ELISA viirushepatiidi jaoks

Share Tweet Pin it

Jäta kommentaar 2929

Viiruse hepatiidi tuvastamiseks organismis kasutatakse laialdaselt ensüümi immunoloogiat, mis põhineb antikehade ja ensüümide määramisel kontsentratsioonil ja antigeenide tüübil. Korraldatakse laboratoorsete uuringute kaupa, millel on väga täpsed näidustused. Sõltuvalt antikehade arvust ja klassist muutub ensüümi värvus ja kontsentratsioon, mis kasutab ELISA-d ja vastavalt sellele arst diagnoosib haigust.

Mis on ELISA?

Viirusliku hepatiidi esinemine patsiendi kehas määratakse kindlaks, kasutades selleks seroloogilist vereanalüüsi meetodit HCV viiruse ja markerite (kehade ja antikehade) olemasolu kohta, viidates sellele. Ensüüm-seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) uurib erinevaid viirusi, madala molekulmassiga ühendeid, makromolekule, nende kvalitatiivseid ja kvantitatiivseid näitajaid, kasutades nende antigeenide reaktsiooni manifestatsiooni. Selleks kasutage signaali registreerimise märgisena ensüümi. Seda kasutatakse üha enam meditsiinis, kuna ELISA selgelt leiab selgelt määratletud antigeenid, segamata neid teistega, on kõrge tundlikkus viirushepatiidi invasiooni esinemise suhtes.

Analüüs tuleb võtta tühja kõhuga.

Selle diagnoosi puuduseks on suutmatus tuvastada haiguse põhjusi, kuna see meetod näitab ainult organismi immuunsüsteemi reaktsiooni. Analüüsi tulemusi mõjutab varasem vaktsineerimine. 8 tundi enne analüüsi on soovitatav hoiduda söömisest, nikotiinist, alkoholist. ELISA testi aluseks on organismi ensümaatiline ja immuunvastus viirusele. Bioloogilised molekulid seob rakku ja selle elemente, mikroorganisme, avastavad viiruse, seejärel töötavad ensüümid, mis võimaldavad teil väljendada immuunvastust nähtavas ja mõõdetavas parameetris.

Analüüsi näitajad

Viiruslik hepatiit organismis võib põhjustada vähki ja maksatsirroosi. Ajakohase diagnoosi tähtsus on vaieldamatu. Esmane diagnoosimeetod on ELISA test, mis määrab kõrge täpsusega HCV viiruse (IgM ja IgG) olemasolu ja selle mikroelementide aktiivsuse. Viiruse hepatiidi passi kohustuslikud testid:

  1. Riskirühmade (narkomaanid, AIDS-i inimesed, meditsiini- ja õiguskaitseorganite töötajad) inimesed.
  2. Ägeda või kroonilise hepatiidi inimesed.
  3. Raseduse planeerimine ja raseduse kavandamine.

ELISA tunnistab haigust igal etapil. Analüüsi tulemused on keskmiselt valmis 2 päeva jooksul.

Analüüsi olulisust määravad kriteeriumid

ELISA test määrab IgG, IgM, IgA antikehade olemasolu. Viirusliku hepatiidi diagnoosimisel ei pööra arst tähelepanu nende tüübile, kuna sellise HCV viiruse sellise ilmnemise esinemine näitab juba haiguse ägedat või kroonilist staadiumi. Haiguse varajastes staadiumides suureneb IgM tase (5 päeva pärast nakatamist); 15.-20. päeval ilmnevad IgG antikehad ja võivad püsida inimveres pikka aega isegi pärast ravimist; IgA - ilmub 10-14 päeva pärast, väheneb pärast ravi.

Kui IgG ja IgA avastatakse pärast ravimite kasutamist ja nende tase püsib sama kiirusega - kandjal on krooniline hepatiidi vorm. Katsetamise oluline kriteerium on olemasolevate antikehade klassi ja nende koguse selge määratlus. Selle põhjal saab teada mitte ainult haiguse esinemist, vaid ka selle arenguetappi. Selliste elementide avastamine patsiendi veres võimaldab määrata õige ja õigeaegse ravi, et hoida ära tõsiseid tagajärgi.

Kuidas seda teha?

Eraldage otsene ja mitte otsene ELISA test. Stage direct:

  1. Bioloogilise materjali kogumine ja selle paigaldamine spetsiaalsetele aukudele.
  2. 15-30 minuti jooksul antigeenid on kinnitatud süvendite pinnale.
  3. Antikehade lisamine leitud antigeeni süvenditesse. Kõik jäeti 1-5 tunniks.
  4. Eemaldage ühendamata antigeenid (süvendite sisu valades).
  5. Loputage auke spetsiaalse lahusega.
  6. Lisage süvendisse ensüümi lahus. Jäta 30 minutit - 1 tund.
  7. Kolorimeetria kasutamine (värvi tuvastamine ja süvendi sisu värvuse kontsentratsioon, võrdlus näitajatega, mis on otseselt proportsionaalsed viiruse kontsentratsiooniga).
Kaudse ELISA diagnoosi kasutamine annab täpsema tulemuse.

Kaudne ELISA meetod toimub leitud antigeenide märgistamata antikehade kasutamisel ja seejärel neile märgistatud ainete lisamisega. Esiteks võetakse verega patsient ja levib läbi süvendeid 15-30 minutit. (antikehad on kinnitatud aukudega). Siis sisestatakse neile märgimata antikehad 1-5 tunni jooksul (moodustatakse antikehade seos antigeenidega - immuunkompleks). Seejärel valatakse süvenditest välja mittepühendatud mikroelemendid ja pestakse spetsiaalse lahusega. Järgmisel etapil lisab laboritehnik 15-30 minuti jooksul süvenditesse märgistatud mikroelemente. (see seostab märgistamata märgisega koos kompleksi "antikeha-antikeha-antigeeni" moodustamisega). Lisad (lahtised) eemaldatakse jälle vedeliku eemaldamise ja pesemise ajal. Järgmine on ensüüm, mis muudab värvi 5-30 minutit. kaevudes viibides ja värvide andmeid võrreldakse tabelite näitajate andmetega. Kaudne ELISA on täpsem.

Mida näitab ELISA viiruslik hepatiit?

ELISA võimaldab avastada infektsiooni (kõik tüüpi hepatiidi viirused, HIV, herpese, süüfilis, tsütomegaloviirus, leetrid, punetised, mumpsi viirus, Epstein-Barri viirus) tuvastamine, autoimmuunhaiguste, vähirakkude marker. Näitab reproduktiivsete funktsioonide (muutused testosterooni, prolaktiini, östradiooli ja progesterooni), kilpnäärme rikete, helmintüüpide, klamidioosi vastu. Kasutatav ureaplasmoosi, köha köha, Dange viiruse, Lääne-Niiluse viiruse, Borrelia avastamise tuvastamiseks. Mõistete loend on kõrge, sisaldab palju pealkirju.

Tulemuste kinnitamine

HCV viiruse antigeeni määramine ELISA-ga annab 98% täpsuse. Seda kasutatakse ka bioloogilise materjali uuesti testimiseks eelnevate näitajatega. IgM antigeenide esinemine ei ole akuutse hepatiidi näitaja ja vajab täiendavaid uuringuid. Kui ELISA testi korratakse, langevad tulemused kokku 90-100%. Minimaalse lahknevuse korral on indikaatoriks keskmine väärtus. Maksimaalse täpsuse tagamiseks annavad arstid paralleele vere biokeemilise analüüsi läbiviimiseks. Ensüümimanuste määramiseks tulemuste testimiseks võite kasutada muid diagnostilisi meetodeid.

ELISA meetod hepatiidi tuvastamiseks

Tänapäevane ravim on tuntud paljude maksahaiguste tõttu. HCV (viirushepatiit C) on üks kõige tavalisemaid ja ohtlikumad, sest see nakkus tekib sageli asümptomaatiliselt ja põhjustab kriitilisi tüsistusi, isegi surma. Sellepärast on haiguse õigeaegne diagnoosimine ülimalt tähtis, mis toimub viiruse antikehade tuvastamiseks erinevate meetoditega, sealhulgas ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsiga (ELISA).

Hepatiidi diagnoosimise kohta HCV infektsioon

Laboratoorses diagnostikas kasutatakse hepatiit C (HCV nakkus) avastamiseks kahte liiki meetodeid:

  1. Seroloogiline, põhineb C-hepatiidi viiruse (anti-HCV) antikehade tuvastamisel, mida nimetatakse ka ELISA (ensüüm-seotud immunosorbentanalüüs). Selle eesmärk on tuvastada C-hepatiidi skriinimiseks ja diagnoosimiseks kasutatud anti-HCV (IgM ja IgG markerid). Mõlemat markerit võib erinevates kombinatsioonides tuvastada veres (plasma), mis nõuab õiget kliinilist tõlgendamist. HCV-vastase antikeha olemasolu kinnitamiseks tehakse RIBA (rekombinantne immunoblot) test.
  2. Molekulaarbioloogiline, mille eesmärk on tuvastada RNA viirus. HCV RNA test on ette nähtud järgmiste patsientide rühmade jaoks:
    • tuvastatud HCV-ga;
    • ilma tuvastatud HCV-vastase antikehaga, kuid kindlakstehtud epidemioloogilised ja kliinilised andmed vajavad HCV ägeda vormi väljajätmist.

Viiruse RNA võib verd tuvastada juba 14 päeva pärast nakatamist, see tähendab enne, kui ilmneb HCV-vastane antikeha, mis tekib esimese 2-3 kuu jooksul.

Diagnoosi lõplikuks kinnitamiseks (eriti kui tuvastatakse ainult üks kahest HCV-nakkuse markerist), soovitavad eksperdid teatud aja jooksul teha HCV- ja HCV-vastase RNA korduvaid katseid.

Hepatiidi tuvastamine ELISA abil

Viiruse hepatiidi, eriti asümptomaatiliste, anikteriliste vormide varase diagnoosi rakendamiseks seerumis tuvastatakse viiruslike valkude (antigeenid) olemasolu või nende antikehad (toodetud immuunsüsteemi kaudu, kui viirused sisenevad organismi) ensüümseotud immunosorbentanalüüsiga (ELISA). See on universaalne immunoloogilise diagnoosi meetod, selle olemus seisneb "antigeeni-antikeha" interaktsiooni uurimises. Laialdaselt kasutusel paljudes maailma riikides.

Hepatiidi määramine ELISA-ga võimaldab mitte ainult määrata täpset diagnoosi, vaid ka hinnata haiguse olemust, samuti valida sobiv ja tõhus ravi traditsiooniliste ravimitega (interferoon, ribaviriin), otsese toimega ravimid (Sofosbuvir, Daclatsvir) ja nende India ja Hiina toodangu geneerilised ravimid.

Kui võimalik, viirusliku hepatiidi diagnoosi ELISA-ga täiendab PCR (polümeraasi ahelreaktsioon), mis võimaldab kindlaks teha hepatiidi viiruste esinemist RNA-s.

Kui täpne on ensüümi immuunanalüüsi meetod

Ekspertiiside hinnangul on ELISA meetodi täpsus 95%, see tähendab, et 95 patsiendil 100 patsiendil, kes kasutavad ensüümi immunoloogilist analüüsi, võib HCV antikehade olemasolu ja hulga - IgM ja IgG tuvastada veres. Kui tulemus on positiivne, on võimalik diagnoosida HCV-i kokkupuude kehaga (mitte viirus ise, nimelt antikehade esinemine veres, mis võib olla juba ülekantud haiguse tagajärg).

Kuid vaatamata ensüümse immunosorbentanalüüsi (ELISA) suurele tundlikkusele 40% positiivse tulemusega patsientidest ei pruugi viirus olla avastatud, mis viitab kahtlase või valepositiivse tulemuse tekkimisele.

ELISA-testi tulemuste õigsuse kinnitamiseks kasutatakse RIBA meetodit (rekombinantset immunoblottimist), et täpsemalt uurida HCV antikehade avastamist.

Anti NCV põhikatse

Hepatiidi viiruste antikehade olemasolu määramiseks tehtavad tõhusad uuringud hõlmavad HCV-vastast südamikku, mida kasutatakse kinnitava testi järgselt, kui saadakse "ebaselgeid" tulemusi.

Kui seerumis tuvastatakse HCV-vastane tuum lahjendusega 1: 1000, siis tõenäoliselt diagnoositakse positiivne tulemus, st haigus esineb.

Kui proovid lahjendusega 1: 1000 on negatiivsed, lahjenduses 1: 200 on positiivne, on vaja uurida viiruse RNA olemasolu. Sellisel juhul ei ole HCV nakkus kõige tõenäolisem.

On oluline mõista, et HCV kroonilistes vormides tuvastatakse antikehad pidevalt ja eliminatsiooni käigus (eemaldatakse organismi rakud) viirus püsib 4-8 aastat või rohkem. Seetõttu ei anna HCV-i esinemine alati organismi infektsiooni ega võimalda teha objektiivseid järeldusi protsessi aktiivsuse kohta. Täpsete andmete saamiseks viiruse koormuse, maksakahjustuse astme, nakkuse kestuse ja haiguse ägedate ja krooniliste vormide vahelise erinevuse kohta on soovitatav kasutada erinevate HCV antikehade spektri määratlust peptiidid. Samuti on oluline jälgida nende kvantitatiivset ja kvalitatiivset dünaamikat.

B-hepatiidi viiruse (ELISA ja PCR) uuringud

B-hepatiidi viiruse antigeen (HBsAg)

B-hepatiidi pinnaantigeen seerumis tavaliselt puudub.
Hepatiit B pinnaantigeeni (HBsAg) avastamine seerumis kinnitab B-hepatiidi viiruse ägedat või kroonilist nakkust.

Ägeda haiguse korral tuvastatakse HBsAg seerumis viimase inkuaarse perioodi 1-2 nädala jooksul ja kliinilise perioodi esimesed 2-3 nädalat. HBsAg tsirkuleerumine veres võib olla piiratud mõne päevaga, nii et peaksite püüdma patsiente varakult esialgselt uurida. ELISA meetod võimaldab avastada HBsAg rohkem kui 90% patsientidest. Peaaegu 5% -l patsientidest ei leia kõige tundlikumad uurimismeetodid HBsAg-d, sellistel juhtudel kinnitab viirusliku hepatiidi B etioloogiat HBcAg-vastase JgM või PCR-i olemasolu.

Seerumi HBsAg kontsentratsioon B-hepatiidi kõigi vormide raskusastmetel haiguse kõrgusel on märkimisväärne kõikumiste hulk, kuid on kindel korrektsus: ägeda perioodi jooksul on seerumi HBsAg kontsentratsiooni ja haiguse tõsidus vahel pöördeline seos.

HBsAg kõrge kontsentratsioon on levinud kergete ja mõõdukate haigusseisundite korral. Raskete ja pahaloomuliste vormide korral on HBsAg kontsentratsioon veres sageli madal ja 20% -l raskekujuliste vormide ja 30% -l patsientidest, kellel on pahaloomuline antigeen veres, ei pruugi üldse tuvastada. HBsAg-vastase antikehaga patsientidel peetakse selle tausta välimust ebasoodsaks diagnostiliseks märgiks; see määratakse kindlaks hepatiit B pahaloomulistes vormides.

B-hepatiidi ägedal käigus väheneb HBsAg kontsentratsioon veres, kuni selle antigeeni täielik kadumine muutub. Enamikus patsientidest kaob HBsAg 3 kuu jooksul pärast ägeda infektsiooni tekkimist.

Akuutse perioodi 3. nädala lõpuks HBsAg kontsentratsiooni vähenemine üle 50% viitab tavaliselt infektsiooni protsessi lõpuleviimisele. Tavaliselt patsientidel, kelle haigus on kõrgem HBsAg kontsentratsioonist, tuvastatakse see veres mitu kuud.
HBsAg madala kontsentratsiooniga patsientidel kaob palju varem (mõnikord mitu päeva pärast haiguse algust). Üldiselt on HBsAg detekteerimise aeg vahemikus mitu päeva kuni 4-5 kuud. HBsAg maksimaalne ägeda hepatiidi B käigus avastamise aeg ei ületa 6 kuud haiguse alguse hetkest.

HBsAg-i võib reeglina leida tervetel inimestel profülaktilistes või juhuslikes uuringutes. Sellistel juhtudel uuritakse muid viirusliku hepatiidi B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG ja anti-HBeAg-vastaseid markereid ja uuritakse maksafunktsiooni.

Kui negatiivseid tulemusi on vaja teha, on korduvad HBsAg-uuringud.
Kui korduvad üle 3-kuulised vereanalüüsid avastavad HBsAg-i, liigitatakse see patsient viirusliku hepatiit B-ga krooniliseks patsiendiks.
HBsAg esinemine on üsna tavaline. Maailmas on üle 300 miljoni vedaja ja meie riigis on umbes 10 miljonit vedaja.
HBsAg-i vereringe lõpetamine järgneva serokonversiooniga (anti-HB-de teke) näitab alati kehas olevat taastumist.

HBsAg-i vereanalüüsi kasutatakse järgmistel eesmärkidel:

  • ägeda hepatiidi B diagnoosimiseks:
    • inkubatsiooniperiood;
    • äge haigus;
    • varane taastumine;
  • kroonilise viirushepatiidi B diagnoosimiseks;
  • haiguste puhul:
    • püsiv krooniline hepatiit;
    • maksa tsirroos;
  • riskigruppide patsientide skriinimiseks ja tuvastamiseks:

  • sagedaste hemotransfusioonidega patsiendid;
  • kroonilise neerupuudulikkusega patsiendid;
  • mitme hemodialüüsi teel;
  • immuunpuudulikkuse seisundiga patsiendid, sealhulgas AIDS.
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemused on väljendatud kvalitatiivselt - positiivsed või negatiivsed. Negatiivne tulemus viitab seerumi HBsAg puudumisele. Positiivne tulemus - HBsAg identifitseerimine näitab ägeda viirusliku hepatiidi B ja ka kroonilise viirusliku hepatiit B inkubatsiooni või ägedat perioodi.

    B-hepatiidi viiruse JgG (anti-HBcAg JgG) tuumase antigeeni antikehad

    Tavaliselt puudub seerumi anti-HBcAg sisaldus seerumis.
    Anti-HBcAg JgG-ga patsientidel ilmnevad viirusliku hepatiit B ägedal perioodil ja nad püsivad kogu elu vältel. Anti-HBcAg JgG on ülekantud HBV juhtiv marker.

    Anti-HBcAg JgG vereanalüüsid kasutatakse diagnoosimiseks:

  • krooniline viirushepatiit B HBs antigeeni manulusel seerumis;
  • viiruslik hepatiit B
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemus väljendatakse kvalitatiivselt - positiivne või negatiivne. Negatiivne tulemus viitab seerumi anti-HBcAg JgG puudumisele. Positiivne tulemus - anti-HBcAg JgG tuvastamine näitab ägeda infektsiooni, paranemise või eelnevalt viiruse viiruse hepatiidi B

    Hepatiit B viiruse "e" antigeen (HBeAg)

    Tavaliselt puudub HBeAg seerumis.
    Enamiku ägeda viirusliku hepatiit B patsientide seerumis võib tuvastada HBeAg-i. Tavaliselt kaob see HBs-antigeeni sisaldavas veres. HBeAg kõrge tase haiguse esimestel nädalatel või selle avastamine enam kui 8 nädala jooksul põhjustab kroonilise infektsiooni kahtlust.

    Seda antigeeni tuvastavad sageli viirusliku etioloogia krooniline aktiivne hepatiit. Eriti huvipakkuv HBeAg määratlus on asjaolu, et selle tuvastamine iseloomustab nakkusprotsessi aktiivset replikatsioonifaasi. On tõendatud, et kõrge HBeAg kontsentratsioon vastab kõrgele DNA polümeraasi aktiivsusele ja iseloomustab viiruse aktiivset replikatsiooni.

    HBeAg esinemine veres näitab selle kõrge nakkavust, st aktiivse B-hepatiidi nakkuse esinemine organismis, mida uuritakse, ja see tuvastatakse ainult juhul, kui HB-de antigeen on veres. Kroonilise aktiivse hepatiidiga patsientidel kasutatakse viirusevastaseid ravimeid ainult siis, kui HBeAg tuvastatakse veres. HBeAg - antigeen - ägeda faasi marker ja hepatiit B viiruse replikatsioon.

    HBe antigeeni olemasolu vereproovi kasutatakse diagnoosimiseks:

  • viirusliku hepatiidi B inkubatsiooniperiood;
  • viirusliku hepatiidi B prodromaalne periood;
  • viirusliku hepatiidi B ägeda perioodi;
  • krooniline püsiv viiruslik hepatiit B
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemus väljendatakse kvalitatiivselt - positiivne või negatiivne. Negatiivne tulemus viitab seerumi HBeAg puudumisele. Positiivne tulemus - HBeAg tuvastamine viitab ägeda viirusliku hepatiidi B inkubatsioonile või akuutsele perioodile või viiruse jätkuvale replikatsioonile ja patsiendi nakkavusele.

    B-hepatiidi viiruse (anti-HBeAg) antigeeni "e" antikehad

    HBeAg-vastane antikeha seerumis tavaliselt puudub. HBeAg-vastaste antikehade ilming näitab tavaliselt intensiivset B-hepatiidi viiruse eemaldamist ja patsiendi kerget infektsiooni.

    Need antikehad ilmnevad ägeda perioodi jooksul ja püsivad kuni 5 aastat pärast infektsiooni. Kroonilise püsiva hepatiidi korral leitakse HBsAg-iga patsiendi veres HBeAg-vastane antikeha. Serokonversioon, st HBeAg-i üleminek HBeAg-le kroonilise aktiivse hepatiidi vastu on enamasti prognostiliselt soodne, kuid sama serokonversioon ei paranda raskeid tsirroosseid maksa transformatsioone.

    HBeAg-vastase antikeha olemasolu vereanalüüse kasutatakse järgmistel juhtudel viirushepatiidi B diagnoosimisel:

  • haiguse algfaasi kindlakstegemine;
  • äge infektsioon;
  • varane taastumine;
  • taastusravi;
  • hilise etapi taastumine.
  • hiljuti ülekantud viirushepatiidi B diagnoos;
  • kroonilise püsiva viirusliku hepatiidi B diagnoos
  • Uurimistulemuste hindamine

    Uuringu tulemus väljendatakse kvalitatiivselt - positiivne või negatiivne. Negatiivne tulemus viitab HBeAg antikehade puudumisele seerumis. Positiivne tulemus on HBeAg antikehade tuvastamine, mis võib viidata ägeda viirusliku hepatiidi B esialgsele staadiumile, ägeda nakkusperioodi vältel, rekonstruktsiooni varase seisundi taastumisel, paranemisel, hiljuti üle viiruse hepatiit B või püsiv viiruslik hepatiit B.

    Kroonilise hepatiit B esinemise kriteeriumid on:

  • HBV DNA tuvastamine või perioodiline tuvastamine veres;
  • pidev või perioodiline ALAT / AST aktiivsuse suurenemine veres;
  • maksa biopsia histoloogilises uuringus kroonilise hepatiidi morfoloogilised tunnused.
  • B-hepatiidi viiruse tuvastamine PCR-ga (kvalitatiivselt)

    B-hepatiidi viirus veres ei ole tavaliselt olemas.
    B-hepatiidi viiruse kvalitatiivne määramine PCR-meetodil veres võimaldab tuvastada viiruse olemasolu patsiendi kehas ja seega seeläbi haiguse etioloogiat.

    See uuring annab kasulikku teavet ägeda viirusliku hepatiidi B diagnoosimiseks haiguse inkubatsioonil ja varases arengujärgus, kui patsiendi peamised seroloogilised markerid veres puuduvad. HBeAg puudumisel tuvastatakse 50% patsientidest seerumi viiruse DNA. PCR-meetodi analüütiline tundlikkus on vähemalt 5 μl viiruse osakestest, viimane DNA avastamise proov, spetsiifilisus 98%.

    See meetod on oluline kroonilise HBV diagnoosimiseks ja jälgimiseks. B-hepatiidi viiruse krooniline kandja on põhjustanud ligikaudu 5-10% tsirroosi ja teiste krooniliste maksahaiguste juhtumitest. Selliste haiguste aktiivsuse markerid on HBeAg ja B-hepatiidi viiruse DNA sisaldus veres.

    PCR-meetod võimaldab määrata B-hepatiidi viiruse DNA nii kvalitatiivselt kui kvantitatiivselt veres. Mõlemal juhul on määratletud fragmendiks hepatiit B viiruse struktuurvalgu geeni ainulaadne DNA järjestus.

    B-hepatiidi viiruse DNA tuvastamine biomaterjalides, kasutades PCRi, on vajalik:

  • küsitavate seroloogiliste testide tulemuste lahendamine;
  • haiguse ägeda faasi avastamine võrreldes eelmise nakatumise või kokkupuutega;
  • kontrollida viirusevastase ravi efektiivsust.
  • B-hepatiidi viiruse DNA kadumine verest on tähtis ravi efektiivsus

    B-hepatiidi viiruse tuvastamine PCR abil (kvantitatiivne)

    See meetod annab olulist teavet haiguse arengu intensiivsuse, ravi tõhususe ja aktiivsete ravimite resistentsuse arengu kohta.
    Seerumis PCR-ga viirusliku hepatiidi diagnoosimiseks kasutatakse katsesüsteeme, mille tundlikkus proovis on 50-100 koopiat, mis võimaldab viirust tuvastada kontsentratsioonil 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 koopiat / ml. Viiruse replikatsiooni hindamiseks on kindlasti vajalik viirusliku hepatiit B PCR.

    HBeAg puudumisel tuvastatakse 50% patsientidest seerumi viiruse DNA. Seerumi, lümfotsüütide ja hepatobioptaatide kasutamine võib olla B-hepatiidi viiruse DNA tuvastamiseks vajalik materjal.

    • Vireemia taseme hindamine on järgmine:
    • vähem kui 2,10 ^ 5 koopiat / ml (vähem kui 2,10 ^ 5 IU / ml) - madal vireemia;
    • alates 2.10 ^ 5 koopiat / ml (2.10 ^ 5 RÜ / ml) kuni 2.10 ^ 6 koopiat / ml (8.10 ^ 5 RÜ / ml) - keskmine vireemia;
    • rohkem kui 2,10 ^ 6 koopiat / ml - kõrge vireemia.

    On olemas seos ägeda viirushepatiidi B ja HBV DNA kontsentratsiooni vahel patsiendi veres. Vireemia madala taseme korral on infektsiooni kroniseerimise protsess peaaegu null, keskmine - protsess on kroonineeritud 25-30% patsientidest ja kõrge vireemia korral muutub äge viirushepatiit B enamasti krooniliseks.

    Kroonilise HBV interferoon-alfa raviks tuleb arvestada aktiivse viiruse replikatsiooni markerite esinemisega (HBV HBV, HBeAg ja HBV DNA tuvastamine seerumis viimase 6 kuu jooksul).

    Ravi efektiivsuse hindamise kriteeriumid on HBeAg ja HBV DNA kadumine veres, millega tavaliselt kaasneb transaminaaside taseme normaliseerimine ja haiguse pikaajaline taandareng, 80% -l patsientidest kaob vererõhk viienda ravikuu jooksul verest. Vireemia keskmise taseme vähendamine kolmanda päeva jooksul alates ravi algusest 85% või rohkem võrreldes algväärtusega on kiire ja õiglaselt täpne kriteerium ravi efektiivsuse ennustamiseks.

    Hepatiit C ELISA

    EIA hepatiit C määrab tõhusalt, see on üks haiguse diagnoosimise meetodeid, mis põhinevad antigeenide ja antikehade koostoimel. Immuunheemiline reaktsioon ELISA-ga (ensüüm-seotud immunosorbentanalüüs) võimaldab tuvastada HCV-vastaseid antikehi organismis. See meetod võimaldab inimestel diferentseeritult diagnoosida C-hepatiiti, määrata haiguse arenguetappi, ennustada selle arengut. Spetsiifiliste seroloogiliste markerite kindlakstegemine võimaldab teil valida patoloogilise efektiivse viirusevastase ravi.

    Meetodi tunnused

    C-hepatiidi viiruse antikehade tuvastamiseks inimveres tehtav analüüs viiakse läbi välismikroorganismi (antigeeni) külge immunoglobuliini molekuliga. Lisatud ensüümi ensüüm mängib teatud tüüpi etiketti. See võimaldab teil jälgida immunokeemilist reaktsiooni, samuti ühte selle komponenti.

    Nagu ensüümi immunoloogiline analüüs võib toimida:

    • antikehad;
    • spetsiifilise ensüümiga märgistatud antikehad;
    • antigeenid;
    • ensüümi substraadid;
    • indikaatorvärvid.

    Kui kahjulikud võõraste mikroorganismid sisenevad inimkehasse, tekivad kaitsejõududes immunoglobuliinid (antikehad). Seejärel toimivad need antigeenid ja neutraliseerivad need. See interaktsioon viib antikeha-antigeeni moodustumiseni, millel on oma kvantiteedi ja kvaliteedi näitajad. Need näitavad HCV nakkuse olemasolu või puudumist organismis. Kui ensüümi immuunanalüüsi tulemus on positiivne, on olemas C-hepatiidi viirus.

    Meditsiinilised kaasaegsed tehnoloogiad võivad oluliselt vähendada hepatiidi viiruse tuvastamise aega, mis esineb ägedas vormis. Tänu kolmanda põlvkonna diagnostilistele süsteemidele on võimalik suurendada immunokeemilise reaktsiooni spetsiifilisust ja tundlikkust.

    ELISA-ga uuritud peamine materjal on venoosne veri (sealhulgas doonorveri). Vastavalt ütlustele võib proovi võtta tserebrospinaalvedelikust või amniootilisest vedelikust.

    ELISA meetodi positiivne tulemus C-tüüpi hepatiidile ei viita alati viiruse infektsiooni esinemisele organismis. Enam kui 35% juhtudest ei tuvastata veres viiruslikke antigeene, mis põhjustab valepositiivseid tulemusi.

    See meetod võimaldab teil jälgida kvantitatiivseid ja kvalitatiivseid muutusi, vahet hepatiidi C ägedate ja krooniliste vormide vahel. Kuid see ei ole efektiivne patoloogilise protsessi aktiivsuse määramiseks. HCV-nakkuse esinemise täpsustamiseks tuleb kasutada ka muid patoloogilise diagnoosi meetodeid.

    ELISA näitajad

    Välise mikroorganismi (antigeenide) spetsiifilise ja kvantitatiivse kontsentratsiooni tuvastamise meetod immunoglobuliinide ja ensüümide abil viiakse läbi mitmel etapil. Värvimuutuse ja ensüümi kvantitatiivse mõõtmise põhjal võib arst diagnoosida inimestel C-hepatiidi.

    Järgmised inimeste kategooriad on haigusele vastuvõtlikumad:

    1. Operatsioonijärgsed patsiendid, samuti siseorganite ja süsteemide haigused.
    2. HIV-infektsioon (nakatunud inimese immuunpuudulikkuse viirusega). Suur osa inimesi selles rühmas on uimastisõltlased.
    3. Meditsiinitöötajad.
    4. Õiguskaitseametnikud.
    5. Rasedad naised.

    Hepatiidi viiruslik päritolu põhjustab sageli vähktõbe (nt maksavähk). Sellepärast peaks ensüümi immuunanalüüsi annustav veri olema mõeldud eelkõige peamiste riskigruppide inimestele, samuti ägeda või kroonilise hepatiidiga patsientidele.

    Kui see on näidustatud, võib arst määrata ELISA meetodi patsientidele, kellel on diagnoositud:

    • STI-d (sugulisel teel levivad nakkused);
    • viirusliku päritoluga haigused (papilloomiviirus, herpese infektsioon, hepatiit jne);
    • patoloogilise allergilise iseloomuga;
    • immuunpuudulikkus;
    • onkoloogia

    Eelised ja puudused

    ELISA hepatiit C on võimalik tuvastada varases staadiumis, samuti asümptomaatilistes ja anikterilistes vormides. Nagu iga diagnostikameetodil, on sellel mitmeid eeliseid ja puudusi.

    Eksperdi hinnangul on ELISA positiivsed omadused järgmised:

    1. Kvalitatiivsete ja kvantitatiivsete näitajate täpsus. Meetodi tundlikkus ületab teisi hepatiidi tuvastamise uuringuid kümneid kordi.
    2. Kaasaegsete diagnostiliste süsteemide tõttu viirusliku nakkuse avastamise ajastamine oluliselt.
    3. Madal hind võrreldes teiste uuringutega hepatiidi tuvastamiseks inimestel.
    4. Võimalus diagnoosida maksahaigust varajases staadiumis väljendunud sümptomite puudumisel.
    5. Järk-järguline uurimine automatiseeritud protsesside abil.

    Vaatamata ELISA suurele täpsusele, ei avalda patsient enam kui 35% -l juhtudest positiivse tulemusega hepatiidi viirust. Sageli ei kinnita test patoloogiat, mis näitab kahtlust või negatiivset tulemust.

    Uuringu usaldusväärsus ühel või teisel määral mõjutab:

    1. Ravimid.
    2. Ainevahetusprotsesside rikkumine.
    3. Kroonilise iseloomuga teatud patoloogiate esinemine, mis soodustavad immunoglobuliinide aktiivset tootmist.

    Arvestades in vitro ELISA-testi tulemuste puudusi, antakse patsiendile täiendavaid uuringuid. Hepatiit C viiruse infektsiooni antikehade usaldusväärseks tuvastamiseks kasutatakse PCR-i (polümeraasi ahelreaktsiooni) või RIBA-d (rekombinantne immunoblottimine).

    Mis määratleb ja kuidas uuring viiakse läbi

    ELISA analüüs võimaldab tuvastada inimestel mitmesuguseid haigusi.

    Lisaks kõikide hepatiit B antikehade tuvastamisele võib positiivne testi tulemus näidata järgmiste patoloogiate esinemist organismis:

    • inimese immuunpuudulikkuse viirus;
    • herpese infektsioon;
    • süüfilis;
    • STI (ureaplasmoos, klamüüdia jne);
    • papilloomiviirus;
    • tsütomegaloviirus.

    Uuring on ka mingi marker pahaloomuliste kasvajate, geneetiliste patoloogiate, hormonaalsete häirete, samuti endokriinse süsteemi funktsioneerimise häirete tuvastamiseks.

    Preparaati bioloogilise materjali tarnimiseks C-hepatiidi viiruse avastamiseks tähendab toidu ja ravimi keeldumist 12 tundi enne uuringut. Samuti on vajalik seisund hoiduda alkoholi, rasvase, praetud ja soolase toidu kasutamisest.

    Otsene ELISA

    Otsemeetodi läbiviimise peamised sammud on järgmised:

    1. Esiteks võtab laboritöötaja vere verest veeni (või muust bioloogilisest materjalist) ja asetab see seejärel spetsiaalsesse mahutisse.
    2. Välismaine mikroorganism (antigeenid) 20 minuti jooksul hakkab nendega kinnitama.
    3. Spetsialist lisab immunoglobuliine (antikehi) antigeenidele, mis leidsid, et need moodustavad immuunvastuse. Sellisel juhul jäetakse komponendid mitmeks tunniks.
    4. Mitteühendatud antigeenid eemaldatakse mahutite valamise teel.
    5. Materjal loputatakse lahusega, seejärel töödeldakse ensüümidega ja jäetakse üheks tunniks välja.
    6. Sisu värvi ja kontsentratsiooni analüüsitakse kolorimeetria abil.

    Kui aine kvantitatiivne näitaja ületab lubatud normi, siis näitab see C-hepatiidi viiruse olemasolu inimese kehas.

    Kaudne ELISA

    Viitab märgistamata immunoglobuliinide vastastikmõju antigeenidega, millele seotakse järgnevalt märgistatud antikehad.

    Patsiendi alguses võetakse verest veeni. Seejärel pannakse bioloogiline materjal umbes pool tundi spetsiaalsesse mahutisse. Sellisel juhul kinnitatakse anumate seintele märgimata antikehad. Seejärel lisatakse neile märgistatud antikehad. Nende interaktsiooni tulemusena moodustub antikeha-antigeeni immuunkompleks.

    4 tunni pärast valatakse konteinerite sisu välja ja lahtised mikroelemendid eemaldatakse. Lab technician kinnitab märgistatud antikehad juba moodustunud kompleksile ja tekib "antikeha-antikeha-antigeeni" immuunvastus.

    Pärast lahtiste mikroelementide korduvat eemaldamist lisatakse mahutile spetsiaalne ensüüm, mis muudab värvi ja kvantitatiivseid näitajaid. Saadud tulemuste põhjal kontrollib spetsialist andmeid ja teeb järeldused.

    Dekodeerimise tulemused

    ELISA analüüsimisel pööratakse tähelepanu IgA, IgG ja IgM klasside antikehade olemasolule või puudumisele. Nende antikehade kvantitatiivseid näitajaid võrreldakse spetsiaalse tabeli andmetega.

    Tema sõnul on tulemuste dekodeerimine järgmine:

    1. Kui kõiki kolme näitaja tüüpi pole määratletud, on isikul täielik taastumine.
    2. Kõigi kolme näitaja puhul on üheaegselt positiivne tulemus viirusliku infektsiooni äge vorm.
    3. Kui määratakse IgG klassi antikehad, samas kui teisi klasse ei identifitseerita, on inimesel tekkinud postinfektsioosne immuunsus.
    4. Haiguse kroonilist iseloomu näitavad IgG ja IgA klassi antikehade positiivsed indikaatorid. Kuid need jäävad muutumatuks ka pärast arstiabi.
    5. Kõigi kolme tüüpi antikehade positiivse avastamise korral võib täheldada hepatiidi kroonilise iseloomu taastumist.

    Statistiliste andmete kohaselt suureneb IgM tase mitu päeva pärast kehas nakatumist, mis näitab patoloogilise varase staadiumi. IgG antikehad ilmuvad tavaliselt 2 nädala jooksul pärast haiguse algust ja jäävad veres pikaks ajaks (isegi pärast taastumist). IgA antikehad tuvastatakse pärast 2 nädala möödumist, samas kui nende kontsentratsioon organismis väheneb pärast ravimi kasutamist.

    Ärge unustage, et C-hepatiidi ELISA positiivne näitaja ei viita alati infektsiooni esinemisele. Sageli peetakse test valepositiivseks, mis nõuab vere uuesti annetamist. Mõnel juhul on patsiendil ette nähtud täiendavad uuringud, et täpsemalt määrata vere parameetreid.

    Katse põhikriteeriumiks on kvantitatiivsete ja tüüpiliste näitajate täpne tuvastamine. Need võimaldavad teil määrata mitte ainult viiruse olemasolu, vaid ka haiguse vormi. Hepatiidi C diagnoosimine tänapäevaste meetoditega aitab teil alustada õigeaegset ravimi kasutamist ja minimeerida negatiivseid tagajärgi.

    Hepatiidi diagnoosimine ifa

    Diagnoos algab patsiendi uurimisega. Viirusliku hepatiidi õige ja õigeaegseks diagnoosimiseks uurivad arstid esmalt patsiendi, suunavad teda vere ja uriinianalüüside tegemiseks.

    Kõigepealt pööravad nad tähelepanu selliste haiguse esialgse perioodi iseloomulikele sümptomitele nagu letargia, üldine lihasnõrkus, isutus, iiveldus, ebamugavustunne kõhus, uriini värvuse tumenemine, maksa laienemine ja paksenemine, selle alumise serva valutundlikkuse suurenemine. Üldiselt pöörab verearstide analüüs tähelepanu leukotsüütide, lümfotsüütide, ESRi sisaldusele.

    Nad kasutavad biokeemilisi vere ja uriinianalüüse, et hinnata maksakahjustuse taset ja kinnitada, kas kollatõbi on seotud maksapõletikuga. Kõige olulisem on sapipigmendi - bilirubiini tase, mis moodustub punaliblede lagunemise tõttu maksas.

    Tavaliselt on bilirubiin seostatud vere proteiinidega ja ei oma toksilist toimet kehakudedele. Hepatiidi korral suureneb vabade ja seotud bilirubiini kontsentratsioon veres järsult. Kui see ületab 200-400 mg / l, muutub ikter nähtuks silma.

    Hepatotsüütide kahjustus räägib transaminaaside aktiivsuse tõusust - ALAT ja AST, mis sisenevad kahjustatud membraanide kaudu maksarakkudesse. Samuti on spetsiifilised testid vere hüübimissüsteemi seisundi kohta, kus osalevad maksas sünteesitud valgud. Uriini positiivne reaktsioon urobiliinile on diagnostilise väärtusega.

    Maksa funktsiooni kahjustuse tõendid on tümooli test. Protrombiiniindeksi muutus iseloomustab viirusliku hepatiidi raskust ja leelisfosfataasi, üldbilirubiini aktiivsuse suurenemine viitab maksa sekretoorse funktsiooni rikkumisele. Uriini reageerimine sapiga pigmentidele haiguse alguses on positiivne palju vähem.

    Vähese tähtsuse diagnoosimisel antakse viirusliku hepatiidi ägedad ja kroonilised vormid kõhuõõne organite ultraheliuuringule. Selle meetodi abil saavad arstid kindlaks teha selliseid muutusi, mida välise uuringu käigus ei tuvastata: suurenenud maks, maksaensüümide kitsenemine, seinte induratsioon ja paksenemine, sapipõie ja pankrease põletiku tunnused, dilateeritud portaal ja põrnaveenid, suurenenud põrn, laienenud lümfisõlmed. Kõige olulisem diagnostiline meetod, eriti krooniline hepatiit, on maksa biopsia.

    Meetodid antikehade ja antigeenide tuvastamiseks veres ja teistes kehavedelikes hõlmavad seroloogilist diagnostikat. Viirusliku hepatiidi varajaseks diagnoosimiseks, kaasaarvatud antikehalised asümptomaatilised vormid, määratakse seerumis viiruse valkude (antigeenid, mida nimetatakse ka viirushepatiidi markeriteks) või nende antikehade määramiseks immunoensüümide analüüsi (ELISA) abil. Lisaks sellele täiendatakse ELISA-d võimaluse piires polümeraasi ahelreaktsiooniga (PCR), mis võimaldab kindlaks teha viirusnukleiinhapete esinemist B-hepatiidi viiruse, teise hepatiidi RNA viiruste seerumis, mis on eriti tähtis õigeaegse ravi alustamiseks.

    Ensüümseotud immunosorbentanalüüs (ELISA) on universaalne immunoloogilise diagnoosi meetod, mida praktikas laialdaselt kasutatakse. Selle eesmärk on tuvastada viiruslikud valgud (antigeenid) või antikehad, mis tekivad immuunsüsteemis vastusena viiruste tungimisele inimkehasse. Need valkud on omapärased markerid (sildid) või märgid, mille olemasolu võimaldab teil teha täpset diagnoosi, hinnata haiguse olemust ja aidata arstil valida õige ravi. See meetod põhineb hästi tuntud antigeeni-antikeha interaktsioonil.

    Antigeenide tuvastamiseks toodavad mitmesugused kaubandusettevõtted katsesüsteeme, mis on 96-süvendiga polüstüreenplaadid. Kaevude põhjas on antikehad eelnevalt adsorbeeritud ("õmmeldud") ühe või teise patogeeni antigeeni, näiteks hepatiit B viiruse - HBs-antigeeni pinnaantigeeni.

    Esimeses etapis lisatakse igasse süvendisse proovi, näiteks patsiendi vereseerumit erinevatel lahjendustel, mis sisaldavad veel määramata viiruse valku (antigeeni). Kui see valk (antigeen) "tunnustab" selle antikeha, siis nende sidumine tekib. See tähendab, et patsiendi seerum sisaldab antigeeni, mille antikehad sorteeritakse plaadi põhjas.

    Selle reaktsiooni tulemuste nägemiseks on järgmine etapp, milles antikehale seostub "antigeeni-antikeha" kompleksile lisatud ühend. See ühend sisaldab ensüümi nagu mädarõika peroksüdaas. Kui sellele lisatakse substraat, lõhustatakse viimane, millele järgneb lahuse värvimine kollakaspruuni värvusega.

    Järgmisel etapil pestakse igast auku põhjalikult reageerimata komponentidest. Nendes süvendites, kus antigeen, nagu meie juhul, on täiesti seotud antikehaga, ei saa see enam ühendatud ühendiga toimida.

    Seepärast eemaldatakse see pesu pesemise ajal. Seerumi lahjendamisel väheneb antikehade sisaldus ja nad ei suuda antigeeni täielikult siduda. Neis süvendites seotakse ensüümi sisaldav ühend antigeeniga ja jääb pärast pesemist kaevu. Järgmisel etapil lisage substraat ja vaadake reaktsiooni tulemusi, mida hinnatakse visuaalselt või kasutage spektrofotomeetrit.

    Seega leidsime, et patsiendi seerumiproov sisaldab HBs antigeeni. Saate teada saada ka selle koguse või tiiteri, määrates seerumi viimase lahjenduse, kus ilmnes kollane värv. Mida suurem lahjendusaste, seda suurem on viirus patsiendi veres.

    Samuti võib kindlaks määrata viirusliku hepatiidi konkreetse haigusetekitaja antikehade olemasolu. Ainult nendel juhtudel kasutatakse süvendite põhjaga "õmmeldud" diagnostilisi katsesüsteeme, mitte antikehadega, vaid teadaolevate antigeenidega. Selle meetodi eelised on suure tundlikkusega ja spetsiifilisusega, reaktsioonivõimega, võimalusega uurida samaaegselt suurt hulka patsiente. Meetodi puudujääkide hulka kuuluvad vajadus spetsiaalsete kallite seadmete ja vastava personali kvalifikatsiooni järele.

    Polümeraasi ahelreaktsiooni meetod

    Kaasaegses laboratoorses diagnostikas on PCR eriline koht. PCR-meetod tõstis kliinilise laboratoorse diagnostika põhimõtteliselt erinevat kõrgust - nukleiinhapete (DNA ja RNA) määramise taset, mis võimaldab nakkuslikku ainet või geneetilisi mutatsioone vahetult avastada igas bioloogilises keskkonnas.

    Selles PCR-meetodis on teoreetiliselt võimalik tuvastada üks soovitud nukleiinhappemolekul miljoneid teisi. Kliinilise meditsiini vaatepunktist on nukleiinhappe definitsioon samaväärne patogeeni avastamisega uuringu objektis.

    Bioloogiast on teada, et nukleiinhapetel (DNA või RNA) omane reproduktsioon (paljunemine). See põhimõte põhineb PCR-i meetodil, kui seda protsessi tehakse laboris kunstlikult. Selleks eraldatakse patsiendilt saadud koeproovist (näiteks viirusliku hepatiidi kahtluse korral) nukleiinhape.

    See täidab mingi "maatriksi" rolli, millele süntees viiakse läbi. Nukleiinhape omab oma "jäljendit" - unikaalset nukleotiidide järjestust, millest see koosneb. Iga patogeeni jaoks on sellist järjestust uuritud, on koostatud mingi "kaart".

    PCR-i kõige olulisem element on praimer (DNA-d, mis on komplementaarsed (vastavad proovile eraldatud nukleiinhapete piirkondadele). Praimerid tagavad reaktsiooni käivitumise ja spetsiifilisuse.

    Seega koosneb PCRi katsesüsteem testproovi nukleiinhapete, praimerite ja spetsiifiliste ensüümide (polümeraasid) segust, mille kaudu see reaktsioon on võimatu. PCR-analüüs hõlmab mitu tsüklit (astmeid), mille tulemusena saadakse malli nukleiinhappe tuvastatava piirkonna täpsed koopiad. Neid tsüklit korratakse 30-50 korda vastavalt antud programmile. Selle reaktsiooni lõppsaadust tuntakse ära geel-elektroforeesiga.

    "Tundlikkuse" indikaator

    Mõni laborianalüüsi diagnostilise efektiivsuse üks tähtsamaid kriteeriume on tundlikkuse indikaator. See peaks eristama analüütilist ja diagnostilist tundlikkust. Analüüsitav tundlikkus PCRi suhtes on DNA või RNA koopiate minimaalne arv 1 ml proovilahuses, mida saab määrata selle testimissüsteemi abil.

    Enamik kommertskatsesüsteeme suudavad tuvastada soovitud nukleiinhapet bioloogilises proovis, isegi kui selle kontsentratsioon on mitusada eksemplari 1 ml proovi kohta. See on seotud üldise olukorraga, mis määrab kindlaks mis tahes laboratoorsete diagnostiliste meetodite või testimissüsteemide kliinilise sobivuse - meetodi diagnostiline tundlikkus ei tohiks olla väiksem kui 95-98%.

    Laboratoorset tõhusust käsitlev teine ​​universaalne kriteerium on "spetsiifilisus", mis määratakse tervete inimeste osakaaluga, kellel on tõeliselt negatiivsed analüüsitulemused. PCR-meetodil on kõrgeim spetsiifilisus, mis ulatub 99-100% -ni.

    PCR-i diagnostiline tundlikkus ja spetsiifilisus on võrreldavad ja sageli suuremad kui need, mida pakuvad muud meetodid, mis on nakkushaiguste diagnoosimisel "kullastandardid".

    PCR-analüüsi tulemusi saab saavutada ühe tööpäeva jooksul, samal ajal kui analüüsideks võetud proove saab säilitada (koguneda) isegi mitme nädala jooksul, järgides samal ajal asjakohaseid temperatuuri norme. Mitme välisriigi uurimiskeskuses hiljuti läbiviidud mitmesuguste diagnostiliste meetodite tundlikkuse kokkuvõte näitas, et ELISA-l on tundlikkus 50-70% ja PCR - 90-100%.

    PCR-ga võrreldes ELISA-ga ja teiste meetoditega on kaks olulist eelist: kõrge tundlikkus ja lühike analüüsi aeg, st arst ja patsient on uurimistulemuste saamiseks asjakohased.

    Enne teiste kliinilise laboratoorse diagnostika meetodeid on PCR-i eelised:

    - meetod võimaldab DNA-d ja RNA-d tuvastada, isegi siis, kui teiste meetodite kasutamisel on võimatu seda teha;

    - meetodil on kõrge spetsiifilisus (kuni 100%). Selle põhjuseks on asjaolu, et uuritavas materjalis leitakse ainulaadne nukleiinhappefragment, mis on iseloomulik ainult antud patogeenile või geenile;

    - võimalus teha mitte ainult kvalitatiivset (kättesaadavus), vaid ka nukleiinhappe koguse (kontsentratsiooni) hindamist. Praegu on kommertskatsesüsteemide abil võimalik uurida valimis mitu sada eksemplari;

    - meetodi kõrge tootlikkus ja automatiseerimine võimaldavad arstil saada uuringu tulemusi ja jagada nendega patsiendi analüüsi päeval;

    - PCR võimaldab tuvastada patogeeni organismis enne haiguse arengut, näiteks inkubatsiooniperioodil;

    - PCR-analüüsi tegemiseks piisab minimaalsest proovi mahust (kuni mikrolitrid);

    - PCR-analüüs võimaldab teil ühe proovi samaaegselt diagnoosida mitut patogeenset ainet, ilma et see mõjutaks tulemuse tundlikkust või spetsiifilisust;

    - PCR-i saadud tulemusi saab sisestada arvutiandmekandjatele või pildistada sõltumatute ekspertide edasiseks hindamiseks.

    Hoolimata eelpool toodud eelistest ei ole PCR-meetodil veel mingeid puudusi, mida tuleks uurimistulemuste hindamisel arvestada:

    - laboratoorsete seadmete kõrgeimad nõuded, katsesüsteemide kvaliteet ja rangem uurimistöö eeskirjade järgimine, et vältida valesid tulemusi. Analüüside kvaliteedi probleemi lahendamine on võimalik vastava personali kvalifikatsiooniga ja labori kohustusliku sertifitseerimisega;

    - Positiivse PCR-i tulemuse ebaselge hindamine. See on see asjaolu, et sageli on praktikute põhjendamatu väide, et tekib saadud tulemus ja PCR-meetodi tõhusus. Näiteks üksikisikute puhul, kelle patogeeni DNA tuvastatakse veres PCR-meetodi abil, haigus ei pruugi kliiniliselt areneda.

    Selles olukorras peaks PCR-i analüüsi hindamisel rääkima nakatunud patsiendist, mitte nakkushaiguste tekkimisest. PCR-analüüsi meetod võimaldab kindlaks teha patogeeni olemasolu või puudumise, vastab suures osas küsimusele "ravida mitte ravida" ja võimaldab ka hinnata ravi kvaliteeti, jälgides patogeeni olemasolu või puudumist. Arst, kes hindab PCR-analüüsi tulemust, mõistab, et see tulemus ei ole ainus argument töötlemise alustamise otsuse langetamiseks või selle keeldumiseks.

    Iga liigi haigustekitajat viirushepatiidi katsesüsteemi, kuid kõige väärtuslikum PCR meetodiga tõestas diagnoosimiseks viirushepatiit B, C, D, G. PCR meetodiga on kriitiline diagnoosimiseks hepatiit B See on tingitud asjaolust, et ühed paljudest sorti viirus seal on mutantsed (muutunud tunnustega), mida tavapärased seroloogilised testid ei määra.

    PCR-analüüsi meetod võimaldab tuvastada ja millisel kujul on hepatiit viirus, kas see on võimeline iseseisvat reproduktsiooni või on integreeritud (integreeritud) peremeesraku DNA-sse. See on kriitiliselt kliiniliselt tähtis, kuna selle infektsiooni integreerivas vormis ei ole inimene teistele nakkav (seksuaalse partneri ohutus, kutsealane sobivus, puudub viiruse vertikaalse ülekande oht emalt lootele jne).

    Lisaks sellele ei ole selliste patsientide jaoks viirusevastane ravi näidustatud, pealegi on see isegi ohtlik. Integreeritud infektsiooni korral suureneb aga maksakasvajate tekke tõenäosus järsult (rohkem kui 200 korda). Sellised inimesed peavad läbima tervikliku kliinilise, laboratoorse ja instrumentaalse uuringu vähemalt kord aastas.

    PCR-meetod võib olla arbitraator, mis määrab vajaduse ravi alustamiseks ja selle tõhususe kontrollimiseks. B-hepatiidi viiruse DNA kiire kadumine verest on otsene ja usaldusväärne test viirusevastase ravi edukaks tulemuseks.

    Seega on kõige olulisem analüüs hepatiit B viiruse DNA määramiseks vereplasmas, mis võimaldab koos teiste laboritestidega infektsiooni objektiivselt diagnoosida, määrata nakkusprotsessi olemust, tegutseda teraapia läbiviimise kriteeriumina ja hinnata selle tõhusust.

    PCR-analüüsi meetod ei ole võrreldav C-hepatiidi viiruse poolt põhjustatud infektsiooni diagnoosimise, prognoosi ja viirusevastase ravi edukuse hindamisega. PCR-i kasutamine võimaldab tuvastada C-hepatiidi viirust infektsiooniprotsessi esimesel etapil, sest C-hepatiidi viiruse RNA-d saab tuvastada vereseerumis üks nädal pärast nakatumist. Selle meetodiga määratakse kindlaks selle viiruse geneetilised sordid, mis võimaldavad arstil määrata õiget ravi.

    D viirusliku hepatiidi puhul võimaldab PCR analüüsimeetod määrata patsiendi seerumis viirusliku RNA määramise, samuti B- ja D-hepatiidi segu nakkuste segu. Seetõttu saab seda uurimismeetodit kasutada ravi tõhususe jälgimiseks, haiguse kulgu ja selle tulemuste prognoosimiseks. On oluline, et arst määrab, kas on segatud nakkus, kuna D-hepatiit suurendab B-hepatiidi nekrootilist toimet ja suurendab seega selle arengut.

    Praegu on PCR-analüüsi meetod ainus võimalus C-hepatiidi viirusega nakatumise tõendamiseks.

    Mõelge erinevate hepatiidide diagnostiliste meetodite kasutamisele.

    Hepatiit E. Peamiseks diagnostika märke E-viirushepatiit on: vesi- eeldusel ülekandemehhanismi, patsiendi vanusest 20 kuni 40 aastat, leviku peamiselt piirkondades troopiliste ja subtroopiliste tsooni, kliinilised nähud, nagu A-hepatiidi levimus kerge, registreerimise tõsist ohtu surmav raseduse teisel poolel, raseduse ajal raseduse ajal ja rasedate emadele (esinevad intensiivse hemolüüsi, hemoglobinuuria, ägedate neerudega piisavus ja raske tromboemorraagiline sündroom). Kinnitab antikehade avastamise diagnoosi veres.

    Viiruslik Hepatiit B arstid kahtlustatakse kui haige 45-180 päeva enne haiguse avaldumist vereülekandeid vere või selle komponentide (erütrotsüütide, leukotsüütide, trombotsüütide massi) viidi läbi operatsiooni, uuringud sisemiste mitmekordne süstimiseks (kaasa arvatud ravimi ) või, mis juhtub palju harvemini, kui patsiendil on olnud B-hepatiidi patsiendil seksuaalne või tihe kontakt. Diagnoosi ennetähtaegse kinnitamise kriteeriumiks on hobuste, HBe ja HBc-vastaste antigeenide tuvastamine veres ja viiruslik DNA.

    Akuutse hepatiidi B seroloogilised markerid

    C-hepatiit. Erinevalt B-hepatiidist, mille antigeensete ja antikehade markerite diagnoosimisel võetakse arvesse C-hepatiidi vastu, kogutakse ainult ELISA-vastased antikehad, mis on seotud viiruse madala kontsentratsiooniga veres. Maksa biopsia proovides saab tuvastada C-hepatiidi viiruse antigeene.

    Laboratoorsed diagnoosid hõlmavad kolme peamist tüüpi katseid.

    Ägeda hepatiit C seroloogilised markerid

    Antikehade tuvastamine. Vaatamata kõrgele spetsiifilisusele ei ole tänapäeva diagnostiliste ensüümide immuunanalüsi süsteemid ülemäärase diagnoosimise eest kindlustatud, see tähendab, et viivitusega on positiivsed tulemused. Nende väljajätmiseks on vaja ka hinnanguid, mis põhinevad eri ajavahemike järel saadud analüüside tulemustel. Valenegatiivsed tulemused on võimalikud ka siis, kui viirusevastaseid antikehi ei saa tuvastada, vaatamata viiruse olemasolule organismis. See juhtub järgmistel juhtudel:

    - haiguse esialgne periood;

    - kui patsiendid kasutavad immunosupressante - immuunsüsteemi pärssivad ravimid;

    - teatud genotüüpidega (kõigepealt 3 ja 4).

    Praegu toodetakse kaubanduslikke katse süsteeme, et tuvastada 1. genotüübi hepatiit C viiruse antikehad. Kuid sellised testid ei pruugi olla piisavalt tõhusad antikehade usaldusväärseks tuvastamiseks, kui nad on nakatunud teise genotüübi viirusega. See on väga tähtis piirkondades, kus valitsevad muud tüüpi viirused. Seega on C-hepatiidi tõhusaks diagnoosimiseks vaja väga tundlikku test, mis võib reageerida mis tahes genotüübi hepatiidi C viiruse antikehadega.

    Viirusliku RNA määramine. Diagnostilisel eesmärgil avastati C-hepatiidi viiruse RNA. Praeguseks peetakse seda testi hepatiidi C diagnoosiks "kullastandardiks". Selleks kasutatakse polümeraasi ahelreaktsiooni klassikalist versiooni (PCR) kõige laialdasemalt. Selle abiga on võimalik jälgida viiruse reproduktsiooni, samuti hinnata selle esinemist maksa ja teiste kudede puhul. Määramine RNA kõige sagedamini kasutatav tulemuse kinnitab antikehade tuvastamiseks, kujutades varajane diagnoos akuutne hepatiit (viiruse RNA võib tuvastada juba 7-21 päeva pärast nakatamist, see tähendab ammu enne esimese antikeha), et jälgida rase perinataalse nakkuse ja viirusevastase ravi efektiivsuse jälgimine.

    Nende kahe katse andmed täiendavad teineteist hästi. Mõne akuutse hepatiidi perioodi puhul on iseloomulikud PCR analüüsi positiivsed tulemused ja viirusevastaste antikehade negatiivsed tulemused. Positiivse antikehade testi taustal PCR-analüüside negatiivsed näitajad võivad olla tingitud vähestest (PCR-i ei tuvastata) viiruse kontsentratsioonis veres. Korduvad positiivsed PCR-i vereanalüüsid peegeldavad viiruse aktivatsiooni maksa või teiste organite rakkudes.

    Samuti kasutatakse PCR-i viiruse tuvastamiseks biopsia ajal võetud maksakoes. See annab infektsiooniprotsessi arengust täielikuma teabe, sest viirus on pikka aega hepatotsüütidega peatuda ilma vere sisse sattumiseta või madala kontsentratsiooniga. See esineb kõige sagedamini nakkuse varases staadiumis, kuid seda võib täheldada ka kroonilise hepatiidi korral.

    C-hepatiidi viiruse valkude (antigeenide) määratlus. C-hepatiidi viiruse valkude avastamise peamine võimalus tuvastati vahetult pärast viiruse avastamist immuunfluorestsentsuuringus, mille käigus saadi krooniline hepatiit C-ga inimestelt saadud kudesid, kellel oli kimpidega nakatunud ja nakatunud selle viirusega.

    Seedes sisalduvate viirusvalkude (antigeenide) määramine nende vähese sisalduse tõttu polnud pikka aega võimalik. Alles hiljuti on välja töötatud metodoloogilised lähenemisviisid sisemise C-valgu immuunsüsteemi tuvastamiseks veres ja korraldatud on esimesed kaubanduslikud katsesüsteemid. Nende kasutuselevõtt võimaldab lahendada vastuolulisi diagnostikaküsimusi majanduslikult vähem kui viirusliku RNA määratlus. AlATi taseme määramine on C-hepatiidi liikumise aktiivsuse hindamise kõige odavam meetod. Siiski, kui saadud andmed ei pruugi haiguse raskuse kindlaksmääramiseks piisav olla.

    Maksakahjustusega seotud olulisemat teavet saab määrata, määrates ALAT kontsentratsiooni mitu kuud. Selleks, et saada teavet maksakahjustuse ulatuse kohta, mida teiste uurimismeetoditega ei ole võimalik kasutada, võib arst anda maksa biopsia. Selle menetluse tulemusena saadud andmed võimaldavad otsustada viirusevastase ravi alustamiseks või tühistamiseks.

    Artiklis kasutatakse avatud lähtekoodiga materjale: Autor: Trofimov S. - Raamat: "Maksa haigused"


    Seotud Artiklid Hepatiit