HCV vereanalüüs: mis see on?

Share Tweet Pin it

Vastavalt kaasaegse meditsiini mõistetele levimus ülemaailmselt kuulub viiruste hulka. Inimkonnal oli nende vastu võitlemiseks kasutada palju jõude ja ressursse. Äärmiselt oluline roll kuulub maksa viirushaiguste, eriti viirushepatiidi C diagnoosiks. Selle haiguse tuvastamiseks laboriparameetrite nõuetekohane tõlgendamine on keeruline valepositiivsete vereanalüüside tulemuste suure hulga tõttu. Seetõttu on uuringu õige valik ja tõlgendamine nii oluline.

Viiruse tuvastamise meetodid

C-hepatiidi viirus (hcv) on viiruse ümbrikus väike RNA-ahel, mis kasutab paljunemise jaoks maksa rakkude geneetilist materjali. Otsene kontakt viib:

  • Põletikulise protsessi käivitamine maksas;
  • Maksarakkude hävitamine (tsütolüüs);
  • Immuunmehhanismide käivitamine spetsiifiliste antikehade sünteesiga;
  • Immuunkomplekside autoimmuunne agressioon põletikuliste hepatotsüütide vastu.

C-hepatiidi viirus, mis siseneb kehasse, põhjustab väga aeglast immuunvastust, mis jätab selle pikaks ajaks märkamatuks. Seda haigust tuvastavad sageli ainult maksatsirroosi staadiumid, kuigi kogu aeg viiruse osakesed ja nende vastavad antikehad tsirkuleerivad veres. Selle põhjal põhinevad kõik tuntud meetodid hcv-infektsiooni diagnoosimiseks. Need hõlmavad järgmist:

  1. Laboratoorsed seroloogilised testid;
  2. PCR-diagnostika (polümeraasi ahelreaktsioon);
  3. Kiirtoimingud haiguse kindlakstegemiseks kodus.

Video hepatiit C kohta:

Võimalikud teadustöö näpunäited

Igaüks saab testida hcv-infektsiooni. Selleks erinäidised ei ole vajalikud, välja arvatud isiku soov ravida seda vereanalüüsi. Kuid on olemas nende isikute kategooria, kelle suhtes kohaldatakse kohustuslikke uuringuid. Need hõlmavad järgmist:

  • Vere doonorid;
  • Inimesed, kes said vereülekannet, selle komponente või ravimeid;
  • Maksa transaminaaside (AlAT, AsAT) taseme tõus, eriti pärast eelmist kirurgilist sekkumist, sünnitus ja muud meditsiinilised protseduurid;
  • Arvatav viirushepatiit C või vajadus selle diagnoosi välja jätta;
  • Viirusliku hepatiidi B negatiivsed testid maksa põletiku sümptomite ilmnemisel;
  • HCV-infektsiooni ravi tõhususe jälgimine ja edasise ravi taktikatega seotud küsimuste lahendamine.

Seroloogilise diagnoosi tunnused ja tulemuste hindamine

HVV laboratoorne vereanalüüs hõlmab C-hepatiidi viiruse antigeensete komponentide klasside M ja G antikehade (immunoglobuliinide) avastamist. Selleks kasutatakse ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) ja radioimmunoanalüüsi (RIA). Antikehade avastamise laboratoorseid meetodeid peetakse kõige usaldusväärsemaks, kuna need võimaldavad kasutada reagentidena kõige levinumaid C-hepatiidi viiruse antigeenseid komplekse.

Uuringu käigus kogutakse perifeersest veenist ligikaudu 20 milliliitrit venoosset verd. Seda tsentrifuugitakse ja kaitstakse plasma (vedel läbipaistev osa) saamiseks. Vormitud elemendid ja sete eemaldatakse. Vigastuste tegemise vältimiseks on parem vere võtmine hommikul enne sööki. Mõni päev enne seda on soovitav ravimeid välistada, eriti immuunsüsteemi seisundit mõjutades.

Katsete tulemusi võib esitada järgmiselt:

  1. Hcv on negatiivne. See tähendab, et organismis ei leitud C-hepatiidi viiruse antikehasid. Haigus puudub;
  2. Hcv on positiivne. See viitab C-hepatiidi viiruse antikehade esinemisele uuritud vereproovides. Inimesel, kellel oli see haigus või kellel oli praegu äge või krooniline vorm;
  3. Anti-hcv IgG tuvastati. Sellisel juhul tasub kaaluda kroonilist viirushepatiiti C;
  4. Anti-hcv IgM tuvastati. Selle isoleeritud esinemine näitab ägedat protsessi ja selle kombinatsioon hVV-vastase IgG-ga näitab kroonilise haiguse ägenemist.

Kiire testimise tunnused

Igaüks võib teha vereanalüüsi hcv jaoks ise. See sai võimalikuks viirusliku hepatiidi C kiire diagnoosimise spetsiifiliste testimissüsteemide loomise tõttu. Nende võimekus on väiksem kui laboratoorsed seroloogilised meetodid, kuid see sobib lühiajaliseks võimaliku infektsiooni ligikaudseks määramiseks.

Te saate osta või tellida katsesüsteemi mõnes apteekis. See sisaldab kõike, mida testi jaoks vaja on. Analüüs algab steriilse mahuti avamisega ja kõikide komponentide valmistamisega. Pärast töötlemist antiseptilise sõrmega spetsiaalse salvrätiku abil loputatakse see õrnalt hõõrdkestaga. Pipeti abil kogutakse 1-2 tilka vere ja viiakse testplaadi süvendisse. Veri lisage viaalist viaalile 1-2 tilka reagenti, mis on katse osa. Tulemust tuleks hinnata 10 minuti järel. On äärmiselt oluline, et tulemust ei hinnata pärast 20 minutit valepositiivse tulemuse võimaluse tõttu.

Vereanalüüsi võib tõlgendada järgmiselt:

  1. Tableti aknas oli üks lilla lint (testi negatiivne). See tähendab, et uuritud veres ei leitud hcv-vastaseid antikehi. Mees on tervislik;
  2. Tableti aknas ilmnes kaks lilla riba (testi positiivne). See viitab antikehade esinemisele testitavas veres ja organismi seostumisega viirusliku hepatiit C-ga. Selliste inimeste suhtes rakendatakse rangemaid seroloogilise diagnoosimise meetodeid;
  3. Tableti aknas ei ilmunud ühtki riba. Katsesüsteem on rikutud. Soovitav on uuesti proovida.

PCR-diagnostika tunnused

Polümeraasi ahelreaktsioon on kõige kaasaegsem viis mis tahes rakkude geneetilise materjali avastamiseks. Viirushepatiidi C puhul võimaldab meetod tuvastada viirusosakeste RNA molekule. Seda saab teha kvalitatiivse ja kvantitatiivse meetodi abil. Esimene meetod võib olla informatiivne, kui testitavas veres sisalduvate viirusosakeste arv ei ulatu läviväärtuseni. Teine meetod võimaldab täpselt määrata tuvastatud viiruse ahela RNA ja tundlikumaks.

Analüüsi võib esitada järgmiste tulemustega:

  1. Hcv RNA ei tuvastatud. See tähendab, et uuritavas veres ei esine viiruseosakesi;
  2. RNA hcv tuvastatakse. See viitab hepatiit C infektsioonile;
  3. Kvantitatiivne hcv-testi PCR viiakse läbi, et hinnata patsiendi vere ja viiruse aktiivsust kehas. Kõrge viiruskoormus verd on 600 kuni 700 RÜ / ml. Selle näitaja kohal olevaid indikaatoreid nimetatakse väga kõrgeks, allapoole - väike viiruskoormus verd.

HVV vereanalüüs viirushepatiidi C diagnoosimisel on ainus informatiivne, ligipääsetav ja ohutu meetod diagnoosi kontrollimiseks. Õige tõlgendamine ja selle rakendamise erinevate viiside kombinatsioon minimeerib diagnostiliste vigade hulka.

BEST anti-HCV (komplekt 2) 12x8

Kass Nr 0772

Hind: soovi korral

Saate lisada toote ostukorvi, täpsustades koguse

Pakendi tüüp: pappkarp

Reaktiivikomplekt immunogeensüümide tuvastamiseks klassides G ja M klassi C-hepatiidi viiruse jaoks inimese seerumis / plasmas ja veresaadetes (immunoglobuliinid, interferoonid, krürektsitraat, albumiin). Komplekt 2 on mõeldud 96 määramiseks, kaasa arvatud juhtelemendid - 4 ava iga analüüsi jaoks, samuti ühe riba osaline kasutamine ühe uuringu kohta. Kavandatud käsitsi seadistamiseks automaatsete ELISA avatud tüüpi analüsaatorite abil. See meetod põhineb tahke faasi ELISA-ga, kasutades rekombinantseid antigeene. Positiivsuse koefitsiendi võimalik arvutamine. Kontrollide ja näidiste ruumiline võrdsus. Fermentatiivse reaktsiooni tingimuste standardiseerimine kromogeeniga termostaadis 37 ° C juures. Reaktsiooniaeg: 1 tund ja 20 minutit

Funktsionaalne eesmärk

Soovitatav kontrollida vereandureid, elundeid, inimese kudesid, viirusliku hepatiidi diferentseeritud diagnoosimist

Tehnilised andmed

Komplekt sisaldab:
1. Kokkupandav tablett - 1 tk.
2. Positiivsed ja negatiivsed kontrollid - 2x1 fl.
3. Konjugaat ja lahjendus lahjendamiseks (RK) - 2x1 fl.
4. Lahus seerumi lahjendamiseks (RS) - 1 fl.
5. Fosfaat-soolalahuse puhverlahus, kontsentraat (FSB) - 2 fl.
6. Substraadi puhverlahus (SBR) - 1 fl.
7. Tetrametüülbensidiini kontsentraat (TMB) - 1 fl.
8. Peata reaktiiv - 1 fl.
9. Kasutusjuhend.
10. Kleepimise film.
Uuritud proov: seerumi või vereplasma maht mitte üle 40 μl.
ELISA testide protokollide arv: vähemalt 4.
Säilitamistingimused: temperatuuril +2. 8 ° C kogu etiketil märgitud kõlblikkusaja vältel.
Seadme säilivusaeg on 12 kuud alates tootmise kuupäevast.
Registreeritud Roszdravnadzoris

HCV vereanalüüs

Haiguse levimise viisid võib jagada rühmadeni:

  • Parenteraalne - see tähendab, et nakkus leiab aset meditsiinivahendite, nõelte ja mittesteriilsete maniküürivahendite jagamise kaudu;
  • Seksuaalne - viirus on nakatuda seksuaalsest kontaktist ühe partneri kaudu teisele;
  • Vertikaalne rada on loote haige ema nakatuda.

Hepatiidi tuleks testida inimesed, kes:

  • Ettevalmistus kavandatud haiglaravi;
  • Plaan lapsele;
  • Bilirubiini, ALAT või AST tõus leiti kliinilises analüüsis;
  • Sümptomaatiline pilt sarnaneb C-hepatiidi sümptomitega;
  • Sageli muudab seksuaalseid partnereid või eelistab kaitsmata seksi;
  • Narkootikumide sõltuvus;
  • Kogutud olema doonor;
  • Meditsiini- ja koolieelsetes asutustes töötavad inimesed peaksid igal aastal läbima igakülgse läbivaatuse, sealhulgas sellise analüüsi.

HCV-vereanalüüs on laboratoorsed meetodid hepatiit C diagnoosimiseks, selle toimemehhanism põhineb selliste antikehade tuvastamisel nagu IgG ja IgM, mis hakkavad aktiivselt arenema, kui viiruse antikehad ilmuvad veres. Mis see on? Need on patogeensed mikroorganismid, mis ilmuvad mitu nädalat või isegi mitu kuud pärast inimese nakatumist.

Dekodeerimisanalüüs

Teadlaste HCV struktuuri uurides on teadlased jõudnud järeldusele, et see patogeen on genoom, mis kuulub nii looma- kui ka taime viiruste hulka. See koosneb ühest geenist, mis sobib üheksa valgu kohta. Esimestele on usaldatud ülesanne viiruse sisenemiseks rakku, viimased vastutavad viiruse osakese moodustamise eest ja teised muudavad rakkude loomulikud funktsioonid ise. Need kuuluvad valkude struktuurirühma, kui teised kuus on mittestruktuursed.

HCV genoom on üks RNA ahel, mis on ümbritsetud oma kapslis (kapsiidis), mis on moodustatud nukleokapsiidi valgu kaudu. Kõik see on ümbritsetud valkude ja lipiidide koosseisuga, see võimaldab viirusel edukalt siduda tervet rakku.

Niipea, kui viirus siseneb vereringesse, hakkab see kogu vereringesse läbi kogu keha ringlema. Maksa ajal aktiveerib genoom oma funktsioone ja ühineb maksarakkudega, järk-järgult tungides nendesse. Hepatotsüüdid (nn nendest rakkudest) rikuvad nende toimimist. Nende peamine ülesanne on töötada viiruse vastu, mille kestel on vaja viiruslikke valke ja ribonukleiinhapet sünteesida.

HCV eristab mitu genotüüpi, see tähendab tüvesid. Praeguseks on teada 6 genotüüpi ja igal sellel liigil on oma alamliik. Kõik need on määratud sõltuvalt nummerdamisest 1-6. On olemas teave viiruse lokaliseerimise kohta kogu maailmas. Näiteks on kogu maailmas maailmas 1, 2 ja 3 genotüüpi, 4 on levinud Lähis-Idas ja Aafrikas, 5 Lõuna-Aafrikas ja 6 Kagu-Aasias.

Ravi aluseks peaks olema HCV positiivne vereanalüüs, samuti konkreetne genotüüp.

HCV-de dekodeerimine:

  • Anti-HCV Ig M - hepatiit C viiruse aktiivse replikatsiooni marker;
  • Anti-HCV Ig G - C-hepatiidi viiruse tõenäoline olemasolu;
  • Ag HCV on positiivne tulemus, mis viitab C-hepatiidi viiruse esinemisele;
  • HCV RNA - C-hepatiidi viirus esineb kehas ja toimub aktiivselt.

Valepositiivne tulemus

Veelgi vähem on tõenäoline, et räägitakse valenegatiivsete tulemustest, mis registreeritakse immunosupressantidega patsientidel või nende immuunsüsteemi omadused mõjutavad. Sama tulemus on oodata, kui C-hepatiit on selle esialgses arengujärgus.

Kui teil on arusaamatusi, võite kasutada C-hepatiidi PCR-testi, kui see annab positiivse tulemuse, siis võta viiruse genotüübi määramiseks veel üks katse.

Kehtivus ja kuidas edasi anda

Hepatiit C testimine tähendab patsiendi vere võtmist tühja kõhuga, arvestades, et ta peaks õhtusööma hakkama hiljemalt 8 tundi enne materjali tarnimist. Pärast ärkamist võite jooma ainult veidi tavalist gaseerimata vett. Oleks parem kui uuringu eelõhtul jälgida oma dieeti, muutes selle nii lihtsaks kui lihtsaks. Praetud ja rasvatud toidud tuleks täielikult välistada, samuti alkohol. Tugev füüsiline töö ja sport võivad mõjutada katsetulemuste täpsust, seega proovige seda vältida.

Kui soovite hepatiidi C avastamiseks analüüsida verd, siis tuleb teile öelda, et ravimid võivad tõelisi väärtusi moonutada, seetõttu korraldage uuring kas enne ravimi alustamist või pärast paar nädalat pärast nende tühistamist. Kui ravimi kasutamise lõpetamine ei ole arsti tunnistuse kohaselt võimalik, siis teavitage sellest meditsiinitööstust. Ta peaks märkima kasutatava ravimi nimetuse ja annuse, milles te seda määrati.

Laboratoorne test nõuab seerumit. Kui palju materjale on kehtiv? Neid võib säilitada vähem kui viis päeva temperatuuril vahemikus 2-8 ° C ja rohkem kui viis päeva tingimusel, et säilitustemperatuur on -20 ° C.

HIV-i vereanalüüs on immuunpuudulikkusega inimestele, eriti HIV-iga, kohustuslik.

Portaali haldamine ei soovita kategooriliselt enesehoolitsust ja soovitab arstiga tutvuda haiguse esimeste sümptomitega. Meie portaalis on parimad meditsiinitöötajad, kellele saate registreeruda veebis või telefoni teel. Saate valida endale sobiva arsti ise või võtame selle täiesti tasuta. Samuti on konsultatsiooni hind madalam kui kliinikus ennast ainult siis, kui registreerite meie kaudu. See on meie väike kingitus meie külastajatele. Õnnistagu sind!

Parim anti vgs

Ensüüm immuunanalüüsikomplekt klassi M immunoglobuliinide avastamiseks C-hepatiidi viirusele.

Parim anti-HCV-auto (komplekt 1)
(Automaatseks analüsaatoriks)

Parim anti-HCV-auto (komplekt 2 / Charoite)

Ensüümi immuunanalüüsikomplekt hepatiit C viiruse klasside G ja M immunoglobuliinide tuvastamiseks automatiseeritud ELISA analüsaatorite jaoks.

Parim anti-HCV (Kit 1)

Parim anti-HCV (Kit 2)

Parim anti-HCV (Kit 3)

Parim anti-HCV (Kit 4)

Ensüümi immuunanalüüsikomplekt hepatiit C viiruse klasside G ja M immunoglobuliinide avastamiseks.

Ensüümimonatseutikomplekt klasside G ja M immunoglobuliinide tuvastamiseks C-hepatiidi viiruse (südamiku, NS3, NS4, NS5) individuaalsete valkude suhtes.

Parim anti-HCV-kinnitav test

Ensüümi immuunanalüüsikomplekt hepatiit C viirusega klasside G ja M immunoglobuliinide esinemise jaoks.

VGS AG / AT-IFA-BEST (komplekt 1)

VGS AG / AT-IFA-BEST (komplekt 2)

Ensüümi immuunanalüüsikomplekt C-hepatiidi viiruse antikehade ja HCV tuumantigeeni tuvastamiseks.

Reaktiivikomplekt C-hepatiidi viiruse tuum-antigeeni immunoensüümide tuvastamiseks.

Reaktiivikomplekt, et kinnitada immunoglobuliini abil C-hepatiidi viiruse antikehade esinemist.

Seatud laborikvaliteedi kontrollimiseks ELISA "Seerum, mis sisaldab C-hepatiidi viiruse antikehi".

Anti-HCV seerumi juhtpaneel

Vere-seerumide proovide komplekt, mis sisaldab ja ei sisalda hepatiit C antikehi. HCV-vastaste uuringute sisekvaliteedi kontrollimiseks (õigsuse hindamine).

Anti-HCV standardseerumpaneel

Vere-seerumite proovide komplekt, mis sisaldab ja ei sisalda hepatiit C antikehi.

Anti Vgs positiivne, mida see tähendab

Hepatiit C antikehad ja mida peaksite nende kohta teadma

Kui mitmesugused võõrkehad, nagu viirused, sattuvad inimese kehasse, hakkab inimese immuunsüsteem tekitama selliseid aineid, mida nimetatakse immunoglobuliinideks. Need on spetsiaalsed rakud, mis aitavad organismil viirusega võidelda. Neid nimetatakse hepatiit C antikehadeks. Mida peaksin nende kohta teadma?

Mis on hepatiit C antikehad?

Sellised antikehad tuvastatakse ELISA või skriinimise erimeetodiga, mida kasutatakse selleks, et määrata kindlaks, kas isikul on C-hepatiidi viirus. Sellised C-hepatiidi antikehad kuuluvad kahte klassi:

- nii et need C-hepatiidi antikehad nimetatakse ladina keeles. Samal ajal on need antikehad kokku C-hepatiidi antikehad.

Mida tähendab C-hepatiidi antikehade esinemine?

Tõenäoliselt on kõikidel patsientidel selliste markerite olemasolu kontrollitud, et selgitada välja, kas neil on C-hepatiidi viirus. Kui haigus on juba äge või krooniline, on neil HCV-vastased antikehad, siis saab neid hepatiit C antikehi tuvastada alles pärast 4 või 6 nädala vältel.

On juhtumeid, kui HCV-vastaste antikehade esinemisel inimesed taastusid ilma spetsialistide abita, vaid üksi. Need inimesed leiavad seda turgu 4-8 aasta jooksul pärast nende taastumist. Isegi kui HCV-vastane test on positiivne, pole see ikkagi piisav diagnoosi õigesti kindlakstegemiseks. Kroonilise hepatiidi korral püsivad sellised hepatiit C antikehad pidevalt sekreteerituna ja pärast ravi positiivset tulemust võivad need püsida kehas pikka aega, kuid nende tiitrid hakkavad järk-järgult vähenema.

C-hepatiidi antikehad ja mida ma peaksin nende kohta teadma?

Kõige tähtsam on see, et peate teadma, et sellised antikehad ei suuda end kaitsta infektsiooni enda vastu ja samuti ei suuda nad tagada puutumatust uuesti nakkuse eest.

Samuti on olemas selline asi nagu anti-HCV Spectrum. Need on ka antikehad, lisaks sellele spetsiifilised, sobivad nad selle viiruse individuaalsetele, nii struktuurilistele kui mittestruktuurilistele valkudele. Nende definitsioon on oluline selleks, et hinnata viiruse koormuse, nakatumisaktiivsuse, kroonilise haiguse riski suurust, samuti eristada ägedat või kroonilist hepatiiti ja seda, kui palju maks on juba mõjutatud.

IgM klassi hepatiit C antikehad on selle viiruse antigeenid. Neid saab määrata pärast 6 ja mõnel juhul isegi 4 nädalat kohe pärast nakatumist, mille puhul nende kontsentratsioon võib ulatuda maksimumini. Pärast seda protsessi lõppu hakkab IgM taseme langema, kuid kui infektsioon taasaktiveerub, suureneb see tase uuesti. Seetõttu peetakse selliseid antikehasid otseseks sümptomiks kroonilise või ägeda infektsiooni korral, millel on reaktivatsiooni märk.

HCV - vereanalüüs - mis see on?

Möödunud sajandi lõpu üks kõige keerulisemaid ja levinumaid haigusi on nakatumine C-hepatiidi viirusega. Arenenud riikides on haiguse levimus 2%, samal ajal kui kogu maailmas patsientide koguarv on 500 miljonit inimest. Nakkus tuvastati palju hiljem kui tema eelkäijad: hepatiit A ja B - ja esialgu nimetati seda "ei A- ega B-nakkuseks". Koos narkomaania kasvuga suureneb nakatunute arv igal aastal. Kõigi põhjus on infektsiooni viis: veenisisene ravim.

Samuti tekitab viirus sünnitamise ajal ema lapsele, kui on tekkinud nahakahjustus. Seetõttu on oluline teada, HCV vereanalüüs - mis see on? Raseduse ajal on vaja edastada kõik tulevased ema. See haigus on üks põhjusi, mis vajavad haige maksa siirdamist.

Kuidas tekib C-hepatiit?

C-hepatiidi viirusega nakatumine toimub järgmiselt: haige inimese vere peab sisenema terve inimese verdesse. Esimene verevool kannab terve veres lahustatud viiruse osakesed maksa ja reproduktsioon algab kohe. Sellisel juhul kahjustab inimese maksu kahekordistumist: ühelt poolt kahjustavad maksarakud viiruse enda aktiivsust, teiselt poolt - inimkeha hakkab võitlema: see saadab immuunreaktsioone, nimelt erilisi lümfotsüütide rakke, mida kutsutakse hävitama nakatunud maksarakud.

Viirus tuvastab võõrkeha geneetilise materjali sisuga immuunsüsteemi. Igaüks, kes on sellega kokku puutunud, samuti mõned kohustuslikud lapsed, teab, mida tähendab HCV vereanalüüs. Igaüks, kes selle probleemi vähemalt korra silmitsi seisab, ütleb, et need on väga olulised näitajad nii avastamisetapis kui ka ravi staadiumis.

Millal on HCV-d testitud?

Kui patsiendil on maksa kaebusi, määravad arstid tavaliselt sellise patsiendi HBS ja HCV vereanalüüsi. Selleks, et teha kindlaks, kas haigus on põhjustatud C-hepatiidi viiruse või muude sellega seotud haiguste esinemisest veres, on vajalik HCV-vereanalüüs. Mis see näitaja on?

Analüüs näitab antikehasid inimese veres, mis võivad kuuluda ühte kahest klassist:

  • HCV antikehad. Need on peamine marker. Infektsiooni esinemist organismis kinnitab HCV RNA tuvastamine. Need antikehad leitakse taaskasutamise etapis ja võivad samuti jääda veres 1-4 aastat. Kroonilise hepatiidi esinemise peamine näitaja on HCV-vastase antikehade suurenemine.
  • IgA, IgM, IgG sisaldus seerumis. Nende markerite kasv näitab alkoholiga kokku puutunud maksakahjustusi, pilleerivat tsirroosi ja mõnda muud haigust.

Millised markerid räägivad?

Alates hetkest, kui antigeen siseneb inimkehasse 4-5 nädala jooksul, saab seda tuvastada HCV vereanalüüsiga. See on C-hepatiidi viirus, mida ei saa täpselt öelda. Need andmed on vajalikud selleks, et arst saaks otsustada sellise patsiendi viirusevastase ravi vajaduse üle. Eriti, kui veres leitakse vähem kui 750 RNA koopiat 1 ml veres, tähendab see minimaalset viiruse rünnakut.

C-hepatiidi antikehad kuuluvad alati ühte kahest klassist, G või M, mis on vajalikud HCV-le vereanalüüsi lisamiseks. Krüpteerimine seletab neid parameetreid nagu immunoglobuliini klass G (IgG) ja M (IgM). Esimese markeri positiivne tulemus ei näita kindlat diagnoosi. Klassi G immunoglobuliin jõuab maksimaalse jõudlusega 5-6 kuud alates kehas nakatumisest ja püsib kroonilise hepatiidiga sama.

M-klassi immunoglobuliine saab kindlaks määrata juba 1-1,5 kuu jooksul pärast nakatumist ja saavutab maksimaalse kontsentratsiooni väga kiiresti. On veel üks näitaja - anti-NS3, mis oma kõrge jõudlusega on selge eelkäija akuutse protsessi olemasolu organismis.

Kuidas HCV analüüsiks veri annetada?

HCV antikehade olemasolu kindlakstegemiseks laboris verre annetamiseks ei ole konkreetseid juhiseid. Ainuke arstide soovitus: tara tuleks teha tühja kõhuga. Veri võetakse patsiendi veenist, mida testitakse ühekordselt kasutatava süstlaga.

Näitajate tõlgendamine

Nii väidetavalt patsient tegi HCV vereanalüüsi. Millised on need plussid ja miinused selle tulemusena? Järgmine tabel vastab sellele.

HCV testide tüübid

HCV-d määravad kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed testid (vereanalüüs). Mis see on?

Kvantitatiivseid katseid rakendatakse, kui alumine piir jõuab 500 RNA koopia milliliitrisse või 200 ühikut milliliitri kohta. Need testid määravad kindlaks HCV-RNA. Mõõtmised viiakse läbi kaks korda, kuna andmed erinevad sageli. Positiivse anti-HCV ja kvantitatiivsete testide korral on positiivne tulemus ligikaudu 75% juhtudest. Lisaks sellele võib seda tulemust saada peaaegu 95% -l juhtudest ägeda või kroonilise C-hepatiidi korral. Neid katseid kasutatakse ägeda infektsiooni diagnoosimiseks, samuti immunodefitsiitidega patsientidel, kelle antikehade test andis negatiivse tulemuse, kuid on olemas kahtlus HCV-nakkuse suhtes.

Kvalitatiivsed testid on tundlikumad, alumine piir on 100 RNA koopiat milliliitri kohta. Kasutatakse ägeda HCV nakkuse diagnoosimise kindlakstegemiseks, HCV vereanalüüsi tegemiseks. Positiivset tulemust saab tuvastada juba esimese kahe nädala jooksul pärast nakatumist. Kvaliteeditesti on erinev, kuna see võib anda ka vale-positiivse või vale-negatiivse tulemuse.

HCV vereanalüüs: mida see tähendab ja millal see on ette nähtud?

Hepatiit C viiruse diagnoosimise üks meetoditest on HCV-i vereanalüüs. See test on ette nähtud C-hepatiidi sümptomite, maksa transaminaaside sisalduse suurenemise ja viirusliku hepatiidi viirusega nakatunud inimeste uuringuteks. Viimasel juhul tehakse koos HCV vereanalüüsiga HBs Agi vereanalüüs.

HCV (C-hepatiidi viiruse hepatiit C viirus) kuulub flaviviiruste perekonda. Seda avastati 1988. aastal firma Chiron Ameerika biotehnoloogia firma teadlaste rühm. HCV genoomi esindab RNA molekul, seega on viiruse mutatsioonikiirus väga kõrge. C-hepatiidi viirusega inimestel avastatakse viirusosakesed, mille genoomid erinevad üksteisest 1-2% võrra. See viiruse populatsiooni omadus võimaldab seda edukalt paljuneda vaatamata inimese immuunsuse kaitsva reaktsioonile. Viiruse genoomide erinevused võivad mõjutada infektsiooni kulgu ja ravi tulemusi.

Maailma Tervishoiuorganisatsiooni andmetel on täna HCV viirusega nakatunud umbes 150 000 000 inimest ja igal aastal surub C-hepatiidi viirus enam kui 350 000 patsienti.

Hepatiit C ülekandemeetodid

C-hepatiidi viirus edastatakse nakatunud verest, näiteks vere doonorilt või elundist retsipiendile, nakatunud ema lapsele seksuaalvahekorda kasutades mittesteriilseid süstlaid meditsiinilistes rajatistes ja instrumentides tätoveeringuteks ja kirurgitamiseks salongides.

Haigus võib esineda ägedal kujul, mis kestab mitu nädalat ja on krooniline, mis võib põhjustada vähki või maksatsirroosi.

HCV vereanalüüs: mida tähendab immunoloogia?

HCV vereanalüüs põhineb IgG ja IgM klasside spetsiifiliste immunoglobuliinide tuvastamisel, mistõttu seda tüüpi uuringuid nimetatakse mõnikord HCV-vastaseks vereanalüüsiks. Immunoglobuliinid on immuunsüsteemi spetsiifilised valgud, need toodavad B-lümfotsüütidest vastusena välisvalkude tuvastamisele organismis. Kui C-hepatiidi viirus on nakatunud, toodetakse immunoglobuliine viiruse ümbrise valkudele, nukleokapsiid-tuumvalgule ja mittestruktuursetele NS-valkudele. Esimeste viiruse antikehade esinemine ilmneb mitte varem kui 1-3 kuud pärast nakatumist. Arst saab määrata tuvastatud antikehade abil infektsiooni faasi (ägeda, latentse või reaktiviseerimise). Hepatiit C-spetsiifilisi antikehi saab tuvastada ka 10 aasta jooksul pärast haigust, kuid nende kontsentratsioon on madal ja nad ei saa kaitsta viiruse taasinfektsiooni eest.

Analüüsitulemuste tõlgendamine

  • Positiivne HCV vereanalüüs. Mida see tähendab? See tulemus näitab hepatiit C haigust ägedas või kroonilises vormis või varem üleantud haigust.
  • Negatiivne HCV vereanalüüs. Mida see tähendab? Viirus ei esine hepatiit C-viirust või hiljuti on nakatumine tekkinud, mistõttu pole veel antikehi. Mõnedel patsientidel ei toodeta viiruse antikehi üldse. Seda haigusseisundit nimetatakse seronegatiivseks, seda esineb 5% juhtudest.
  • HCV RNA PCR ei näinud viirust, eelnevalt on saadud positiivne HCV-i vereanalüüs. Mida see tähendab? HCV vereanalüüsi tulemus oli valepositiivne, selle põhjuseks võivad olla teatavad infektsioonid, neoplasmid, autoimmuunhaigused.

HCV antikehad tuvastatakse veres, mida see võib tähendada?

Natalka

Hepatiit C viiruse antikehad (HCV-vastased antikehad) on C-hepatiidi nakkuse diagnoosimise meetod, tuvastades nii IgG kui ka IgM-i antikehade verd (C-hepatiidi viiruse valkude jaoks toodetud spetsiifilised antikehad ELISA-ga). Tavaliselt puudub veres C-hepatiidi viiruse antikehad.
Kogu antikehade (anti-HCV) tuvastamine võimaldab hepatiit C diagnoosi alustada pärast nakatumist 3-6 nädalat või rohkem. Siiski on antikehade tuvastamine ELISA abil skriinimine ja see ei ole piisav viirushepatiidi C diagnoosimiseks ja nõuab kinnitamist immunoblotmeetodiga.

Julia

Erinevalt HBV-st, mille antigeensete ja antikehade markerite diagnoosimisel võetakse arvesse HCV-ga, tuvastatakse ELISA-ga ainult antikehad. HCV antigeenid, kui nad sisenevad verd kogustes, mis on vaevu lõksus. Maksa biopsia proovides saab immunogistokeemilisi meetodeid kasutades tuvastada HCV antigeene. See piirab oluliselt võime hinnata nakkusprotsessi kulgu ja aktiivsust.
Hiljuti on ilmnenud näited uue lähenemisviisi väljatöötamise kohta HCV antigeenide märgistamiseks veres. Esimene etapp on antigeenide vabastamine rakulistest struktuuridest seerumi lüüsimisega, teine ​​on antigeenide hõivamine spetsiifiliste monokloonsete antikehadega. Selle meetodi kasutuselevõtmine kliinilises praktikas on mõeldud selleks, et oluliselt rikastada HCV-de diagnoosimise ja jälgimise võimalusi.
Enamik HCV-vastaseid (välja arvatud klassi M coreAg antikehad) ei viita jätkuvale viiruse replikatsioonile, ei iseloomusta selle aktiivsust ja võivad vastata postinfektsioonile. Me peame kaaluma ka seda, et isikud, kellele olid vereülekandeid nakatunud vere, saab tuvastada anti-HCV doonori ühe märge ei pruugi viidata Vereülekandega HCV infektsiooni. HCV-vastane näidustus lahendab peamiselt etioloogilise diagnoosi probleemi, kuid ei iseloomusta nakkuse kulgu (äge, krooniline) ega lahenda prognoosi probleemi. Kroonilise HCV-ga patsientidel leitakse anti-HCV sisaldus veres mitte ainult vabas vormis, vaid ka ringlevate immuunkomplekside koostises. Nende sisu on suhteliselt suurem HBV / HCV segatüüpi hepatiidi tekkega.
Antikehad toodetakse HCV struktuurse ja mittestruktuurse piirkonna kõikides viirusvalkudes. See määrab nende ebavõrdse spetsiifilisuse ja seega erineva disaini teabe sisu ekraanil. HCV-vastase antikeha skriinimiseks kasutatakse ELISA-meetodit ja kinnitusanalüüsina kasutatakse immunoblot-meetodit (RIBA). Esimene katsesüsteem, mis põhineb ELISA-ga C-100-3 antikehade tuvastamisel, muutus doonorite valimisel kiiresti üldlevinud kliinilis-epidemioloogilises praktikas. Kuid see võimaldas lüüa vööndis antikehasid, mis iseloomustavad ainult 12% viiruse polüproteiini ja ainult mittestruktuurilises piirkonnas (NS3, NS4). Lisaks ei ühti kunstlik rekombinantse antigeen C-100-3 täielikult looduslike viirusvalkudega, mis määrab selle nõrga immunogeensuse.
C-valgu (südamiku Ag) antikehad antigeeni C-100-3 abil ei jää üldse. Kõik see määrati kindlaks HCV-vastase antikehade madala spetsiifilisusega ja suure hulga vale-negatiivsete tulemustega, eriti kroonilise HCV faasis. Raske hüpergammaglubulinaemiaga patsientidel on vastupidi C-100-3 test sageli valepositiivseid tulemusi. Antikehade C-100-3 kuvamiseks tekivad kroonilise HCV diferentsiaaldiagnostika probleemi lahendamisel autoimmuunse hepatiidi, krüoglobuliinijuhtimise ja kollageenhaiguste korral spetsiifilised raskused.
Teise põlvkonna katsesüsteemid võimaldavad hõivata antikehasid valkudele erinevates genoomi valdkondades, mitte ainult mittestruktuurilist, vaid ka struktuurilist piirkonda. Nende eeliseks olid eelkõige kõrge spetsiifilisus, samuti HCV antigeenset spektri täielikum esindatus. Teise põlvkonna katsesüsteemide kasutamine võimaldas märkimisväärselt parandada doonorite valimist ja vähendada transduktsioonijärgse HCV kujunemise ohtu.
Kuid teise põlvkonna katsesüsteemide kasutamisel ei välistata vale negatiivseid tulemusi, eriti HCV genotüüpidega patsientidel, mis on selles piirkonnas ebatavalised. Kolmanda põlvkonna kõige täpsemad katsesüsteemid.
Uuringute informatiivsust suurendatakse märkimisväärselt, viies läbi ulatusliku hinnangu mitmesugustele anti-HCV-dele, mis on tingimata dünaamilise kontrolli all. See seiresüsteem võimaldab teil täheldada muutusi antikehade suhetes erinevate HCV antigeenidega.

Evgeny Stefantsov

Poeg leidis AT k HCVAg. Ja HB s Ag ei tuvastata, kas viga võib olla. Ja mis on parem anda analüüsi jaoks täpset diagnoosi? 27-aastane poeg ei kasutanud seda ravimit kunagi. Vang annetati Tambovis HIV-i ja jõe jaoks 2 korda. P. Inzhavino armee arstlikul läbivaatusel ja seejärel pane see diagnoos.

Hepatiit Anti HCV-kogus (positiivne) Anna nõu, palun!

Meie naise ja mina uuriti, testid näitasid hepatiidi viirust. Mul on Anti HCV-positiivne. Ülejäänud teine Mu naine ka. Kui ohtlik on, kui palju aega paraneda? Kui palju see maksab? Mis tööga on, kas on võimalik töötada raviperioodi jooksul? Tulge suurepäraselt!

P kuni

Anti-HCV esineb mõlemas ägises (neid saab tuvastada juba 4-6 nädala möödumisel nakkusest) ja kroonilise hepatiidi korral. Anti-HCV kogus esineb ka neil, kellel on olnud C-hepatiit ja kes on taastunud iseseisvalt. Selline marker võib sellistesse inimestesse pärast taastumist olla 4-8 aastat või rohkem. Seepärast ei ole diagnoosi tuvastamiseks positiivne HCV-vastane test. Taustal krooniline infektsioon kokku antikehadest pidevalt ning pärast edukat ravi säilitada pikka aega (peamiselt tänu anti-HCV core IgG, kirjutatud need allpool), ja nende pealkirjad on järk-järgult vähenenud.

Catherine Gustova

C-hepatiit suunatakse vere ja kehavedelike kaudu parenteraalselt, seksuaalselt ja transplacentaalselt. Kõrge riskiga rühmad on üksikisikud, kes praktiseerivad intravenoosse narkootikumide kuritarvitamist, promiscuous sexi, samuti meditsiinitöötajaid, patsiente, kes vajavad hemodialüüsi või vereülekannet, kinnipeetavatele. Injumiseks kehasse saabub HCV vere makrofaagid ja maksa hepatotsüüdid, kus see kordub. Maksa kahjustus tuleneb peamiselt immuunsuse lüüsist ja viirusel on otsene tsütopaatiline toime. Viiruse antigeeni sarnasus inimese histoloogilise kokkusobivuse süsteemi antigeenidega põhjustab autoimmuunsete (süsteemsete) reaktsioonide esinemist. Programm HCV-nakkuse võib esineda ilminguid süsteemne autoimmuuntüroidiit, Sjögreni sündroom, idiopaatiline purpur, glomerulonefriit, reumatoidartriit ja teised. Võrreldes teiste viirushepatiit, hepatiit C on vähem ere kliiniline pilt muutub sageli krooniliseks. In 20-50% juhtudest kroonilise C-hepatiidi tulemused arengus maksatsirroosi ja 1,25-2,50% - arengule maksarakuline vähk. Autoimmuunhaigused esinevad sagedasti.
Ma tahan sind häirida! C-hepatiit pole kõdjas nagu HIV-nakkus! Sa võid elada koos temaga aastaid! Kuid tsirroos võib esineda varem või hiljem. See sõltub sellest, keda te töötate. Kas teie diagnoos teie tööd mõjutab, pole teada. kuid teie kolleegid ei räägi sellest diagnoosist paremini.

Kostarev konstantin

Väärib märkimist, et ainult umbes 20% inimestest, kes on korduvalt hepatiit C-ga nakatunud, on nakkusega toime tulemas. Seetõttu kahjuks viitab enamikul juhtudel HCV antikehade esinemine kroonilise viirusliku hepatiit C (CVHC) olemasolule.

Olga

Ülaltoodu kohta lisage, et pärast antikehade tuvastamist on vaja analüüsida viiruse esinemist veres. Seda analüüsi nimetatakse HCV RNAks PCR-ga, kui see on positiivne, siis on vaja genotüpiseerimist, st viiruse genotüübi tuvastamist (ravi aeg ja maksumus sõltuvad sellest). Kui see on negatiivne, siis võib-olla olete saanud 15-20% neist õnnelikest, kes on ennast paranemas. Aga sel juhul peate olukorda kontrollima ja vähemalt kord aastas peate analüüsi tegema PCR-iga.
Kui teil on endiselt hepatiit, ei tohiks teil olla ärritunud. Ta on edukalt ravitud. Ravi on keeruline, kuid seda on võimalik töötada, kui töö ei kuulu ohtlike hulka, mis nõuavad erilist kontsentreeritust. Sa ei tohiks lihtsalt lennata kosmosesse)))

Ensüümimonoomiaanalüüsikomplekt klasside G ja M immunoglobuliinide tuvastamiseks C-hepatiidi viiruse (südamiku, NS3, NS4, NS5) individuaalsete valkude suhtes (parim anti-HCV spekter)

Säilitustingimused Reaktiivikomplekt immunogeensüümide tuvastamiseks klasside G ja M immunoglobuliinide puhul C-hepatiidi viiruse (südamiku, NS3, NS4, NS5) individuaalsete valkude tuvastamiseks (parim anti-HCV spekter)

Hoida lastele kättesaamatus kohas.

Tellige meditsiinitooteid apteekides:

Jäta oma kommentaar

  • Esmaabikomplekt
  • Internetipood
  • Ettevõttest
  • Võta meiega ühendust
  • Kirjastaja kontaktid:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • E-post: [email protected]
  • Aadress: Venemaa, 123007, Moskva, st. 5. põhikool, 12.

Oleme sotsiaalsed võrgustikud:

© 2000-2018. MEDIA VSIA ® RLS ® REGISTREERIMINE

Kõik õigused kaitstud.

Materjalide kaubanduslik kasutamine ei ole lubatud.

Tervishoiutöötajatele mõeldud teave.

Hepatiidi C laboratoorsed diagnoosid

Mihhailov Mihhailov, Epidemioloogia ja Mikrobioloogia Instituut. N.F. Gamalei RAMS, Moskva

C-hepatiidi diagnoosimisel tuleb kaaluda järgmisi kõige olulisemaid tegureid:

  • "maksa" ensüümide aktiivsuse näitajad;
  • C-hepatiidi viiruse (HCV) ja teiste hepatotroopsete viirustega nakatumise markerite olemasolu või puudumine;
  • epidemioloogilise ajaloo andmed;
  • patsiendi kliinilise läbivaatuse tulemused. Nende tegurite põhjalik arvestamine võimaldab selle haiguse diagnoosimist kõrge usaldusväärsusega. Laboratöötaja peab pakkuma objektiivset teavet viiruse antigeenide ja antikehade, samuti HCV RNA tuvastatud spektri kohta, võimaldades oma probleemide lahendamisel kliinilistile, vereülekande teenistujatele ja epidemioloogidele. Enamasti on see:
  • HCV-ga isikute identifitseerimine transfusiooni järgse hepatiidi C taseme vähendamiseks;
  • ägeda ja kroonilise C-hepatiidi diagnoosimine ja eristamine;
  • haiguse prognoos;
  • ravi määramine, hindamine ja prognoosimine;
  • HCV leviku ulatuse uurimine elanikkonna ja erinevate elanikerühmade lõikes.
    Sel juhul on laboratooriumitöötajate põhitöödeks järgmised:
  • HCV infektsiooni markerite identifitseerimiseks kõige informatiivsemate meetodite väljatöötamine ja valimine;
  • saadud tulemuste objektiivse hindamise kriteeriumide kindlaksmääramine;
  • optimaalsete laboriuuringute algoritmide väljatöötamine;
  • HCV infektsioonimarkerite avastamise kvaliteedi parandamise süsteemi rakendamine.

    Hepatiidi C laboratoorset diagnoosi aluseks on HCV teadmised, selle replikatsioon, teave infektsioonimarkerite esilekerkimise ja kadumise dünaamika kohta, samuti antigeenide, antikehade ja nukleiinhapete avastamiseks kasutatavad kaasaegsed immunokeemilised ja molekulaarbioloogilised meetodid.

    C-hepatiidi viirus. HCV leiti esmakordselt 1988. aastal, kui M. Houghtoni ja Choo Q.L juhitud teadlaste rühm rakendas uusi molekulaarbioloogilisi uurimismeetodeid, viiruse genoomi [I] klooniti ja sekveneeriti. C-hepatiidi viiruse osakesel on sfääriline kuju keskmise läbimõõduga umbes 50 nm [2,3]. Pärast viiruse avastamist on tehtud viiruse hepatiit C viiruse struktuuri visuaalselt tuvastamiseks ja uurimiseks tehtud katsed, kuid nende uuringute kohta ei ole veel hästi dokumenteeritud tulemusi, mis võivad olla tingitud viiruseosakeste kogunemise keerukusest vajalikes kogustes.

    VGS on ainus Flaviviridae perekonna hepatsiviiruse perekonna liige, mis sisaldab viiruseid nagu buli diarröa viirus ja sigade katk (Pestivirus perekond) ja kollapalaviku viirus, Denge viirus ja GB viirused: GBV-A, GBV-B ja GBV-C / HGV (perekond Flavivi-rus). C-hepatiidi viiruse struktuuri võib kujutada järgmiselt (skeem nr 1). Nukleokapsiid sisaldab C-hepatiidi viiruse RNA-d. Altpoolt on nukleokapsiid kaetud lipiidmembraaniga, ümbritsetud sellega ümbritsetud proteiinidega, mida kodeerivad HCV RNA. Viiruse genoomi esindab üheahelaline lineaarne positiivse polaarsusega RNA molekul, mille pikkus on umbes 9600 nukleotiidi. HCV genoomi ülesehitus sarnaneb teiste flaviviirustega. See eristab kahte tsooni, mis kodeerivad struktuurseid ja mittestruktuurseid (funktsionaalseid) valke. Struktuurvalkude kodeerivad geenid paiknevad viiruse genoomi 5 'piirkonnas ja 3' piirkonnast mittekorduvad struktuurid. HCV geenil on üks avatud lugemisraam (ORS) - üks polüpeptiid (ligikaudu 3000 aminohapet), mis lõigatakse struktuurseteks ja mittestruktuurseteks valkudeks viiruslike ja rakuliste proteaaside poolt.

    Joon. 1. HCV struktuurielemendid

    Struktuursed valgud hõlmavad valke, mida kodeerivad HCV RNA Core, El ja E2 tsoonid. Detekteeriti kolme HCV C-valgu vormi: nakatunud hepatotsüütide nukleose leitud täispikad (21 pinnad) molekulkaaluga 21 kD, kärbitud (p19) ja vorm (p16). Sellel pinnal kannab C-proteiin mitmesuguseid väga konserveerunud B-raku epitoope, mille olemasolu on väga oluline HCV antikehade tuvastamiseks hepatiit C laboratoorsel diagnoosimisel.

    HCV RNA tsoonid E1 ja E2 kodeerivad valke molekulmassiga 31 ja 70 kD. Nendel valkudel on mitu N-glükosüülimissaiti; E1 valgus on määratletud kuni 6 sellist saiti ja E2 - 11. E2 osas on andmed väikese valgu - p7 kohta, mida ei leidu viiruse struktuuris.

    HCV RNA 3'-otsast lähemal asuvate piirkondade määramine - kui viiruste mitteseotud struktuurvalgudest informatsiooni sisaldavad piirkonnad näitavad, et need valgud ei ole viiruseosakese struktuursed komponendid. HCV RNA mittestruktuurilises tsoonis on lõigud, mis on tähistatud kui NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A ja NS5B. Enamik valke, mida kodeerivad HCV RNA mittestruktuurilised tsoonid, on viiruse replikatsiooniks vajalikud.

    Sellel viirusel on RNA kõrge heterogeensuse näitaja tuvastatud HCV isolaatide RNA nukleotiidjärjestuste võrdlev analüüs erinevates maailma piirkondades ja isegi sama patsiendi haiguse käigus. HCV RNA märkimisväärse geneetilise varieeruvuse positsioon moodustas teooriate aluse, mis selgitasid: pikaajalist (mõnikord eluaegset) viiruse vedu, kroonilise haiguse sagedast arengut, ravi raskusi ja tõhusate vaktsiinide loomist. Kõige olulisemad erinevused HCV RNA järjestustes on kontsentreeritud E2 piirkonna N-terminaalsesse ossa, mis on määratletud kui "hüpervarieeruv piirkond" (HVR) [4].

    Praeguseks on tuvastatud 6 peamist genotüüpi ja üle 100 HCV alatüüpi. Genotüübid 1a, 1b, 2a, 2b, 2c ja Za moodustavad üle 90% Põhja-ja Lõuna-Ameerikas, Euroopas, Venemaal, Hiinas, Jaapanis ja Austraalias / Uus-Meremaal saadud HCV isolaatide [5]. Vastavad genotüübid 4, 5a ja 6 on registreeritud Kesk- ja Lõuna-Aafrikas ning Kagu-Aasias. Venemaal ja SRÜ riikides registreeritakse genotüübi 16 domineerivus (mitte vähem kui 68,9%) [6,7]. Arvatakse, et genotüübiga 1 nakatunud patsiendid (eriti 1b) reageerivad ravile halvemini kui patsiendid, kes on nakatunud viiruse teistest genotüüpidest.

    Patsiendil tsirkuleerib HCV viiruseosakeste populatsioonina, milles genoomid erinevad üksteisest 1-2% (kvaasikohasuse tõttu) nakkustesse nakatamise ajal nakkust kogenud ja / või patsiendi kehasse sisenenud mutatsioonide tulemusena. Need mutantsed vormid võivad aidata kaasa aktiivsemale replikatsioonile või aidata viirusel vältida organismi immuunvastust ja potentsiaalselt mõjutada akuutse infektsiooni tulemusi, erinevusi haiguse käigus ja interferooni ravivastust [8].

    ANTI-HCV MÄÄRATLUS. Pärast avastamist HCV viirusega ning määrama selle rolli arengus Vereülekandega hepatiit - "ei A ega B" Uurijad nakatati töötada välja meetodeid, mis suudab tuvastada neid, kellel HCV ja sobivad diagnoosi ägeda ja kroonilise C-hepatiidiga On leitud, et HCV antigeene ringle väga madalad kontsentratsioonid ning on selge, et 20. sajandi lõpu 80ndate metodoloogiline tase, mida kasutati viiruslike antigeenide avastamiseks, oli selgelt ebapiisav.

    Aastal 1989 teadlaste rühm firma "Chiron Corporation" juhtimise all Q-L.Choo läbi kloonimine HCV RNA ja oli immunoreaktiivne oligopeptiidideks mis reageerivad antikehad veres ringlevate patsientide krooniline hepatiit "ei A ega B". Need oligopeptiidid on saanud diagnostiliste ravimite aluse HCV antikehade tuvastamiseks. See määrati diagnostiliste toodete arendamise ja kommertstootmise kiireid edusamme. Peamine HCV-vastase antikeha tuvastamiseks kasutatav meetod on muutunud ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsiks praktilise tervishoiu vajadustele vastava meetodina, st. Sellel on suur tundlikkus, spetsiifilisus ja hõlpsam rakendamine.

    Arvestades, et HCV püsib veres ägeda ja kroonilise C-hepatiidiga koostoimes anti-HCV diagnostikatoodete tänu arendajad keskendunud loomist testsüsteemide antikehade tuvastamiseks, annab maksimaalsel võimalikul identifitseerimist viirusekandjad ning võimalikult varakult Ägeda nakkuse diagnoosi. HCV RNA struktuurse ja mittestruktuurse tsooni poolt kodeeritud antigeenide ja antigeensete determinantide mitmekesisus on kindlaks määranud suuna diagnostiliste toodete kujundamisel, valides ja seadistades nende loomiseks kasutatud oligopeptiidid. HCV avastamisest möödunud aja jooksul on loodud kolm põlvkonda kuuluvaid diagnostilisi süsteeme (tabel 1).

    Tabel 1
    Diagnostilised preparaadid anti-HCV detekteerimiseks [9]

    Kasutatud peptiidid
    HCV RNA tsoonid, milles
    need on kodeeritud

    % kandja tuvastamine
    HCV

    Esimest korda
    tuvastada
    anti-HCV alates
    alustada kollatõbe

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 ja NS4
    SZZs NS3
    100-3 NS4st

    C22-3 Core
    C200 NS3 ja NS4
    SZZs NS3
    Peptiid NS5

    Täiendavate peptiidide (peamiselt C22-3 (Core) lisamine teise ja kolmanda põlvkonna diagnostilistele preparaatidele aitas lahendada peamist probleemi, st suurendada tundlikkust, spetsiifilisust ja, mis kõige tähtsam, anti-HCV tuvastatavust. Tänu 3. põlvkonna diagnostikale saab tuvastada kuni 97% HCV kandjatest. Samal ajal põhjustas teatud arutelu ka HCV RNA NS5 piirkonna kodeeritud diagnostilise peptiidi sisestamise otsus. Mõnede teadlaste sõnul ei ole selle peptiidi esinemine diagnostilise ravimi kvaliteedi parandamisel kriitiline. [10,11]. Kuid NSV-vastaseid antikehi saab nakkuse avastamiseks varem tuvastada, mis parandab ägeda hepatiit C laboratoorset diagnoosimist. [12].

    Praegu kasutatakse kogu maailmas, sealhulgas Venemaal, kolmanda põlvkonna diagnostilisi tooteid. Diagnostilistel preparaatidel kasutatavad peptiidid saadi rekombinantse tehnoloogia abil (näiteks firmad diagnostilised testid: diagnostilised preparaadid, Nižni Novgorod, Vector, Novosibirsk, Roche, Abbott jt) või sünteetilised ( 000 MTS "Avicenna", Peterburi, "Organon" jne). Diagnosticumid, milles mõlemat tüüpi peptiide kasutati samaaegselt, määrati 4. põlvkonna ravimiteks. Nende omaduste kohaselt ei ole neil ravimitel olulisi erinevusi. Venemaa tervishoiuministeeriumi korrapäraselt läbiviidud võrdluskatsed näitasid riigisiseste ja välismaiste tootjate diagnostiliste toodete võrreldavat tundlikkust.

    On kindlaks tehtud, et kolmanda põlvkonna diagnostika kasutamine anti-HCV tuvastamiseks immunokompetentse populatsiooni (näiteks vere doonorite) hulgas on hinnanguliselt 98,8-100%. Samal ajal on immunokompetentsete indiviidide, näiteks pärast neeru-, luuüdi või HIV-nakkusega patsientidel transplantatsiooni saanud patsientide seas märkimisväärselt madalam - 50-95% [12]. S.George et al. [13] näitas, et 8,4% -l HIV-nakkusega patsientidest registreeritakse HCV-vastase antikeha tuvastamise vale-negatiivsed tulemused. Peale selle võib sellistes patsientides seireversiooniefekti jälgimise ajal registreerida, st positiivse tulemuse registreerimine pärast seronegatiivset anti-HCV perioodi [14].

    Üks olulisemaid probleeme HCV anti-HCV esinemise uurimiseks on valepositiivsed tulemused. Nende välimus võib olla tingitud reaktsioonikomponentide mittespetsiifilisest vastastikmõjust, võimalikest ristreaktsioonidest teiste viiruslike antigeenidega ja paljude teiste teguritega. Valepositiivsete tulemuste tase anti-HCV-de tuvastamisel erinevate diagnostiliste ravimitega võib ulatuda 10-20% [15, 16]. Selliste tulemuste suurenenud tase oli täheldatud onkoloogiliste ja autoimmuunhaigustega patsientidel, immuunpuudulikkusega inimestel ja süüfilisusega patsientidel [16,17]. Valepositiivsete tulemuste olemasolu seisab laboritöötaja ees ülesandega eristada neid anti-HCV tõelistest avastustest. Selle probleemi lahendamiseks on seerumi HCV RNA tuvastamine vereproovis. Kuid HCV RNA tuvastamise negatiivne tulemus ei viita HCV-vastase valepositiivse avastamise olemasolule. Tuleb meeles pidada, et HCV-vastane antikeha võib tsirkuleerida patsiendi veres, kes on saanud ägeda hepatiit C (10-15%) või kes on ravi tulemusena kõrvaldanud HCV RNA-d.

    KINNITUS (TÄIENDAVAD) TESTID. Valitud positiivsete proovide ja proovide, mis tegelikult sisaldavad HCV antikehi, eristamiseks on välja töötatud täiendavad (täiendavad) testid. Nendes testides kasutatakse sageli immunoblot-põhimõtet [näiteks RIBA-test ("Ortho-Clinical Diagnostics"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika)], kui mitmesugused HCV RNA tsoonid kodeerivad antigeenid adsorbeeruvad nitrotselluloosmembraanile nitrotselluloosmembraanis. Anti-HCV interakteerub adsorbeeritud antigeenidega, kasutades ensüümiga märgistatud inimese IgG antikehi ja nende järgnevat avastamist substraadi kompleksiga. Lisaks immuunülekandel samuti lisakatsed kasutada diagnostiliste ainete avastamiseks anti-HCV vastu antigeene poolt kodeeritud erinevate tsoonide HCV RNA [ "Spectrum 4" ( "ImBio" Nižni Novgorod; RecombiBest anti-HCV-SPEKTRITURGUDE "- ZAO" Vector Best ", Novosibirks; ELISA-Anti-NSU-Spectr, NPO" Diagnostikaseadmed ", Nižni Novgorod].

    Nende testide väljatöötamine ja rakendamine käib käsikäes skriinimistestide kasutuselevõtuga HCV-de tuvastamiseks, korrates peptiidide laieneva spektri põhimõtet, mida kasutatakse igas järgnevas diagnostiliste toodete genereerimises. Seega erineb diagnostika RIBA-III varasema põlvkonna poolt, lisades NS5 tsooni poolt kodeeritud peptiidi. Principles kinnitada positiivset tulemust avastamine anti-HCV hõlmavad peamiselt: võimalust (teatud juhtudel) täpsemad tulemused ensümaatilise reaktsiooniga üksikpeptiide samuti kasutamiseks spread spectrum DIAGNOSTICUM peptiide, mida ei kasutata sõelumisanalüüsides. Ainult uute peptiidide kasutuselevõtt võib suurendada kinnitavate testide diagnostilist väärtust.

    Saadud tulemuste tõlgendamine näiteks RIBA-III testis sisaldab kolme võimalust: positiivne, negatiivne ja ebakindel tulemus. Viimane neist väljastatakse juhul, kui puuduvad selged märgised (vastavalt diagnostikakomplektile lisatud juhistele), mis võimaldab teil kindlasti hinnata HCV-vastase antikeha esinemist või puudumist uuritavas proovis. Kinnitustestide läbiviimisel registreeritud vastuste spektri suhe varieerub sõltuvalt patsiendi rühmade omadustest, kellel esmakordselt tuvastatakse HCV-vastane antikeha [18]. J.M. Pawlotsky et al. [19], poolte tulemustega, mida käsitletakse kui "määratlemata", on võimalik tuvastada HCV RNA. Meie arvates legitiimsuse vastus - "määratlemata tulemus avastamine anti-HCV", mille on välja andnud laboritöötajaid arst, ilmne mitte ainult kinnitav katse ja rutiinset kontrolli olemasolu anti-HCV. Tulemuste sellise tõlgendamise vajadus peegeldab hepatiit C laboratoorset diagnoosi.

    IgM anti-HCV määramine. Praegu on ettevõtted loodud IgM anti-HCV-de tuvastamiseks mõeldud diagnostiliste komplektide jaoks: "Vector Best"; "Diagnostika süsteemid"; Imbio, Abbott jt. Diagnostikomplektide projekteerimisfaasis loodi ELISA komplektid, mis põhinevad peptiididel, mida kodeerivad HCV RNA erinevad piirkonnad [20]. Valik tehti HCV RNA Core piirkonna poolt kodeeritud peptiidide ja sellele IgM antikehade tuvastamiseks. Nagu HCV-vastase antikeha (IgG) tuvastamiseks kasutatavate testide kasutamisel, võidakse IgM-vastases HCV-vastases testides ka valepositiivseid tulemusi. Stevensona D.L. et al. [21] oli kuni 70% -l kroonilise C-hepatiidiga patsientidest koos HCV-vastase IgM-i esinemisega samaaegselt reumatoid-faktori suurenenud tase, mis aitab kaasa valepositiivsete tulemuste ilmnemisele. Kuid Pawlotsky J. M. sõnul ei mõjuta reumatoidfaktori olemasolu IgM anti-HCV-de avastamise kvaliteeti [22].

    HCV ANTIGENSIDE MÄÄRAMINE. Võime tuvastada HCV antigeene tõi teadlaste tähelepanu kohe pärast viiruse avastamist. Nende katsetamise peamist võimalust näitas K. Krawczynski jt [23], kes immunohistokeemiliselt avastas HCV antigeenid maksas koes, tõestades immunofluorestsentsi sära eripära. Polü- ja monokloonsete antikehade kasutamine erinevate HCV antigeenide korral näitas Ag HCV tuumade esinemist, HCV RNA NS3 ja NS4 kodeeritud viiruse hepatotsüütide tuumades ja tsütoplasmas kodeeritud antigeene 60-90% patsientidel, kellel esines krooniline HS) [24]. Kuid edasised uuringud näitasid, et HCV antigeene saab tuvastada vähem kui 5% maksasrakkudest.

    1999. aastal avastati immunobiooloogiliste preparaatide turule esimesed diagnostiliste testimissüsteemid ("Ortho antikeha Core antigeenile (hiire monoklonaalne) EL1SA testisüsteem" ja "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai") HCV antigeeni tuvastamiseks. Avastamise sihtmärk oli HCV Core antigeen, mis määratakse kindlaks monokloonsete antikehade põhjal konstrueeritud tahke faasi ELISA variandi abil. Esimesed uuringud nende testide kasutamisel määravad nende suure tundlikkuse, spetsiifilisuse ja paljulubava kasutamise, peamiselt vereülekande teenistuses [25,26]. Paigaldatud:

  • võime määrata Core Ag HCV seerumis või plasmas;
  • Core Ag HCV avastamise spetsiifilisus;
  • veres tsirkuleeriva antigeeni olemasolu inimestel, kes seronegatiivselt anti-HCV suhtes;
  • Core Ag HCV seerumi sagedane (90,3%) avastamine HCV- ja HCV-vastase RNA-ga [25];
  • otsene seos HCV RNA kontsentratsiooni ja Core Ag HCV avastamise vahel [25];
  • "akna" faasi kokkutõmbumine - infektsiooni hetkest kuni HCV-vastase anti-HCV tuvastamise esimese positiivse tulemuse saavutamiseni. Selgus, et Core-HC HC-d saab avastada 83% -l juhtudest (n = 24) järgmisel päeval pärast HCV RNA esmakordset tuvastamist [26] ja pikka aega (keskmiselt 26 päeva) enne anti-HCV-i ilmnemist [27].

    HCV RNA tuvastamise meetodid. Hepatiit C laboratoorset diagnoosi kaasaegset staadiumi võib iseloomustada kui HCV RNA tuvastamiseks kasutatavate molekulaarbioloogiliste meetodite laialdase kasutuselevõtu etappi. Enamik nukleiinhappe tuvastamise meetodeid on testitud HCV RNA tuvastamiseks. Nii vene [28] kui ka välismaised väljaanded [29] avaldatud märkimisväärsel hulgal kirjandusülevaateid on pühendatud diagnostiliste toodete projekteerimisele ja nende kasutamisele viiruse DNA või RNA tuvastamiseks. Kõik need meetodid võib jagada kahte rühma, mis põhinevad hübridisatsiooni põhimõtete rakendamisel ilma nukleiinhappe valitud sektsiooni võimendamiseta või nende amplifitseerimiseta, mis võib märkimisväärselt suurendada meetodi lahutusvõimet.

    Hübridisatsiooni meetod põhineb märgistatud hübridisatsiooni sondide kombinatsioonil (geenitehnoloogia või sünteetilised molekulaarsed struktuurid, mis sisaldavad nukleotiidjärjestusi, mis on täiendavad RNA valitud lõigud). Tulemuste analüüs viiakse läbi märgistuse intensiivsuse järgi moodustunud kompleksi koostises.

    C-hepatiidi puhul on see meetod HCV RNA tuvastamiseks kasutatud peamiselt selle identifitseerimiseks otseselt hepatotsüütides ja testides, mida nimetatakse in situ hübideerumiseks [30]. HCV RNA otsene tuvastamine koes võimaldas seda tuvastada monoteraapia vererakkudes, süljenäärme rakkudes ja teistes C-hepatiidiga patsiendi kehade kudedes [31, 32].

    HCV RNA tuvastamiseks kasutatav hübridiseerimismeetod võimaldab tõendada HCV RNA negatiivsete (replikatsioonide) ahelate olemasolu, mis näitab viiruse aktiivset replikatsiooni [33].

    Praegu on polümeraasi ahelreaktsiooni meetod kõige levinum metoodiline meetod, mis põhineb peaaegu kõigil molekulaarbioloogilistel meetoditel HCV RNA tuvastamiseks. Lisaks on HCV RNA määramine võimalik nii kvalitatiivses kui ka kvantitatiivses vormis, mis on eriti oluline rakendatud ravi efektiivsuse määramiseks, jälgimiseks ja hindamiseks.

    Meetodi peamised variandid on järgmised:

  • polümeraasi ahelreaktsioon (PCR);
  • ligaasi ahelreaktsioon;
  • NASBA;
  • TMA (transkriptsiooni vahendatud amplifikatsioonireaktsioon, transkriptsiooni vahendatud võimendus).

    Polümeraasi ahelreaktsioon on laialt levinud HCV RNA tuvastamise viis nii Venemaal kui ka välismaal. See põhineb mitme tsükli protsessil, mis sarnaneb nukleiinhappe loomuliku replikatsiooniga, kusjuures iga tsükkel koosneb järjestikustest etappidest.

    Uuritud materjalist (seerumi või vereplasma, maksa biopsia) eraldatakse HCV RNA. Arvestades, et HCV nukleiinhape on esindatud RNA-ga ja cDNA molekul on vajalik ensüümi pöördtranskriptaasi amplifitseerimiseks, tekib üheahelalise HCV cDNA molekulide moodustumine. Järgmises etapis kinnitatakse HCV cDNA ahela spetsiifiline sektsioon nn "HCV". Praimerid on lühikesed oligonukleotiidid, mis on komplementaarsed tuntud nukleotiidjärjestustega. Erinevate HCV isolaatide 5'UTR piirkonna esmaste struktuuride võrdlemisel ilmnes nende ebaoluline varieeruvus (genotüüpide ja nukleotiidide homoloogia vahel - 92-98% ja genotüüpides 98-99%). Selle tulemusena oli eelistatav valida praimerid sellest HCV RNA tsoonist ja kasutada neid meie riigis ja välismaal toodetud diagnostilistes katsesüsteemides.

    Lisaks sellele toimub ensüümi DNA-sõltuva DNA polümeraasi abil uute DNA segmentide süntees. Praegu kasutatakse selle ensüümi allikana kõige sagedamini baktereid Thermophilus termus (Tth polümeraas) või Thermophilus aquaticus (Taq polümeraas). Kasutades termilist stabiilsust mangaani ja magneesiumioonide juuresolekul, saab seda ensüümi samaaegselt kasutada, et sünteesida komplementaarset üheahelalist HCV cDNA molekule ja amplifitseerida valitud cDNA piirkondi. Reaktsiooni ühe tsükli viimasel etapil, kasutades DNA polümeraasi, toimub täiendavate HCV cDNA uute ahelate süntees. Reaktsioonitsüklite korduv kordamine viib HCV cDNA fragmentide akumuleerumiseni, mida saab registreerida polüakrüülamiidgeel-elektroforeesi abil, millele järgneb visuaalne detekteerimine või hübridisatsiooni kasutamine oligonukleotiidsondidega, mis suurendab kasutatud diagnostiliste toodete tundlikkust ja spetsiifilisust. Ensüümidega märgistatud praimerite kasutamine võimaldab ensüümi immuunanalüüsil PCR tulemuste registreerimist.

    HCV RNA tuvastamiseks diagnoosimise süsteemide väljatöötajate jaoks on pidev eesmärk suurendada tundlikkust ja spetsiifilisust. Seda eesmärki teenindab PCR variant, mis on tähistatud "pesastatud PCR" (pesastatud PCR) [34]. Selle meetodi eristav tunnus "klassikalisest" on kahe paari praimerite samaaegne kasutamine, millest üks täiendab amplikoni sisemist osa, mis on saadud pärast esimest amplifitseerimisvooru. Samal ajal arvatakse, et selle PCR-i variandi puhul on suurem proovide saastumise oht, mis võib kaasa tuua valepositiivseid tulemusi [35].

    HCV RNA määramise äge vajadus ja raskused, mis on seotud ülitundlike ja spetsiifiliste diagnostiliste komplektide suuremahulise tootmisega PCR-diagnostikas, on kindlaks määranud teaduslikes laborites tehtud preparaatide laialdase kasutamise. Nende katsesüsteemide, nn kodutehniliste testide ("maja katsetes") võrdluses ilmnes nende suur tundlikkuse ja spetsiifilisuse varieeruvus ning laboratooriumide ja diagnostikavahendite seeria tulemuste reprodutseeritavuse puudumine. Seega, 136 "laboratooriumist" HCV RNA (1996) avastamiseks mõeldud "välise" kvaliteedikontrolli esimese tsükli läbiviimisest suutsid ainult 22 (16%) kindlaks määrata viiruse RNA esinemise või puudumise esitatud kontrollproovides [36]. Samasugust tulemust täheldati ka meie riigis väljaspool välismaise kvaliteedikontrolli föderaalse süsteemi (2001) sarnase töö raames, kui 14 osalevast laborist ei suutnud ülesannet õigesti lahendada ainult 3 (21,4%) [37].

    HCV RNA tuvastamise vale-negatiivsete ja valepositiivsete tulemuste ilmnemise põhjused on erinevad. Valenegatiivsete tulemuste korral:
    - HCV RNA kaotus või hävimine kliinilise materjali ravivastuse ettevalmistamiseks;
    - PCR-i erinevate komponentide mõju inhibiitorite sisaldus proovis. Neid inhibiitoreid esindavad mitmesugused keemilised või valgud. Näiteks: pöördtranskriptaasi inhibiitorite spermide vedeliku olemasolu ei võimaldanud tuvastada HCV RNA-d ja rääkida C-hepatiidi seksuaalse ülekande realiseerimisvõimalusest [38]; hepariini olemasolu [39]; kõrge seerumi krüoglobuliini tase [40];
    - termilise ladustamise ja kliinilise materjali transpordi mittetäitmine. Valepositiivsete tulemuste puhul:
    - proovide saastumine (proovide töötlemisel ja / või reaktsiooniseguga töötamisel), sealhulgas saastumine positiivse kontrollprooviga;
    - saastumine eelneva amplifikatsiooniga toodetega (amplikonid), mis võivad saastata uuritavaid proove ja lahuseid aerosoolide või laboriseadmete abil.

    HCV RNA määratluse kohaselt on PCR diagnostika ulatuslik kasutuselevõtt seadnud ülesande üle viia tervishoiuasutustele laboratoorsete uuringute uus tase. Isolustatud tsoonide eraldamine PCR põhitaste staadiumide rakendamiseks (proovide valmistamiseks, amplifikatsiooniks, saadud tulemuste arvessevõtmiseks); reaktsioonilaborite riide iga etapi eraldi komplekt, automaatpipetid; standarddiagnostikakomplektide olemasolu ja ennekõike kõrgelt kvalifitseeritud laboratooriumide töötajate olemasolu vähendab valede tulemuste esinemist.

    Esimene standarditud komplekt HCV RNA ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") määramiseks valmis 1993. aastal. Aastate jooksul on kujunenud HCV RNA komplektid, mille peamine eesmärk oli suurendada nende tundlikkust ja spetsiifilisust. Amplicor TM HCV projekteerimisel kasutati mitut originaali meetodit, et identifitseerida HCV RNA 100 või enam koopiat milliliitri kohta. Samuti võib komplektina kasutada proovide ja lahuste saastumise võimalikke juhtumeid. Ensüümi - amperside ja dehipüuridiintrifosfaadi (dUTP) kasutamine võimaldab hävitada eelnevate aplikonide esimeses tsüklis, millega saastumine võib tekkida. Esimese amplifikatsioonitsükli lõpus (temperatuuril +55 ° C) amplifikatsiooni hävitamine ei võimalda ensüümi hävitada sihtmärgina valitud amplikoneid. Peamiseks uuenduseks oli sisekontrolli juurutamine. Selle innovatsiooni tähendus seisneb selles, et HCV RNA amplifitseeritud piirkonnaga sarnanev järjestus siseneb igasse prooviprooviasse, mis seejärel tuvastatakse, kasutades samalaadses režiimis amplifikatsioonireaktsiooni vastavaid praimereid. Positiivse reaktsiooni puudumine sisekontrolli tuvastamisel näitab, et reaktsiooni valenegatiivne tulemus on HCV RNA olemasolul uuritavas proovis. Järgmisel põlvkonnal diagnoositi ravim, mida nimetatakse "HCV Amplicor 2.0", mille kasutamisel on 50 HCV RNA molekulide tundlikkus.

    HCV RNA tuvastamise süsteemi Roche'i komplektide abil ei saa lugeda nende seadmetelt eraldatuks, mis määrab testide kõrge kvaliteedi. Meetodi väljatöötajad püüdsid täielikult rekonstrueerida kõiki reaktsiooni etappe. Selle idee teostus oli "COBASAmpliPrepTM" süsteem, mis võimaldab teil täielikult HCV RNA eraldamise protsessi, amplifikatsiooni ja avastamise protsessi automatiseerida, vähendades seeläbi valepositiivsete ja valenegatiivsete tulemuste riski, säilitades samal ajal kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisuse [41].

    Ligase ahelreaktsioon HHC RNA tuvastamiseks (LCR). Meetod põhineb ensüümi "DNA-sõltuv DNA ligaas" võimetel, et õmmelda (ligeerida) fosfodiorserühma sidemeid DNA-s ATP ja Mg2 + ioonide juuresolekul. Nagu ka "klassikalise" PCR-i puhul HCV RNA tuvastamiseks, on LCR esimene etapp pöördtranskript, et saada HCV cDNA. Peale selle seondub DNA ligasega kaks praimeripaari (täiendavad HCV RNA 5 'kodeerimata tsooni), mis täiendavalt amplifitseeritakse. LCR-i amplifitseerimisproduktide tuvastamine toimub, võttes arvesse antigeeni-antikeha reaktsiooni. Kõik need kaks praimerit on märgistatud erineva hapteeniga. Esimene neist on kinnitatud mikroosakeste adsorbeeritud antikehadega. Pärast pesemisprotseduuri, kus kasutatakse teist fluorestsentsmärgistusega märgistatud antikehade paari, nad selektiivselt interakteeruvad hapteeniga amplifikatsiooniproduktis, millele järgneb substraadi reaktsioon ja loendatakse fluorimeeter.

    Selle meetodi tundlikkus on ligikaudu 200 koopiat HCV RNA-st milliliitris, mis võimaldab seda kasutada erinevate kliiniliste diagnostiliste probleemide lahendamiseks [42]. Praegu valmistab Abbott toodetud diagnostikakomplekte HCV RNA tuvastamiseks LCR-i baasil.

    Nukleiinhapete seakeste amplifikatsioon - NASBA meetod HCV RNA tuvastamiseks põhineb kolme ensüümi - lindude müeloblastoom pöördtranskriptaasi, lindude RNAase ja T7 RNA polümeraasi [43.] samaaegsel toimel. Erinevalt RT-PCR-st ei tohiks esimene samm pöörata HCV RNA transkriptsiooni. Kasutades kasutatavaid ensüüme võib 90 minuti jooksul saada HCV cDNA piirkonna rohkem kui 10 (9) koopiat [44]. Reaktsiooni teostamise võimalus madalatel temperatuuridel (+ 41 C) lihtsustab oluliselt tööd ja välistab vajaduse seadmete järele, mis tagavad tsüklilised muutused kõrgel temperatuuril. Reaktsiooni tulemused salvestatakse elektrokeemiluminestsentsi abil. Vaatamata asjaolule, et NASBA on tundlikkusel RT-PCR-ga sarnane, ei kasutata seda meetodit HCV RNA tuvastamiseks. Praegu töötatakse välja meetodi variant, mis ühendab NASBA ja reaalajalise RT PCR-i põhimõtted.

    Transkriptsiooni vahendatud amplifikatsiooni (TMA) meetod erineb PCR-i ja LCR-i peamiselt sellest, et see suurendab otseselt HCV RNA fragmente, mitte HCV cDNA-d. Reaktsiooni algfaasis kinnitatakse praimer (nr 1) HCV RNA-iga ja sihtmolekuli, cDNA koopia sünteesitakse ensüümi (pöördtranskriptaas) abil. Pöördtranskriptaas, millel on samuti RNaas-H aktiivsus, hävitab viirusliku RNA hübriid-RNA-cDNA-s. Järgnevalt lisatakse cDNA molekulile teine ​​praimer, millele järgneb kaheahelalise DNA lõpetamine pöördtranskriptaasi abil. Teise ensüümi β-RNA polümeraasi abil transkribeeritakse RNA cDNA-st, mille tagajärjel tekib ühe reaktsioonitsükli jooksul HCV RNA amplikoni 100 kuni 1000 eksemplari. Nende RNA aplikonidega on lisatud primer nr. 2 cDNA koopiate edasiseks sünteesiks ja RNA molekuli hävitamiseks. Praimeri nr 1 kinnitamine cDNA-le, millele järgneb kaheahelalise DNA lõpuleviimine, käivitab järgmise amplifikatsioonitsükli. Reaktsiooni tulemuste registreerimine toimub lumenomeetril, kuna saadud RNA-amplikoonid interakteeruvad spetsiifiliselt kemiliimiinidega märgistatud DNA-proovidega.

    TMA-meetodi eelisteks HCV RNA tuvastamisel märgitakse:

  • reaktsioon viiakse läbi madalama temperatuuriga võrreldes PCR-ga;
  • suurema hulga amplikonite moodustumine ühes reaktsioonitsüklis, mis vähendab lõpptoodangu saamiseks vajalikku aega (30-40 minutit) ja suurendab reaktsiooni tundlikkust (50 koopiat / ml) [45].
  • saastumise ohu vähendamine, kuna RNA on vähem stabiilne kui DNA.

    Võrdlusuuringud HCV RNA tuvastamiseks, kasutades TMA-d ja teisi meetodeid, on näidanud tulemuste suuremat kokkusattumist [45].

    Hübridisatsiooni ja amplifikatsiooni põhimõtete kombinatsioon põhineb HCV RNA tuvastamismeetodil, mida tähistatakse kui hargnenud sondide hübridiseerimise meetodit või Branded DNA-analüüsi (bDNA) [46]. Erinevalt PCR-ist ei amplifitseerita seda test mitte HCV cDNA molekule, vaid signaali. Reaktsioon viiakse läbi 96 süvendiga plaadil, kuhu 5 'translatsioonita tsooni HCV RNA fragmendid ja HCV RNA südamiku geen adsorbeeruvad sünteetilise hargnenud DNA molekuli järgneva sidumise tõttu ja hübridiseerimine leeliselise fosfotaasiga märgistatud prooviga koos Saadud signaali järsk tõus saavutatakse võimendi ja sellele järgneva ensümaatilise reaktsiooniga. Praegu on diagnoosimise turule (Vaueg 3.0 Hepatiit-C viiruse RNA), mille tundlikkus on 520 RÜ / ml tuvastamiseks (2500 koopia HCV RNA-st), ilmnenud kolmanda põlvkonna diagnostilised testid..

    HCV RNA KVANTITATIIVNE MÄÄRAMINE. HCV RNA kontsentratsiooni hindamiseks kasutatud kvantitatiivne PCR versioon. Algselt iseloomustati HCV RNA kontsentratsiooni järjestikuste väärtustega nagu "+", "++" jms, mis visuaalselt peegeldavad amplifikatsiooniproduktide elektroforeesi käigus saadud ribade intensiivsust või lõpliku lahjendusmeetodiga, st positiivse tulemuse juuresolekul lõplikus tiitrimispunkt. Raskused PCR kõigi etappide standardiseerimisel ei võimalda HCV RNA kontsentratsiooni objektiivset hindamist, mis toob kaasa saadud tulemuste tõlgendamisel olulisi vigu.

    Praegu on uuringu tulemused väljendatud kvantitatiivsetes ühikutes: HCV RNA eksemplaride arv, mis sisalduvad 1 ml. Absoluutsetes või logaritmilistes tingimustes (log 10). Võttes arvesse asjaolu, et tuvastatud HCV RNA kontsentratsioon peegeldab viirusosakeste arvu, nimetatakse seda indikaatorit viiruse ekvivalendiks (eq), millele lisatakse eesliide k (kilogramm, tuhat) või M (miljonit). Veel ühe viiruse osakeste summa väljendamiseks on nende kaalu ekvivalendid. Näiteks grammides või pikogrammides (1 pg vastab ligikaudu 1 miljonile ekvivalendile). Kasutatud väärtuste mitmekesisus raskendab eri laborites saadud tulemuste tõlgendamist. Seetõttu on WHO bioloogilise standardimise ekspertkomitee koostanud HCV RNA sisaldava "rahvusvahelise standardproovi" (1. genotüübiga HCV RNA sisaldav külmkuivatatud seerum), mille kontsentratsioon on väljendatud rahvusvahelistes ühikutes (RÜ / ml) [47]. Eritoodetega saate ümber arvutada saadud kontsentratsiooninäitajad rahvusvahelistes üksustes.

    HCV RNA kontsentratsiooni määramiseks kasutatakse peaaegu kõiki PCR-i variante. Sellisel juhul kehtestatakse diagnoosimispreparaatide jaoks mitmeid konkreetseid nõudeid, millest kõige olulisem on tulemuste range lineaarsus, st registreeritud reaktsiooni signaali suurenemine HCV RNA kontsentratsiooni suurenemisega uuritavas proovis. HCV RNA erinevate tasemete sisestandardite kasutamine võimaldab vältida mitmeid metoodilisi vigu, mis võivad mõjutada reaktsiooni lõpptulemust [28]. Rakendatud diagnostika tundlikkus (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNA kvantitatiivne analüüs) võimaldab tuvastada HCV RNA-d, alustades 50 koopiat milliliitri kohta [48,49], mis on eriti oluline valitud viirusevastase ravi efektiivsuse prognoosimiseks.

    Reaalajaline PCR ("reaalajaline RT PCR") on üks kõige lootustandvamaid võimalusi HCV RNA tuvastamiseks kasutatava kvantitatiivse meetodi järele. Meetodit ja selle riistvara arendavad ühiselt Roche ja Percin Elmeri spetsialistid. Meetodi põhimõte on võime hüdrolüüsida cDNA järjestusi 5 '- 3' suunas. Reaktsioon kasutab spetsiaalset sondi, mis on märgistatud kahe fluorestsentsvärviga, millel on sarnane imendumine ja fluorestsentsi maksimum. Amplifitseerimisproduktide juuresolekul lagundab Tag polümeraas sondi, mis takistab energiaülekande ühest värvaine molekulist teise ja takistab sellega kvantuva valguse vabanemist. Spetsiaalne vahend registreerib reaktsiooni igas etapis fluorestsentskineetika reaktsiooni ja matemaatilist modelleerimist, mis võimaldab saada teavet HCV RNA algse kontsentratsiooni kohta.

    "Reaalajalise PCRi" eripära on võime saada teavet HCV RNA olemasolu kohta otse reaktsiooniprotsessis, mis võimaldab vähendada analüüsi aega kombinatsioonis tulemuste kõrge tundlikkusega ja lineaarsusega [50]. Tatjana Yashina ja kaasautorite sõnul võimaldab see meetod tuvastada 200 eksemplari HCV RNA-d milliliitri kohta. [51].

    HCV RNA genotüpiseerimise meetodid. Konkreetsele genotüübile ja alatüübile vastava HCV määratlust on kasutatud mitte ainult teaduslike, vaid ka praktiliste probleemide lahendamiseks. Näiteks: infektsiooni allika otsimine hepatiit C puhangute ajal või kasutatava ravi efektiivsuse prognoosimine.

    HCV genotüpiseerimise "kullastandard" on HCV RNA esmase struktuuri otsene määramine koos sellele järgneva fülogeneetilise analüüsiga [52], mis võimaldab seda viirusisolaati selgelt iseloomustada. Seda teavet saab järgmiste järjestamisvalikute abil:

  • otsene;
  • standardse kloonimise alusel;
  • PCR reaktsiooniproduktide järjestus (piiratud järjestus).
    Hoolimata tulemuse täpsusest ei kasutata otsese sekveneerimismeetodit praktilistes tervishoiuvaldkondades uuringu tehniliste raskuste ja töö kõrge hinna tõttu. Samal ajal on HCV RNA esmase struktuuri kohta teabe kättesaadavus genotüpiseerimise standardmeetodiks ja automaatse järjestuse vahendite kättesaadavus lihtsustab tulemuse saamist.

    Praegu kasutatakse enamikul juhtudel HCV RNA genotüpiseerimiseks tüübispetsiifiliste praimeritega PCR-i kasutades põhinevaid meetodeid. HCV RNA genotüpiseerimine teostati esimest korda N. Okamoto ja kaasautoritega 1992. aastal, kasutades RT-PCR-i [53], mis hõlmab kahte amplifitseerimisetappi. Esimene neist viidi läbi universaalsete, kõikide HCV genotüüpide, praimerite ja teise tüübi spetsiifiliste praimerite segu jaoks, saades eri pikkusega spetsiifiliste amplifitseerimisproduktide. Eriti genotüübi olemasolu hinnati amplifitseeritud produkti suuruse järgi. Praimeritena kasutatakse tüübispetsiifilisi sonde, mille andmed paiknevad 5'UTR, Core või NS5-RNVGS piirkondades [54].

    Testitud "INNO-LiPA HCV, INNO-GENEETIKA" [55] aluseks on adsorbeeritud geenispetsiifilised sondid (HCV RNA 5'-mitteseotud tsoonist), mis on adsorbeeritud nitrotselluloosmembraanile, amplifitseeritud toodete hübridiseerimine. Esialgu oli seda testi kasutades genotüüpe võimalik kirjutada: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 ja 5a. Tulevikus võimaldavad teise põlvkonna "INNO-LiPA HCV II, INNOGENEETIKA" katsesüsteemid eristada kõiki 6 genotüüpi ja lisaks ka 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a ja 10a. [56]

    HCV genotüüpide määramise metodoloogiline arsenal ei piirdu ülalmainitud meetoditega ja hõlmab erinevaid meetodeid:

  • amplifitseeritud toodete restriktsiooniprofiilide (RFLP) analüüsil põhinev genotüpiseerimine. HCV RNA fragmentide amplifitseerimisproduktid (HCV RNA 5'UTR - piirkond või NS5 piirkond) lõhustatakse restriktsiooniensüümidega. Saadud fragmendid erinevad pikkusega, sõltuvalt neist lõigatavatest restriktsioonisaitidest. Elektroforeesi tulemused ja nende võrdlemine võimaldavad meil uurida uuritavas proovis HCV genotüüpi [57]. Genotüpiseerimise tulemuste võrdlemine PCR-RFLP-ga koos andmete järjestamisega näitas tulemuste kokkulangevuse kõrget taset - 95% [58].
  • SSCP-meetodil põhinev genotüpiseerimine (üheahelaliste DNA fragmentide konformatsioonilise polümorfismi hindamine). Uuringu objektiks valiti HCV RNA 5'-transleerimata piirkond, millel on minimaalne komplekt nukleotiidivariante, mis eristavad genotüüpe üksteisest. See fakt määrab võimaluse kasutada ühiseid praimereid genotüpiseerimise ajal [59].

    SEROTÜPING Anti-HCV oli võimalik P.Simmondsi ja kaasautorite poolt läbi viidud uuringutega, kes tuvastasid genotüübispetsiifiliste epitoopidega seotud antikehade esinemise, mille informatsiooni kodeerib HCV RNA NS4 piirkond [60]. Sünteetiliste peptiidide baasil valmistatud ELISA diagnostilise testi abil oli võimalik eristada viiruste 1, 2 ja 3 genotüüpide põhjustatud hepatiidi C juhtumeid (89% genotüpiseerimise tulemustest). HCV RNA NS4 ja Core-piirkondade kodeeritud sünteetiliste ja rekombinantsete antigeenide väljatöötamine võimaldas meil laiendada viiruse variantide tüüpe ja määrata alamtüüpide (1a, lb, 2a, 2b, 3a, 4a) olemasolu [61,62]. Praegu serotüpiseerimisega seotud diagnostiliste toodete kaubanduslik tootmine viiakse läbi ELISA kohesel versioonil - "Murekh NA 1-6 serotüptimise test, Murex Diagnostics" ja variandis "immunoblot" - RIBA HCV serotüpiseerimisanalüüs, Chiron Diagnostics. HCV RNA serotüpiseerimise ja genotüpiseerimise tulemuste võrdlusandmed näitasid suurt kokkusattumist, ulatudes 95% -ni [62].

    HCV-vastase antikehade serotüpiseerimine võrreldes HCV RNA genotüpiseerimisega sisaldab selliseid eeliseid nagu reaktsioonivõime ja madalamate kuludega. Samal ajal ei saa see meetod mingil juhul genotüpiseerimist asendada. Anti-HCV serotüpiseerimise tulemused näitavad HCV-i tüüpi praeguste või varasemate infektsioonide korral. Mõnedel juhtudel (kõige sagedamini hemofiiliaga patsientidel) registreeritakse samaaegselt erinevate alatüüpide anti-HCV, mis võib näidata mitmete erinevate alatüüpide ja HCV genotüüpide mitut infektsiooni [63]. Lisaks sellele võib C-hepatiidi patsientidel ilmnenud immuunpuudulikkuse seisundi taustal olla ainus marker, mis muudab serotüpiseerimise võimatuks.

    HCV SEROLOOGILISTE MARKERIDE INFEKTSIOONI TESTIDE TULEMUSTE IDENTIFITSEERIMINE JA TÖÖTLEMINE. Mitme praeguse või eelmise HCV-nakkuse seroloogiliste markerite olemasolu, samuti kaasaegne metoodiline alus võimaldab lahendada paljusid probleeme labori diagnoosimisel ja hepatiit C ennetamisel. Tabelis 2 on näidatud HCV-nakkuse seroloogilised markerid ja nende olulisemad testimise alad.

    Tabel 2
    Praeguse või eelmise HCV infektsiooni markerite diagnostiline tähtsus

    Sõelumine
    kasutuses
    verest

    Kinnitus
    ootab
    tulemus
    + anti-HCV

    Üks C-hepatiidi laboratoorse diagnoosi põhiülesanne on diagnoosida ja eristada kroonilise C-hepatiidi ägedat haigestumist, tuvastades nakkuse seroloogilised markerid. Nagu teistegi ägeda viirusliku hepatiidi korral, ilmnevad ja kaovad HCV infektsiooni seroloogilised markerid nakkuse ja tervenemisprotsessi käigus (joonis 2).

    HCV RNA võib detekteerida päevadel 7-21 pärast HCV nakatamist ja anti-HCV-d päevadel 20-150 (keskmiselt 50 päeva) [64]. Anti-HCV spekter võib varieeruda sõltuvalt ägeda hepatiidi perioodist. Arvatakse, et esimene, kes suudab tuvastada HCV RNA Core ja NS5 tsooni poolt kodeeritud antikehasid. NS4 tsooni kodeeritavate anti-HCV valkude puhul puudub hepatiit C ägeda faasi puhul [65]. Võrdlev uuring anti-HCV, HCV-vastase ja HCV RNA spektri kohta ägeda ja kroonilise hepatiidiga patsientidel näitas mõningaid erinevusi [66]. Meie arvates võivad need erinevused olla seotud nakkusprotsessi individuaalsete omadustega, mis vähendab nende diagnostilist väärtust.

    Joon. 2. Äge C-hepatiit

    Analoogiliselt A-ja B-hepatiidi laboratoorse diagnostikaga oli oodata, et HCV klassi IgM antikehade määramisel oleks nii palju diagnostilist väärtust kui IgM anti-HAV ja IgM anti-HBc. Kuid ägeda ja kroonilise C-hepatiidi patsientide seerumi katseandmed HCV-vastase IgM-i esinemise kohta näitavad, et nende patsientide seas esineb sageli neid vastavalt 50-93% ja 50-70% [67,68], need tulemused näitavad, et IgM anti - HCV-d ei saa kasutada ägeda HCV-nakkuse markerina.

    Ägeda hepatiidi "kuldse" standardi rolli puudumine näitab, et patsiendi dünaamilisel vaatlusel põhinevate tulemuste terviklik hindamine on vajalik.

    HCV RNA väga tundlike meetodite katsetamine ei ole vähem tähtis, vähendab transfusioonivastase hepatiidi C tekke riski. Sellise töö vajadus määratakse kindlaks akna faasi olemasolu järgi, st aeg HCV RNA esmase avastamise ja HCV-vastase antikeha ilmnemise vahel, samuti vere doonorite (krooniline C-hepatiit) patsientide olemasolu, kellel on HCV-vastase antikehade puudumisel HCV RNA. Praegune HCV doonorvere seire süsteem sisaldab ainult HCV-vastaseid uuringuid ja C-hepatiidi nakatumise risk jääb püsima. Selle põhjal on õigustatud kontrollida vere testimist HCV RNA olemasolule kaasaegsete meetodite abil (NAT-i meetodid - "nukleiinhapete amplifikatsiooni test"). Selle töö piirav tegur on teadusuuringute kõrge hind. Kulude vähendamiseks on soovitatav testida vere seerumite kogumit (8 kuni 96 proovi), millele järgneb positiivse proovi otsimine, kui HCV RNA tuvastatakse seerumis. Vere-seemnevedeliku külvamiseks vajaliku HCV RNA lahjendusteguri arvessevõtmine on kõige tundlikumate avastamismeetodite kasutamise küsimus väga oluline. Arvatakse, et NAT-i diagnostiliste komplektide kasutamine, mille tundlikkus on 50-100 RÜ / ml, võib märkimisväärselt vähendada transfusiooni järgse hepatiidi C ohtu.

    Kahtlemata ei piirdu nende kahe valdkonnaga loetelu probleemidest, mida saab HCV infektsiooni kogu spektri testimiseks lahendada. Kaasaegsete katsemeetodite kättesaadavus koos nende võimekuse tundmisega avab laialdased väljavaated teaduslikuks ja rakenduslikuks tööks hepatiit C vastu.


  • Seotud Artiklid Hepatiit