C-hepatiidi viirus (HCV), kor, NS3, NS4, NS5 antigeenid, IgG antikehad

Share Tweet Pin it

Maksa kaotamine C-tüüpi viirusega on üks nakkushaiguste spetsialistide ja hepatoloogide ägedatest probleemidest. Selle haiguse puhul on tegemist pikkade inkubatsiooniperioodidega, mille jooksul ei esine kliinilisi sümptomeid. Sel ajal on HCV kandja kõige ohtlikum, sest ta ei tea oma haigusest ja on võimeline nakatama terveid inimesi.

Esimest korda alustati viirusega 20. sajandi lõpus rääkimistest, mille järel alustati selle täielikku uurimist. Täna on teada oma kuus vormi ja suurt hulka alatüüpe. Konstruktsiooni selline varieeruvus on tingitud patogeeni võimest muteeruda.

Nakkus-põletikulise protsessi arengu alus maksas on hepatotsüütide (nende rakkude) hävitamine. Need hävitatakse otsese tsütotoksilise toimega viiruse all. Prekliinilises faasis ainus võimalus identifitseerida patogeenset ainet on labori diagnoos, mis hõlmab viiruse antikehade ja viiruse geneetilise komplekti otsimist.

Mis on C-hepatiidi antikehad veres?

Inimesest, kes pole ravimit kaugel, on laboratoorsete uuringute tulemusi raske mõista, kellel pole mingit mõtet antikehade kohta. Fakt on see, et patogeeni struktuur koosneb valgukomponentide kompleksist. Pärast kehasse sisenemist põhjustab see immuunsüsteem reageerima, nagu oleks see selle juuresolekul häiriv. Seega algab C-hepatiidi antigeenide antikehade tootmine.

Neid võib olla mitut tüüpi. Arvestades nende kvalitatiivse koostise hindamist, suudab arst kahtlustada inimese nakatumist, samuti haiguse staadiumi (sealhulgas taastumise) kindlakstegemist.

Hepatiidi antikehade avastamise esmaseks meetodiks on immunoloogiline analüüs. Selle eesmärk on otsida spetsiifilisi Ig-i, mis sünteesitakse infektsiooni sissetungimisele organismi. Pange tähele, et ELISA võimaldab kahtlustada haigust, mille järel on vaja täiendavat polümeraasi ahelreaktsiooni.

Antikehad, isegi pärast täielikku võitu viiruse üle, jäävad kogu oma eluks inimveres ja näitavad, et see on patogeeni puutumatuse minevikus.

Haiguse faasid

Hepatiit C antikehad võivad viidata nakkus-põletikulise protsessi staadiumile, mis aitab spetsialisti tõhusate viirusevastaste ravimite valimisel ja muutuste dünaamika jälgimisel. Haigus on kahes faasis:

  • latentne. Inimesel puuduvad kliinilised sümptomid, vaatamata sellele, et ta on juba viiruse kandja. Samal ajal on antikehade (IgG) test hepatiit C suhtes positiivne. RNA ja IgG tase on väike.
  • äge - mida iseloomustab antikeha tiitri, eriti IgG ja IgM, suurenemine, mis näitab patogeenide intensiivset paljunemist ja hepatotsüütide märgatavat hävimist. Nende hävimist kinnitab maksaensüümide (ALT, AST) kasv, mida biokeemia näitab. Lisaks on RNA patogeenset ainet kõrgel kontsentratsioonil.

Ravi taustal on positiivne dünaamika kinnitatud viiruskoormuse vähenemisega. Taastumisel ei tuvastata haigusetekitaja RNA-d, vaid ainult G immunoglobuliinid, mis viitavad ülekantavale haigusele.

ELISA näitajad

Enamikul juhtudel ei saa immuunsus patogeeni ise toime tulla, kuna see ei suuda selle vastu võimsa vastuse. See on tingitud viiruse struktuuri muutumisest, mille tagajärjel tekkinud antikehad on ebaefektiivsed.

Tavaliselt määratakse ELISA korduvalt mitu korda, kuna on võimalik negatiivne tulemus (haiguse alguses) või valepositiivne (rasedatel naistel, kellel on autoimmuunpatoloogia või HIV-vastane ravi).

ELISA vastuse kinnitamiseks või tagasilükkamiseks on vaja seda uuesti läbi viia kuu aja jooksul, samuti annetada veri PCR-i ja biokeemia jaoks.

Uuritakse C-hepatiidi viiruse antikehasid:

  1. süstivad narkomaanid;
  2. maksa tsirroosiga inimestel;
  3. kui rase on vedaja viirus. Sel juhul kontrollitakse nii ema kui ka beebi. Nakkusoht sõltub viiruse ja haiguse aktiivsusest 5% -st 25% -ni;
  4. pärast kaitsmata sugu. Viiruse edasikandumise tõenäosus ei ületa 5%, kuid suguelundite limaskestade, homoseksuaalide ja partnerite sagedaste muutuste õnnetuste oht on palju suurem;
  5. pärast tätoveerimist ja keha augustamine;
  6. pärast halva mainega ilusalongi külastamist, kuna nakatumine võib toimuda saastunud vahendite kaudu;
  7. enne kui annetate verd, kui inimene soovib saada doonoriks;
  8. parameedikud;
  9. lahkumisel töötajad;
  10. hiljuti vabastatud MLS-ist;
  11. kui maksaensüümide (ALT, AST) suurenemine avastatakse elundi viiruslike kahjustuste välistamiseks;
  12. tihedas kontaktis viiruse kandjaga;
  13. hepatosplenomegaaliaga inimestel (maksa ja põrna suurenemine);
  14. HIV-nakkusega;
  15. naha kollasusega isik, peopesa hüperpigmentatsioon, krooniline väsimus ja valu maksas;
  16. enne planeeritud operatsiooni;
  17. raseduse planeerimisel;
  18. ultraheliuuringus tuvastatud inimestel, kellel on maksa struktuurimuutused.

Ensüümimonoomianalüüsi kasutatakse sõelumisel inimeste massilisel sõelumisel ja viirusekandjate otsimisel. See aitab vältida nakkushaiguse puhkemist. Hepatiidi algusjärgus alustatud ravi on palju efektiivsem kui maksa tsirroosist tingitud ravi.

Antikehade tüübid

Laboratoorse diagnostika tulemuste korrektseks tõlgendamiseks peate teadma, millised antikehad on ja mida need võivad tähendada:

  1. anti-HCV IgG on immunoglobuliinide G esindatud peamine antigeenide tüüp. Neid saab avastada inimese esialgse uurimise käigus, mis võimaldab haigust kahtlustada. Kui vastus on positiivne, siis on mõttekas mõelda loogilisele nakkavale protsessile või immuunsusega kokkupuutumisele viirustega varem. Patsiendil on vajadus täiendava diagnoosimise järele, kasutades PCR-i;
  2. anti-HCVcoreIgM. Seda tüüpi marker tähendab patogeense toimeaine "tuumstruktuuride antikehi". Need ilmuvad varsti pärast nakatumist ja viitavad ägedale haigusele. Tiitri suurenemist täheldatakse immuunsuskaitse tugevuse vähenemise ja viiruste aktiveerimisega haiguse kroonilises ravis. Kui remissioon on nõrgalt positiivne marker;
  3. anti-HCV kogus - patogeenide struktuursete valguühendite antikehade kogumõõdik. Sageli võimaldab ta täpselt diagnoosida patoloogia faasi. Laboratoorsed uuringud muutuvad informatiivseks pärast 1-1,5 kuud alates HCV sissetungi kehasse. Hepatiit C viiruse antikehade koguarv on immunoglobuliinide M ja G analüüs. Nende kasvu jälgitakse keskmiselt 8 nädala möödumisel nakkusest. Nad püsivad kogu elu ja näitavad varem haigust või selle kroonilist liikumist;
  4. anti-HCVNS. Näitaja on patogeeni mittestruktuuriliste valkude antikeha. Nende hulka kuuluvad NS3, NS4 ja NS5. Esimene tüüp tuvastatakse haiguse alguses ja näitab puutumatuskontakti HCV-ga. See on infektsiooni näitaja. Kõrge taseme pikaajaline säilimine on kaudne viiruse põletikulise protsessi kroonilisus maksas. Hepatiidi hilises staadiumis tuvastatakse ülejäänud kahte proteiini struktuuri tüüpi antikehad. NS4 on elundikahjustuse ulatuse näitaja ja NS5 näitab haiguse kroonilist liikumist. Nende tiitrite vähendamist võib pidada vähendamise alguseks. Arvestades laboriuuringute kõrget hinda, kasutatakse seda praktikas harva.

On veel üks marker - see on HCV-RNA, mis hõlmab patogeeni geneetilise komplekti otsingut veres. Sõltuvalt viiruse koormusest võib infektsiooni kandja olla enam-vähem nakkav. Uuringuks kasutatakse suure tundlikkusega katsesüsteeme, mis võimaldab avastada patogeenset ainet prekliinilises staadiumis. Lisaks sellele võib PCR abil infektsiooni tuvastada staadiumis, kus antikehad ei ole veel olemas.

Antikehade ilmumise aeg veres

Oluline on mõista, et antikehad ilmnevad erinevatel aegadel, mis võimaldab täpsemalt määrata nakkus-põletikulise protsessi staadiumi, hinnata komplikatsioonide riski ja samuti kahtlustada hepatiiti arengu alguses.

Immuunglobuliinid koguvad ennekõike nakkuse teisel kuul veres. Esimese 6 nädala jooksul suureneb IgM tase kiiresti. See näitab haiguse ägedat liikumist ja viiruse suurt aktiivsust. Pärast nende kontsentratsiooni tippust täheldatakse selle vähenemist, mis näitab haiguse järgmise faasi algust.

Kui tuvastatakse G-klassi hepatiidi antikehade tuvastamine, on vajalik kahtlustada ägeda faasi lõpp ja patoloogia üleminek krooniliseks. Need avastatakse kolme kuu jooksul alates kehasse nakatumise hetkest.

Mõnikord saab kogu antikehi isoleerida haiguse teisel kuul.

Anti-NS3 puhul tuvastatakse need serokonversiooni varases staadiumis ja anti-NS4 ja -NS5 - hiljem.

Dekodeerimise uurimine

Immunoglobuliinide tuvastamiseks ELISA meetodil. See põhineb antigeen-antikeha reaktsioonil, mis toimib spetsiifiliste ensüümide toimel.

Tavaliselt ei ole kogu indeks veres registreeritud. Antikehade kvantitatiivseks hindamiseks kasutati positiivsuse koefitsienti "R". See näitab uuritava markeri tihedust bioloogilises materjalis. Selle võrdlusväärtused on vahemikus null kuni 0,8. Vahemik 0,8-1 näitab küsitavat diagnostilist vastust ja vajab patsiendi edasist uurimist. R-ühikute ületamisel arvestatakse positiivset tulemust.

Hepatiit C antigeenid

Tänapäeval on tuntud vähemalt 10 struktuurset ja mittestruktuurset valku, mida kodeerivad HCV genoom. Struktuursed valgud hõlmavad südamikku, mähisjoont 1 ja ümbrikut 2. Tuumvalk on nukleokapsiidvalk, samas kui ümbrik 1 ja ümbrik 2 on viiruse väliskihi glükoproteiinid. Struktuurne tsoonis kodeeritakse samuti p7 valgu mille funktsiooniks ei ole selge, kuid analoogselt teiste liikmetega Flaviviridae perekonna soovitab selle talitlus on seotud vabastamist virioni nakatunud rakus.
See valk lõhustub rakupeptidaasi poolt ümbrikust 2, kuid mitte kõigil juhtudel, mis põhjustab ümbrise 2 olemasolu kahe ja enama laiendatud vormi kujul.

HCV genoomi mittekonstruktsiooniline piirkond kodeerib 6 valku - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A ja NS5B. NS2 valk on metallist sõltuv viiruse proteinaas. NS4A valk toimib NS3 proteolüütilise aktiivsuse efektorina või kofaktorina NS4A / NS4B, NS4B / NS5A, NS5A / NS5B viiruse polüproteiini lõikamispaikades.

Praegu kasutatakse ensüümi immuunanalüüsi katsesüsteemide projekteerimisel antigeenina struktuursete ja mittestruktuursete valkude fragmente, mis on saadud geenitehnoloogia abil (rekombinantsed valgud) või keemilise sünteesi teel. Ensüümimanuste määramise esimese põlvkonna süsteemid ilmusid turule 1989. aastal ja tuginesid otsesele ELISA-le. Immunosorbendina kasutati kahe valgu fragmente, NS3 ja NS4, tähistatud kui 5-1-1 ja C100-3.

Samaaegselt töötati välja rekombinantsete valkude (RIBA) abil immunoblot põhinevad kinnitavad testid. Nende esimese põlvkonna katsesüsteemide tundlikkus oli ELISA puhul ainult 64% ja immunoblot 55%. Teise põlvkonna katsesüsteemid ilmusid turule 1991. aastal. Nagu antigeeni adsorbeerunud tahkele faasile antud katse kasutatavad süsteemid kapsiidivalkude (fragment s22-3) ja NS3 mittekonstruktiivsete piirkonna antigeenide (fragmendid C200 ja sZZs) ja NS4, parandades seeläbi tundlikkuse ja spetsiifilisuse uuringud. Kuna humoraalse immuunvastuse kapsiidantigeeni toimel (struktuursed valgud) naginaetsya kiirem gem mitte-struktuursed valgud, ajavahemikul infektsiooni avastatavaid serokonversioonile kahe kuuni.

Kinnitavad immunoblot-põhised testimissüsteemid võimaldasid tuvastada reaktsioonis osalevaid antigeene. Saadud tulemused nende testsüsteemidega tõlgendati kui positiivne antikehade vastuse ainult siis mugavalt testsubstraadis vähemalt kahe antigeeni, kuigi tulemus on defineerimata juuresolekul reaktsioon ainult üks antigeenidega. Leiti, et teise põlvkonna katsesüsteemide spetsiifilisus sõltub antigeenide allikast. 1993. aastal ilmus turule kolmanda põlvkonna katsesüsteemid. Lisaks ülaltoodud antigeenidele kasutatakse ka nendes katsesüsteemides antigeene, mille aminohappejärjestus vastab NS5 valkude immunodominantsetele piirkondadele.

Esimese, teise ja kolmanda põlvkonna katsesüsteemides antigeenina kasutati rekombinantseid või sünteetilisi peptiide. Praegu on võimalik välja selgitada ka neljanda põlvkonna katsesüsteemid, milles kasutatakse rekombinantsete ja sünteetiliste peptiidide kombinatsioone immunosorbentina.

Erinevate põlvkondade katsesüsteemide kasutamise kogemus maailmas on väga suur. On leitud, et kasutades testsüsteemidele esimese või teise põlvkonna ägeda viirushepatiit C antikeha tuvastati 10-16, ja mõningatel juhtudel 25-30 nädala algusega, kolmanda põlvkonna diagnosticums lasti sel perioodil vähendada 2-3 nädalat. Üldiste andmete kohaselt on esimese, teise ja kolmanda põlvkonna katsesüsteemide tundlikkus vastavalt 70-80%, 92-95% ja 97%.

Samal ajal, vastavalt 2001. aasta S. Colini andmetele oli kolmanda põlvkonna katsesüsteemide tundlikkus krooniliste maksahaigustega patsientidel 98,9% ja spetsiaalsete seerumi kontrollpaneelide puhul 97,2%. Kolmanda ja neljanda põlvkonna immunoensüümide testimissüsteemide kõrge tundlikkuse saavutamine on seotud mõningate probleemidega teadustöö eripära tagamisel, mis mõnel juhul võib viia valepositiivsete tulemuste saamiseni. Kirjanduses on tõendeid võimalike vigade kohta ELISA 3 katsesüsteemide spetsiifilisuses. Need on ühised kõikidele ELISA testimissüsteemidele, sealhulgas AIDS-i diagnoosimise katsesüsteemidele.

Valepositiivseid tulemusi võib olla tingitud suurenenud sisaldus proovides gamma-globuliinid (seerumi Aafrika sõit patsientidest, hulgimüeloom, reumatoidfaktoreid), maksahaigused (tsirroos, vähk), autoimmuunhaigused (kollageen, autoimmuunne hepatiit), teiste viirusnakkuste (HIV, hepatiit B ) ja seerumite pikaajaline säilitamine muutuvates temperatuuritingimustes. Immuniseerimisega võib kaasneda ka valepositiivsete reaktsioonide sagenemise suurenemine. Praegu soovitatud meetmed selle probleemi lahendamiseks on järgmised: a) proovide uuesti määramine samades EFTS-is; b) HCV-vastane korduv tuvastamine teises IFTS-s; c) ELISA ja immunoblot põhinevate kinnitavate testide kasutamine.

Kuid tulemuste kinnitamiseks kavandatud meetodite kasutamine viib tihti lõpuni tõlgendamises lahkarvamustesse, mida näitavad ka Venemaa ja välismaiste teadlaste uuringud.

Praegu on anti-HCV avastamiseks kasutatavate IPT-de tootjad saavutanud suure tundlikkuse või NS3 antikehade või antigeenide südamiku antikehade täieliku avastamise. Erinevate riskirühmade ja spetsiaalsete juhtpaneelide võrdlusuuringud näitasid, et katsesüsteemid, mis paremini tuvastasid NS3-vastaseid antikehi, osutusid mõnevõrra tundlikumad kui katsesüsteemid, mis paremini tuvastasid tuumantigeenide vastaseid antikehi. Nende tundlikkus oli vastavalt 99,9% ja 98,6%.

Hepatiit C antikehade analüüsi koguarv ja analüüsi tõlgendus

Täna on maksa viirushaigused sageli gastroenteroloogide praktikas. Ja juht on kindlasti nende seas C-hepatiit C. Pöördudes kroonilise staadiumi poole, põhjustab see oluliselt maksarakke, häirib selle seedetrakti ja barjääri funktsioone.

C-hepatiidi iseloomustab loid vool, pikk ajavahemik ilma haiguse peamistest sümptomitest ja tüsistuste suure riski ilmnemiseta. Haigus ei eraldu ennast pikka aega ja seda saab avastada üksnes hepatiit C antikehade ja teiste markerite suhtes.

Viirus mõjutab hepatotsüüte (maksarakud), mis põhjustab nende häireid ja hävinemist. Korduma astme järk-järgult langeb haigus inimese surma. Hepatiidi C antikehade patsiendi õigeaegne diagnoosimine suudab peatada haiguse arengut, parandada patsiendi kvaliteeti ja eeldatavat eluea pikenemist.

C-hepatiidi viirus eraldati esmakordselt 20. sajandi lõpus. Meditsiin eristab täna kuus viiruse varianti ja enam kui sada selle alatüüpi. Mikroobi ja selle alamtüübi kindlaksmääramine inimestel on väga tähtis, kuna need määravad haiguse kulgu ja on seetõttu lähenemised ravile.

Alates hetkest, kui viirus esimest korda inimveresse siseneb, langeb enne esimest sümptomit 2 kuni 20 nädalat. Üle nelja viiendiku kõigist juhtudest tekib äge infektsioon ilma sümptomiteta. Ja ainult ühel viiest juhtumist on võimalik ägeda protsessi areng, millel on iseloomulik hele kliiniline pilt vastavalt kõikidele kollatõve ülekandmise reeglitele. Krooniline infektsioon omandab enam kui pooled patsiendid, seejärel liigub maksa tsirroos.

A-hepatiidi C-viirusega ajutiselt tuvastatud antikehad on võimelised infektsiooni diagnoosima selle kõige primaarsel etapil ja annavad patsiendile võimaluse täielikuks raviks.

Mis on hepatiit C antikehad?

Inimestel, kes ei ole seotud ravimitega, võib olla loomulik küsimus - hepatiit C antikehad, mis see on?

Selle haiguse viirus selle struktuuris sisaldab mitmeid valgukomponente. Allaneelamisel põhjustavad need valgud immuunsüsteemi reageerima ja neile tekivad hepatiidi C antikehad. Erinevat tüüpi antikehad eraldatakse sõltuvalt algalliigi tüübist. Nad määratakse laboratooriumiks erinevatel ajavahemikel ja diagnoositakse haiguse erinevaid etappe.

Kuidas on hepatiit C antikehade testid läbi viidud?

Hepatiit C antikehade tuvastamiseks võetakse laborisse veenivere võtmiseks inimene. See uuring on mugav, kuna see ei vaja eelnevat ettevalmistamist, välja arvatud 8 tundi enne protseduuri söömise hoidumist. Steriilses katseklaasis säilitatakse subjekti vere, pärast antigeen-antikehaühenduse põhjal ensüümseotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) meetodi abil tuvastatakse vastavad immunoglobuliinid.

Diagnoosi näitajad:

  • maksa häired, patsiendi kaebused;
  • maksa funktsiooni näitajate tõus biokeemilises analüüsis - transaminaasid ja bilirubiini fraktsioonid;
  • preoperatiivne eksam;
  • raseduse planeerimine;
  • kahtlased ultraheliandmed, kõhuõõne organite, eriti maksa diagnoosimine.

Kuid tihtipeale leitakse veresoopiast C-hepatiidi antikehi üsna juhuslikult rasedate naiste või kavandatud operatsiooni uurimisel. Inimesel on see teave paljudel juhtudel šokk. Kuid ärge paanitse.

On mitmeid juhtumeid, kus on tõenäoline, et vale-negatiivne ja valepositiivne diagnostiline tulemus on tõenäoline. Seetõttu on pärast konsulteerimist spetsialistiga soovitatav küsitavat analüüsi korrata.

Kui tuvastatakse hepatiit C antikehad, ei ole selle väärtuse häälestamine halvim. On vaja küsida spetsialisti nõu ja viia läbi täiendavaid eksameid.

Hepatiit C antikehade tüübid

Sõltuvalt antigeenist, kuhu nad on moodustunud, on hepatiit C antikehad jaotatud rühmadesse.

Anti-HCV IgG-klassi G-hepatiidi viiruse antikehad

See on peamine nakatumise diagnoosimiseks tuvastatud antikeha tüüp patsientide algse skriinimise ajal. "Need hepatiit C markerid, mis see on?" Iga patsient küsib arstilt.

Kui need hepatiit C antikehad on positiivsed, siis tähendab see seda, et immuunsüsteem on selle viirusega varem kokku puutunud ja haiguse loidus võib esineda ilma elavat kliinilist pilti. Proovide võtmise ajal puudub viiruse aktiivne replikatsioon.

Immuunglobuliinide andmete tuvastamine inimese veres on täiendava uurimise põhjus (hepatiidi C patogeeni RNA tuvastamine).

HCV-vastase tuumaga IgM-klassi M antikehad HCV tuumavalkudega

Seda tüüpi markerid hakkavad silma paika panema kohe pärast seda, kui patogeen on inimkehasse sisenenud. Laboratooriumi saab jälgida üks kuu pärast nakatumist. Kui tuvastatakse M-klassi M-hepatiidi antikehad, diagnoositakse äge faas. Nende antikehade hulk suureneb immuunsüsteemi nõrgenemise ja viiruse aktiveerimise ajal haiguse kroonilise protsessi ajal.

Mis haiguse patogeeni aktiivsuse vähenemine ja haiguse üleminek krooniliseks vormiks, siis võib seda tüüpi antikehad uuringu käigus enam veres diagnoosida.

HCV-vastane antikeha - kogu hepatiit C antikehad (IgG ja IgM)

Praktilistel juhtudel nimetatakse sageli seda tüüpi uuringuid. Hepatiit C viiruse kogu antikehadeks on mõlemad markerite klassid, nii M kui ka G. See analüüs muutub informatiivseks pärast esimese klassi antikehade akumuleerumist, see tähendab 3-6 nädala jooksul pärast infektsiooni esinemist. Kaks kuud hiljem, keskmiselt pärast seda kuupäeva, toodetakse aktiivselt klassi G immunoglobuliine. Nad määratakse haige inimese veres kogu oma elu või kuni viiruse kõrvaldamiseni.

Hepatiidi C kogu antikehad on universaalne meetod haiguse esmaseks skriinimiseks üks kuu pärast isiku nakatumist.

Anti-HCV NS - antikehad HCV mittestruktuurilistele valkudele

Ülaltoodud markerid kuulusid hepatiit C patogeeni struktuurseteks valkudeks. Siiski on mitteredruktuursete valkude klass. Samuti on võimalik diagnoosida patsiendi haigus. Need on NS3, NS4, NS5 rühmad.

NS3-elementide antikehad tuvastatakse esimeses etapis. Nad iseloomustavad peamist koostoimet patogeeniga ja on nakkuse esinemise sõltumatu näitaja. Suuremahuline tiitrite pikaajaline säilimine võib olla näitaja, mis näitab, et infektsioon muutub krooniliseks.

Elementide NS4 ja NS5 antikehad on leitud haiguse hilisematel perioodidel. Esimene neist näitab maksakahjustuse taset, teine ​​- krooniliste infektsioonimehhanismide käivitamisel. Mõlema näitaja tiitrite langus on remissiooni alustamise positiivne märk.

Praktikas kontrollitakse harva mittekonstruktsiooniliste hepatiit C antikehade esinemist veres, kuna see suurendab oluliselt uuringu maksumust. Maksa seisundi uurimiseks kasutatakse sagedamini hepatiit C tuumikantikehasid.

Muud hepatiidi C markerid

Meditsiinipraktikas on mitmeid näitajaid, mis hindavad patsiendi C-hepatiidi viiruse esinemist.

HCV-RNA - hepatiit C viiruse RNA

Seepärast on C-hepatiidi C-RNA põhjustav toimeaine, mis sisaldab retrograafilist transkriptsiooni PCR-meetodil, võimalikuks teha maksa biopsiast võetud vere või biomaterjali patogeeni geeni tuvastamine.

Need katsesüsteemid on väga tundlikud ja võivad materjali sisaldada isegi ühe viiruse osakesi.

Sel moel on võimalik mitte ainult haigus diagnoosida, vaid ka määrata selle liik, mis aitab välja töötada plaani tulevaseks raviks.

Hepatiit C antikehad: dekodeerimise analüüs

Kui patsient on saanud hepatiidi C uuringu tulemused ELISA-ga, võib ta imetleda C-hepatiidi antikehasid, mis see on? Ja mida nad näitavad?

Hepatiit B biomaterjali uurimisel ei leidu üldiselt antikehi tavaliselt.

Mõelge C-hepatiidi ELISA-testide näidetele ja nende tõlgendusele:

"HEPATIITI VIRUS: viiruse antigeenid ja mikroorganismi immuunsüsteemi vastus neile Informatiivne juhend Novosibirsk UDC 616.36-002.14: 578.891] -078.33 C-hepatiidi viirus :. "

Virus HEPATITIS C:

viiruse antigeenid ja reaktsioon

neile immuunsüsteemi

C-hepatiidi viirus: viiruse antigeenid ja mikroorganismi immuunsüsteemi vastus:

info ja metoodiline juhend / L.I. Nikolaev.

- Novosibirski: "Vector-Best", 2009. 78 p.

Käsiraamatus on välja toodud praegune arusaam hepatiit C viiruse (HCV) molekulaarbioloogiast, selle antigeenidest ja makroorganismi immuunvastusest, kui see viirus on nakatunud. Arvatakse, et erilise humoraalse immuunsuse erinevused on inimestel, kellel on äge ja krooniline C-hepatiit, viirusevastaste immunoglobuliinide sisalduse muutuste struktuurid looduslikult ägedate ja krooniliste infektsioonide korral, samuti spetsiifilise humoraalse immuunsuse eripära lastel, kellel on HCV-nakkuse markerid.

Käsiraamat on ette nähtud bioloogiliste ja meditsiiniliste uurimisinstituutide töötajate, arsti- ja diagnostikakeskuste töötajate ning arstide kraadiõppe üliõpilastele.

L.I. Nikolaeva - Bioloogiateaduste doktor, Viroloogia Uurimisinstituudi juhtivteadur. D.I. Ivanovsky RAMS.

Avaldatud autori väljaandes.

© Nikolaev, L.I., 2009 © JSC "Vector-Best", 2009

LÜHENDITE LOETELU

aco - aminohappejääk (id) ALAT - alaniini aminotransferaasi AIC - antigeeni esitlevad rakud ASAT - aspartaataminotransferaas kDa - kilodalton LDL - madala tihedusega lipoproteiinid VLDL - väga madala tihedusega lipoproteiinid MCA - monoklonaalsed antikehad MHC - peamine koesobivuskompleks NTO - mittetransleeritav piirkond OGS - stop Esimene hepatiit C RT-PCR - pöördtranskriptsioonivõime polümeraasi ahelreaktsiooni HPV - psevdovirusnye osakesed PCR - polümeraasi ahelreaktsiooni CHC - krooniline hepatiit C TCL - T-helper lümfotsüüdid CTLid - tsütotoksilised T-lümfotsüüdid EPR - endoplasmaatilise retirulum

SISUKORD

1. peatükk. HEPATIITI VIRUS

1.1. Viiruse genoomi organiseerimine

1.2. Virionstruktuur

Peatükk 2. HEPATIISI VIIRUSE PEAMISED ANTIGENID C.

2.1. Kestade glükoproteiinide struktuur, funktsioon ja epitoobid

2.2. Nukleokapsiidi antigeen

2.3. NS2 valgu omadused

2.4. NS3 valgu struktuur, funktsioon ja epitoobid.

2.5. NS4a ja NS4b polüpeptiidid ja nende determinandid. 35

2.6. Valkude NS5a ja NS5b bioloogiline tähtsus ja epitoopid

3. peatükk. IMMUNEESÜSTEEMI ROLL HCV-INFEKTSIOONI PIIRANGUTES

3.1. Immuunsüsteemi peamised tegurid, mis mõjutavad viiruse eliminatsiooni nakkuse akuutses faasis. _

3.2. T-rakulise vastuse roll hepatiit C-s

3.3. Humoraalne vastus hepatiit C antigeenidele 49 3.3.1. Spetsiifilised antikehad nakatumise ägedas faasis. 3.3.2. Spetsiifiline humoraalne immuunsus kroonilise hepatiit C korral. 55.3.3. HCV-spetsiifiline humoraalne immuunsus inimestel, kellel on ägenenud nakkushaigus

3.3.4. Spetsiifiline humoraalne immuunsus lastel, kellel on HCV-nakkuse markerid

SISSEJUHATUS

Praegu on Vene Föderatsioonis, nagu enamikus riikides, ebasoodsad epidemioloogilised seisundid seoses parenteraalse viirusliku hepatiidiga [1-3]. Eeldatakse, et 2015.-2020 nakatunud inimeste arv ületab maailmas [2, 3]. Alates 2001. aastast on meie riigis olnud tendents vähendada ägedat hepatiit C (GHS) esinemissagedust [1, 4]. Pärast 2004. aastat hakkas kroonilise C-hepatiidi (CHC) patsientide avastamisel alanema [5, 6].

Kuid laste seas kuni 2006. aastani suurenes kroonilise C-hepatiidiga patsientide arv [1, 5, 6]. Ekspertide sõnul on 1,4-2,4% Vene Föderatsiooni kodanikest nakatunud C-hepatiidi viirusega (HCV) ja enamikul neist on juba krooniline nakkushaigus [7, 8]. CHC-d iseloomustab progresseeruv kulg, mis põhjustab maksa tsirroosi (kuni 30%), primaarse hepatotsellulaarse kartsinoomi (kuni 15%) ja ekstrahepaatilistest ilmingutest (kuni 74%) [9, 10].

Hoolimata HCV infektsiooni intensiivsest uuringust ei ole veel võimalik kindlaks teha nakkuse kroonilise vormi sagedast arengut, tuvastada immuunvastuse tunnused, mis põhjustavad viiruse loomulikku eliminatsiooni nakkuse akuutses faasis, samuti luua ennetav vaktsiin. On teada, et HCV antigeenid on võimelised indutseerima B- ja T-rakkude vastust, mis 15-25% -l inimestel ägeda hepatiit C-ga on viiruse kõrvaldamiseks piisav [2, 11]. Kuid kõige sagedamini muutub infektsiooni äge faas krooniliseks enam-vähem väljendunud adaptiivse immuunvastuse vastu [12, 13].

C-hepatiidi viirus on ainulaadne patogeen, mis suudab elimineerida immuunsuse kontrolli, luua uusi geneetilisi ja antigeenseid variante, viivitada T-helperi ja T-tapja vastuse moodustumist ägeda hepatiit C korral ja põhjustada retsipiente inimestel. HCV-infektsiooni intensiivne uuring algas pärast selle patogeeni identifitseerimist 1989. aastal ja peamine eesmärk oli ennetava vaktsiini loomine [14, 15]. 1990. aastate lõpuks pärast seda, kui ebaõnnestunud katsed arendada sellist vaktsiini, mis põhineb rekombinantse HCV ümbrise valkudel, oli uuringu keskmes viirusevastane immuunsus spetsiifilise T-rakulise ravivastuse suhtes.

Tuleb märkida, et C-hepatiidi kaitsvate immuunmehhanismide uuringut takistavad suuresti olemasoleva laboratoorse infektsiooni mudeli puudumine, see viirus mõjutab ainult inimesi ja šimpanse. Ent A. A. Basset ja kaasautorid näitasid, et viirusega nakatatud šimpansidel on infektsiooni kergem vorm ja taastumine toimub sagedamini kui inimestel [16].

Käesolev käsiraamat võtab kokku praegused andmed HCV antigeenide kohta ja käsitleb infektsiooni ajal inimese keha immuunsuse kaitse võimalusi. Erilist tähelepanu pööratakse spetsiifilisele humoraalsele vastusele, sest see oli see, kes jättis intensiivravi valdkonnast välja. Nagu välismaised teadlased märkisid, on see peamiselt tänu olemasolevate meetodite puudumisele eraldiseisvate (individuaalsete) HCV antigeenide antikehade analüüsimiseks [17]. Alates 1998. aastast on meie riigis valmistatud immuunfermentimiskatsesüsteemid üksikute HCV antigeenide immunoglobuliinide analüüsimiseks, mis on võimaldanud kodumaiste spetsialistidel saada väärtuslikku teavet viiruse valkude humoraalse vastuse tunnuste kohta.

6 Peatükk 1. Hepatiit C viirus

1.1. Viiruse genoomi organiseerimine Ajavahemikus 1989-1990 sai tänu molekulaarsete geneetiliste meetodite väljatöötamisele võimalikuks HCV genoomi kloonimine ja eraldamine, seejärel viirus, mille olemasolu varem ennustasid, [14, 15, 18, 19]. HCV genoomi organisatsiooni omadused võimaldasid selle lisada perekonda Flaviviridae perekonda Hepacivirus, mis sisaldas hiljem ka teisi viiruseid [15, 20, 21]. HCV genoomi esindab üheahelaline RNA, millel on positiivne polaarsus ja mis sisaldab ligikaudu 9400-9600 nukleotiidi jääki. Seda iseloomustab ainulaadne avatud lugemisraam, lühikesed 5- ja 3-kontaktid, tõlkimata piirkonnad (UTR) ja suure mutatsioonikiirusega piirkonnad [21, 22].

Avatud lugemisraam kodeerib ühe valgu prekursorit, mida nimetatakse polüproteiiniks, mis koosneb 3008-3037 aminohappejäägist (aco) [23]. Polüproteiini kaas- ja post-translatsioonivaba proteolüütilise lõhustamise ja toodete töötlemise tulemusena moodustuvad struktuurilised ja mittestruktuursed valgud. Viiruslike antigeenide paigutus polüproteiinis, proteaaside toimemehhanismid ja viiruse erinevate isolaatide homoloogia ulatus on toodud joonisel. 1 [24].

90-ndate aastate alguse HCV geneetilise mitmekesisuse tõttu oli isolaate raske klassifitseerida. 1994. aasta II hepatiit C-ga ja sellega seotud viiruse rahvusvahelisel konverentsil lepiti kokku viiruse klassifitseerimise aluseks NS5b proteiini kodeeriva genoomi piirkonnas [25]. Selle tulemusena eraldati 6 genotüüpi ja umbes 80 HCV alamtüüpi.

(5-NTO) * (3-NTO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% Joon. 1. Viiruslike antigeenide paiknemine polüproteiinis [24]. Rakuproteaaside toimemehhanisme tähistavad noolad eespool, HCV seriinproteaasi jaoks - allapoole. NS2 / NS3 viiruse proteaasiga lõhestatud piirkond on tähistatud tärniga.

Allpool on homoloogiate protsent viirusisolaatide vahel, võttes arvesse NTO-d.

Peamised genotüübid on homoloogsed 65-70%, alatüüpides (alatüübid) 77-80% ja geneetilised variandid ühel isolaadil 95-97%. Hiljem selgitas ekspertide rühm 2005. aastal HCV klassifikatsiooni [26]. Soovitatav on jätta mõnede teadlaste esitatud "Clyde" asemel mõiste "genotüüp". Viiruse isolaatide kirjutamisel tuleks analüüsida südamiku / E1, NS5b genoomi piirkonda ja määrata kogu viiruse RNA nukleotiidjärjestus, kui kahtlustatakse rekombinatsiooni [27]. On tehtud ettepanek klassifitseerida kõik seni teadaolevad kuue genotüübi HCV isolaadid ning kaaluda mõnede teadurite poolt alatüüpide poolt genotüüpe 7-10.

HCV RNA kõige konserveerunud piirkond on 5-otsane NTO - umbes 92% homoloogia [22]. Tänu sellele konservatiivsele piirkonnale sai võimalikuks viirusliku RNA tuvastamine erinevate isolaatide puhul RT-PCR meetodil (pöördtranskriptsiooni polümeraasi ahelreaktsioon) [28, 29]. Nakatunud organismis eksisteerib HCV kui geneetiliselt heterogeensete, kuid tihedalt seotud variantide kogum, mida nimetatakse kvaasiliikideks, kusjuures nukleotiidjärjestuse erinevused moodustavad mõne protsendi [30].

Infektsiooniprotsessi ajal on viirus immuunrõhu all: mõned HCV variantid eemaldatakse peremeesorganismi immuunsüsteemist, teised aga tekivad [31, 32]. Viiruse uued variandid ilmnevad HCV RNA-polümeraasi RNA-polümeraasi puudumise tõttu, parandades 3-5-eksonukleaasi aktiivsust [33]. Seetõttu ei kõrvaldata viiruse RNA replikatsiooni käigus tekkinud vigu.

Enamik HCV RNA nukleotiidjärjestuse muutusi leidub nn sünonüümsetes saitides, kus mutatsioonid ei mõjuta viiruse bioloogiliselt olulisi omadusi. Sünonüümiliste saitide võrdlus võimaldab määrata viiruse sobivate variantide lahknevuse. Seepärast leiti erinevates piirkondades isoleeritud HCV isolaatide uuringus, et viiruse tungimine inimpopulatsioonini ilmselt tekkis umbes tuhat aastat tagasi [34, 35].

HCV genoomi esimene element, 5-terminaalne UTR, koosneb 341 nukleotiidi jäägist ja täidab olulisi bioloogilisi funktsioone. See piirkond annab viirusliku RNA interaktsiooni ribosoomi 40S subühikuga, moodustades seondumiskoha keerulise struktuuri, millele on viidatud ingliskeelses lühendis IRES (ribosoomi sisemine sisestuskoht) [36]. IRES HCV-l on keeruline ruumiline struktuur (joonis 2) [37, 38].

- 480 60 - 140 - 440 - 5 - 500

Joon. 2. IRESi teisese struktuuri skeem koos nelja peamise domeeniga (I-IV), pseudomõõtmega, peamised (1) ja täiendavad (2) koodonid on esitatud artikli D.M. Forton jt. [38].

Pärast HCV IRESi seondumist ribosoomi 40S allüksusega algab aktiivse translatsioonikompleksi moodustumine ja viiruse genoomi translatsioon läbi cap-sõltumatu mehhanismi [37, 39]. Tõlke käivitamiseks kasutatakse AUG koodonit positsioonis 342 (joonis 2). On kindlaks tehtud, et viiruse RNA ja 40 ribosoomi 40S subühiku interaktsioon viimases tekitab kompleksseid konformatsioonilisi muutusi, mis on ainulaadne protsess [40].

HCV genoomi tõlkimiseks on vajalikud tavalised (kanoonilised) rakulised initsieerimisfaktorid eIF2 ja eIF3. Kuna aktiivsed kompleks moodustub translatoorse aeglaselt, esialgne tõlkimise kiirus on madal, kuid see suurendab interaktsiooni plussahela RNA noncanonical raku aktivaatorvalkude nagu antigeen La, heterogeenne tuuma ribonucleoprotein L ja ribosoomi valgus rpS5 mitut tundmatu rakuvalgus [41-44 ]

HCV IRESi võime seonduda ribosoomiga võib inhibeerida mõningaid rakulisi valke, peptiide ja B12-vitamiini [45-49].

Lühike RNA-d, mis on IRES-ile täiendavad, nimetatakse lühikesteks häirivateks RNA-dele, seostuvad sellega ja peatavad viiruse genoomi translatsiooni [50]. On näidatud, et alfa-, beeta- ja gamma-interferoonide viirusevastane toime avaldub ka IRES-vahendatud translatsiooni tasemel [51]. Leiti, et HCV-le on koespetsiifilised erinevused IRESi struktuuris [38, 52, 53]. On võimalik, et see on üks viis viiruse püsivuse tagamiseks paljude kudede rakkudes.

HCV genoomi replikatsiooni protsessis moodustub RNA negatiivse polaarsusega, mida nimetatakse RNA negatiivseks ahelaks. See on ebastabiilne ja jaotub rakuliste ensüümide poolt (peaaegu 60% 30 minutiga) [54]. Nakatatud rakus on RNA pluss- ja miinus-ahelate suhe 10: 1 [55]. Viiruse genoomi tõhusaks replikatsiooniks on vajalik polüpürimidiini RNA traktooniga seonduv rakulise valgu PTB (polüpürimidiinirakkude siduv valk) [56]. Mudelkatsetes leiti, et ühes nakatatud rakus päevas moodustatakse ligikaudu 1000 eksemplari RNA plussahelatest ja umbes 100 eksemplari RNA negatiivsetest ahelatest [57].

Genoomiku 3-terminaalse UTR genoomi viimane element on seotud replikatsiooni initsieerimisega (initsiooni koht paikneb RNA negatiivses ahelas), genoomse RNA translatsiooni ja stabiliseerimise reguleerimisel [41, 59-61]. Kolmeterminali UTR struktuuris on kolm elementi:

1) lühike sektsioon, mille varieeruv järjestus koosneb 40 nukleotiidijäägist, 2) polüuridiintrakt, mis sisaldab 36 või rohkem uridiini jääki ja 3) ainulaadne konservatiivne X piirkond, mis koosneb 98 nukleotiidist [60]. Piirkonnal X on keeruline teisene struktuur, milles eristatakse ühte pikka ja kahte lühikest juuksenõelu [61]. On kindlaks tehtud, et see piirkond on otseselt seotud replikatsioonikompleksi moodustamisega, tõlke algatamise ja replikatsiooni reguleerimisega [41, 62, 63].

1.2. Struktuuri virioni alguses eksperimendid HCV filtritega erineva pooride läbimõõt on näidanud, et viirus suurus 30-60 nm, mis ühtib andmetel elektronmikroskoopias analüüs viirust bioloogilistes proovides [64, 65]. 1990ndate alguses seerumist inimeste hepatiit C on isoleeritud RNA sisaldavaid osakesi, mis pärast gradientultratsentrifuugimise koondunud viis piirkonda, mis jääb vahemikku tihedus 0,95-1,21 g / ml [66-68]. Kõiki neid tsoone kasutati šimpansi nakatamiseks [68]. Ja selgus, et tsoon, mille tihedus oli 0,95-1,10 g / ml, oli maksimaalne nakkavus. Seda viiruse osakeste ebatavaliselt väikest tihedust seletatakse HCV seotusega madalate tihedusega lipoproteiinide (LDL) ja väga madala tihedusega (VLDL) seerumis [19, 66].

Lipoproteiinid on sfäärilise poolt moodustatud osakesed üksikkihis fosfolipiidid kolesterooliga kandmisel ja apolipoproteiinidega B ja E, siseõõne täidetakse osakesed triglütseriidid [69]. Lipoproteiinide peamine ülesanne on triglütseriidide ja kolesterooli manustamine erinevatele rakkudele. Lipoproteiini sünteesi esineb endoplasmaatilise retirulume (EPR) hepatotsüütides kus nad arvatavasti suhtlevad belkovolipidnoy HCV ümbriku, moodustades kompleksi, [70]. HCV-kärje saidid, mis vastutavad LDL / VLDL-i viiruse kompleksi moodustumise eest, ei ole veel kindlaks tehtud. Seda kompleksi nimetatakse lipoviiruse osakesteks. Kompleksist pärinevad virionid on kaitstud viiruse neutraliseerivate antikehadega ja võivad tungida läbi hepatotsüütide, kasutades LDL retseptorit [68]. Umbes 75% veres levivatest lipoproteiinidest naaseb hepatotsüütidele LDL spetsiifilise retseptori kaudu; ülejäänud saavad hepatotsüütideni erinevalt. On kindlaks tehtud, et ligikaudu 20% virioonidest ei seostatud seerumi lipoproteiinidega [71].

HCV resistentsuse uurimine orgaanilistele lahustitele, A.M. Prince ja tema kolleegid näitasid, et viirusel on lipiid-valgu membraan, mille moodustavad viiruse peremeesraku lipiidid ja pinnavalgud [72]. Järgnevatel aastatel rafineeriti HCV struktuuri, kasutades hepatiit C ja tehisviirusesarnaste osakeste (HPV) patsientide maksa biopsiadide kõrglahutusanalüüsi elektronmikroskoopilist analüüsi. HPV-d moodustuvad pärast HCV genoomi (replikoni) fragmendi ekspressiooni erinevates vektorites. Vektorites kasutati vesikulaarset stomatiidi viirust, vaktsiiniaviirusi ja bakuloviirust [73-75]. Kui genoomi sisse viidud retroviiruse (HIV või leukeemia viirus Hiirte) nukleotiidide järjestus, mis kodeerib ümbrisproteiinid HCV, võimalik saada psevdovirusnye osakesed (HPV), on kest, mis sisaldas E1 ja E2 valkude HCV ning kõiki muid elemente osakestest retroviiruse [76, 77 ] HPV kasutamine hõlbustas HCV morfoloogia ja komplekteerimise uurimist ning selle valkude omaduste uurimist. Eelkõige määrati virioni mõõtmed, mille läbimõõt oli 50 nm, mis vastab tänapäevastele andmetele, mis saadi hepatiit C patsientidel isoleeritud natiivse viiruse uurimisel [78, 79].

Joonisel fig. 3 on kujutatud transfekteeritud elektronmikroskoobi abil saadud HPV elektronmikrograafi [79].

Joon. 3. Elektrooniline mikrograaf HPV negatiivse kontrastiga [79].

Kõrgemal suurendusel vasakul vasakul on ühe T-kujulise virioniga T-otsaga pinnavalgud.

HCV ümbrise all paikneb nukleokapsiid, mis moodustub tuuma (südamiku) valgus ja sisaldab viiruslikku RNA-d (joonis fig 4). Nukleokapsiidi suurus, nagu on määratud elektronkiirguse viiruse osakeste elektronmikroskoopilise analüüsiga, on 33-40 nm [74].

Siiani polnud HCV isoleerimist eraldatud piisavas koguses, et uurida seda kas haigetelt inimestelt või šimpansidelt. See on tingitud viiruse vähest sisaldusest, selle heterogeensusest, samuti võimeest moodustada komplekse antikehade ja vere lipoproteiinidega. Esimest aruannet HCV kasvatamise kohta transplanteeritavates rakukultuurides tegi P.G. Deryabin ja tema kaasautorid 1997. aastal [81]. 2005. aastal avaldasid neli teadlaste rühma eksperimentaalsed andmed viiruse ekspressiooni kohta siirdatud rakukultuurides nakkuslike viiruse osakeste tootmisega [82-85].

HCV morfogenees viiakse läbi endoplasmaatilise vananemise membraanides, Golgi aparaadi vakuullides ja rakkude tsütoplasmas. Viiruse struktuurvalgud lõhustatakse polüproteiinis rakulistest ensüümidest (signaalpeptidaasid ja peptiidpeptidaasid). Põhiriba jääb EPR tsütoplasmaatilisse pinnale ja tsütoplasma lipiidvaakulle ning ümbrise valgud tungivad osaliselt EPR sisesesse õõnsusse.

Endoplasmaatilises retikulumis moodustavad E1 ja E2 valgud keeruliseks ja läbivad töötlemise, mis tõenäoliselt lõpeb Golgi sekretoorsetel vakuoletel. Nukleokapsiid pärast RNA pakendamist kaetakse koorega ja viirus ekstrudeeritakse ESR-i tsisternidesse. CHCV-ga patsientidel põhinevad maksa biopsia proovide analüüsi tulemustel. V. Falcon ja kaasautorid väitsid, et viiruse morfogeneesi viimased etapid esinevad tsütoplasma EPR-sarnastes vesikulaarsetes struktuurides [86]. Molekulaarsed viiruseosakesed lahkuvad rakust osana sekretoorsetelt vakuulle [87].

Kriitilise HCV nakkusega patsientide virioni moodustumise määr võib ulatuda 1012 osakestani päevas ja virionide poolväärtusaeg veres on umbes 3 tundi [88].

Peatükk 2. VIRUSE-HEPATIISI PEAMISED ANTIGENID koos oluliste HCV-valkudega on ümbritsevad valgud E1 ja E2, nukleokapsiidsed ja mittestruktuursed valgud NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b.

Lisaks neile edastatakse viiruse genoomi kaudu ka väiksemaid polüpeptiide: p7 peptiid, F-valk ja halvasti uuritud polüpeptiid, mille molekulmass on umbes 8 kDa [89].

Viimased kaks vähemtähtsat valku sünteesitakse geneetilise informatsiooni lugemise tulemusena täiendavatest initsieerimiskoodonitest, mis paiknevad südamelihase kodeeriva genoomi piirkonnas [22]. On kindlaks tehtud, et vähe uuritud polüpeptiidi, mille molekulmass on umbes 8 kDa, loetakse koodonist 2 (vt joonis 2). HCV valkude paigutus EPR membraanis on näidatud joonisel fig. 5

P7 peptiid, mida nimetatakse ka HCV viroporiiniks, moodustab heptameerid, mis moodustavad katioon-spetsiifilise kanali, mille olulisus viiruse bioloogias pole veel täielikult välja selgitatud [91]. Eeldatakse, et ta on kaasatud viiruse morfogeneesi varases staadiumis. Hiljuti on näidatud p7-peptiidi mõju HCV nakkuslikele omadustele [92].

Valk F sünteesitakse geneetilise koodi lugemisraami nihutamisega ühe nukleotiidijäägiga (uus algatuskoodon algab 341. nukleotiidi jäägist, vt joonis 2) ja on

Õõnsuse EPR joonis. 5. EPR membraani HCV valkude paigutus antakse B. Lindenbachi ja C.M. toote väikeste muutustega. Riis [90].

konservatiivne aminohappejärjestus [93, 94]. On väidetud, et see valk on seotud püsiva HCV nakkuse tekkega [94, 95]. Võibolla on seos valgu F ja maksa steatoosi esinemise vahel kroonilises C-hepatiidis. On näidatud, et selle valgu antikehad on leitud ainult 10% -l patsientidest, kellel on krooniline hepatiit C, kuid kui neil tekib maksatoos, tekib nende antikehade avastamismäär kolm korda [96]. Praegu käivitatakse väikeste HCV valkude bioloogiliste funktsioonide intensiivne uurimine.

2.1. Kaetud glükoproteiinide struktuur, funktsioonid ja epitoop E1 (aco 192-383) ja E2 (aco 384-746) ümbritsevad valgud on polüproteiini fragmendid, mis paiknevad südamiku valgu (vt joonis 1) [97, 98] taga. Vastavalt elektroforeesianalüüsile on E1 valgu molekulmass 31 kDa, E2 - 70 kDa. Mõlemad valgud kuuluvad transmembraanseteks valkudeks ja sisaldavad süsivesikujääke [97]. Nende valkude peamised funktsioonid

- interaktsioon retseptoritega ja viiruse genoomi tungimine rakuliini tsütoplasmasse.

HCV valkude biosüntees viiakse läbi EPR-ga seotud ribosoomidega. Tänu erilise translokatsioonisignaalile siseneb suur osa E1 ja E2 valkudega vastavatest polüproteiini piirkondadest EPR paakide õõnsusest. Seal raku signaalpeptidaasid lõhustavad neid valke üksteisest, samuti südamiku valgusest [62, 97-99]. (Peptiidase toimemehhanismid on näidatud joonisel 1.) Pärast seda jäävad HCV ümbrise valgud seonduma EPR membraanidega, mis on tingitud nende polüpeptiidahelate COOH-terminaalsete piirkondade transmembraansetest piirkondadest [99, 100].

E1- ja E2-valkude ruumilise voltimise või kokkupakkimise kompleksprotsess algab samaaegselt tõlkimisega ja on pärast seda lõppenud. E1 valgu kokkuvoldimise peamised etapid viiakse läbi 1 tunni jooksul raku valgu kaperoon-calnexiiniga, mis moodustab selle lühiajalise kompleksi [101, 102]. Kalneksiini osalusel moodustatakse neli disulfiidi (S-S) sidet glükoproteiini E1 kaheksa tsüsteiini jäägist. Veel ühe tunni jooksul stabiliseerub E1 glükoproteiini ruumiline struktuur [103].

E2 valgu kokkulangemine on pikem (umbes 4 tundi) kui E1 valgul.

Loomulikult on see tingitud 18-20 tsüsteiinijäägi olemasolust molekulis, mis võib moodustada 9-10 disulfiidsidemeid ja E2 valgu intensiivset glükosüülimist [104]. E2 valgu ruumiline kokkupakkumine toimub koos calnexiiniga ja veel identifitseerimata kaperoneid ja E1 valku [103, 104].

Eeldatakse, et selle valmimisel moodustuvad tema E2 valguses ühe polüpeptiidi ja ühe S-S sideme kahe E2-E2 polüpeptiidi piiridesse 8-9 disulfiidsidemed.

E1-E2 koorevalkude kompleks moodustub ilma kovalentsete sidemete ilmnemiseta [103-105]. Selle kompleksi stöhhiomeetria ei ole veel kindlaks tehtud, tõenäoliselt domineerib E2 valk [104]. Valkude kokkukleepumine ja koorega glükoproteiinide kompleksi moodustumine ei toimi alati korrektselt, E1 ja E2 valkude ebaõigesti kokku monteeritud, samuti nende kompleksid leiduvad EPR-mahutitena kõrgmolekulaarsete agregaatide kujul [105].

EPR võrgu rakuliste ensüümide toimel on E1 ja E2 valgud glükosüülitud, moodustades nn chitobiose südamiku [97].

Glükosüülimisprotsess algab samaaegselt valkude kokkukleepumisega ja lõpeb Golgi seadme vaakumiga. Glükosüülimine tagab õige ruumilise voltimise, spetsiifilise antigeense struktuuri moodustumise ja bioloogilise aktiivsuse ilmnemise koorega glükoproteiinides. Peale selle võib pärast glükosüülimist E1 ja E2 valke rakkudest eraldada ja on paremini kaitstud rakkude teatud proteolüütiliste ensüümide eest.

Mõlemad HCV glükoproteiinid kuuluvad I tüüpi transmembraanseteks valkudeks, mida iseloomustab NH2-terminaalse ektodomeeni (valgu osa, mis eksponeeritakse viiruse ümbrise lipiidide kaksikkihist) ja COOH-terminaalse transmembraanse piirkonna juuresolekul. E1 ja E2 valkudes leiti [106-108] ühte või kahte transmembraanset ahelat, mis on kaasatud E1-E2 kompleksi moodustamisse ja säilitavad glükoproteiinid viiruse ümbrise lipiidide kaksikkihis.

Hiljuti on teadlased pööranud suurt tähelepanu fusioonpeptiidi (fusioonpeptiidi) HCV ümbrise glükoproteiinide otsimisele, mis ühendab endosoomi lipiidsete kaksikkihtide ja viiruse. HCV puhul on väljapakutud mudel (mis on juba osaliselt kinnitust leidnud) tunginud rakku analoogselt puukentsefaliidi viiruse protsessiomadustega. Antud mudeli kohaselt moodustub HCV kokkupuude retseptoriga viiruse retseptori kompleks, mis endotsütoosivakuli kujul tungib rakku (seda protsessi nimetatakse ka retseptor-vahendatud endotsütoosiks). Järgmises etapis ühendab endotsütoosi vakuole endosoomi (rakkude tsütoplasmaatiline vesikulaarne struktuur), mida iseloomustavad madalad pH väärtused. Endosoomi happelise keskkonna toimel mõjuvad HCV pinna glükoproteiinid konformatsioonilistele muutustele, mis viib kokkupuutesse ja liidetud peptiidi sisestamise endosomaalsesse membraani. See protsess käivitab viiruse ja endosoommembraani lipiidide kaksikkihi liitmise, mis lõpeb HCV RNA vabanemisega rakkude tsütoplasmasse.

Siiani ei ole kindlaks tehtud, kus kahest HCV ümbrise glükovalkudest asub liitpeptiid. E1 valgu lokaliseerimise kohta on mitmeid eeldusi: kohas, kus on aminohappejäägid 265-287 või 272-281 või 275-293 [107, 109]. Sarnasused leiti HCV alatüübi 1a fusiooni (Aco 265-287) oletatava peptiidi peamistest struktuuridest sarnaste peptiididega Flaviviridae perekonna mõnedes osades (joonis 6) [109].

HCV glükoproteiinil E1 on identifitseeritud neli N-glükosüülimissaiti: need on asparagiinhappejäägid positsioonidel 196, 209, 234 ja 305 [110-112]. E1 valku kodeeriva viirusliku RNA piirkonna mutatsioonide meetodi abil oli võimalik näidata, et glükosüülimissaitide kadumine positsioonides 209 ja 234 ei mõjuta E1-E2 kompleksi moodustumist [110, 113]. Oligosahhariidi jäägid

Joon. 6. Fusioonpeptiidi peamine struktuur Flaviviridae perekonna üksikutes liikmetes [109].

TBE - spongioosne entsefaliidi viirus, HLV - kollapalaviku viirus, WNE - Jaapani entsefaliidi viirus, VDEN - dengue viirus, KUNV - Kunjan viirus, VNV - Lääne-Niiluse viirus. HCV-ga (2-glütsiin ja 2 tsüsteiin) tavalised aminohappejäägid on alla kriipsutatud, fiksee-keemilistest omadustest sarnased aminohappejäägid on esile tõstetud kaldkirjas.

et positsioonid 196 ja 305 on vajalikud E1 valgu õigeks ruumiliseks kokkuvõtmiseks, samuti glükoproteiinide E1-E2 kompleksi moodustamiseks. Lisaks on näidatud, et E1 glükoproteiini positsioonis 196 ja 209 on süsivesikute jäägid vajalikud viiruse nakkavuse säilitamiseks [112].

Joonisel fig. 7 on kujutatud E1 valgu ruumilise voltimise hüpoteetiline mudel, mis arvutatakse proteoomikanalüüsi, arvuti simulatsiooni ja võrdleva analüüsi abil, mis on seotud puukentsefaliidi viiruse ümbrise valkuga E.

HCV glükoproteiinide oligosahhariidide ahelad moodustuvad enamasti 6-9 mannoosi jääkidega, mis on kinnitatud kahele N-atsetüülglükoosamiini jääkidele [114, 115]. Ainult E2 valgul on komplekssem oligosahhariidide tüüp, milles on väiksem arv mannoosi jääke, mis osaliselt asendab fukoosi ja N-atsetüülglükoosamiini jäägid on oligosahhariidide ahelas [115] lõppasendites.

Glükoproteiini E2 korral leiti asparagiinhappe jääkide positsioonidel 417 (1), 423 (2), 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8 ), 576 (9), 623 (10) ja 645 (11) [111, 112, 115].

Leiti, et glükoproteiinide kompleks E1 - E2 ei moodusta, kui

Joon. 7. E1 valgu eeldatava ruumilise struktuuri skeem on esitatud R.F. Garry ja S. Dash [107].

Selgitus: rakmed - polüpeptiidide ahelad, silindrid - alfa heeliks, nooled - beeta struktuur, trendid - oligosahhariidide ahelad, mustad segmendid - disulfiidsidemed.

HCV E2 valgu positsioonis 10 pole oligosahhariidide ahelat.

Viirus kaotab nakkavuse, kui E2 glükoproteiin ei sisalda süsivesikute jääke positsioonidel 1, 2, 4, 8, 10 ja 11 [111]. Lisaks leiti, et oligosahhariidide ahelad positsioonides 1, 6 ja 11 on seotud epitoopide moodustumisega, millel on moodustunud neutraliseerivad antikehad [108, 116].

Alamtüüpide 1a ja 3a viirused on ümbritsevate valkude oligosahhariidide ahelate arvust erinevad [117]. Glükoproteiin E2 vastupidiselt E1 valgu suhtes on modifitseeritud oligosahhariidi jäägid asendites 423 ja 430 [115, 116].

Glükoproteiin E2 on halvasti võimeline uurima füüsikalis-keemilisi meetodeid valkude struktuuri analüüsimiseks, seda peamiselt süsivesikute jääkide arvu tõttu. E2 glükoproteiini oligosahhariidide ahelate arvukus muudab röntgendifraktsioonanalüüsi jaoks valkkristallide saamise raskeks ja tuumamagnetresonantsi läbiviimiseks. Seepärast tehti E2 valgu lühenenud vormi (ektodomeen) teisese struktuurimudeli abil arvutiprogrammid, mis ennustavad juba varem uuritud Flaviviridae perekonna valkude kokkuvoldimist ja võrdlusanalüüsi [112]. Ektodomeen on E2 glükoproteiini (aco 384-660) fragment ilma selle transmembraanse osata, millel on palju täispika suurusega E2 valguga kaasnevaid bioloogilisi omadusi. See võib moodustada kompleksi glükoproteiin El-ga, interakteeruda monokloonsete antikehadega E2 valgu konformatsioonipopöpidele, samuti heparinsulfaadile ja mõnedele rakulistele retseptoritele.

Selles A.T. pakutud E2-glükoproteiini ektodomeeni ruumilises mudelis Yagnik ja kaasautorid näitasid sekundaarse struktuuri (umbes 37%) elementide vähest sisaldust ja häirete levimust [113]. Sekundaarstruktuuri elemente esindavad peamiselt beeta-volditud sektsioonid ja mitu lühikest alfa-spiraalset fragmenti. See on esimene ja siiani ainus glükoproteiini E2 mudel, mis ilmselgelt kajastab selle tegelikku sekundaarset struktuuri mõningate ligikaudsete väärtustega. Arvestades selle mudeli keerukust ja ebaselgust, ei ole see selgelt esindatud.

E2 valgu primaarstruktuuri üks peamisi omadusi on stabiilsete ja hüpervarieeruvate osakeste olemasolu [118, 119]. E2 valgus leiti kolme ala, millel on väga suur aminohapete asenduste sagedus: need on hüpervarieeruvad piirkonnad (HWR). Esimene HVR paikneb E2 valgu NH2-terminaalses osas aminohappejääkidega 384-411, teises HWR - kohas, kus on jäägid 474-482 ja kolmas, hiljuti avastatud kohas jääkidega 431-466 või 434-450 [120- 122].

On kindlaks tehtud, et esimene HWR, hoolimata aminohapete asenduste kõrgest sagedusest, säilitab alati positiivse koguse ja stabiilse hüdrofiilsuse / hüdrofoobsuse profiili.

Lisaks on neli aminohappejääki positsioonidel 385, 389, 406 ja 409 väga konservatiivsed, st nad on väga levinud uuritud HCV isolaatide puhul [123, 124]. Esimese HWR aminohappejärjestuste erinevaid variante võib vähendada konsensusjärjestusse, mis koosneb E2 valgu selle osa mis tahes 27 positsiooni (384-411) kõige sagedasematest aminohappejääkidest [124, 125]. Esimese HVR bioloogiline roll on pakkuda HCV sorptsiooni esialgseid etappe raku pinnale ja esitada "libisev sihtmärk" immuunsüsteemile, mis moodustub E2 valgu selle piirkonna uute antigeensete variantide pideva muutmisega [31, 123, 126].

On tõendeid selle kohta, et teine ​​ja kolmas HVR on seotud HCV seondumisega raku retseptoritega [121, 127].

E2 glükoproteiini kõigi kolme hüpervarieeruva piirkonna aminohapete varieeruvuse tõttu moodustuvad viiruse niinimetatud evakuatsioonivariandid, st need, mille kohta praegu puudub immuunvastus.

E2 koorevalgu teine ​​tunnus on polüpeptiidahelate saite, mis sarnanevad teiste valkudega.

Seda nähtust nimetatakse molekulaarseks mimikriks. Seega moodustavad E2 valgu kaksteist konservatiivset aminohappejääki (positsioon 660-671) ribosoomi translatsiooni initsieerimisfaktoriga eIF2a [128] fosforüülimissaidil identset PEHD domeeni. Selle sarnasuse tõttu võib HCV peatada IFN-alfa viirusevastane toime. Pärast alfa-interferooni aktiveerimist peab proteiini kinaas R fosforüleerima faktori eIF2a, mis omakorda viib HCV RNA translatsiooni lõpetamiseni. Kuid E2 valk, kasutades RephD domeeni, interakteerub eIF2a faktori asemel proteiinkinaasiga R ja viirusvalkude biosüntees jätkub [129].

E2 valgu NH2-terminaalses osas leiti molekulaarne mimikrios immunoglobuliini kergete ja raskete ahelate ja T-raku retseptorite piirkondadega [118]. Arvatakse, et see strukturaalne sarnasus võib olla autoimmuunhaiguste tekke põhjuseks HCV-ga nakatunud patsientidel, nagu II tüüpi segaktsüglobulineemia ja B-rakkude mitte-Hodgkini lümfoom [130].

Nagu eespool mainitud, pakuvad HCV ümbrisvalgud viiruse interaktsiooni rakuliste retseptoritega. On kindlaks tehtud, et nende ümbrisega glükoproteiinide oligosahhariidi jäägid võivad mängida võtmerolli viiruse seondumisel potentsiaalsete retseptoritega nagu DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) ja asialoglükoproteiini retseptoriga [117, 131, 132]. Esimesed kaks potentsiaalset retseptorit on tüüp C-lektiinid ja toimivad pinnakleepuva molekulina, mis annavad rakkudevahelisi kontakte dendriidi, endoteeli ja T-rakkude vahel. L-SIGN retseptorid on olemas maksa ja lümfisõlmede sinusioidide endoteelirakkude pinnal ning dendriitrakkude pinnal on olemas DC-SIGN. Need retseptorid sisaldavad spetsiaalset kaltsiumi-sõltuvat süsivesiku-tundlikkuse piirkonda CRD (süsivesiku äratundmise domeenid), mis võib seonduda E1 ja E2 valkude süsivesikute jääkidega [117, 131]. Kuna DC-SIGN-i ja L-SIGNi retseptoreid ei leidu hepatotsüütides, ei saa neid pidada HCV põhieesmärkideks. Need retseptorid hõivavad, koguvad viirust ja edastab selle T-rakkudele ja võimalusel ka hepatotsüütidele.

Asialoglükoproteiini retseptor esineb maksarakkude pinnal ja tagab nende glükoproteiinide hõljumise, millel ei ole süsivesinikhappe lõpus siaalhappe jääki. See retseptor on spetsiifiliselt seotud rekombinantsete E1 ja E2 valkudega, mis saadakse vastavate HCV RNA fragmentide ekspresseerimisel putukarakkudes [132].

On kindlaks tehtud, et rekombinantne E2 valk interakteerub teise potentsiaalse viiruse retseptoriga (või kaasretseptoriga), transmembraanse valguga CD81 [133]. See retseptor esineb enamiku rakkude (välja arvatud erütro- ja trombotsüüdid) pinnal ja on seotud rakkude funktsioonidega, mis on seotud nakkumise, liikuvuse, metabolismi aktiveerimise ja transformatsiooniga. CD81 kuulub tetraspaniini valgu rühma ja sellel on iseloomulik struktuur: 4 transmembraanilist ahelat ning suurt ja väikest rakuvälist silmust. On näidatud, et suur rakuvälise silma CD81 seob spetsiifiliselt rekombinantse viiruse valgu E2 [133].

Mudel A.T. Selles interaktsioonis osalevad Yagnik ja kaasautorid kaks E2 valgu pinda aco 474-494 ja 522-551 [112]. Kuid hilisemas uuringus leiti, et E2 valgu aminohappejäägid positsioonides 420, 527, 530 ja 535 puutuvad kokku CD81 suure aasaga [134].

Katsed HPV, HPV ja natiivse viirusega CHC patsientide seerumist kinnitasid, et CD81 osaleb HCV sissetungimise protsessis rakku, kuid peale selle on vaja ka mõnda muud endotsütoosiga stimuleerivat valku [77, 78, 134]. CD81-ga ja selle valkuga sisenevad rakudesse virionid, mis ei ole seotud lipoproteiinidega, kuna on vaja viiruse glükoproteiini E2 ja CD81 kokkupuudet. On teada, et selliste virionide sisaldus on umbes 20% (vt lõik 1.2). Viirused, mis ei ole seotud lipoproteiinidega, võivad siseneda rakku mööda seda rada, kuna HCV kompleksi moodustamine nendega ilmselt takistab E2 glükoproteiini kokkupuudet CD81 retseptoriga.

Nakatunud inimeste kehas leidub kuni 80% HCV kompleksi koos lipoproteiinidega (need on niinimetatud lipoviiruse osakesed). Need osakesed sisenevad rakkudesse, kasutades LDL retseptorit (vt lõik 1.2) ja teist SR-BI retseptorit (tuntud ka kui Cla-1) [126]. SR-BI retseptor leitakse paljude rakkude pinnal, kuid selle kõrgeim sisaldus leitakse maksa ja steroidogeensetes kudedes. Selle retseptori põhifunktsiooniks on saada lipiidid, mis moodustavad suure tihedusega lipoproteiin rakkudesse. SR-BI retseptor viitab transmembraansetele valkudele. Sellel on NH2 ja COOH-terminaalsete piirkondade kaks membraani ahelat, suur rakuvälise ahela ja kaks lühikest tsütoplasmaatilist saiti [135]. On kindlaks tehtud, et rekombinantse E2 valgu, HPV ja rakukultuurist saadud viiruse esimene HWR võib olla seotud selle retseptoriga [136-138]. Kuid hepatiit C-ga patsientide seerumi HCV interakteerub SR-BI retseptoriga ilma esimese HWR ja E2 valgu osalemiseta [118].

Selle nähtuse selgitamiseks on tehtud ettepanek, et viirus siseneb rakku, kasutades CD81-SR-BI poolt moodustatud mitmekomponendilise retseptori kompleksi [77, 138].

On teada, et rakkude pinna-glükoproteiinide negatiivselt laetud süsivesikuahelad võivad olla mitmesuguste viiruste esmased seondumiskohad [139]. Selle protsessi tõttu kasvab viirusisaldus rakupinnal ja suureneb selle spetsiifilise retseptoriga vastastikmõju tõenäosus. HCV seondumise hepatomeerunud rakukultuuridest katsed on näidanud, et seda protsessi saab blokeerida hepariin ja suramiin, millel on negatiivne laeng [140]. Koht, kus spetsiifiliselt seondub hepariin, eeldatakse, et see lokaliseeritakse E2 glükoproteiini esimeses HVR-s ja / või AKO 559-614 piirkonnas, kus tuvastati positiivselt laetud aminohappejääkide kõrge sisaldus [112, 126]. Pseudoviiruse HCV-osakestega tehtud katsetes ei olnud siiski võimalik tuvastada E2 valgu ja hepariini interaktsiooni [141]. Ilmselt vajab glükoosaminoglükaanide kaasamine HCV sisenemisesse rakus keerulises protsessis täiendavaid uuringuid.

Nagu uuringud on näidanud viimasel kümnendil, on HCV-l laialine rakuline tropism. Viirus paljuneb hepatotsüüdides, perifeersed mononukleaarsed rakud ja astsiit, lümf ja monotsüütide [142-144], dendriitrakud [52, 145] vereloome eellasrakkude [146], mikrogliia [38] kardiomüotsüüdide [147] sooleepiteeli [ 148], osteoblastid [149] ja lümfisõlmede b-rakulised folliikulid [150]. Sellepärast on tõenäoline, miks on rohkem kui üks HCV retseptor.

Kogu valkude uurimisel pööratakse suurt tähelepanu nende antigeensete ja immunogeensete omaduste analüüsile, kuna see teave on vajalik hepatiit C vaktsiinide arendamiseks.

On kindlaks tehtud, et glükoproteiinidel E1 ja E2 on kõrge immunogeensus. Seega rekombinantsete ümbrise valkudega tehtud šimpanside immuniseerimine andis nende valkude suhtes spetsiifilised antikehad tiitriga 1/819200 [15]. Kuid ägeda ja kroonilise C-hepatiidi loomulikul teel inimestel on humoraalne vastus E1 ja E2 viiruse glükoproteiinidele palju nõrgem.

Avaldatud andmed valkude E1 ja E2 lineaarsete B-epitoopide identifitseerimise kohta on esitatud tabelis. 1. Nende epitoopide analüüsimiseks kasutati peptiidi skaneerimist, faagi kuva ja monoklonaalseid antikehi. Peptiidi skaneerimise meetod põhineb sünteetiliste peptiidide kasutamisel, mis hõlmavad kogu valgu aminohappejärjestust ja määravad nende immunoreaktiivsuse, st võime interakteeruda C-hepatiidiga patsientidel esinevate antikehadega. Selline HCV ümbrise valkude uurimine viidi läbi Chiron Corporationis (USA) [151]. Hiljem avaldati 1997. aastal glükoproteiinide E1 ja E2 peptiidi skaneerimise tulemused, milles

17 aastat tagasi nakatatud naiste unikaalsed seerumid ühe HCV isolaadiga, mis saastasid D-d immunoglobuliini ravimit, kasutati [152].

Tänu kolme uurimisrühma jõupingutustele, mida juhib J. Dubuisson, M. Flint ja A.H. Patel loodi HCV hiire ja inimese monokloonsete antikehade (MCA) pank, mille abil oli võimalik tuvastada E1 ja E2 ümbrise valkude mõnede lineaarsete ja konformatsiooniliste B-epitoopide [79, 109, 153-155].

Joonisel fig. 8 on näidatud E2-glükoproteiini B-epitoopide paigutus, mis tuvastatakse ICA poolt.

Eriti huvipakkuvad on B-epitoobid, antikehade sidumine, mille tulemuseks on viiruse neutraliseerimine. Selline neutraliseeriv epitoop tuvastati E2 valgu esimeses HWR-is [156].

Veel üks epitoop, mis neutraliseerib viiruse sidumise rakku (niinimetatud NOB epitoop seondumisvastase neutraliseerimisega), on

Joon. 8. E2 valgu kaudu ICA abil tuvastatud B-epitoopide asukoht.

Kava on esitatud väikeste muudatustega R. F. Clayton et al. [79] ja A. M. Owsianka et al. [155].

Ülaosas tähistavad ristkülikud ICA-d, mis tunnistavad E2 valgu, täissuuruses E2 valgu ja E1 ja E2 valgu HPV ekvivalenti. Alumine näitab, et ICA interakteerub E2 valgu ektodomeeniga või täispika E2 valguga koos E1 valguga. Mustades on ICA isoleeritud, mis inhibeerib CD81 ektodomeeni E2, täispika E2 valgu seondumist koos E1 ja HPV-ga. HPV-ga HPV seondumise inhibeerimine IC81-le on märgitud halli värviga.

konformatsioonilises struktuuri moodustamisel, mis poolt eeldusel, üks rühm autoritel kaasatud aminohappejääke 406-644 E2 valgu järjestuse [76, 156, 157] ja vastavalt teistele - jäänuseid järjestused 414-443 ja 490-519 [158 ]

Näidati, et kolme järjestuse aminohappejäägid võivad moodustada veel ühe keerulisema konformatsioonilise B-epitoobi, millel ei ole neutraliseerivaid omadusi:

E2 valgu E1 valgu, 480-494 ja 613-621 297-306 [167].

E1 ja E2 glükoproteiinides on tuvastatud T-helper (CD4 +) ja T-killer (CD8 +) epitoobid (tabel 2).

Praegu on käimas uuringud HCV ümbrise valkude B- ja T-epitoopide paiknemise ja struktuuri kohta. Teavet selle teema kohta leiate Los Alamose riikliku labori (USA) veebisaidilt: http://hcv.lanl.gov.

* Kui epitoopi kindlakstegemiseks kasutati 20-lülilisi peptiide, ei esine täpset lokaliseerimist.

2.2. Nukleokapsiidi antigeen Nukleokapsiidi valgu lokaliseerimise skeem (sünonüümid: tuum, südamik) polüproteiinis on näidatud joonisel. 1. See valk on seotud viiruse morfogeneesi oluliste staadiumitega: see moodustab viiruse nukleokapsiidi, algatab HCV RNA pakendi ja viiruse ümbrise [74, 178, 179].

Tuumvalgul on ilmselt muid bioloogilisi funktsioone. Seega erinevates mudelkatses näitab, et see suhtleb regulaatorvalke ja teatavate struktuurielemendid raku: Protein p53 [179], esimesest retseptor tuumorinekroosifaktori [180] retseptori lümfotoksiiniks-beeta [181], transkriptsiooni LZIP faktori [182 ] STAT3 valku (mis parandab transkriptsiooni signaali) [183], heterogeenne tuuma ribonucleoprotein K [184] helikaas DDX3 [185] tsütoplasmas triglütseriidi vesiikulid [186], mitokondrid [187] tsütokera- rakud [188]. Arvatakse, et Corbeloc osaleb steatoosi ja hepatokartsinogeneesi arengus kroonilise C-hepatiidiga patsientidel [179, 186].

Nukleokapsiidvalk moodustub kõigepealt kõigi viiruslike valkude seas biosünteesi käigus, see lõhustatakse polüproteiinis rakusignaali peptidaaside abil [190]. Põhivalgu lõplikus proteolüütilises hüdrolüüsis osaleb hiljuti avastatud signaalpeptiid-peptidaas SPP, mis teeb ebatavaliselt intramembraani lõhustamist [189, 190].

Nukleokapsiidi valgu töötlemisel kaasneb selle p23 vormi (193 ako) üleminek p21-le (173 aco) ja seriinijääkide fosforüülimine OH-rühmadele [189]. Lõhustatud ala (174-193 aco) kannab translokatsiooni signaali, mille tõttu E1-valgu NH2-terminaalne osa satub EPR-mahutidesse [191].

Põhivalgu küpsel kujul on täpselt määratletud amfipaatne struktuur: hüdrofiilne NH2-terminaalne piirkond ja hüdrofoobne COOH-terminaalne piirkond [192]. Seega on proteiinist eraldatud D1 (hüdrofiilne) domeen ja D2 domeen (hüdrofoobsed). Sarnane struktuur on Flaviviridae perekonna nukleokapsiidsed valgud. Mõnikord eraldatakse südameliigendis ka kolmas domeen (keskne), millel on ebatüüvalt suur trüptofaani jääkide sisaldus [46].

Hüdrofiilses domeenis D1 on RNA seondumiskoht, peamised konservatiivsed B-epitoobid ja tuumvalgu dimeeri moodustumise eest vastutav fragment [192]. Nukleokapstsiidi valgu funktsionaalselt aktiivne vorm moodustub kahe polüpeptiidahelaga, st Tuumvalk on dimeer, milles domineerib alfa-heeliksi struktuuriline organisatsioon. Hüdrofoobses domeenis D2, mis tagab seose tsütoplasma membraanide ja lipiidsete lisanditega, on leitud amfipaatseid alfa-heeliksid, millel on väljendunud hüdrofiilsed ja hüdrofoobsed pinnad.

Kõigist viirusvalkudest iseloomustab südameliigule esmase struktuuri konservatiivsete piirkondade suurim sisaldus [193].

Nukleokapsiidvalgu peamistes funktsionaalselt olulistes piirkondades on kujutatud joonisel fig. 9. Nendes tähtsates valdkondades tuleks märkida piirkonna armatuuri valku 72-91 aminohappejääki, mis suhtleb ümbrisvaigu E1 [194] portsjoni jääkidega 69-104 säilitamiseks vajalike nakkuslikkuse HCV [195] tsoonis 65 jääke -72, mis tõenäoliselt puutub kokku viiruse morfogeneesi varajastes staadiumides p7-peptiidiga [195].

Elektroonilise mikroskoobi andmete järgi on südameliigend lokaliseeritud EPR membraanide, tsütoplasmas lipiidide vesiikulite ja ka tuuma rakus. Tuumvalgu ülekandmine rakutundesse toimub biparniini NLS-i tsellulaarse transpordi valgu kaudu, mis interakteerub südamiku valgu spetsiaalse signaaljärjestusega [196].

Seerumi natiivse nukleokapsiidi ja selle analoogide uuring, mis saadi kasutades HCV replikoneid, näitas, et sõltumata nende päritolust on nende settetegur umbes 100 S, ujuv tihedus gradiendis

Joon. 9. Nukleokapsiidi valgu peamistest funktsionaalselt olulistest paikadest koosnevad paigad koos C.L. kergeid modifikatsioone. Murray et al. [195].

Numbrite alumisel küljel on märgitud aminohappejäägid.

tseesium on 1,28 g / ml ja läbimõõt 33-46 nm, mis on määratud ülekandemikroskoobi abil [197, 198]. Kroonilise hepatiit C-ga inimese maksa biopsia proovide elektroonilise mikroskoopilise analüüsi andmetel on kindlaks tehtud, et viiruse nukleokapsiidi suurus on antud juhul intensiivsem: 28-48 nm [198].

Core valk on üks kõige enam immunogeenseid HCV antigeene. Andmed tema B- ja T-epitoopide kohta on toodud tabelis. 3 ja 4.

Tuleb märkida, et nukleokapsiidi valgu B-epitoobid on kontsentreeritud peamiselt hüdrofiilses domeenis ja konserveerunud piirkondades.

2.3. NS2 valgu iseloomustus NS2 valk on mittestruktuurne HCV valk, see paikneb polü-proteiinina pärast p7 peptiidi (vt joonis 1). NS2 valgu molekulmass on umbes 23 kDa, ei sisalda süsivesikute jääke ja seostatakse EPR-membraanidega [206, 207]. Valgu täpne topograafia membraanis ei ole kindlaks tehtud, eeldatakse, et see moodustab 3 transmembraani ahelaid (vt joonis 5) [90]. NS2 valk on halvasti lahustuv, seega on seda raske uurida.

NS2 valgu peamine bioloogiline funktsioon on HCV seriinproteaasi eliminatsioon. Selle teostamiseks moodustab NS2 valk kompleksi, mille polüproteiinisisendis vastab NS3 valk [206, 208].

"Kaasani (Volga piirkonna) föderaalse ülikooli teadusraamatukogu. N.I. Lobachevski. Uue raamatu sisestamine fondi riigipangasse 27. juunist 4. septembrini 2015. Kazan. Recorded RUSMARC-vormingus kasutades Ruslani AIS-i. Materjal on korraldatud süstemaatilises järjestuses teadmiste osakondade kaupa sektsioonide kaupa - autorite ja pealkirjade tähestikus. Kogu, väljaande kokkuvõte ja sisu leiate elektroonilisest kataloogist. Tundmatu pealkiri. All-Vene konverentsi materjalid lk. "

"VENEMAA-FÖDERATSIOONI HARIDUSE JA TEADUSUURINGUTE AMETLIK KESKKONNAPOLIITIKA Eelarveasutus" TYUMENI RIIKLIK ÜLIKOOL "Bioloogiainstituut Ökoloogia ja geneetika osakond O.N. Zhigileva ÖKOLOOGILINE PARASITOLOOGIA Haridus-ja metoodiline kompleks. Koolituse suunas õppijate tööprogramm 06.03.01 Bioloogia (bakalaureusekraad), koolitusprofiilid "Bioekoloogia", täiskoormusega haridus Tjumeni osariik. "

"VENEMAA FÖDERATSIOON HARIDUSE JA TEADUSMINISTEERIUM HARIDUSKORRALDUSE VALDKONDLIK KOOLITUSASUTUS TÜÜMENÜÜSIKOOL Bioloogiainstituut Loomade zooloogia ja evolutsioonikeskkonna osakond A.V. Tolstikov, V.A. Stolbov ENTOMOLOGY Haridus-ja metoodiline kompleks. Koolituskursuste üliõpilaste tööprogramm 35.03.10 Maastikuarhitektuur, koolitusprofiil Dekoratiivne taimekasvatus ja puukoolid, täiskoormusega haridus Tumen. "

"Haridus- ja teadusminister VENE FÖDERATSIOONI Federal State õppeasutus Kõrgharidust" Tjumen State University "Bioloogia Instituut, osakonna inimese anatoomia ja füsioloogia ja loomade Lepunova ON INIMAATOMIKA JA MORFOLOOGIA Haridus-metoodiline kompleks. Tööprogramm õpilastele 06.03.01 "Bioloogia" valdkonnad, profiilid: botaanika, zooloogia, füsioloogia, geneetika, biokeemia, biokeemia; haridusvorm. "

"MUNITSIPAALSED" Bežanitsõ linnaosa "olmejäätmete eelarve üldhariduskoolides" Bezhanitsky SECONDARY SCHOOL "Kokkulepitud kinnitada metoodiline nõukogu №1 peamine protokoll 2014/08/27 _ / SK MIKHEEV Tellimuse number 71 aasta 29.08.201 tööprogrammi teemad BIOLOOGIA põhi üldharidus, 6. klass aasta 2014-2015 õppeaasta Master Irina Vasilyeva Bežanitsõ 2014 1.Poyasnitelnaya teadmiseks Töö bioloogia programm vastab Federal. "

"VENEMAA FÖDERATSIOONI PÕLLUMAJANDUSE MINISTEERIUMI FEDERATSIOONILISTE KOHUSTUSLIKU KOOLITUSE KOOLITUSE KOOLITUSASUTUS" KUBA RIIGIAGRADI ÜLIKOOL "Mikrobioloogia, episootioloogia ja viroloogia osakond METOODIKA JUHENDID teemal: koolitus 36.06.01 Veterinaar- ja loomakasvatustehnoloogia, fookus: "Veterinaarmikrobioloogia, viroloogia. "

"Haridus- ja teadusministeerium Kaluga piirkonnas riigieelarvest asutuse täiendavate haridus Kaluga Region" Regional ökoloogiliste ja bioloogiliste Center "General üldkeskhariduse arenguhäireid programmi" Sahver looduse "õpilastele algkooliealistest (7-11 aastat) rakendamise perioodil -2 aastat Koostanud õpetajatele täiendavate haridus : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kaluga Sisukord Selgitav märkus Programmi tegelikkus: programmi eesmärgid ja eesmärgid. "

" TEOREETILISED MEHAANIKA "Juhend praktiliste harjutuste jaoks meditsiinitehnika ja bioloogia teaduskonna teisel aastal 2012-2013 õppeaasta 1. semester eriala 201000 - Biotehnilised süsteemid ja tehnoloogiad 1. Sissejuhatav õppetund. Punkti trajektoori liikumiste võrrandid ja võrrandid. Lahendage järgmised ülesanded: 1. Vastavalt punkti liikumise võrrandile, leidke selle trajektoori võrrand koordinaatvormis ja näidake joonisel liikumissuunda: 1) x = 3t-5, y = 4-2t; 2) x = 2t, y = 8t2; 3) x = 3t2, y = 4t2; "

«Http://www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_ru.phtml Page 1 Prindi veebisait Bioloogia print version või tagasi Shalapenok Elena Semenovna personaliosakonna zooloogia bioloogilise teaduskonna BSU. INIMESED zooloogia osakond Õppejõud Õpetamine ja toetavad teaduslike töötajate doktorantide ja üliõpilastele Shalapenok Elena Semenovna (1931-2010) Dotsent, zooloogia osakond, PhD, dotsent Graduate valgevene. "

"VENE FEDERATSIOONI PENZA RIIGI ÜLIKOOLI HARIDUSE JA TEADUSUURINGUTE MINISTEERIUM Kinnitan: rektor A.D. Gulyakov '' _ 201, registreerimisnumber intrahigh põhi professionaalne haridusprogrammid Kõrgharidus suund valmistamises 020 400 Bioloogia Profiil Bioecology koolituse kvalifikatsiooni (aste) lõpetanud bakalaureuse Õppevorm Täistööajaga Penza 2013 SISUKORD 1. ÜLDINE. 1.1. Kõrghariduse põhiprogramm. "

"Avalduse teema" Bioloogia "tööprogramm 2014-2015. Õppeaastal. 9. klass. Tööprogrammi eesmärk on luua tingimused teemavaldkonna õppeprotsessi planeerimiseks, korraldamiseks ja juhtimiseks rubriigile" Ülddialoogi alused ". 1. Selgitav märkus, milles täpsustatakse üldhariduse üldeesmärke, võttes arvesse akadeemilise aine eripära. Tööprogramm põhineb peamise programmi ligikaudsel programmis. "

"VENEMAA-FÖDERATSIOONI HARIDUSE JA TEADUSUURINGUTE AMETLIK KESKKONNAPOLIITIKA Eelarveasutus" TYUMENI RIIKLIK ÜLIKOOL "Bioloogiainstituut Ökoloogia ja geneetika osakond O.N. Zhigileva ÖKOLOOGIA ALUSED Haridus-ja metoodiline kompleks. Õppurite tööprogramm koolituse suunas 42.03.02 Ajakirjandus (bakalaureusekraad), koolitusprofiilid "Prindi", "Televisiooni ajakirjandus", "Lähenemine ajakirjandus". "

"Haridus- ja teadusministeerium, Federal State õppeasutus Kõrgharidust Tjumen State University Institute of Biology Botaanika osakond, biotehnoloogia ja maastikuarhitektuur Marina V. Semenova bioecological aluse kompositsiooni taimede õppematerjale. Õppurite töökava 35.03.10 Maastikuarhitektuuriprofessionaalne maastikukujundus ja maastik. "

"Haridus- ja teadusminister VENE FÖDERATSIOONI Federal State õppeasutus Kõrgharidust Tjumen State University Institute of Biology, Botaanika osakond, biotehnoloogia ja maastikuarhitektuur Belozerova A.A.MORFOBIOLOGICHESKIE TUNNUSJOONED ilutaimed õppematerjale. Õppurite töökava 35.03.10 Täistööajaga haridusprofiili maastikuarhitektuur Dekoratiivne dekoratiivne ja. "

"VENEMAA FÖDERATSIOONI HARIDUSE JA TEADUSUURINGUTE AMET Riigiteadus Eelarve kõrgharidusasutus" TYUMEN RIIKLIK ÜLIKOOL "Instituut Zooloogia ja loomade ökoloogia osakond Ökoloogia OA Aleshina BASIC HARIDUS ÜLDINE BIOLOOGILINE PRAKTIKA: INVERTILITY ZOOOLOOGIA Haridus-ja metoodiline kompleks. Koolituse suunas õppijate tööprogramm 06.03.01 - "Bioloogia" (akadeemiline bakalaureus), koolitusprofiil. "

"Haridus- ja teadusminister VENE FÖDERATSIOONI Federal State õppeasutus Kõrgharidust" Tjumen State University "Bioloogia Instituut, osakonna inimese anatoomia ja füsioloogia ja loomade Lepunova ON VIRUUDE JA MUUDE INTRACELLULAARSETE PARASIITIDE MOLEKULAR BIOLOOGIA Haridus-metoodiline kompleks. Tööprogramm õpilastele 06.03.01 suund "Bioloogia", profiil: biokeemia; õppetüüp - täisajaga tüvenium. "

"Föderaalne meditsiini- ja bioloogiline amet" TERVISEFONDI EELARVEVAHENDI INSTITUTSIOON. "

"VENEMAA FÖDERATSIOONI HARIDUSE JA TEADUSUURINGUTE AMETLIK KESKMISE AMETLIKU AMETLIKU AMETLIKU AMETLIKU TÜÜMEENIÜHINGU ÜLIKOOL Bioloogiainstituut botaanika, biotehnoloogia ja maastikuarhitektuuri osakond S.P. Arefiev MAKSUSTAMINE Haridus-ja metoodiline kompleks. Suuniste üliõpilaste tööprogramm 35.03.10 Profiili täiskoormusega maastikuarhitektuur Dekoratiivtaimede kasvatus ja puukoolid Tumeenia Riiklik Ülikool. "

"Kaug-Ida Riiklik Ülikool V.V. Isayev Synergetics bioloogia sissejuhatavas õpik Vladivostok töövihik on koostatud tuginedes loengukursuse õpilastele rakubioloogia instituut Kaug-Ida State University, loe autor mitu aastat ja on kohandatud bioloogid, lihtsustatud ja illustreeritud põhiideed mittelineaarne teaduse (sageli nimetatakse sünergia), sealhulgas bifurkatsioonide teooriad ja. "

"MUNICIPAL BUDGETARY HIGHER EDUCATION INSTITUTION" KOKKULEPP Nr 18 "Kohtumistel" kinnitatud "ShMO loodusteaduste direktori asetäitja MBOU" Keskkool nr 18 "Leader T.I. Antonovich UVR LA-ga Ishutin V.N. Nikitini protokoll nr 1, 23. mai 2014. HARIDUSKAVA BIOLOOGIA 5 9 KLASS (GEF) Abakan Selgitav märkus See bioloogiaprogramm põhineb föderaalvalitsuse haridusstandardil. "


Seotud Artiklid Hepatiit