni 6 - 1a7 - 2a8 - 3a. On kindlaks tehtud, et HCV populatsioon ei ole igas patsiendis ühtlane. HCV tsirkuleerib inimese keha kui sama viiruse genotüübiga seotud lähedaste mutantsete tüvede heterogeenset segu, millel on geneetilised erinevused viiruse genoomi varieeruvates piirkondades. Geneetiliselt erinevad HCV-i variantid, mis tsirkuleerivad ühe peremehe kehas nimega "kvaasiliigid". Erakordset ebastabiilsust iseloomustab E2 / NS1 piirkond, mis sisaldab ainult 80 nukleotiidi ja nimetatakse hüpervarieeruvat piirkonda (HVR1). Arvatakse, et E2 / NS1 genoomi poolt kodeeritavate valkude antikehad, millel on neutraliseerivad omadused. HVR1 piirkonna erakordne ebastabiilsus toob kaasa asjaolu, et viirus suudab oma antigeenset struktuuri muuta, mistõttu immunokompetentsed rakud ei suuda tuvastada pidevalt uuendatud antigeene. "Kvaasiliikide" esinemine on seotud viiruse põgenemisega immuunvastusest, HCV-i ebaefektiivse eemaldamisega ja selle tagajärjel selle pikaajalise püsivusega inimese kehas ja suurte krooniliste infektsioonide osakaaluga. Üksiku HCV populatsiooni heterogeensuse hindamine viiakse tavaliselt läbi HVR1 viiruse genoomi geneetiliste variantide arvu registreerimise alusel, kasutades heterodupleksi analüüsi või SSCP-d. Mõnede välismaiste teadlaste arvates põhjustab HVR-lookuse individuaalse HCV populatsiooni kõrge heterogeensuse tase HCG C-i raskemat liikumist kudede transaminaaside taseme kõikuvuse ja viirusevastase ravi suhtes. Füüsikalis-keemilise meditsiini teadusuuringute instituudi tehtud uuring näitas, et HCV populatsiooni geneetiliste muutuste registreerimisel ägeda hepatiit C korral ei ole prognoositav väärtus, nagu mõnedel juhtudel on HCG-C. Seega on geneetiline heterogeensus vaja pidada kui elusoleva viiruse adaptiivne reageering peremeesorganismi muutuvatele tingimustele, mida tõendavad erinevused hepatotsüütide, mononukleaarsete rakkude ja inimese seerumi HCV subpopulatsioonides. Lisaks sellele võib HCV üksikpopulatsiooni geneetilise varieeruvuse dünaamika ja muutused viiruse kontsentratsioonis patsiendi seerumis olla ka maksarakkudes esineva replikatsiooniprotsessi aktiivsuse kaudne marker. Hepatiidi C laboratoorne diagnostika areneb uute, arenenumate katsesüsteemide loomiseks. Ortho Clinic Diagnostic on käivitanud uue immunoloogilise analüüsi komplekti, et määrata veres oleva tuumantigeeni. Esimene etapp on antigeenide vabastamine rakulistest struktuuridest seerumi lüüsimisega, teine ​​on antigeenide hõivamine spetsiifiliste monokloonsete antikehadega. See katse on eriti kasulik HCV-nakkuse varase staadiumi tuvastamiseks, kui viiruspetsiifilised antikehad pole veel ilmnenud. Chiron ja Gen-Probe pakuvad uut amplifikatsioonikatset - NAT-i analüüsi - nii HCV kui ka HIV RNA tuvastamiseks, mis võib analüüsida analüüsitavas materjalis ühe viiruse koopiaid. Kokkuvõttes tuleb mainida vajadust patsiendi tervikliku uurimise järele, kaasates meditsiinilise ja bioloogilise teaduse uusimad edusammud viirusliku hepatiidi õigeks diagnoosiks ja patsiendile piisava ravi määramiseks.


Seotud Artiklid Hepatiit