Viirusliku hepatiidi C, B, A laboratoorsed diagnoosid

Share Tweet Pin it

Viiruse hepatiit on maksa põletikuline infektsioon, kõige levinum patoloogia maailmas teiste maksakahjustuste hulgas. Sõltuvalt viirusliku hepatiidi tüübist põhineb haiguse diagnoos kliiniliste sümptomite ja laborikatsetega. Olulist rolli mängib hoolikalt välja selgitatud haiguse ajalugu ja epidemioloogiline ajalugu. Viirusliku hepatiidi mitmesugused vormid, võttes arvesse patogeeni liiki, kliinilisi ilminguid, haiguse kulgu ja raskusastet. Viirusliku hepatiidi laboratoorsed diagnoosid on paljudel juhtudel ainus meetod haiguse täpselt kindlaksmääramiseks. Praeguseks on tuvastatud ja uuritud mitmeid hepatotroopsete toimete (A, B, C, D, E) viiruseid, mis põhjustavad sarnast kliinilist pilti. Sümptomite puudumise ja C-hepatiidi diagnoosimise raskuste tõttu peetakse kõige tuntumate liikide hulka kõige raskemaid.

Viiruse hepatiit A

Sellel on fekaal - suuline transplantatsioon, mis muudab selle laialt levinud infektsiooni. Hepatiidi A diagnoosimine ei ole raske. Inkubatsiooniperiood on suhteliselt lühike - 7 kuni 50 päeva; mida iseloomustab äge seisund: kõrge palavik, märgatav asteenia sündroom, valu kõigis liigeses - kliiniliselt sarnaneb gripp. Haiguse kestus - 1 kuu. Kerge haigus ei vaja mõnikord spetsiaalseid ravimeetmeid, on ennastpidavuse juhtumeid.

Viirushepatiit B

Subkliinilise ravikuuri puhul on hepatiidi B laboratoorsed diagnoosid ainus täpne meetod diagnoosi kontrollimiseks - viiruse antigeen ja patogeeni valgu ja HBV DNA antikehad määratakse veres. Edastamise viisid:

  • parenteraalne - läbi vere;
  • sugu - sperma kaudu;
  • vertikaalne: emalt lootele (viirus ei edastata lapsele ema piima kaudu).

Infektsioon siseneb kehasse vahendite abil (kirurgia, tätoveeringu, nõelravi, kõrvapõlve, maniküüri, pediküürina) ja vereülekannete kaudu, kasutades määrdunud süstlaid (ühe nõela kasutamine narkomaanide poolt). Varjatud periood on 2 kuud kuni 6 kuud. Sümptomid sarnanevad viirusliku hepatiidi A tekkega: tekib gripilaadne sündroom, esinevad kogu keha ja liigestevalu, suur nõrkus, halb enesetunne. Mõnikord esineb lööve. Ägeda hepatiidi prognoos on suhteliselt soodne: taastumine esineb 80% -l juhtudest. Haiguse subkliiniline vorm muutub sageli krooniliseks, sellistel juhtudel on harva võimalik tervenemist saavutada.

Samal ajal tuvastatakse haiguse paljudel juhtudel B-hepatiidi satelliit - viirus D (delta), mis põhjustab viirushepatiiti D ja raskendab haiguse kulgu.

Viiruse hepatiit E on kliinilistes sümptomites sarnane HAV-iga, kuid see on järk-järgult alanud ja rasedatele naistele palju ohtlikum.

HCV manifestatsioonid

Laboratoorselt on C-hepatiidi (HCV) laboratoorne diagnoos eriti tähtis, kuna umbes 3% maailma elanikkonnast on selle nakatunud. Igal aastal suureneb esinemissagedus - see on seotud narkomaania pideva tõusuga maailmas.

Tähelepanu! Viiruse hepatiit C on üks kõige ohtlikumaid ja tugevalt tuntud maksahaiguste nakkushaiguste seas. Seda nimetatakse õrnaks tapjuseks pikka aega subkliinilise ravikuuri tõttu ja seejärel kiirelt tulemuseks tsirroosile, mis võib lõppeda surmaga. HCV koos teiste nakkushaiguste vormidega tõstab oluliselt haiguse kulgu ja kiirendab surma.

Äge HCV on asümptomaatiline ja seetõttu diagnoositakse harva. Kui haigus on selles faasis võimalik tuvastada, siis 20% -lise ravi õigeaegse alustamise korral võib tekkida taastumine.

Kõige sagedamini täheldatakse HCV-d kroonilises vormis, hilisemates staadiumides. Kroniseerimisprotsess toimub 50% juhtudest.

Viiruse C asümptomaatilise transpordi korral on maksarakud järk-järgult kahjustatud, fibroos areneb. Lisaks, kui õigeaegset ravi ei toimu, suureneb tsirroos või maksavähk.

Igat liiki viirusliku hepatiidi diagnoos põhineb järgmiste mõistete määratlemisel:

  • patogeen ja selle replikatsioon;
  • nakkuse markerid.

Diagnostilised meetodid hõlmavad immunokeemilisi ja molekulaarseid bioloogilisi reaktsioone, mis näitavad:

  • patogeenide antigeenid;
  • viiruse antikehad;
  • nukleiinhapped.

Viiruse C struktuur

C (BC) viirusel on oma genoomis üheahelaline RNA. Ta on ainus seas viirusliku hepatiidi põhjustajaid, kellel on selline struktuur. Nii vedaja kui ka patsient ei suuda arvata viiruse olemasolu. Seepärast on ebaselge diagnoosiastmega patoloogia väljaselgitamiseks vaja teha mitmeid uuringuid ja diagnostilisi teste.

Viiruse C (selle RNA) genoom koosneb 10 000 nukleotiidi alusest. Selline suur heterogeensus määrab HCV omadused. RNA nukleotiidide uuringus ilmnesid nende struktuuri olulised erinevused. Võttes arvesse avastatud struktuurseid omadusi, on loodud HCV klassifikatsioon, mille järgi eristatakse järgmist:

  • valikud (seal on 6 - 9);
  • alatüübid;
  • genotüübid.

Mõned neist asuvad kõikides maailma riikides ilma eranditeta, mõnedes piirkondades teatud piirkonnas. Kui C viirus siseneb kehasse, sisestatakse see RNA molekuli nukleotiidide ahelasse. See pidevalt muteerib (modifitseerib) ja inimene võib kohe saada viiruse genotüübi 50 alamtüübi kanduriks. Immuunsüsteem ei toimi kiire mutatsiooniga: antikehad toodetakse ühe viiruse rühma jaoks, haigus muutub krooniliseks.

Viiruse C määratlus

HCV diagnoosimine on reaalsuseks molekulaarbioloogia tekkimisega. Seda seletatakse viiruse väga väikese sisaldusega veres, mis ei võimalda oma antigeenide eraldamist varem kättesaadavate meetoditega.

HCV kahtluse korral on laboratoorse diagnoosi kindlaksmääramine:

  • antikehad (IgG, IgM) ELISA-ga (ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs);
  • RNA viirus, kasutades PCR-i (polümeraasi ahelreaktsioon).

Tähelepanu! C-hepatiidi seroloogilised markerid on RNA-HCV ja antikehad, mis moodustuvad kehas.

PCR - hepatiit C viiruse määratlus

RNA - HCV kuulub HCV varajasi markereid: selle esinemine veres toimub 10 kuni 12 päeva pärast nakatamist, see tähendab palju kiiremini kui aminotransferaaside (AST, ALT, GGT) tõus. RNA tuvastamine - HCV viitab viiruse aktiivsele replikatsioonile (paljunemisele). See on diagnoosi "kuldstandard", sest see selgitab ja kinnitab diagnoosi isegi ajal, mil haiguse sümptomid praktiliselt puuduvad. ELISA-analüüsi tulemuste jälgimiseks tuleks läbi viia PCR-analüüs. Seda tehakse kvalitatiivsetes ja kvantitatiivsetes versioonides.

Viiruslikku koormust peetakse kõrgeks, kui PCR on suurem kui 800000 IU / ml või 2 miljonit koopiat / ml; madal - PCR abil

Tähelepanu! PCR on mitte ainult kvalitatiivne analüüs (RNA viiruse tuvastamine), vaid ka määratakse RNA koopiate arv 1 ml veres. See mängib olulist rolli efektiivse ravi määramisel ja ravi edukuse hindamisel. Kui viiruse C RNA tuvastatakse vereplasmas, näitab see haiguse ägedat faasi. Pärast biopsia ilmneb maksakahjustuse ulatus ja patoloogiliste muutuste levik - fibroos ja põletik. See meetod on diagnoosimisel kõige informatiivsem ja usaldusväärsem. Manipuleerimine on patsiendile täiesti ohutu ja kestab mõni sekund.

ELISA - viiruse antikehade määramine

Inimese immuunsüsteem, kui ükskõik milline nakkusoht on imendunud, toodab patogeenile antikehi (IgG, IgM). Saadud immunoglobuliinid loovad tugeva kompleksi võõrvalguga (viiruse antigeeniga), mille kvantitatiivsed ja kvalitatiivsed parameetrid määratakse ELISA meetodil. See viitab kaudsele uurimismeetodile: katse ajal ei avasta tuvastatud viirus, vaid tekib organismi immuunvastus sissetungivale nakkusohtlikule ainele. ELISA viiakse läbi varajaseks diagnoosimiseks, protsessi jälgimiseks aja jooksul.

Antikehad tuvastatakse 80% -l nakatunud patsientidest ainult 5-6 nädala jooksul pärast haiguse algust 90% -l 12 nädala jooksul. Mõnikord annab see analüüs valepositiivseid vastuseid. Sellistel juhtudel on olemas spetsiaalsed testid - antikehade valkude spekter määratakse rekombinantse immunoblottimisega.

Usaldusväärsete tulemuste saamiseks viiakse skriinimine PCR ja ELISA abil läbi kaks korda teatud aja jooksul. Reeglina on ajavahemik 6 kuud.

Vaatluse taktika

Maksa protsessi aktiivsuse selgitamiseks, ravitaktika kindlaksmääramiseks määratakse maksakatsed:

  • vere transaminaasid (ALT, AST, GGT);
  • kogu bilirubiin ja selle fraktsioonid;
  • aluseline fosfataas (leeliseline fosfataas);
  • kogu valk fraktsioonidega.

Sõltuvalt laboriuuringute tulemustest rakendatakse patsiendi juhtimise erinevaid taktikaid:

  • Normaalsete arvudega patsient on arsti järelevalve all. Heaolu muutustega korratakse analüüse.
  • Kasvuga 2 korda või enam korda tehakse anti-HCV-ga ELISA.
  • Kui ensüümi immuunanalüüs on positiivne, kasutatakse PCR -t - polümeraasi ahelreaktsiooni, mille tulemusi kasutatakse viirusevastase ravi valimiseks.
  • Kõrgendatud 2-kordne või mitme näitaja maksaproovidest, kuid negatiivse ELISA või suurendades maksas proovid 2-kordne, positiivse IFA ja PCR negatiivse dünaamilise seire jätkub kontrollimise ja biokeemiliste testide 1 iga 3 kuu tagant.
  • Kõrgete biokeemiliste indeksitega tehakse ELISA ja PCR positiivsed tulemused, kliiniline diagnostika, viirusevastane ravim valitakse ja ravi jälgitakse.

Biokeemiliste parameetrite uuring

Vere biokeemilise analüüsi tulemuste põhjal hinnatakse aminotransferaaside taset.

  • ALT - alaniini aminotransferaas - on hepatotsüütide osa. Isegi veidi normi ületamine viitab hepatiidi esinemisele (ka viiruslikule) varajases staadiumis.
  • AST - aspartaataminotransferaas: kui selle tase ületab ALATi, on see algulise fibroosi (sidekoe proliferatsioon) näitaja.

Kõrge ALAT ja ASAT sisaldus veres tuleneb maksa rakkude nekroosist. Nad on põletikulise protsessi aktiivsuse kaudne indikaator. Kui ALT tase ületab 3 korda normi, me räägime minimaalse aktiivsusega, 3 - 10 korda -umerennaya põletikuline protsess aktiivsus, rohkem kui 10 korda - hepatiit kõrge aktiivsusega.

AST tase muudab ka teisi patoloogiaid, peetakse ALATi maksahaiguste spetsiifilisemaks.

  • Kogu ja otsese bilirubiini taseme tõus tekib koos organismi suurenenud moodustumise või aeglase eemaldamisega. Viiruslik hepatiit ilmneb, rikkudes bilirubiini eemaldamist. Bilteriini kontsentratsioon on üle 30-35 mmol / l, ikkersed limaskestad ja sklerad täheldatakse edasise akumulatsiooni korral, nahk muutub kollaseks. Kroonilises mõttes seda ei juhtu.
  • Sellel sündroomil on iseloomulik suurenenud leeliseline fosfataas (leeliseline fosfataas), gammaglutamintransferaas (GGT), kolesterool ja sapphapped. Kuid maksahaigus ei ole nende suurenemise ainus põhjus.
  • Albumiini suurenemine on seotud sünteetilise maksafunktsiooni kahjustusega.

Kliiniline diagnoos

Kliinilised ilmingud on viirusliku hepatiit C kasuks. Kroonilist ulatust iseloomustab nõrk sümptomatoloogia: ärevus ja suurenenud väsimus päeva lõpuks, tavalise füüsilise koormuse taluvuse vähenemine, mure. Tavalistes biokeemilistes analüüsides seostatakse selliste kliiniliste ilmingutega harva viiruslikku hepatiiti. Voltimata kliiniline pilt kuvatakse hilisemates etappides: seal telangiektaasiat ja maksa "tärni", maksa - ja splenomegaalia, kollatõbi kõvakesta, naha ja limaskestade suudmest, nahasügelus (väga kõrge bilirubiini tase), tume uriin, plekiliseks fekaalid, veritsemine, kaalulangus, maksa peopesad.

Tähelepanu! Kohalolekul kroonilise HCV võivad moodustada suure tõenäosusega arendada maksavähk, seetõttu on vajalik regulaarsete ajavahemike järel (1, iga kuue kuu tagant), et uurida verd tuumorimarkeritena ja alfa - fetoproteiini.

Ultraheli

Lisaks laboratoorsetele meetoditele on täiendavaid uurimismeetodeid, mis mängivad olulist rolli HCV diagnoosimisel. Nendeks on ultraheli OBP. Selle uurimismeetodiga uuritakse kõhuõõne organite seisundit. Mõõdetakse elundite suurust, tihedust, struktuuri, paigutust, avastatakse mahulised kahjustused, arvutused, sapipõletiku väljavool, portaali suurus ja põrnaveen. Splenomegaalia, hepatomegaalia, portaalveeni laienemine näitab hepatiiti üleminekul tsirroosile. Täiendav uurimine on vaja seroodiagnoosimist viirushepatiidi C vältimiseks või kinnitamiseks.

Fibroskaan ja muud testid

Kaudse diagnoosi meetod, biopsia samaväärne - fibroskantimine (elastometry): mitteinvasiivne, ohutu, saab ravi jälgimiseks korduvalt läbi viia. Elastometria nähtudeks on kahtlustatav patoloogilised protsessid maksas, sealhulgas viiruse esinemine.

Samuti on diagnoositestid, mis on alternatiiv maksa biopsiale. Katsed võimaldavad kindlaks määrata mõjutatud organi, olemasoleva fibroosi, steatoosi, nekroosi või põletiku täpset morfoloogilist pilti. Mõned neist on:

  • FibroTest - tema abiga põhjalik analüüs 5 biokeemilist parameetrit ja fibroosetappide õigeaegne diagnoosimine.
  • AktiTest - identifitseerib 6 biokeemilist parameetrit ja võimaldab diagnoosida maksa nekroos-põletikulist protsessi.

Tähelepanu! HCV prognoos sõltub õigeaegsest diagnoosist, infektsiooni määrast ja patsiendi soovist taastuda. Viimaste ravimitega viirusevastaste ravimite kasutamine võimaldab haigust ravida või saavutada pikaajalist remissiooni, pikendades elu ja parandades selle kvaliteeti nakatunud inimesel või kandjal. Viiruse hepatiit C, hoolimata raskest diagnoosist ja pikaajalisest ravist, pole lause. Kvaliteetse meditsiinilise abi saamiseks ja hoolikalt kõigi kohtumiste läbiviimiseks on vajalik aeg-ajalt arstiga konsulteerida.

B-hepatiidi ja hepatiit C. diagnoosimine

Hepatiit on maksa põletikuliste protsesside üldnimetus. Kõige sagedamini põhjustavad hepatiit B ja C-hepatiidi viirused hepatiiti. Üks võib nakatuda huulte, tätoveeringute, maniküüride või intravenoossete ravimite läbiviimisel. On suur nakkusoht hambaarstil, operatsiooni ajal, vereülekanne. B-hepatiit levib raseduse ajal sugulisel teel ja emalt lapsele (risk on ligikaudu 30-40%). C-hepatiidi korral on see edastamise viis vähe tähtsust.

Viirusliku hepatiit B ja hepatiit C sümptomid on sarnased.

Kliiniline pilt on ägedate ja krooniliste vormide puhul erinev.

Äge viiruslik hepatiit on maksakudede põletikuline protsess, mis on põhjustatud hiljutisest (vähem kui 6 kuu vanusest) infektsioonist. Krooniline viirushepatiit on põletikuline-düstroofiline maksakahjustus, mille mõõdukas fibroos on pikem kui 6 kuud.

Viirusliku hepatiidi sümptomid on põhjustatud joobeseisundist maksa- ja kolestaasikahjustuse (sapi väljavoolu rikkumine) tõttu. Esiteks on tserebrotoksiline toime, mis põhjustab suurenenud väsimust, unehäireid (kerge ägedas hepatiidi ja kroonilise hepatiidi korral).

Akuutse haiguse korral algne periood kestab umbes 2-3 nädalat. Sellega kaasneb liigesevalu, nõrkus, seedehäired (iiveldus, oksendamine, isutus), palavik, eriti sageli viirusliku hepatiit B-ga. Kolestaas põhjustatud kollatõbi on iseloomulik ka B-hepatiidi suhtes. See muudab uriini värvi (tumedamaks) ja väljaheiteid (kergemini ) Sageli on äge vorm tavaliselt asümptomaatiline, eriti hepatiit C.
Akuutne viirushepatiit B lõpeb 80% -l juhtudest taastumisest ja muutub 20% krooniliseks. C-hepatiidi korral areneb krooniline haigus umbes 90% -l täiskasvanud patsientidest ja 20% -l lastest. Krooniline vorm on kõige ohtlikum, sest see muutub sageli maksa tsirroosiks.

Ravitamata patsientidel võib vaimu depressioon ja väsimus olla kroonilise viirusliku hepatiidi ainsad ilmingud isegi enne diagnoosi tegemist. Kroonilise hepatiidi, millega on kaasnenud ulatuslik fibroos ja tsirroos, hilisemates staadiumides esile tuleb esile portaal-hüpertensiooni sündroom, mis on eluohtlik vedeliku kogunemise tõttu kõhuõõnes (astsiit) ja võimalik sisemine verejooks.

Hepatiidi iseloomulike sümptomite esmakordse ilmnemise korral on vaja läbi viia B (B) ja C-hepatiidi viiruste diagnostiline uuring. Arvestades asjaolu, et haiguse asümptomaatiline suund on võimalik, samuti nakkuse leevendamine, tuleb hepatiidi viiruseid testida regulaarselt ja viirusliku hepatiidi B inokuleerimine.

Meetodid, mida kasutatakse hepatiit C infektsiooni tuvastamiseks

Kõige tõsisem viirusliku hepatiidi vorm on C-hepatiit. Ainult seda viirust iseloomustab RNA sisaldus selle koostises. Maksaensüümide aktiivsuse suurenemise korral esineb kahtlust viiruse levikut ja levikku organismis. Diagnostika vajadust näitav täiendav tegur on võimaliku kandja kuulumine riskirühma.

Hepatoloogide nõuanne

2012. aastal tekkis C-hepatiidi ravis läbimurre. Uued otsese toimega viirusevastased ravimid töötati välja, mis 97% tõenäosusega vabastab teid täielikult haigusest. Nüüdsest peetakse hepatiit C ametlikuks ravikeskkonnas täielikult ravitavaks haiguseks. Venemaa Föderatsioonis ja SRÜ riikides on ravimid esindatud sofosbuviiri, daclatsviri ja ledipasviiriga. Praegu on turul palju võltsinguid. Hea kvaliteediga ravimeid saab osta ainult litsentseeritud ettevõtetelt ja asjakohastest dokumentidest.
Minge ametliku tarnija veebilehele >>

Enamikul juhtudel kaob haigus ilma erimärkideta ja vedaja ei pruugi olla teadlik, et tema keha nakatub HCV-ga. Haiguse avastamiseks on vaja läbi viia mitmeid uuringuid ja katseid.

Kui selliste katsete tulemused on küsitavad, võib spetsialist määrata patsiendi uuesti läbivaatamise.

Inimestel täidab maksas mikrolabori funktsioone. Kui viirused tungivad, annab see signaali selle kohta - teatud ensüümide tootmise või nende aktiivsuse vähenemise rikkumise korral toimub vere muutuste biokeemilised parameetrid uute ainete asendamise või väljanägemise tõttu.

Näiteks kaudne märge HCV olemasolust organismis võib olla muutused ensüümide ALT ja AST transenaa-nide aktiivsuses, mis vabanevad maksas maksas koehaiguste tõttu.

Kuid see tegur võib näidata teisi maksa- ja siseorganite haigusi, nii et eksperdid on välja töötanud spetsiaalsed väga tõhusad viisid hepatiit C viiruse diagnoosimiseks.

Selleks, et kontrollida haiguse esinemist, on vaja teha laboratoorse, laboratoorse ja kliinilise iseloomuga uuringuid.

Haiguse üldised sümptomid

Haigus võib esineda varjatud kujul ja minna kroonilisele staadiumile ja see võimalus on enamikul juhtudel fikseeritud. Kuid pärast viiruse inkubatsiooniperioodi lõppu, mis võib kesta kuni kuu, võivad ilmneda teatavad märgid, mis sarnanevad gripi sümptoomidega. Oluline on pöörata neile õigeaegselt tähelepanu ja kontrollida HCV olemasolu.

Need märgid on:

  • üldine tervise halvenemine;
  • kehatemperatuuri tõus;
  • lihaste ja liigeste valu;
  • vähem - nahareaktsioonide ilmnemine.

Need sümptomid ilmnevad järk-järgult, nii et patsient saab kergesti segada oma seisundit külmetushaigusega või sama gripiga.

Kuid mõne päeva pärast muutub haiguse käigu olemus. Ilmub:

  • valu paremas hüpohoones;
  • süvenemine või täielik isutus;
  • tume uriin;
  • väljaheidete selgitamine;
  • iiveldus, tung oksendamiseks.

Kui aeg ravi alustamist ei alanud, levib haigus kroonilises staadiumis.

Sellise haigusseisundi muutused on mõnikord nii nähtamatud, et nakatunud inimene ei anna neile mingit tähtsust, kustutades kõike banaalse väsimuse tõttu. Aga tegelikult nõuavad nad spetsialistide tähelepanelikku uurimist.

Hiljuti lugesin artiklit, milles räägitakse uimastite kompleksi "SOFOSBUVIR" kasutamisest DAKLATASVIR "hepatiit C raviks. Selle kompleksi abil saate alati HEPATITIS C. vabaneda.

Mind ei kasutanud mingit teavet usaldades, kuid otsustasin seda kontrollida ja tellida. Need ravimid ei ole odavad, kuid elu on kallim! Ma ei tundnud vastuvõtust kõrvaltoimeid, ma juba arvasin, et kõik oli asjatu, kuid kuu aega hiljem läbisin testid ja PCR-i ei tuvastatud, seda ei tuvastatud pärast kuut ravi. Dramaatiliselt paranenud meeleolu oli taas soov elada ja nautida elu! Ma võttis ravimeid 3 kuud ja selle tulemuseks oli viirus. Proovige seda ja teie, ja kui keegi huvitab, siis link allolevale artiklile.

Need on järgmised sümptomid:

  • väsimuse kiire käivitumine;
  • füüsiline halb enesetunne ja suutmatus tavaliste koormustega toime tulla;
  • ebamugavustunne kõhus;
  • sagedane oksendamine ja iiveldus;
  • lihaste ja liigesevalu;
  • soole düsfunktsioon.

Kui haigus omandab kroonilise kulgemise, on täheldatud kollatõbi, maksa ja põrna suuruse suurenemine, verejooksu esinemine, kaalulangus. See ähvardab maksatsirroosi või vähki.

Ülalmainitud märkide või murete esinemine HCV tungimise suhtes veres näitab, et tervislikku seisundit tuleb põhjalikult uurida ja kvaliteetse arstiabi saamiseks läbi viia. Selline sekkumine hõlmab laborikatseid, et kinnitada viiruse nakatumist ja levikut organismis.

Laboratoorsed testid

Hepatiit C diagnoosimine ja sellele järgnev ravirežiimi väljakirjutamine on kaasatud nakkushaiguste spetsialisti professionaalsesse pädevusse, kes on spetsialiseerunud haiguse ägeda haigusjuhtumi äratundmisele. Kui patsiendil esineb haiguse krooniline vorm, peaks ta konsulteerima hepatoloogiga.

Maksa seisundi muutmise protsessi uurimiseks soovitatakse patsiendil läbi viia sellised uuringud nagu bilirubiini ja maksaensüümide (ALT) taseme testid.

Samuti on kohustuslik biokeemiast pärinevate maksaproovide võtmine, mille uurimine võimaldab kontrollida haiguse esinemist ja maksarakkude kahjustuse taset. Kehakaalu kõrvalekalded viitavad vereanalüüsile HCV olemasolu kohta.

Viiruse olemasolu ja selle omadused tuvastatakse spetsiaalsete markerite abil. Need on anti-IgM / G ja HCV RNA markerid. Sellised analüüsid on esitatud kahte tüüpi uuringute abil:

Immunoloogiline (ELISA). See liik põhineb viiruse antikehade olemasolu kindlakstegemisel veres. Antikehade olemasolu on HCV korraline näitaja. Neid toodab keha (nimelt vere leukotsüüdid) viiruse hävitamiseks. Pärast seda, kui inimene on haigestunud, jäävad antikehad kogu elu veres. See on immuunsüsteemi kaitstav reaktsioon.

Kui see test on positiivne, ilmneb nakkuse kahtlus. Seejärel peab potentsiaalne vedaja läbima kinnitava diagnostikameetodi. Seda seetõttu, et antikehade olemasolu ei ole otseselt tõendeid haiguse esinemise kohta. Võibolla keha on kunagi vastas viirusega, näiteks vaktsineerimise ajal. Või näiteks võib valepositiivseid tulemusi sageli registreerida rasedatel naistel.

Selleks, et teha täpset diagnoosi, peab spetsialist kontrollima geneetilise uuringu tulemusi. Selliste testide vaieldamatu eelis on võime diagnoosida haiguse varases staadiumis, kasutamise hõlpsus, võime kontrollida nakkuse progresseerumist. ELISA-i puudused tulenevad viiruse olemasolu kindlakstegemisest ja ainult selle vastavatest antikehadest;

Geneetiline (PCR). See liik põhineb HCV geneetilise materjali määramisel veres PCR abil (polümeraasi ahelreaktsiooni meetod). Määratakse viiruse RNA olemasolu. Selle tulemusena saadakse andmed viiruse kontsentratsiooni ja selle kindlat liiki kuulumise kohta. See meetod võimaldab tuvastada ka väikest HCV kontsentratsiooni.

Kuna haigus võib esineda teistsuguse iseloomuga ja sellest tulenevalt selle põhjustanud erinevad viirused, võimaldab PCR-uuring saada kõige täielikumat teavet konkreetse viiruse etioloogiliste tunnuste kohta, mis põhjustas haiguse. Sellise analüüsi eeliseid peetakse kvalitatiivseks ja kvantitatiivseks uuringuks, kui seerumis on HCV. See võimaldab arstil määrata haiguse likvideerimise optimaalne skeem, jälgida haiguse arengu dünaamikat, hinnata valitud ravi meetodite efektiivsust.

See analüüs koosneb kolmest etapist - see on kvalitatiivne PCR, seejärel - kvantitatiivne PCR ja genotüübi määramine. Tänu uusimatele uuringutele suudab spetsialist kõige tõhusamalt ravida haigust ja rakendada teatud tüüpi viirusele sobivaid ravimeid. See aitab haigusest vabaneda niipea kui võimalik.

Pärast laboratoorsete testide komplekti koostamist määrab arst optimaalse raviskeemi:

  • kui biokeemilised parameetrid jäävad normaalsesse vahemikku, määratakse patsiendi seisundi jälgimine ja määratakse perioodilised uuringute kordused;
  • ebanormaalse maksafunktsiooni testide esinemisel, ELISA ja PCR-i positiivsete tulemustega, määrab spetsialist kliinilised uuringud, määrab ravi kava ja kontrollib haiguse dünaamikat ja valitud ainete ja ravimite tõhusust.

Mis on kliinilise diagnoosimise tunnusjooned? Maksa kahjustuse ulatuse kindlaksmääramiseks ultraheli meetodil. Ultraheli ajal saadud andmete põhjal saab spetsialist hinnata muutusi elundi suuruses, selle struktuuri, struktuuri, kudede tihedust ja mõnel juhul ka funktsioone.

Täpsemad andmed maksa seisundi kohta annavad biopsia analüüsi, mille abil määratakse fibroosi ja nekroosi ja põletikuliste kahjustuste aste.

Kõik diagnostikatüübid põhinevad arstil diagnoosimisel ja näevad ette kõige tõhusama ravi. Kui spetsialistil on kahtlusi viiruse olemasolu või selle teatud tüüpi kuulumise vastu, on võimalik, et potentsiaalsel patsiendil antakse korduvaid või täiendavaid katseid, mis aitavad täpsemalt näha tema seisundit.

C-hepatiit: infektsiooni viisid, diagnoos, ravimeetodid

C-hepatiit (C-hepatiit) on maksa põletikuline haigus, mis on põhjustatud keha nakatumisest HCV viiruse, C-hepatiidi viiruse poolt. Hepatiit C viiruse paljunemise ajal ja maksakudede kahjustuse korral arenevad patoloogilised protsessid, tekib maksatsirroos ja vähkkasvajad. Seda vormi peetakse kõige ohtlikumaks hepatiidi tüübiks mitte ainult selle võime tõttu häirida organismi üldist funktsioneerimist ja põhjustada haigusi, mis põhjustavad puude või surma, vaid ka haiguse käigu iseloomu tõttu. Hepatiit C sümptomeid tavaliselt ei avaldata, infektsioon on latentne ja C-hepatiidi vaktsiin puudub.

Mis on C-hepatiit (C-hepatiit)?

C-hepatiit (HCV) tuntud kui eraldi haigus juba ammu enne konkreetse nakkusohu avastamist. Haigus mitte-B-hepatiidi mitte-A-ga, mitte-A-ga, mitte-B-hepatiidil (NANBH) oli manifestatsioonidel, mis võimaldasid tal kuuluda hepatiidi rühma, kuid haiguse käik ja märgatavad komplikatsioonid olid erinevad. Hiljem identifitseeriti ka hepatiidi viirused, mis põhjustavad hepatiit D ja G hepatiidi sorte.
Esimest korda eraldati 1989. aastal spetsiaalne viiruse vorm. Praegu identifitseeritakse 6 HCV-viiruse genotüüpi ja tehakse veel 5 laboritesti. Samuti on teada umbes 90 HCV alatüüpi. Kõige tavalisem tüüp on viiruse esimene vorm ja see vastutab ka kõige tõsisema hepatiit C vormi eest, mis on interferoonravi suhtes resistentne.
Hepatiit C viiruse varieeruvus ja uute genotüüpide tekitamine nakatumise ajal raskendab selle haiguse jaoks vaktsiini loomist, mis praegu on statistiliste hinnangute kohaselt umbes 150 miljonit inimest maailmas. Igal aastal sureb C hepatiidi põhjustatud komplikatsioonidest umbes 350 tuhat inimest. Spetsiifilised kaotatud sümptomid põhjustavad olukordi, kus HCV hepatiidi diagnoos tuvastatakse katsetes juhuslikult või tüsistuste tekkimise etapis. Viiruse aktiivsed mutatsioonid põhjustavad genotüübi muudetud koopiate loomist, mis põhjustab haiguse kroonilise vormi suurt osakaalu.

C-hepatiidi märgid

Foto: Jarun Ontakrai / Shutterstock.com

C-hepatiidi esimeste nähtude ilmumine sõltub keha resistentsusest. Infektsiooni hetkest kuni primaarsümptomini võib kesta 2 nädalat kuni 6 kuud. Kui teil esineb kahtlus kontaktis varajase diagnoosiga nakatumisega, tehakse PCR abil vereanalüüs, mis võimaldab määrata viiruse RNA olemasolu veres, 2 nädalat pärast nakatamist.
C-hepatiidi iseloomustab "õrn tapja": peidetud sümptomid ja tõsised komplikatsioonid põhjustavad tõsist kahjustust kehale, kui puudub kahtlus HCV suhtes.
Selle viirusliku hepatiidi viiruse esimesed sümptomid on vähenenud võimekus, astehniline seisund, väsimustunne.
C-hepatiidi peamised tunnused, mis ilmnevad kehas viiruse märkimisväärse paljunemise staadiumis, loetakse:

  • isutus vähenemine või puudumine;
  • iiveldus;
  • üldine nõrkus, asteenia, tervise halvenemine;
  • liigesvalu;
  • Naha, limaskestade ja silma sklerarea kollasus bilirubiini kontsentratsiooni suurenemise tõttu veres, mille põhjuseks on hepatiit C maksakahjustus;
  • maksa ja põrna suuruse suurenemine.

Hepatiit C põhjused, C-hepatiidi nakkuse leevendamine

HCV viiruse edastamise viis on hematogeenne vere ja teiste kehavedelikega. Nakkushaigus esineb isegi väikseimates verd tilgades ja jääb aktiivseks kuni 5 päeva, kui vedelik kuivatab toatemperatuuril. Infektsioon tekib, kui HCV-nakkusega bioloogiline materjal satub invasiivsete protseduuride ajal teisele organismi, samuti kokkupuutel haavapindadega (kriimud, abrasiivid, praod ja limaskestade kahjustus jne). Selles suhtes on nakkuse peamised viisid:

  • süstides steriliseerimata korduvkasutatavate süstalde, nõelte abil;
  • vereülekande ajal, nakatatud doonori plasmast, elundite ja kudede siirdamisest;
  • steriliseerimata instrumentide kasutamisel hambakliinikutes, ilusalongides, küünehooldustöökodades, ilutulestikes, tätoveeringutes jne;
  • traumaatilise seksuaalse kontaktiga: ainult limaskesta pinnal esinevad väikesed praod;
  • vertikaalne infektsiooni tee: emalt rinnaga toidet lootele;
  • nohu, hambaharjad jms (väga harv);
  • sünnituse ja kirurgiliste protseduuride ajal vigastused mittesteriilsetes tingimustes.

Viiruse inaktiveerimine toimub siis, kui pindu töödeldakse kloori sisaldavad desinfektsioonivahendid, kui neid töödeldakse veega temperatuuril vähemalt 60 ° C 40 minutit või keeda kolm minutit.
Riskirühma populatsioonid suures ohus HCV nakkuse läbi meditsiinilise personali ja töötajate sanitaar-ja-epidemioloogiline institutsioonide, narkomaanid invasiivse ravimite manustamist, inimeste suure arvu kaitsmata seksuaalvahekorras, seksuaalpartnerite infektsiooniga patsientidel, sh peidetud hepatiidi kandjaid C, autoimmuunhaigustega inimesed, immuunpuudulikkus jne
C-hepatiidi viirus ei levi läbi puutetundliku käepigistus lenduvate tilkade võivad üksikjuhtudel nakkuse imetatavate (kohalolekul haavad nisade pragusid ema ja limaskesta kahjustuste suus lapse) ja majapidamises kontakt jagamine. Hepatiit C nakkuse ennetamine on meditsiiniliste ja kosmeetiliste vahendite steriliseerimine invasiivsete protseduuride ja süstide jaoks, isikliku hügieeni eeskirjade järgimine igapäevaelus ja mehaanilised meetodid seksuaalsete kontaktide kaitsmiseks harjumata partneritega.
Raseduse ajal C-hepatiidi lapse nakatumise ennetamine on spetsiaalne ravi, et vähendada viiruskoormust rinnaga toitmise ajal, samuti naise uurimist ja ravi enne lapse sündi.

C-hepatiidi tüübid ja staadiumid

Erinevad kahest C-hepatiidi vormist. Selle viirusliku infektsiooni äge vorm on diagnoositud ähmase kliinilise pildi tõttu harvadel juhtudel. Sageli esineb ägeda astme tuvastamine juhuslikult profülaktiliste uuringute käigus või kui isik taotleb diagnoosimist kahtlase kontakti korral.
Ajakohase ravi korral on 20% hepatiidi C ägeda vormi täielikult ravitud. Ravi puudumisel või ebaõnnestumisel tekib äge hepatiit C haiguse kroonilises staadiumis.
Kroonilises vormis olev C-hepatiit võib olla asümptomaatiline, ilma et see avaldaks viiruse koormust organismis ilma kliiniliste ilmingute ja spetsiifiliste sümptomitega. Selline varjatud viiruse kandjate rühm raskendab HCV levimust käsitleva statistika kogumist, kuna seda määravad ainult hepatiidi markerite vereanalüüsid, kuid need võivad kaasa aidata nakkuse levikule.
Klassikalise C-hepatiidi klassikaline kurss on seotud maksarakkude kahjustusega ja kofibroosi arenguga. Kui ravimata, kiulised fookused põhjustavad maksa tsirroosi tekkimist, vähkkasvajate tekke ja muid ohtlikke komplikatsioone.

C-hepatiidi komplikatsioonid

Foto: Den Rise / Shutterstock.com

Tüsistuste arengu määr sõltub keha üldisest seisundist, immuunsüsteemi võimest antikehasid tekitada, genotüübi vormi ja viiruse mutatsioonide esinemist, samuti inimese elustiili ja toitumist. Alkoholi, rasvaste toitude kasutamine aitab oluliselt kiirendada patoloogiliste protsesside, alkoholi ja toksilise hepatiidi arengut.
C-hepatiit võib põhjustada järgmisi haigusi ja häireid:

  • maksa kofibroos;
  • steatohepatiit, maksa koe asendamine rasvaga;
  • maksa tsirroos;
  • hepatotsellulaarne kartsinoom, maksavähk;
  • portaalhüpertensioon;
  • astsiit, vedeliku kogunemine kõhuõõnes;
  • siseorganite veenilaiendid;
  • maksa entsefalopaatia;
  • keha krooniline mürgitus koe lagunemissaadustega ja ebapiisava maksafunktsiooni tõttu;
  • peidetud sisemine verejooks.

Samuti on oht, et C-hepatiit on ohtlik, tekitades maksapuudulikkuse vähenemisega kokkupuutel nakkusega kaasneva B-hepatiidi suurenenud riski.

Hepatiidi C diagnoosimine

Hepatiidi C diagnoosimiseks kasutatakse järgmisi meetodeid:

  • patsiendi ajalugu võtmine ja uurimine, peritoneaalsete organite palpatsioon;
  • biokeemiline vereanalüüs;
  • hepatiit C viiruse (HCV-vastane antikeha) ja HCV-RNA antikehade vereproov PCR abil;
  • vereanalüüs klass IgM antikehade (anti-HCV IgM) antikehade olemasolu, mis näitab haiguse ägedat staadiumi;
  • täielik vereanalüüs, hüübimishäirete uuring (koagulogramm);
  • maksa, põrna, peritoneaalsete organite ultraheliuuring.

Mõnedel juhtudel määrati laboratoorsed uuringud maksakudede (biopsia).
Need meetodid võimaldavad teil määrata nakkuse esinemist ja määrata kindlaks täpne diagnoos HCV genotüübi määratlusega.

Viirusliku hepatiit C ravi erinevates etappides

C-hepatiit hõlmab kompleksset ravi, mille eesmärk on nii kehal toetada kui ka HCV viiruse üldist või spetsiifilist viirusevastast toimet võidelda. C-hepatiidi patsientide ravi hõlmab järgmisi ravimeid:

  • viirusevastane ravimravim;
  • võttes ravimeid, et säilitada maksa funktsioone;
  • ravimite tugevdamine, immunomodulaatorid, immuunsust stimuleerivad ained.

Raviprogrammi käik ei toimi toitumisreeglite mittetäitmise, kehalise aktiivsuse piiramise, igapäevase ravirežiimi järgimise korral. C-hepatiidi viirus mõjutab agressiivselt inimese immuunsüsteemi ja maksakudet, mis nõuab säästvat dieeti, vajalikku puhastamist, välistades kontakti teiste viiruslike ja bakteriaalsete infektsioonidega.

Traditsiooniline viirusevastane ravi C-hepatiidi raviks

HCV viiruse vastu võitlemiseks kasutatakse viirusevastaseid ravimeid, et stimuleerida keha immuunsüsteemi. Ribaviriini ja Interferoon-Alfat kasutatakse kõige tõhusamana (sõltuvalt haiguse staadiumist ja hepatiit põhjustanud HCV genotüübist 45-50%), sõltuvalt patsiendi staadiumist ja üldisest seisundist, eraldi või kombinatsioonis.
Nende ravimite, nende annuste ja raviskeemide üldine ravikuur määrab kindlaks patsiendid, kellel on diagnostilised andmed ja patsiendi ravivastused. Nende ravimitega viirusevastase ravi keskmine kestus on 12 kuud.
Ravimite kombinatsioon võib põhjustada allergilisi reaktsioone, nende vastuvõtmine raseduse ja mõnede haiguste korral ei ole vastuvõetav. Ravi efektiivsust hinnatakse vereanalüüsi põhjal, et vähendada viiruse koormust (HCV RNA) ja transaminaaside aktiivsuse taset.
Narkootikumid võivad põhjustada märkimisväärseid kõrvaltoimeid. Saamist interferoon rühma suurtes annustes sageli kaasneda märkimisväärne halvenemiskarakteristikut kohanemisaeg ravimile (kuni 1 kuu) ja millele on lisatud hüpertermia kuni 38-39 ° C, peavalu ja liigesevalu, kaalukaotus, kuiv nahk, juuste väljalangemine. Sellised sümptomid kaovad üksi ja ei nõua ravimi kasutamise katkestamist.
3-4 kuud pärast interferoonirühma ravimite manustamise alustamist võib täheldada verepildi muutust: trombotsüütide, leukotsüütide kontsentratsiooni langus. Sõltuvalt muutuste ulatusest võib ravimit lühiajaliselt peatada.
Tõsised komplikatsioonid, mis vajavad ravikuuri korrigeerimist, on hemorraagiline verejooks ja bakteriaalsete infektsioonide lisamine.
Ribaviriini, väikese mööduva düspepsia, hemolüütilise aneemia, kusihappe kontsentratsiooni suurenemise ja peavalude tekkimisel võib tekkida rasvumine.
Ravi viiakse läbi spetsialistide järelevalve all.

HCV otsefektid

2013. aastal võeti üle 11 aasta jooksul välja töötatud uus ravim, mis anti kliinilistes uuringutes ja kinnitati otsetoimeliste viirusevastaste ainetena. Uuringu kohaselt on patenteeritud Gileadi (USA) poolt toodetud Sofosbuvir, mis 95% -l juhtudest ravib C-hepatiiti.
Tänu tootmiskulude kõrgele tasemele (Ameerika Ühendriikides sofosbuviiriga ravimise põhikursus maksab 84 000 dollarit), andis ettevõte litsentsi õigused ravimi tootmiseks. Praegu on Indias toodetud Heptsinaat kohal ka ravimite turul, mille ravikulud on 880-1200 dollarit.
Viirusevastane ravim sisaldab sofosbuviiri ja daklatsaviini kombinatsiooni suukaudselt. Haigla annust ja kestust arvutab hepatoloog, tuginedes viiruse genotüübi, maksafibroosi staadiumi ja patsiendi individuaalsetele omadustele. Need ravimid on efektiivsed kõigile HCV genotüüpidele, HIV-infektsiooniga patsientidel ei ole vastunäidustusi. Ravi kestus on 12 kuni 24 nädalat.

Hepatiit C hepatoprotektorid

Hepatoprotektorid, mis on osa C-hepatiidi ravist, on suunatud kahjustatud organi funktsioonide säilitamisele. Ei ravida haigusjuht, nad aitavad säilitada ja taastada maksa tervist, taastada koed.
Sellised C-hepatiidi ravivad ravimid on Essentiale, Karsil, Lipoic acid, Silimar, Phosphogliv ja teised. Hepatoprotektorite võtmise käik algab sõltumata viirusevastase ravi olemasolust või puudumisest ja lõpeb labori ja instrumendi uuringutega kinnitatud maksa kliinilise tervisega.

Immunomodulaatorid

Kuna immuunsüsteem kannatab pideva viiruskoormuse all, on selle tugevdamiseks mõeldud ravimite kasutamine kaasatud hepatiit C patsientide jaoks ette nähtud üldravi hulka. Kõige sagedasemad C-hepatiidi immunomodulaatorid on Zadaksiin ja Temogeen.

Dieettoit

Hepatiit C ravi ja selle tüsistustega kaasneb terapeutiline Pevzneri toitumise süsteem, dieet nr 5. Toitumine aitab soodustada maksa ja teiste seedetrakti organite toimimist, aeglustades hepatiit C komplikatsioonide arengut.
Dieet nr 5 põhiprintsiibid piiravad toiduainete tarbimist, mis suurendavad seedimahlade sekretsiooni: rasvased, vürtsikad, soolased, suitsutatud, konserveeritud toidud, kohv, tugev tee. Alkohoolsed joogid on täielikult välistatud. Soovitatav igapäevane vedeliku maht (vesi, kompotid, puuviljajoogid, vähese ärritava maosisaldusega puuvilja- ja köögiviljamahlad) on vahemikus 2 kuni 3 liitrit.

Hepatiit C ravi tulemuste prognoosimine

Viirushepatiidi C ravimise prognoos sõltub ravi alustamisest, haiguse staadiumist, komplikatsioonide esinemisest ja arengutasemest, ravikuuri valikust ja spetsialisti määramisest.
Kõige eelistatavam prognoos ravi alguses varajases, ägedas hepatiit C etapis, kui haigus ei ole veel kroonilise nakkusega raskete komplikatsioonidega, maksarakkude degeneratsioon, keha toksiline kahjustus.
Toitumisalase toitumise põhimõtete järgimine, alkoholisisalduse keeldumine aitavad oluliselt kaasa komplikatsioonide varasele arengule ja üldiselt tervise säilitamisele.
Sõltuvalt otsese või üldise viirusevastase toimega ravimite valikust on viirushepatiidi C prognoos 45 kuni 95% ravivastusest. Hepatiidi C terviklik ravi uute viirusevastaste ravimite kasutamisega aitab haigust ravida ja tüsistusi vältida.

C-hepatiidi ennetamine

Foto: Alexander Raths / Shutterstock.com

Tänu selle tüüpi hepatiidi viiruse genotüüpide suurele arvule ja selle muteerumise võimele on paljudes alaliikides vaktsineerimise vormis spetsiifiline hepatiidi C ennetamine veel välja töötatud. Haigusjuhu ennetamiseks mittespetsiifilisi meetodeid viirusliku hepatiit C vastu peetakse piiravateks meetmeteks, et kaitsta viiruse tungimist organismi ja üldist keha tugevnemist.
C-hepatiit levib ainult siis, kui viirust sisaldav bioloogiline vedelik satub haava pinnale või nahaalusesse kudedesse. Seetõttu on haiguse ennetamine selliste kontaktide olukorra väljajätmine:

  • sanitaar- ja hügieeninormide järgimise kontrollimine meditsiiniseadmete, ilu ja hambaravi salongide teenuste kasutamisel, välja arvatud võimalus kasutada sterteriseerimata kirurgiainstrumente, korduskasutatavaid süstlaid;
  • seksuaalse kontaktide arvu piiramine võõraste partneritega, isikukaitsevahendite kasutamine seksuaalvahekordade ajal;
  • viiruse markerite korrapärane analüüs, kui nad töötavad nakkuse suurenenud riski tingimustes.

Umbes 20% selle vormi hepatiidi viirusega nakatumise juhtudest on ebaselge etioloogia, haigus esineb inimestel, kes juhivad tervislikku eluviisi, ei ole läbinud vereülekande protseduure ega elundisiirdeid, millel on üks püsiv seksuaalpartner ja kellel ei esine narkootikumide süstimist. Ennetus on haiguse ärahoidmise vahend, mida tuleb järgida ka selge nakkusvõimaluse puudumisel.
Muud mittespetsiifilise profülaktika meetmed hõlmavad tervislikku eluviisi, alkoholi kasutamise piiramist ja tasakaalustatud toitumist, mis võib piirata haiguse ja selle tüsistuste arengut isegi siis, kui viirus siseneb kehasse.

C-hepatiit: ennetusmeetmed patsiendi juuresolekul perekonnas

C-hepatiit on nakkushaigus, mis edastab peamiselt verd. Kui nakatunud patsiendiga samas piirkonnas elab koos, ei ole vaja ruumi kaitsta, takistada taktilist kokkupuudet või kasutada eraldi söögiriistu.
Oluline on välistada ühe hambaharja (võimalike jaotustükkide) jagamine hambaharjaga, et desinfitseerida pindasid, mille puhul leibkonna vigastustest põhjustatud verejääkide, valgendava lahuse (1: 100), kloori sisaldavad vedelikud, keetmine või pesemine temperatuuril 60 ° C, jälgida seksuaalvahekorras kaitsevahendid, et vältida suguelundite vigastusi, haiguste arengut, millega kaasnevad naha või limaskestade kahjustused. Vigastuste, avatud haavade olemasolu korral soovitatakse olla ettevaatlik.
Organismi väiksema resistentsuse tõttu teist tüüpi hepatiidile soovitatakse pereliikmetel ja hooldajatel vaktsineerida A- ja B-hepatiidi vastu.

Loote ja vastsündinu nakkuse ennetamine

Tänu kustutatud sümptomitele saab viirusliku hepatiidi C olemasolu naisel juba infektsioonitestide hindamisel diagnoosida raseduse ajal. Sellistel juhtudel sõltub viiruse ülekandumise prognoos lootele ema keha viiruslikust koormusest, mis on määratud vere tiitrite arvu järgi.
Loote infektsiooni tõenäosuse vähendamiseks on soovitatav võtta mõningaid üldtoimega ravimeid, samuti hepatoprotektorite määramist, et vähendada maksast tingitud stressi põhjustatud raseduse tüsistuste tõenäosust.
Madala viiruskoormusega on nakatunud lapse nakatamise tõenäosus väike, kuigi on võimalik määrata viiruse esinemist veres ainult 1... 1,5 aasta pärast sündi, kuna ema antikehad on pikka aega beebi veres.
Täielik ennetus on vereanalüüs viiruse olemasolule enne rasestumist ja haiguse ravikuuri, kui see esineb enne rasedust. Rasedusperioodi vältel on viirusevastaste ravimite kasutamine lootele võimalikult teratogeense toime tõttu ja raseduse katkemise riski tõttu keelatud.
Vastsündinute nakatumise tõenäosuse vähendamiseks soovitatakse samu meetmeid nagu täiskasvanud nakatunud inimese elamiseks.
Imetamine imikutel, kellel on C-hepatiit, on praegu ohutu, sest rinnapiima ei esine. Siiski on vaja hoolikalt jälgida rindade ja niplite naha seisundit, vältida iiveldust, pragusid ja kontrollida imiku suu limaskesta haava, abrasiivide ja seennakkuste teket.
Kui närvipiirkonnas esinevad mikrotuumorid, soovitatakse vooderit kasutada, et takistada lapse haavast suhu sundmõõtmist või ajutiselt lõpetada rinnaga toitmine, kuni nahk taastub.

Hepatiidi C laboratoorsed diagnoosid

Mihhailov Mihhailov, Epidemioloogia ja Mikrobioloogia Instituut. N.F. Gamalei RAMS, Moskva

C-hepatiidi diagnoosimisel tuleb kaaluda järgmisi kõige olulisemaid tegureid:

  • "maksa" ensüümide aktiivsuse näitajad;
  • C-hepatiidi viiruse (HCV) ja teiste hepatotroopsete viirustega nakatumise markerite olemasolu või puudumine;
  • epidemioloogilise ajaloo andmed;
  • patsiendi kliinilise läbivaatuse tulemused. Nende tegurite põhjalik arvestamine võimaldab selle haiguse diagnoosimist kõrge usaldusväärsusega. Laboratöötaja peab pakkuma objektiivset teavet viiruse antigeenide ja antikehade, samuti HCV RNA tuvastatud spektri kohta, võimaldades oma probleemide lahendamisel kliinilistile, vereülekande teenistujatele ja epidemioloogidele. Enamasti on see:
  • HCV-ga isikute identifitseerimine transfusiooni järgse hepatiidi C taseme vähendamiseks;
  • ägeda ja kroonilise C-hepatiidi diagnoosimine ja eristamine;
  • haiguse prognoos;
  • ravi määramine, hindamine ja prognoosimine;
  • HCV leviku ulatuse uurimine elanikkonna ja erinevate elanikerühmade lõikes.
    Sel juhul on laboratooriumitöötajate põhitöödeks järgmised:
  • HCV infektsiooni markerite identifitseerimiseks kõige informatiivsemate meetodite väljatöötamine ja valimine;
  • saadud tulemuste objektiivse hindamise kriteeriumide kindlaksmääramine;
  • optimaalsete laboriuuringute algoritmide väljatöötamine;
  • HCV infektsioonimarkerite avastamise kvaliteedi parandamise süsteemi rakendamine.

    Hepatiidi C laboratoorset diagnoosi aluseks on HCV teadmised, selle replikatsioon, teave infektsioonimarkerite esilekerkimise ja kadumise dünaamika kohta, samuti antigeenide, antikehade ja nukleiinhapete avastamiseks kasutatavad kaasaegsed immunokeemilised ja molekulaarbioloogilised meetodid.

    C-hepatiidi viirus. HCV leiti esmakordselt 1988. aastal, kui M. Houghtoni ja Choo Q.L juhitud teadlaste rühm rakendas uusi molekulaarbioloogilisi uurimismeetodeid, viiruse genoomi [I] klooniti ja sekveneeriti. C-hepatiidi viiruse osakesel on sfääriline kuju keskmise läbimõõduga umbes 50 nm [2,3]. Pärast viiruse avastamist on tehtud viiruse hepatiit C viiruse struktuuri visuaalselt tuvastamiseks ja uurimiseks tehtud katsed, kuid nende uuringute kohta ei ole veel hästi dokumenteeritud tulemusi, mis võivad olla tingitud viiruseosakeste kogunemise keerukusest vajalikes kogustes.

    VGS on ainus Flaviviridae perekonna hepatsiviiruse perekonna liige, mis sisaldab viiruseid nagu buli diarröa viirus ja sigade katk (Pestivirus perekond) ja kollapalaviku viirus, Denge viirus ja GB viirused: GBV-A, GBV-B ja GBV-C / HGV (perekond Flavivi-rus). C-hepatiidi viiruse struktuuri võib kujutada järgmiselt (skeem nr 1). Nukleokapsiid sisaldab C-hepatiidi viiruse RNA-d. Altpoolt on nukleokapsiid kaetud lipiidmembraaniga, ümbritsetud sellega ümbritsetud proteiinidega, mida kodeerivad HCV RNA. Viiruse genoomi esindab üheahelaline lineaarne positiivse polaarsusega RNA molekul, mille pikkus on umbes 9600 nukleotiidi. HCV genoomi ülesehitus sarnaneb teiste flaviviirustega. See eristab kahte tsooni, mis kodeerivad struktuurseid ja mittestruktuurseid (funktsionaalseid) valke. Struktuurvalkude kodeerivad geenid paiknevad viiruse genoomi 5 'piirkonnas ja 3' piirkonnast mittekorduvad struktuurid. HCV geenil on üks avatud lugemisraam (ORS) - üks polüpeptiid (ligikaudu 3000 aminohapet), mis lõigatakse struktuurseteks ja mittestruktuurseteks valkudeks viiruslike ja rakuliste proteaaside poolt.

    Joon. 1. HCV struktuurielemendid

    Struktuursed valgud hõlmavad valke, mida kodeerivad HCV RNA Core, El ja E2 tsoonid. Detekteeriti kolme HCV C-valgu vormi: nakatunud hepatotsüütide nukleose leitud täispikad (21 pinnad) molekulkaaluga 21 kD, kärbitud (p19) ja vorm (p16). Sellel pinnal kannab C-proteiin mitmesuguseid väga konserveerunud B-raku epitoope, mille olemasolu on väga oluline HCV antikehade tuvastamiseks hepatiit C laboratoorsel diagnoosimisel.

    HCV RNA tsoonid E1 ja E2 kodeerivad valke molekulmassiga 31 ja 70 kD. Nendel valkudel on mitu N-glükosüülimissaiti; E1 valgus on määratletud kuni 6 sellist saiti ja E2 - 11. E2 osas on andmed väikese valgu - p7 kohta, mida ei leidu viiruse struktuuris.

    HCV RNA 3'-otsast lähemal asuvate piirkondade määramine - kui viiruste mitteseotud struktuurvalgudest informatsiooni sisaldavad piirkonnad näitavad, et need valgud ei ole viiruseosakese struktuursed komponendid. HCV RNA mittestruktuurilises tsoonis on lõigud, mis on tähistatud kui NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A ja NS5B. Enamik valke, mida kodeerivad HCV RNA mittestruktuurilised tsoonid, on viiruse replikatsiooniks vajalikud.

    Sellel viirusel on RNA kõrge heterogeensuse näitaja tuvastatud HCV isolaatide RNA nukleotiidjärjestuste võrdlev analüüs erinevates maailma piirkondades ja isegi sama patsiendi haiguse käigus. HCV RNA märkimisväärse geneetilise varieeruvuse positsioon moodustas teooriate aluse, mis selgitasid: pikaajalist (mõnikord eluaegset) viiruse vedu, kroonilise haiguse sagedast arengut, ravi raskusi ja tõhusate vaktsiinide loomist. Kõige olulisemad erinevused HCV RNA järjestustes on kontsentreeritud E2 piirkonna N-terminaalsesse ossa, mis on määratletud kui "hüpervarieeruv piirkond" (HVR) [4].

    Praeguseks on tuvastatud 6 peamist genotüüpi ja üle 100 HCV alatüüpi. Genotüübid 1a, 1b, 2a, 2b, 2c ja Za moodustavad üle 90% Põhja-ja Lõuna-Ameerikas, Euroopas, Venemaal, Hiinas, Jaapanis ja Austraalias / Uus-Meremaal saadud HCV isolaatide [5]. Vastavad genotüübid 4, 5a ja 6 on registreeritud Kesk- ja Lõuna-Aafrikas ning Kagu-Aasias. Venemaal ja SRÜ riikides registreeritakse genotüübi 16 domineerivus (mitte vähem kui 68,9%) [6,7]. Arvatakse, et genotüübiga 1 nakatunud patsiendid (eriti 1b) reageerivad ravile halvemini kui patsiendid, kes on nakatunud viiruse teistest genotüüpidest.

    Patsiendil tsirkuleerib HCV viiruseosakeste populatsioonina, milles genoomid erinevad üksteisest 1-2% (kvaasikohasuse tõttu) nakkustesse nakatamise ajal nakkust kogenud ja / või patsiendi kehasse sisenenud mutatsioonide tulemusena. Need mutantsed vormid võivad aidata kaasa aktiivsemale replikatsioonile või aidata viirusel vältida organismi immuunvastust ja potentsiaalselt mõjutada akuutse infektsiooni tulemusi, erinevusi haiguse käigus ja interferooni ravivastust [8].

    ANTI-HCV MÄÄRATLUS. Pärast avastamist HCV viirusega ning määrama selle rolli arengus Vereülekandega hepatiit - "ei A ega B" Uurijad nakatati töötada välja meetodeid, mis suudab tuvastada neid, kellel HCV ja sobivad diagnoosi ägeda ja kroonilise C-hepatiidiga On leitud, et HCV antigeene ringle väga madalad kontsentratsioonid ning on selge, et 20. sajandi lõpu 80ndate metodoloogiline tase, mida kasutati viiruslike antigeenide avastamiseks, oli selgelt ebapiisav.

    Aastal 1989 teadlaste rühm firma "Chiron Corporation" juhtimise all Q-L.Choo läbi kloonimine HCV RNA ja oli immunoreaktiivne oligopeptiidideks mis reageerivad antikehad veres ringlevate patsientide krooniline hepatiit "ei A ega B". Need oligopeptiidid on saanud diagnostiliste ravimite aluse HCV antikehade tuvastamiseks. See määrati diagnostiliste toodete arendamise ja kommertstootmise kiireid edusamme. Peamine HCV-vastase antikeha tuvastamiseks kasutatav meetod on muutunud ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsiks praktilise tervishoiu vajadustele vastava meetodina, st. Sellel on suur tundlikkus, spetsiifilisus ja hõlpsam rakendamine.

    Arvestades, et HCV püsib veres ägeda ja kroonilise C-hepatiidiga koostoimes anti-HCV diagnostikatoodete tänu arendajad keskendunud loomist testsüsteemide antikehade tuvastamiseks, annab maksimaalsel võimalikul identifitseerimist viirusekandjad ning võimalikult varakult Ägeda nakkuse diagnoosi. HCV RNA struktuurse ja mittestruktuurse tsooni poolt kodeeritud antigeenide ja antigeensete determinantide mitmekesisus on kindlaks määranud suuna diagnostiliste toodete kujundamisel, valides ja seadistades nende loomiseks kasutatud oligopeptiidid. HCV avastamisest möödunud aja jooksul on loodud kolm põlvkonda kuuluvaid diagnostilisi süsteeme (tabel 1).

    Tabel 1
    Diagnostilised preparaadid anti-HCV detekteerimiseks [9]

    Kasutatud peptiidid
    HCV RNA tsoonid, milles
    need on kodeeritud

    % kandja tuvastamine
    HCV

    Esimest korda
    tuvastada
    anti-HCV alates
    alustada kollatõbe

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 ja NS4
    SZZs NS3
    100-3 NS4st

    C22-3 Core
    C200 NS3 ja NS4
    SZZs NS3
    Peptiid NS5

    Täiendavate peptiidide (peamiselt C22-3 (Core) lisamine teise ja kolmanda põlvkonna diagnostilistele preparaatidele aitas lahendada peamist probleemi, st suurendada tundlikkust, spetsiifilisust ja, mis kõige tähtsam, anti-HCV tuvastatavust. Tänu 3. põlvkonna diagnostikale saab tuvastada kuni 97% HCV kandjatest. Samal ajal põhjustas teatud arutelu ka HCV RNA NS5 piirkonna kodeeritud diagnostilise peptiidi sisestamise otsus. Mõnede teadlaste sõnul ei ole selle peptiidi esinemine diagnostilise ravimi kvaliteedi parandamisel kriitiline. [10,11]. Kuid NSV-vastaseid antikehi saab nakkuse avastamiseks varem tuvastada, mis parandab ägeda hepatiit C laboratoorset diagnoosimist. [12].

    Praegu kasutatakse kogu maailmas, sealhulgas Venemaal, kolmanda põlvkonna diagnostilisi tooteid. Diagnostilistel preparaatidel kasutatavad peptiidid saadi rekombinantse tehnoloogia abil (näiteks firmad diagnostilised testid: diagnostilised preparaadid, Nižni Novgorod, Vector, Novosibirsk, Roche, Abbott jt) või sünteetilised ( 000 MTS "Avicenna", Peterburi, "Organon" jne). Diagnosticumid, milles mõlemat tüüpi peptiide kasutati samaaegselt, määrati 4. põlvkonna ravimiteks. Nende omaduste kohaselt ei ole neil ravimitel olulisi erinevusi. Venemaa tervishoiuministeeriumi korrapäraselt läbiviidud võrdluskatsed näitasid riigisiseste ja välismaiste tootjate diagnostiliste toodete võrreldavat tundlikkust.

    On kindlaks tehtud, et kolmanda põlvkonna diagnostika kasutamine anti-HCV tuvastamiseks immunokompetentse populatsiooni (näiteks vere doonorite) hulgas on hinnanguliselt 98,8-100%. Samal ajal on immunokompetentsete indiviidide, näiteks pärast neeru-, luuüdi või HIV-nakkusega patsientidel transplantatsiooni saanud patsientide seas märkimisväärselt madalam - 50-95% [12]. S.George et al. [13] näitas, et 8,4% -l HIV-nakkusega patsientidest registreeritakse HCV-vastase antikeha tuvastamise vale-negatiivsed tulemused. Peale selle võib sellistes patsientides seireversiooniefekti jälgimise ajal registreerida, st positiivse tulemuse registreerimine pärast seronegatiivset anti-HCV perioodi [14].

    Üks olulisemaid probleeme HCV anti-HCV esinemise uurimiseks on valepositiivsed tulemused. Nende välimus võib olla tingitud reaktsioonikomponentide mittespetsiifilisest vastastikmõjust, võimalikest ristreaktsioonidest teiste viiruslike antigeenidega ja paljude teiste teguritega. Valepositiivsete tulemuste tase anti-HCV-de tuvastamisel erinevate diagnostiliste ravimitega võib ulatuda 10-20% [15, 16]. Selliste tulemuste suurenenud tase oli täheldatud onkoloogiliste ja autoimmuunhaigustega patsientidel, immuunpuudulikkusega inimestel ja süüfilisusega patsientidel [16,17]. Valepositiivsete tulemuste olemasolu seisab laboritöötaja ees ülesandega eristada neid anti-HCV tõelistest avastustest. Selle probleemi lahendamiseks on seerumi HCV RNA tuvastamine vereproovis. Kuid HCV RNA tuvastamise negatiivne tulemus ei viita HCV-vastase valepositiivse avastamise olemasolule. Tuleb meeles pidada, et HCV-vastane antikeha võib tsirkuleerida patsiendi veres, kes on saanud ägeda hepatiit C (10-15%) või kes on ravi tulemusena kõrvaldanud HCV RNA-d.

    KINNITUS (TÄIENDAVAD) TESTID. Valitud positiivsete proovide ja proovide, mis tegelikult sisaldavad HCV antikehi, eristamiseks on välja töötatud täiendavad (täiendavad) testid. Nendes testides kasutatakse sageli immunoblot-põhimõtet [näiteks RIBA-test ("Ortho-Clinical Diagnostics"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika)], kui mitmesugused HCV RNA tsoonid kodeerivad antigeenid adsorbeeruvad nitrotselluloosmembraanile nitrotselluloosmembraanis. Anti-HCV interakteerub adsorbeeritud antigeenidega, kasutades ensüümiga märgistatud inimese IgG antikehi ja nende järgnevat avastamist substraadi kompleksiga. Lisaks immuunülekandel samuti lisakatsed kasutada diagnostiliste ainete avastamiseks anti-HCV vastu antigeene poolt kodeeritud erinevate tsoonide HCV RNA [ "Spectrum 4" ( "ImBio" Nižni Novgorod; RecombiBest anti-HCV-SPEKTRITURGUDE "- ZAO" Vector Best ", Novosibirks; ELISA-Anti-NSU-Spectr, NPO" Diagnostikaseadmed ", Nižni Novgorod].

    Nende testide väljatöötamine ja rakendamine käib käsikäes skriinimistestide kasutuselevõtuga HCV-de tuvastamiseks, korrates peptiidide laieneva spektri põhimõtet, mida kasutatakse igas järgnevas diagnostiliste toodete genereerimises. Seega erineb diagnostika RIBA-III varasema põlvkonna poolt, lisades NS5 tsooni poolt kodeeritud peptiidi. Principles kinnitada positiivset tulemust avastamine anti-HCV hõlmavad peamiselt: võimalust (teatud juhtudel) täpsemad tulemused ensümaatilise reaktsiooniga üksikpeptiide samuti kasutamiseks spread spectrum DIAGNOSTICUM peptiide, mida ei kasutata sõelumisanalüüsides. Ainult uute peptiidide kasutuselevõtt võib suurendada kinnitavate testide diagnostilist väärtust.

    Saadud tulemuste tõlgendamine näiteks RIBA-III testis sisaldab kolme võimalust: positiivne, negatiivne ja ebakindel tulemus. Viimane neist väljastatakse juhul, kui puuduvad selged märgised (vastavalt diagnostikakomplektile lisatud juhistele), mis võimaldab teil kindlasti hinnata HCV-vastase antikeha esinemist või puudumist uuritavas proovis. Kinnitustestide läbiviimisel registreeritud vastuste spektri suhe varieerub sõltuvalt patsiendi rühmade omadustest, kellel esmakordselt tuvastatakse HCV-vastane antikeha [18]. J.M. Pawlotsky et al. [19], poolte tulemustega, mida käsitletakse kui "määratlemata", on võimalik tuvastada HCV RNA. Meie arvates legitiimsuse vastus - "määratlemata tulemus avastamine anti-HCV", mille on välja andnud laboritöötajaid arst, ilmne mitte ainult kinnitav katse ja rutiinset kontrolli olemasolu anti-HCV. Tulemuste sellise tõlgendamise vajadus peegeldab hepatiit C laboratoorset diagnoosi.

    IgM anti-HCV määramine. Praegu on ettevõtted loodud IgM anti-HCV-de tuvastamiseks mõeldud diagnostiliste komplektide jaoks: "Vector Best"; "Diagnostika süsteemid"; Imbio, Abbott jt. Diagnostikomplektide projekteerimisfaasis loodi ELISA komplektid, mis põhinevad peptiididel, mida kodeerivad HCV RNA erinevad piirkonnad [20]. Valik tehti HCV RNA Core piirkonna poolt kodeeritud peptiidide ja sellele IgM antikehade tuvastamiseks. Nagu HCV-vastase antikeha (IgG) tuvastamiseks kasutatavate testide kasutamisel, võidakse IgM-vastases HCV-vastases testides ka valepositiivseid tulemusi. Stevensona D.L. et al. [21] oli kuni 70% -l kroonilise C-hepatiidiga patsientidest koos HCV-vastase IgM-i esinemisega samaaegselt reumatoid-faktori suurenenud tase, mis aitab kaasa valepositiivsete tulemuste ilmnemisele. Kuid Pawlotsky J. M. sõnul ei mõjuta reumatoidfaktori olemasolu IgM anti-HCV-de avastamise kvaliteeti [22].

    HCV ANTIGENSIDE MÄÄRAMINE. Võime tuvastada HCV antigeene tõi teadlaste tähelepanu kohe pärast viiruse avastamist. Nende katsetamise peamist võimalust näitas K. Krawczynski jt [23], kes immunohistokeemiliselt avastas HCV antigeenid maksas koes, tõestades immunofluorestsentsi sära eripära. Polü- ja monokloonsete antikehade kasutamine erinevate HCV antigeenide korral näitas Ag HCV tuumade esinemist, HCV RNA NS3 ja NS4 kodeeritud viiruse hepatotsüütide tuumades ja tsütoplasmas kodeeritud antigeene 60-90% patsientidel, kellel esines krooniline HS) [24]. Kuid edasised uuringud näitasid, et HCV antigeene saab tuvastada vähem kui 5% maksasrakkudest.

    1999. aastal avastati immunobiooloogiliste preparaatide turule esimesed diagnostiliste testimissüsteemid ("Ortho antikeha Core antigeenile (hiire monoklonaalne) EL1SA testisüsteem" ja "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai") HCV antigeeni tuvastamiseks. Avastamise sihtmärk oli HCV Core antigeen, mis määratakse kindlaks monokloonsete antikehade põhjal konstrueeritud tahke faasi ELISA variandi abil. Esimesed uuringud nende testide kasutamisel määravad nende suure tundlikkuse, spetsiifilisuse ja paljulubava kasutamise, peamiselt vereülekande teenistuses [25,26]. Paigaldatud:

  • võime määrata Core Ag HCV seerumis või plasmas;
  • Core Ag HCV avastamise spetsiifilisus;
  • veres tsirkuleeriva antigeeni olemasolu inimestel, kes seronegatiivselt anti-HCV suhtes;
  • Core Ag HCV seerumi sagedane (90,3%) avastamine HCV- ja HCV-vastase RNA-ga [25];
  • otsene seos HCV RNA kontsentratsiooni ja Core Ag HCV avastamise vahel [25];
  • "akna" faasi kokkutõmbumine - infektsiooni hetkest kuni HCV-vastase anti-HCV tuvastamise esimese positiivse tulemuse saavutamiseni. Selgus, et Core-HC HC-d saab avastada 83% -l juhtudest (n = 24) järgmisel päeval pärast HCV RNA esmakordset tuvastamist [26] ja pikka aega (keskmiselt 26 päeva) enne anti-HCV-i ilmnemist [27].

    HCV RNA tuvastamise meetodid. Hepatiit C laboratoorset diagnoosi kaasaegset staadiumi võib iseloomustada kui HCV RNA tuvastamiseks kasutatavate molekulaarbioloogiliste meetodite laialdase kasutuselevõtu etappi. Enamik nukleiinhappe tuvastamise meetodeid on testitud HCV RNA tuvastamiseks. Nii vene [28] kui ka välismaised väljaanded [29] avaldatud märkimisväärsel hulgal kirjandusülevaateid on pühendatud diagnostiliste toodete projekteerimisele ja nende kasutamisele viiruse DNA või RNA tuvastamiseks. Kõik need meetodid võib jagada kahte rühma, mis põhinevad hübridisatsiooni põhimõtete rakendamisel ilma nukleiinhappe valitud sektsiooni võimendamiseta või nende amplifitseerimiseta, mis võib märkimisväärselt suurendada meetodi lahutusvõimet.

    Hübridisatsiooni meetod põhineb märgistatud hübridisatsiooni sondide kombinatsioonil (geenitehnoloogia või sünteetilised molekulaarsed struktuurid, mis sisaldavad nukleotiidjärjestusi, mis on täiendavad RNA valitud lõigud). Tulemuste analüüs viiakse läbi märgistuse intensiivsuse järgi moodustunud kompleksi koostises.

    C-hepatiidi puhul on see meetod HCV RNA tuvastamiseks kasutatud peamiselt selle identifitseerimiseks otseselt hepatotsüütides ja testides, mida nimetatakse in situ hübideerumiseks [30]. HCV RNA otsene tuvastamine koes võimaldas seda tuvastada monoteraapia vererakkudes, süljenäärme rakkudes ja teistes C-hepatiidiga patsiendi kehade kudedes [31, 32].

    HCV RNA tuvastamiseks kasutatav hübridiseerimismeetod võimaldab tõendada HCV RNA negatiivsete (replikatsioonide) ahelate olemasolu, mis näitab viiruse aktiivset replikatsiooni [33].

    Praegu on polümeraasi ahelreaktsiooni meetod kõige levinum metoodiline meetod, mis põhineb peaaegu kõigil molekulaarbioloogilistel meetoditel HCV RNA tuvastamiseks. Lisaks on HCV RNA määramine võimalik nii kvalitatiivses kui ka kvantitatiivses vormis, mis on eriti oluline rakendatud ravi efektiivsuse määramiseks, jälgimiseks ja hindamiseks.

    Meetodi peamised variandid on järgmised:

  • polümeraasi ahelreaktsioon (PCR);
  • ligaasi ahelreaktsioon;
  • NASBA;
  • TMA (transkriptsiooni vahendatud amplifikatsioonireaktsioon, transkriptsiooni vahendatud võimendus).

    Polümeraasi ahelreaktsioon on laialt levinud HCV RNA tuvastamise viis nii Venemaal kui ka välismaal. See põhineb mitme tsükli protsessil, mis sarnaneb nukleiinhappe loomuliku replikatsiooniga, kusjuures iga tsükkel koosneb järjestikustest etappidest.

    Uuritud materjalist (seerumi või vereplasma, maksa biopsia) eraldatakse HCV RNA. Arvestades, et HCV nukleiinhape on esindatud RNA-ga ja cDNA molekul on vajalik ensüümi pöördtranskriptaasi amplifitseerimiseks, tekib üheahelalise HCV cDNA molekulide moodustumine. Järgmises etapis kinnitatakse HCV cDNA ahela spetsiifiline sektsioon nn "HCV". Praimerid on lühikesed oligonukleotiidid, mis on komplementaarsed tuntud nukleotiidjärjestustega. Erinevate HCV isolaatide 5'UTR piirkonna esmaste struktuuride võrdlemisel ilmnes nende ebaoluline varieeruvus (genotüüpide ja nukleotiidide homoloogia vahel - 92-98% ja genotüüpides 98-99%). Selle tulemusena oli eelistatav valida praimerid sellest HCV RNA tsoonist ja kasutada neid meie riigis ja välismaal toodetud diagnostilistes katsesüsteemides.

    Lisaks sellele toimub ensüümi DNA-sõltuva DNA polümeraasi abil uute DNA segmentide süntees. Praegu kasutatakse selle ensüümi allikana kõige sagedamini baktereid Thermophilus termus (Tth polümeraas) või Thermophilus aquaticus (Taq polümeraas). Kasutades termilist stabiilsust mangaani ja magneesiumioonide juuresolekul, saab seda ensüümi samaaegselt kasutada, et sünteesida komplementaarset üheahelalist HCV cDNA molekule ja amplifitseerida valitud cDNA piirkondi. Reaktsiooni ühe tsükli viimasel etapil, kasutades DNA polümeraasi, toimub täiendavate HCV cDNA uute ahelate süntees. Reaktsioonitsüklite korduv kordamine viib HCV cDNA fragmentide akumuleerumiseni, mida saab registreerida polüakrüülamiidgeel-elektroforeesi abil, millele järgneb visuaalne detekteerimine või hübridisatsiooni kasutamine oligonukleotiidsondidega, mis suurendab kasutatud diagnostiliste toodete tundlikkust ja spetsiifilisust. Ensüümidega märgistatud praimerite kasutamine võimaldab ensüümi immuunanalüüsil PCR tulemuste registreerimist.

    HCV RNA tuvastamiseks diagnoosimise süsteemide väljatöötajate jaoks on pidev eesmärk suurendada tundlikkust ja spetsiifilisust. Seda eesmärki teenindab PCR variant, mis on tähistatud "pesastatud PCR" (pesastatud PCR) [34]. Selle meetodi eristav tunnus "klassikalisest" on kahe paari praimerite samaaegne kasutamine, millest üks täiendab amplikoni sisemist osa, mis on saadud pärast esimest amplifitseerimisvooru. Samal ajal arvatakse, et selle PCR-i variandi puhul on suurem proovide saastumise oht, mis võib kaasa tuua valepositiivseid tulemusi [35].

    HCV RNA määramise äge vajadus ja raskused, mis on seotud ülitundlike ja spetsiifiliste diagnostiliste komplektide suuremahulise tootmisega PCR-diagnostikas, on kindlaks määranud teaduslikes laborites tehtud preparaatide laialdase kasutamise. Nende katsesüsteemide, nn kodutehniliste testide ("maja katsetes") võrdluses ilmnes nende suur tundlikkuse ja spetsiifilisuse varieeruvus ning laboratooriumide ja diagnostikavahendite seeria tulemuste reprodutseeritavuse puudumine. Seega, 136 "laboratooriumist" HCV RNA (1996) avastamiseks mõeldud "välise" kvaliteedikontrolli esimese tsükli läbiviimisest suutsid ainult 22 (16%) kindlaks määrata viiruse RNA esinemise või puudumise esitatud kontrollproovides [36]. Samasugust tulemust täheldati ka meie riigis väljaspool välismaise kvaliteedikontrolli föderaalse süsteemi (2001) sarnase töö raames, kui 14 osalevast laborist ei suutnud ülesannet õigesti lahendada ainult 3 (21,4%) [37].

    HCV RNA tuvastamise vale-negatiivsete ja valepositiivsete tulemuste ilmnemise põhjused on erinevad. Valenegatiivsete tulemuste korral:
    - HCV RNA kaotus või hävimine kliinilise materjali ravivastuse ettevalmistamiseks;
    - PCR-i erinevate komponentide mõju inhibiitorite sisaldus proovis. Neid inhibiitoreid esindavad mitmesugused keemilised või valgud. Näiteks: pöördtranskriptaasi inhibiitorite spermide vedeliku olemasolu ei võimaldanud tuvastada HCV RNA-d ja rääkida C-hepatiidi seksuaalse ülekande realiseerimisvõimalusest [38]; hepariini olemasolu [39]; kõrge seerumi krüoglobuliini tase [40];
    - termilise ladustamise ja kliinilise materjali transpordi mittetäitmine. Valepositiivsete tulemuste puhul:
    - proovide saastumine (proovide töötlemisel ja / või reaktsiooniseguga töötamisel), sealhulgas saastumine positiivse kontrollprooviga;
    - saastumine eelneva amplifikatsiooniga toodetega (amplikonid), mis võivad saastata uuritavaid proove ja lahuseid aerosoolide või laboriseadmete abil.

    HCV RNA määratluse kohaselt on PCR diagnostika ulatuslik kasutuselevõtt seadnud ülesande üle viia tervishoiuasutustele laboratoorsete uuringute uus tase. Isolustatud tsoonide eraldamine PCR põhitaste staadiumide rakendamiseks (proovide valmistamiseks, amplifikatsiooniks, saadud tulemuste arvessevõtmiseks); reaktsioonilaborite riide iga etapi eraldi komplekt, automaatpipetid; standarddiagnostikakomplektide olemasolu ja ennekõike kõrgelt kvalifitseeritud laboratooriumide töötajate olemasolu vähendab valede tulemuste esinemist.

    Esimene standarditud komplekt HCV RNA ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") määramiseks valmis 1993. aastal. Aastate jooksul on kujunenud HCV RNA komplektid, mille peamine eesmärk oli suurendada nende tundlikkust ja spetsiifilisust. Amplicor TM HCV projekteerimisel kasutati mitut originaali meetodit, et identifitseerida HCV RNA 100 või enam koopiat milliliitri kohta. Samuti võib komplektina kasutada proovide ja lahuste saastumise võimalikke juhtumeid. Ensüümi - amperside ja dehipüuridiintrifosfaadi (dUTP) kasutamine võimaldab hävitada eelnevate aplikonide esimeses tsüklis, millega saastumine võib tekkida. Esimese amplifikatsioonitsükli lõpus (temperatuuril +55 ° C) amplifikatsiooni hävitamine ei võimalda ensüümi hävitada sihtmärgina valitud amplikoneid. Peamiseks uuenduseks oli sisekontrolli juurutamine. Selle innovatsiooni tähendus seisneb selles, et HCV RNA amplifitseeritud piirkonnaga sarnanev järjestus siseneb igasse prooviprooviasse, mis seejärel tuvastatakse, kasutades samalaadses režiimis amplifikatsioonireaktsiooni vastavaid praimereid. Positiivse reaktsiooni puudumine sisekontrolli tuvastamisel näitab, et reaktsiooni valenegatiivne tulemus on HCV RNA olemasolul uuritavas proovis. Järgmisel põlvkonnal diagnoositi ravim, mida nimetatakse "HCV Amplicor 2.0", mille kasutamisel on 50 HCV RNA molekulide tundlikkus.

    HCV RNA tuvastamise süsteemi Roche'i komplektide abil ei saa lugeda nende seadmetelt eraldatuks, mis määrab testide kõrge kvaliteedi. Meetodi väljatöötajad püüdsid täielikult rekonstrueerida kõiki reaktsiooni etappe. Selle idee teostus oli "COBASAmpliPrepTM" süsteem, mis võimaldab teil täielikult HCV RNA eraldamise protsessi, amplifikatsiooni ja avastamise protsessi automatiseerida, vähendades seeläbi valepositiivsete ja valenegatiivsete tulemuste riski, säilitades samal ajal kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisuse [41].

    Ligase ahelreaktsioon HHC RNA tuvastamiseks (LCR). Meetod põhineb ensüümi "DNA-sõltuv DNA ligaas" võimetel, et õmmelda (ligeerida) fosfodiorserühma sidemeid DNA-s ATP ja Mg2 + ioonide juuresolekul. Nagu ka "klassikalise" PCR-i puhul HCV RNA tuvastamiseks, on LCR esimene etapp pöördtranskript, et saada HCV cDNA. Peale selle seondub DNA ligasega kaks praimeripaari (täiendavad HCV RNA 5 'kodeerimata tsooni), mis täiendavalt amplifitseeritakse. LCR-i amplifitseerimisproduktide tuvastamine toimub, võttes arvesse antigeeni-antikeha reaktsiooni. Kõik need kaks praimerit on märgistatud erineva hapteeniga. Esimene neist on kinnitatud mikroosakeste adsorbeeritud antikehadega. Pärast pesemisprotseduuri, kus kasutatakse teist fluorestsentsmärgistusega märgistatud antikehade paari, nad selektiivselt interakteeruvad hapteeniga amplifikatsiooniproduktis, millele järgneb substraadi reaktsioon ja loendatakse fluorimeeter.

    Selle meetodi tundlikkus on ligikaudu 200 koopiat HCV RNA-st milliliitris, mis võimaldab seda kasutada erinevate kliiniliste diagnostiliste probleemide lahendamiseks [42]. Praegu valmistab Abbott toodetud diagnostikakomplekte HCV RNA tuvastamiseks LCR-i baasil.

    Nukleiinhapete seakeste amplifikatsioon - NASBA meetod HCV RNA tuvastamiseks põhineb kolme ensüümi - lindude müeloblastoom pöördtranskriptaasi, lindude RNAase ja T7 RNA polümeraasi [43.] samaaegsel toimel. Erinevalt RT-PCR-st ei tohiks esimene samm pöörata HCV RNA transkriptsiooni. Kasutades kasutatavaid ensüüme võib 90 minuti jooksul saada HCV cDNA piirkonna rohkem kui 10 (9) koopiat [44]. Reaktsiooni teostamise võimalus madalatel temperatuuridel (+ 41 C) lihtsustab oluliselt tööd ja välistab vajaduse seadmete järele, mis tagavad tsüklilised muutused kõrgel temperatuuril. Reaktsiooni tulemused salvestatakse elektrokeemiluminestsentsi abil. Vaatamata asjaolule, et NASBA on tundlikkusel RT-PCR-ga sarnane, ei kasutata seda meetodit HCV RNA tuvastamiseks. Praegu töötatakse välja meetodi variant, mis ühendab NASBA ja reaalajalise RT PCR-i põhimõtted.

    Transkriptsiooni vahendatud amplifikatsiooni (TMA) meetod erineb PCR-i ja LCR-i peamiselt sellest, et see suurendab otseselt HCV RNA fragmente, mitte HCV cDNA-d. Reaktsiooni algfaasis kinnitatakse praimer (nr 1) HCV RNA-iga ja sihtmolekuli, cDNA koopia sünteesitakse ensüümi (pöördtranskriptaas) abil. Pöördtranskriptaas, millel on samuti RNaas-H aktiivsus, hävitab viirusliku RNA hübriid-RNA-cDNA-s. Järgnevalt lisatakse cDNA molekulile teine ​​praimer, millele järgneb kaheahelalise DNA lõpetamine pöördtranskriptaasi abil. Teise ensüümi β-RNA polümeraasi abil transkribeeritakse RNA cDNA-st, mille tagajärjel tekib ühe reaktsioonitsükli jooksul HCV RNA amplikoni 100 kuni 1000 eksemplari. Nende RNA aplikonidega on lisatud primer nr. 2 cDNA koopiate edasiseks sünteesiks ja RNA molekuli hävitamiseks. Praimeri nr 1 kinnitamine cDNA-le, millele järgneb kaheahelalise DNA lõpuleviimine, käivitab järgmise amplifikatsioonitsükli. Reaktsiooni tulemuste registreerimine toimub lumenomeetril, kuna saadud RNA-amplikoonid interakteeruvad spetsiifiliselt kemiliimiinidega märgistatud DNA-proovidega.

    TMA-meetodi eelisteks HCV RNA tuvastamisel märgitakse:

  • reaktsioon viiakse läbi madalama temperatuuriga võrreldes PCR-ga;
  • suurema hulga amplikonite moodustumine ühes reaktsioonitsüklis, mis vähendab lõpptoodangu saamiseks vajalikku aega (30-40 minutit) ja suurendab reaktsiooni tundlikkust (50 koopiat / ml) [45].
  • saastumise ohu vähendamine, kuna RNA on vähem stabiilne kui DNA.

    Võrdlusuuringud HCV RNA tuvastamiseks, kasutades TMA-d ja teisi meetodeid, on näidanud tulemuste suuremat kokkusattumist [45].

    Hübridisatsiooni ja amplifikatsiooni põhimõtete kombinatsioon põhineb HCV RNA tuvastamismeetodil, mida tähistatakse kui hargnenud sondide hübridiseerimise meetodit või Branded DNA-analüüsi (bDNA) [46]. Erinevalt PCR-ist ei amplifitseerita seda test mitte HCV cDNA molekule, vaid signaali. Reaktsioon viiakse läbi 96 süvendiga plaadil, kuhu 5 'translatsioonita tsooni HCV RNA fragmendid ja HCV RNA südamiku geen adsorbeeruvad sünteetilise hargnenud DNA molekuli järgneva sidumise tõttu ja hübridiseerimine leeliselise fosfotaasiga märgistatud prooviga koos Saadud signaali järsk tõus saavutatakse võimendi ja sellele järgneva ensümaatilise reaktsiooniga. Praegu on diagnoosimise turule (Vaueg 3.0 Hepatiit-C viiruse RNA), mille tundlikkus on 520 RÜ / ml tuvastamiseks (2500 koopia HCV RNA-st), ilmnenud kolmanda põlvkonna diagnostilised testid..

    HCV RNA KVANTITATIIVNE MÄÄRAMINE. HCV RNA kontsentratsiooni hindamiseks kasutatud kvantitatiivne PCR versioon. Algselt iseloomustati HCV RNA kontsentratsiooni järjestikuste väärtustega nagu "+", "++" jms, mis visuaalselt peegeldavad amplifikatsiooniproduktide elektroforeesi käigus saadud ribade intensiivsust või lõpliku lahjendusmeetodiga, st positiivse tulemuse juuresolekul lõplikus tiitrimispunkt. Raskused PCR kõigi etappide standardiseerimisel ei võimalda HCV RNA kontsentratsiooni objektiivset hindamist, mis toob kaasa saadud tulemuste tõlgendamisel olulisi vigu.

    Praegu on uuringu tulemused väljendatud kvantitatiivsetes ühikutes: HCV RNA eksemplaride arv, mis sisalduvad 1 ml. Absoluutsetes või logaritmilistes tingimustes (log 10). Võttes arvesse asjaolu, et tuvastatud HCV RNA kontsentratsioon peegeldab viirusosakeste arvu, nimetatakse seda indikaatorit viiruse ekvivalendiks (eq), millele lisatakse eesliide k (kilogramm, tuhat) või M (miljonit). Veel ühe viiruse osakeste summa väljendamiseks on nende kaalu ekvivalendid. Näiteks grammides või pikogrammides (1 pg vastab ligikaudu 1 miljonile ekvivalendile). Kasutatud väärtuste mitmekesisus raskendab eri laborites saadud tulemuste tõlgendamist. Seetõttu on WHO bioloogilise standardimise ekspertkomitee koostanud HCV RNA sisaldava "rahvusvahelise standardproovi" (1. genotüübiga HCV RNA sisaldav külmkuivatatud seerum), mille kontsentratsioon on väljendatud rahvusvahelistes ühikutes (RÜ / ml) [47]. Eritoodetega saate ümber arvutada saadud kontsentratsiooninäitajad rahvusvahelistes üksustes.

    HCV RNA kontsentratsiooni määramiseks kasutatakse peaaegu kõiki PCR-i variante. Sellisel juhul kehtestatakse diagnoosimispreparaatide jaoks mitmeid konkreetseid nõudeid, millest kõige olulisem on tulemuste range lineaarsus, st registreeritud reaktsiooni signaali suurenemine HCV RNA kontsentratsiooni suurenemisega uuritavas proovis. HCV RNA erinevate tasemete sisestandardite kasutamine võimaldab vältida mitmeid metoodilisi vigu, mis võivad mõjutada reaktsiooni lõpptulemust [28]. Rakendatud diagnostika tundlikkus (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNA kvantitatiivne analüüs) võimaldab tuvastada HCV RNA-d, alustades 50 koopiat milliliitri kohta [48,49], mis on eriti oluline valitud viirusevastase ravi efektiivsuse prognoosimiseks.

    Reaalajaline PCR ("reaalajaline RT PCR") on üks kõige lootustandvamaid võimalusi HCV RNA tuvastamiseks kasutatava kvantitatiivse meetodi järele. Meetodit ja selle riistvara arendavad ühiselt Roche ja Percin Elmeri spetsialistid. Meetodi põhimõte on võime hüdrolüüsida cDNA järjestusi 5 '- 3' suunas. Reaktsioon kasutab spetsiaalset sondi, mis on märgistatud kahe fluorestsentsvärviga, millel on sarnane imendumine ja fluorestsentsi maksimum. Amplifitseerimisproduktide juuresolekul lagundab Tag polümeraas sondi, mis takistab energiaülekande ühest värvaine molekulist teise ja takistab sellega kvantuva valguse vabanemist. Spetsiaalne vahend registreerib reaktsiooni igas etapis fluorestsentskineetika reaktsiooni ja matemaatilist modelleerimist, mis võimaldab saada teavet HCV RNA algse kontsentratsiooni kohta.

    "Reaalajalise PCRi" eripära on võime saada teavet HCV RNA olemasolu kohta otse reaktsiooniprotsessis, mis võimaldab vähendada analüüsi aega kombinatsioonis tulemuste kõrge tundlikkusega ja lineaarsusega [50]. Tatjana Yashina ja kaasautorite sõnul võimaldab see meetod tuvastada 200 eksemplari HCV RNA-d milliliitri kohta. [51].

    HCV RNA genotüpiseerimise meetodid. Konkreetsele genotüübile ja alatüübile vastava HCV määratlust on kasutatud mitte ainult teaduslike, vaid ka praktiliste probleemide lahendamiseks. Näiteks: infektsiooni allika otsimine hepatiit C puhangute ajal või kasutatava ravi efektiivsuse prognoosimine.

    HCV genotüpiseerimise "kullastandard" on HCV RNA esmase struktuuri otsene määramine koos sellele järgneva fülogeneetilise analüüsiga [52], mis võimaldab seda viirusisolaati selgelt iseloomustada. Seda teavet saab järgmiste järjestamisvalikute abil:

  • otsene;
  • standardse kloonimise alusel;
  • PCR reaktsiooniproduktide järjestus (piiratud järjestus).
    Hoolimata tulemuse täpsusest ei kasutata otsese sekveneerimismeetodit praktilistes tervishoiuvaldkondades uuringu tehniliste raskuste ja töö kõrge hinna tõttu. Samal ajal on HCV RNA esmase struktuuri kohta teabe kättesaadavus genotüpiseerimise standardmeetodiks ja automaatse järjestuse vahendite kättesaadavus lihtsustab tulemuse saamist.

    Praegu kasutatakse enamikul juhtudel HCV RNA genotüpiseerimiseks tüübispetsiifiliste praimeritega PCR-i kasutades põhinevaid meetodeid. HCV RNA genotüpiseerimine teostati esimest korda N. Okamoto ja kaasautoritega 1992. aastal, kasutades RT-PCR-i [53], mis hõlmab kahte amplifitseerimisetappi. Esimene neist viidi läbi universaalsete, kõikide HCV genotüüpide, praimerite ja teise tüübi spetsiifiliste praimerite segu jaoks, saades eri pikkusega spetsiifiliste amplifitseerimisproduktide. Eriti genotüübi olemasolu hinnati amplifitseeritud produkti suuruse järgi. Praimeritena kasutatakse tüübispetsiifilisi sonde, mille andmed paiknevad 5'UTR, Core või NS5-RNVGS piirkondades [54].

    Testitud "INNO-LiPA HCV, INNO-GENEETIKA" [55] aluseks on adsorbeeritud geenispetsiifilised sondid (HCV RNA 5'-mitteseotud tsoonist), mis on adsorbeeritud nitrotselluloosmembraanile, amplifitseeritud toodete hübridiseerimine. Esialgu oli seda testi kasutades genotüüpe võimalik kirjutada: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 ja 5a. Tulevikus võimaldavad teise põlvkonna "INNO-LiPA HCV II, INNOGENEETIKA" katsesüsteemid eristada kõiki 6 genotüüpi ja lisaks ka 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a ja 10a. [56]

    HCV genotüüpide määramise metodoloogiline arsenal ei piirdu ülalmainitud meetoditega ja hõlmab erinevaid meetodeid:

  • amplifitseeritud toodete restriktsiooniprofiilide (RFLP) analüüsil põhinev genotüpiseerimine. HCV RNA fragmentide amplifitseerimisproduktid (HCV RNA 5'UTR - piirkond või NS5 piirkond) lõhustatakse restriktsiooniensüümidega. Saadud fragmendid erinevad pikkusega, sõltuvalt neist lõigatavatest restriktsioonisaitidest. Elektroforeesi tulemused ja nende võrdlemine võimaldavad meil uurida uuritavas proovis HCV genotüüpi [57]. Genotüpiseerimise tulemuste võrdlemine PCR-RFLP-ga koos andmete järjestamisega näitas tulemuste kokkulangevuse kõrget taset - 95% [58].
  • SSCP-meetodil põhinev genotüpiseerimine (üheahelaliste DNA fragmentide konformatsioonilise polümorfismi hindamine). Uuringu objektiks valiti HCV RNA 5'-transleerimata piirkond, millel on minimaalne komplekt nukleotiidivariante, mis eristavad genotüüpe üksteisest. See fakt määrab võimaluse kasutada ühiseid praimereid genotüpiseerimise ajal [59].

    SEROTÜPING Anti-HCV oli võimalik P.Simmondsi ja kaasautorite poolt läbi viidud uuringutega, kes tuvastasid genotüübispetsiifiliste epitoopidega seotud antikehade esinemise, mille informatsiooni kodeerib HCV RNA NS4 piirkond [60]. Sünteetiliste peptiidide baasil valmistatud ELISA diagnostilise testi abil oli võimalik eristada viiruste 1, 2 ja 3 genotüüpide põhjustatud hepatiidi C juhtumeid (89% genotüpiseerimise tulemustest). HCV RNA NS4 ja Core-piirkondade kodeeritud sünteetiliste ja rekombinantsete antigeenide väljatöötamine võimaldas meil laiendada viiruse variantide tüüpe ja määrata alamtüüpide (1a, lb, 2a, 2b, 3a, 4a) olemasolu [61,62]. Praegu serotüpiseerimisega seotud diagnostiliste toodete kaubanduslik tootmine viiakse läbi ELISA kohesel versioonil - "Murekh NA 1-6 serotüptimise test, Murex Diagnostics" ja variandis "immunoblot" - RIBA HCV serotüpiseerimisanalüüs, Chiron Diagnostics. HCV RNA serotüpiseerimise ja genotüpiseerimise tulemuste võrdlusandmed näitasid suurt kokkusattumist, ulatudes 95% -ni [62].

    HCV-vastase antikehade serotüpiseerimine võrreldes HCV RNA genotüpiseerimisega sisaldab selliseid eeliseid nagu reaktsioonivõime ja madalamate kuludega. Samal ajal ei saa see meetod mingil juhul genotüpiseerimist asendada. Anti-HCV serotüpiseerimise tulemused näitavad HCV-i tüüpi praeguste või varasemate infektsioonide korral. Mõnedel juhtudel (kõige sagedamini hemofiiliaga patsientidel) registreeritakse samaaegselt erinevate alatüüpide anti-HCV, mis võib näidata mitmete erinevate alatüüpide ja HCV genotüüpide mitut infektsiooni [63]. Lisaks sellele võib C-hepatiidi patsientidel ilmnenud immuunpuudulikkuse seisundi taustal olla ainus marker, mis muudab serotüpiseerimise võimatuks.

    HCV SEROLOOGILISTE MARKERIDE INFEKTSIOONI TESTIDE TULEMUSTE IDENTIFITSEERIMINE JA TÖÖTLEMINE. Mitme praeguse või eelmise HCV-nakkuse seroloogiliste markerite olemasolu, samuti kaasaegne metoodiline alus võimaldab lahendada paljusid probleeme labori diagnoosimisel ja hepatiit C ennetamisel. Tabelis 2 on näidatud HCV-nakkuse seroloogilised markerid ja nende olulisemad testimise alad.

    Tabel 2
    Praeguse või eelmise HCV infektsiooni markerite diagnostiline tähtsus

    Sõelumine
    kasutuses
    verest

    Kinnitus
    ootab
    tulemus
    + anti-HCV

    Üks C-hepatiidi laboratoorse diagnoosi põhiülesanne on diagnoosida ja eristada kroonilise C-hepatiidi ägedat haigestumist, tuvastades nakkuse seroloogilised markerid. Nagu teistegi ägeda viirusliku hepatiidi korral, ilmnevad ja kaovad HCV infektsiooni seroloogilised markerid nakkuse ja tervenemisprotsessi käigus (joonis 2).

    HCV RNA võib detekteerida päevadel 7-21 pärast HCV nakatamist ja anti-HCV-d päevadel 20-150 (keskmiselt 50 päeva) [64]. Anti-HCV spekter võib varieeruda sõltuvalt ägeda hepatiidi perioodist. Arvatakse, et esimene, kes suudab tuvastada HCV RNA Core ja NS5 tsooni poolt kodeeritud antikehasid. NS4 tsooni kodeeritavate anti-HCV valkude puhul puudub hepatiit C ägeda faasi puhul [65]. Võrdlev uuring anti-HCV, HCV-vastase ja HCV RNA spektri kohta ägeda ja kroonilise hepatiidiga patsientidel näitas mõningaid erinevusi [66]. Meie arvates võivad need erinevused olla seotud nakkusprotsessi individuaalsete omadustega, mis vähendab nende diagnostilist väärtust.

    Joon. 2. Äge C-hepatiit

    Analoogiliselt A-ja B-hepatiidi laboratoorse diagnostikaga oli oodata, et HCV klassi IgM antikehade määramisel oleks nii palju diagnostilist väärtust kui IgM anti-HAV ja IgM anti-HBc. Kuid ägeda ja kroonilise C-hepatiidi patsientide seerumi katseandmed HCV-vastase IgM-i esinemise kohta näitavad, et nende patsientide seas esineb sageli neid vastavalt 50-93% ja 50-70% [67,68], need tulemused näitavad, et IgM anti - HCV-d ei saa kasutada ägeda HCV-nakkuse markerina.

    Ägeda hepatiidi "kuldse" standardi rolli puudumine näitab, et patsiendi dünaamilisel vaatlusel põhinevate tulemuste terviklik hindamine on vajalik.

    HCV RNA väga tundlike meetodite katsetamine ei ole vähem tähtis, vähendab transfusioonivastase hepatiidi C tekke riski. Sellise töö vajadus määratakse kindlaks akna faasi olemasolu järgi, st aeg HCV RNA esmase avastamise ja HCV-vastase antikeha ilmnemise vahel, samuti vere doonorite (krooniline C-hepatiit) patsientide olemasolu, kellel on HCV-vastase antikehade puudumisel HCV RNA. Praegune HCV doonorvere seire süsteem sisaldab ainult HCV-vastaseid uuringuid ja C-hepatiidi nakatumise risk jääb püsima. Selle põhjal on õigustatud kontrollida vere testimist HCV RNA olemasolule kaasaegsete meetodite abil (NAT-i meetodid - "nukleiinhapete amplifikatsiooni test"). Selle töö piirav tegur on teadusuuringute kõrge hind. Kulude vähendamiseks on soovitatav testida vere seerumite kogumit (8 kuni 96 proovi), millele järgneb positiivse proovi otsimine, kui HCV RNA tuvastatakse seerumis. Vere-seemnevedeliku külvamiseks vajaliku HCV RNA lahjendusteguri arvessevõtmine on kõige tundlikumate avastamismeetodite kasutamise küsimus väga oluline. Arvatakse, et NAT-i diagnostiliste komplektide kasutamine, mille tundlikkus on 50-100 RÜ / ml, võib märkimisväärselt vähendada transfusiooni järgse hepatiidi C ohtu.

    Kahtlemata ei piirdu nende kahe valdkonnaga loetelu probleemidest, mida saab HCV infektsiooni kogu spektri testimiseks lahendada. Kaasaegsete katsemeetodite kättesaadavus koos nende võimekuse tundmisega avab laialdased väljavaated teaduslikuks ja rakenduslikuks tööks hepatiit C vastu.


  • Seotud Artiklid Hepatiit