C-hepatiidi PCR analüüs

Share Tweet Pin it

Hepatiidi diagnoos sisaldab mitmeid viiruse olemasolu kindlakstegemiseks veres. Üks haiguse avastamise viise on selline uurimismeetod nagu C-hepatiidi PCR. Miks on hepatiidi PCR analüüsi oluline nii, nagu seda tehakse ja detekteeritakse?

Mis see on?

Polümeraasi ahelreaktsiooni või PCR-i kasutatakse maohaavandi, koliidi, enteriidi diagnoosimiseks. Kuid selle peamine eelis seisneb selles, et see aitab organismil tuvastada nii C-hepatiidi viirust kui ka selle antikehasid, millel on võime mitte põhjustada immuunsüsteemi reaktsioone nende muteerumise võime tõttu.

Uuring ja selle olemus seisneb teatud tingimuste loomises, mille alusel toimub hepatiidi RNA ahelreaktsioon. Kui leitakse kokkulangevus võrreldes C-hepatiidi viiruse nukleotiidijärjestusega, siis see näitab, et veres leidub viiruse osakesi, ja maksa levivad protsessid. Kui viiruse kogus on alla teatud taseme, tehakse negatiivne diagnoos ja kui see on kõrgem, siis on see positiivne.

Hepatiidi PCR-meetodil kasutatakse kahte tüüpi vereanalüüse: kvantitatiivne analüüs ja kvalitatiivne analüüs.

Nagu eespool mainitud, määrab kvantitatiivne PCR hepatiidi viiruse RNA kontsentratsiooni. Lisaks on ta võimeline andma teavet intensiivsuse kohta, millega patoloogia areneb, ja ettenähtud ravi tõhusust. Hepatiidi C kvantitatiivne analüüs on äärmiselt tähtis, kuna see määrab vastupanuvõime viirusevastaste ravimite toimele ja võimaldab teil ravi kohandada.

Pärast seda, kui patsient läbib ravikuuri, aitab PCR määrata kohtumiste järjekorda. Mõnel juhul on vaja täiendavaid uuringuid. Näiteks kui ALP tase on suurenenud (kuid mitte rohkem kui 2 korda kuue kuu jooksul) ja analüüsi transkriptsioon viitab viiruse koormusele üle 105 RÜ / ml, antakse patsiendile biopsia. Kui PCR kvantitatiivne analüüs näitab tugevat põletikku ja fibroosi, on patsiendile ette nähtud ravi viirusevastaste ravimitega.

Olukorra puhul, kus suur arv viiruseosakesi on kombineeritud kõrge ALT-ga, tuleb patsienti kohe ravida ilma täiendavate diagnostiliste abinõudeta.

Võtke see test ja teada, kas teil on probleeme maksaga.

Hepatiidi veres kvantitatiivse analüüsi abil saab kvalifitseeritult kvalifitseeritud ja kogenud spetsialistid dešifreerida ja tänapäevased tehnoloogiad aitavad seda teha vähese viiruse kontsentratsiooniga veres.

PCR-i kvalitatiivne analüüs on mõeldud kindlaks tegema ja kinnitama viiruse tegelikku olemasolu organismis. See viiakse läbi, kui hepatiidi antikehad tuvastatakse veres. See on hepatiidi kvalitatiivne analüüs, mis tagab tulemuse täpsuse 100% võrra ja võimaldab teil diagnoosida haiguse varajastes staadiumides, mis võimaldab alustada võitlust hepatiidi vastu juba esimestel nädalatel pärast nakatamist ja suurendab täielikku taastumist (haiguse B korral).

PCR-i eelised

PCR uuringus ja hepatiidi vereanalüüsi detekteerimisel saate määrata ka patogeeni genotüübi. Kuid kokku on 6 viiruse genotüüpi ja suur hulk alatüüpe, kuid meie piirkonnas on sagedased 1, 2 ja 3 genotüübid.

Seda tüüpi diagnoosi muud eelised on:

  • saadud indikaatorite kõrge täpsus ja väike vea tõenäosus nendes;
  • kõrge viiruse osakeste tundlikkuse tase veres;
  • võimalus mitme haigusetekitaja identifitseerimiseks korraga;
  • kõrge antigeense varieeruvusega patogeensete intratsellulaarsete mikroorganismide diagnoosimine;
  • hepatiidi analüüsi dekodeerimisega töötades võimaldab teil tuvastada varjatud praeguseid infektsioone.

Kes on määratud

Hepatiidi PCR-analüüsi läbivad järgmised inimesed:

  • rasedad naised;
  • tervishoiutöötajad;
  • potentsiaalne veri ja doonorid;
  • need, kellel on haiguse iseloomulikud tunnused;
  • HIV-nakkusega inimesed;
  • uimastisõltlased;
  • promiscuous.

Kuidas toimub analüüs ja selleks on vajalik koolitus?

Vereproovi võtmine PCR-i jaoks toimub veenist. Tavaliselt toimub see hommikul enne seda, kui inimene on söönud, sest pärast toidukorda söömist peab vähemalt 8 tundi läbima. Äärmuslikel juhtudel võib verd kontrollida päeva või õhtul, kuid analüüsi ja toidutarbimise vaheline ajavahemik peab olema vähemalt 5 tundi.

Inimtegur võib tulemusi kvantitatiivselt mõjutada: nende täpsus väheneb mõnel juhul 100% -lt 95% -le, seetõttu on vaja ette valmistada vere annetamist. Analüüsimiseks kasutatava biomaterjali kvaliteet on asjakohane, kui patsient järgib järgmisi reegleid:

  • enne vere andmist võite jooma ainult puhta veega;
  • kaks päeva enne uuringut on vaja keelduda praetud ja rasvase toidu ning alkohoolsete jookide vastuvõtmisest;
  • üks päev enne labori visiiti peaks lõpetama ravimite võtmise. Kui see ei ole võimalik, on tingimata teatada laboritehnikule ja ravivabale arstile;
  • päev enne, kui peate vältima stressirohke olukordi ja füüsilist koormust;
  • ultraheli-, röntgeni- ja instrumentaalanalüüse ei tohiks teha vahetult enne vereannetamist;
  • analüüsi tunni pärast tuleb hoiduda suitsetamisest;
  • 20 minutit enne vere annetamist peate häirima, rahunema ja välja hingama.

Kui laps alla 5-aastase lapse saab uuringu, peavad lapsevanemad tagama, et ta jookseb keedetud vett iga 10 minuti järel pool minutit enne biomaterjali võtmist.

Saadud andmete dekrüpteerimine

Analüüsi dekodeerimist võib esitada sõnadega (kvalitatiivse uuringu puhul), näiteks "ei tuvastatud" ega "allpool muutuste ulatust". Esimesel juhul näitab see, et infektsiooni ei leitud. Teises - viirus olemas, kuid väikestes kogustes. Selline olukord nõuab uuesti teadusuuringuid.

Viiruslik koormus määratakse infektsioosse RNA koguse järgi ja seda nimetatakse IU / ml või koopiateks / ml.

C-hepatiidi kvantitatiivse analüüsi normaalne indikaator (norm) on vahemikus 1,8x102 kuni 2,4x107 RÜ / ml.

Viiruse kontsentratsioon veres võib olla:

  • madal: 600 IU / ml kuni 3x10 4 / ml;
  • keskmine: alates 3x10 4 RÜ / ml kuni 8 x 105 RÜ / ml;
  • kõrge: rohkem kui 8x10 5 RÜ / ml.

Hepatiidi PCR-i kvantitatiivne ja kvalitatiivne analüüs võimaldab kindlaks teha viiruse olemasolu organismis ja selle kontsentratsiooni taset. Mitmemõõtmeline ahelreaktsioon suudab diagnoosida haigust oma varases staadiumis, kuid selleks on vaja patsiente võimalikult kiiresti pöörduda arstide poole ja aidata rangelt järgida arsti soovitusi.

PCR-diagnostika kasutamine

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) molekulaarbioloogias on eksperimentaalne meetod viiruste avastamiseks. See võimaldab märkimisväärselt suurendada teatud nukleiinhappefragmentide (DNA) kontsentratsiooni bioloogilise materjali proovides, mis võimaldab neid (tuvastada) ja lugeda.

Analüüs viiakse läbi järgmiselt. Toru sisestatakse geneetiline materjal (vereproov), mis võib potentsiaalselt sisaldada soovitud geeni. Samuti on paigutatud praimerid - soovitud geeni väikese pikkusega keemiliselt sünteesitud segmendid.

Samuti lisatakse anumasse DNA või RNA polümeraas, see suudab moodustada nukleiinhappeahela, mis on täielikult originaaliga identne. Saadud kompositsioon süstitakse ja moodustatakse neli vaba nukleotiidi - spetsiaalne ehitusmaterjal RNA või DNA jaoks, millest üks sisaldab radioaktiivseid fosforiosakesi.

Saadud segu kuumutatakse temperatuurini 95-96 ° C, mistõttu koondatakse kaks tavaliselt harjunud DNA-heelikku. Siis ravimit jahutatakse, millal praimerid ise kinnitavad viiruse genoomi soovitud piirkonnale, takistades uuesti RNA (või DNA) kahekordse heeliksi moodustumist.

Jahutamise käigus otsib polümeraas vaba nukleotiidide ahelat. Selle ensüümi toimimiseks on vaja nukleotiidide ahelat. Kuna polümeraas libiseb mööda DNA ahelat (nagu köites olev rõngas), pole see võimeline töötama topeltheeliksiga.

Seejärel viiakse läbi korduv küttetsükkel, mille tõttu nukleotiidide ahelad on eraldatud. Kõigil nimetatud PCR-i tsüklitel suureneb hepatiidi soovitud geeni proovis sisalduv kogus eksponentsiaalselt ja ülejäänud geneetiline materjal toodetakse (kasvab) lineaarselt.

Pärast lahuse puhastamist nukleotiidijääkidest ja DNA ahela elektroforeesi eraldamist molekulmassi parameetriga saab hõlpsasti kindlaks teha, kas uuritavas proovis on soovitud geen või mitte.

PCR-i eelised

PCR-i abil tehtavad laboriuuringud võimaldavad saada rohkem teavet kui viiruse RNA olemasolu. Radioaktiivse kiirguse taseme parameetri määramisel on võimalik kindlaks teha, kui palju geneetiline materjal oli algselt uuritavas proovis. Hepatiidi korral määrake viiruse koormuse näitaja.

Selle meetodi teine ​​eelis on CR reaktsiooni tundlikkus väga kõrge. See on palju kõrgem kui klassikalised viiruste avastamise meetodid. Ideaalis piisab, kui soovitud geeni identifitseerimiseks PCR-i jaoks on ainult üks viirus proovis.

Lisaks on PCR täiesti spetsiifiline. Selle praimerid on konstrueeritud nii, et need vastavad täielikult soovitud geenide ainulaadsetele piirkondadele, millele pole teistsugust järjestust. Nagu sõrmejäljed on unikaalsed, on igas geenis unikaalsed nukleotiidjärjestused.

PCR-i kvalitatiivne analüüs

Kvalitatiivne analüüs võimaldab tuvastada ainult viiruse esinemist veres. See test tuleb läbi viia kõikide patsientide puhul, kellel leiti veres C-hepatiidi antikehi. Selle tulemuseks võib olla ainult üks kahest väärtusest: "tuvastatud" või "ei tuvastatud". Tervislikul inimesel ei tohiks norm (kontrollväärtus) olla "avastatud".

Selliste kvalitatiivsete uuringute tulemuste eriline tõlgendamine on järgmine:

  • Tulemuseks on "tuvastatud". See tähendab, et võetud bioloogilise materjali analüüsitavas proovis leiti C-hepatiidi viiruse jaoks spetsiifilise RNA fragmenti. Seega on tõsiasi, et patsient on nakatunud C-hepatiidi viirusega. ja see nakatab sel ajal uusi maksarakke.
  • Tulemuseks on "ei tuvastatud." Selline otsus näitab, et selles laboris saadud bioloogilise materjali analüüsitud proovis ei leitud ühtegi RNA fragmenti, mis on spetsiifiline C-hepatiidi viiruse suhtes. Teise võimalusena oli patogeeni infektsiooni RNA kontsentratsioon selles proovis väiksem kui testi tundlikkuse piirväärtus.

C-hepatiidi viiruse RNA akuutses faasis saab selliseid kvalitatiivseid uuringuid PCR-meetodiga tuvastada juba 1-2 nädala jooksul kohe pärast kehahaiguse nakatumist, st juba ammu enne hepatiidi antikehade tekkimist.

Selle uuringu ebaõigeid katse tulemusi saab järgmiselt:

  • saastunud biomaterjal;
  • hepariini esinemine patsiendi veres;
  • keemiliste või valguliste ainete (inhibiitorite) olemasolu proovis, mis mõjutavad PCRi erinevaid komponente.

PCR-i kvalitatiivse analüüsi läbiviimiseks ei ole patsiendile vaja spetsiaalset ettevalmistust uuringuks teha. Materjalina kasutatakse venoosset verd.

Tulemuste hindamine

Kvaliteetsetel PCR-testidel on teatav tundlikkus ning sõltuvalt uuringute täpsusest ja laboratooriumi varustuse tasemest võib varieeruda vahemikus 10-500 RÜ / ml.

See tähendab, et kui vereproovis esinev viirus on väga madalal kontsentratsioonil (vähem kui selle labori tundlikkuse läviväärtus), siis võib tulemuse määrata patsiendi patsiendil kui mitte tuvastatud. Sellepärast on viirusevastase raviga patsientidel, näiteks vähese viiremia (vähese viiruse kontsentratsiooni) korral PCR-i kvalitatiivse analüüsi läbiviimisel väga oluline teada selle diagnostilise süsteemi tundlikkuse lävi.

Diagnostika süsteemide variandid

Viroloogilise ravivastuse kontrollimiseks soovitatakse kasutada viirusevastaseks raviks diagnostilisi süsteeme, mille tundlikkuse lävi on vähemalt 50 RÜ / ml. Need kriteeriumid on täidetud näiteks Cobas Ampicolori HCV-testi analüsaatoritega (täpsusega kuni 50 RÜ / ml) ja RealBest'i HCV RNA-ga (tundlikkusega 15 RÜ / ml).

Vastavalt Maailma Tervishoiuorganisatsiooni soovitustele on C-hepatiidi lõpliku diagnoosimise kindlakstegemiseks vaja aluseks võtta ainult C-viiruse RNA kolmekordset avastamist patsiendi seerumiproovides teiste hepatiidi markerite sortide puudumisel.

Lisaks PCR meetoditele kasutatakse ka TMA analüüsi (transkriptsiooni amplifikatsiooni meetodit) HCV RNA tuvastamiseks patsientidel. Sellel on parim tundlikkusläve (5-10 RÜ / ml), kuid meie riigis selline katsemeetod pole veel väga levinud.

Avastatavate viiruse modifikatsioonide hulk

Selline C-hepatiidi viiruse RNA esinemise seerumis kvalitatiivne määramine võimaldab kindlaks teha selle viiruse mitu genotüüpi. Praegu teab teaduses rohkem kui kuus selle viiruse genotüüpe, samuti umbes 10 selle haiguse alatüüpi.

Meie riigis on levinud viirused 1, 2, 3 genotüübid. Laboratooriumid võivad avastada järgmisi genotüüpe: 1a ja 1b, 2a, 2b ja 2c, samuti 3, 4, 5a ja 6, sõltumata alatüüpidest. Kõigi viiruse modifikatsioonide puhul on avastamise spetsiifilisus 100%.

PCR kvantitatiivne analüüs

Kvantitatiivse PCR-testi abil määratakse hepatiidi viiruse kontsentratsioon vereproovides (viiruskoormus). See vireemia katse (viiruse kontsentratsioon) võimaldab määrata kindlaksmääratud hulga teatud geneetilise materjali (kõige viirusliku RNA) ühikute arvu. Sellisel juhul määrake selle kontsentratsioon 1 ml, mis vastab 1 cu. vaata

Analüüsi kvantitatiivsed parameetrid on esitatud joonistel, selleks kasutatakse mõõtühikuna rahvusvahelist ühikut (RÜ) milliliitri kohta (ml), mida nimetatakse IU / ml. Praegu mõnedes laborites võib viiruse hulga määrata teistes üksustes: koopiate arv milliliitri kohta on näidatud koopiate / ml.

  • Kuupäevad: C-hepatiidi puhul viiakse selline PCR kvantitatiivne analüüs vahetult enne ravi alustamist. Siis 1., 4., 12. ja 24. nädalal. 12. nädala hindamine on soovituslik, see võimaldab kindlaks määrata ravi efektiivsuse.
  • Analüüsi ettevalmistamine. PCR-i kvantitatiivse analüüsi läbiviimiseks ei ole patsiendile ette nähtud spetsiaalset ettevalmistust uuringuks. Pool tundi enne proovide võtmist ei tohiks suitsetada. Laboratoorsel materjalil kasutatakse venoosset verd.

Tulemuste hindamine

Erinevate laboratoorsete testimissüsteemide jaoks on selle indikaatori jaoks erinevad ümberarvestuskoefitsiendid IU / ml kohta. Keskmiselt võtavad nad konversiooni parameetrit, mille korral 4 koopiat / ml = 1 RÜ / ml. Näiteks kui labor annab tulemuseks PCR analüüsi 2,4 * 10 6 koopiat / ml, siis tuleb see parameeter jagada 4-ks ja saame 6 * 10 5 RÜ / ml.

800 000 RÜ / ml koormust peetakse kõrgeks, mis vastab ligikaudu 3000 000 koopiat / ml. Mõnede autorite arvates vastab madal vireemia kvantitatiivse PCR parameetritele alla 400 000 RÜ / ml.

Kvantitatiivse testi tulemusena ei saa lõplikke tulemusi esitada digitaalse väärtuse kujul, vaid: "mõõtepiirkonna all" või "ei leitud".

  • Hindamine: "allpool mõõtepiirkonda." See viitab sellele, et kvantitatiivne test ei suutnud tuvastada C-hepatiidi viiruslikku RNA-d, kuid viirus ise on organismis väga madala kontsentratsiooniga. Seda tõendab täiendav kvalitatiivne test, mis kinnitab viiruse olemasolu.
  • Hinnang: pole tuvastatud. See tulemus näitab, et viiruse RNA proovis ei leitud kvantitatiivset testi.

Viirusliku koormuse parameeter määrab ennekõike haiguse nakkushaiguse astme, patsiendi "nakkavuse" taseme. Mida kõrgem on patsiendi viiruse kontsentratsioon, seda suurem on tõenäosus selle üle anda teistele inimestele. Näiteks seksuaalvahekorras koos haigete inimestega või vertikaalselt. See kvantitatiivne näitaja aitab samuti kindlaks teha patsiendi ravi efektiivsust.

Kõhukinnisuse kvantitatiivse analüüsi läbiviimine on viirusevastase ravi seisukohast oluline, hinnates selle edukust ja planeerides ravikuuri kestust. Seega võib ravi kestus olla lühenenud, kui organism ravib kiirelt reageerivalt ravi ja madala vireemia tasemega.

Kui kvantitatiivne PCR parameeter aeglaselt väheneb, tuleb viirusevastast ravi pikendada või modifitseerida. Kui viiruse koormuse tase on madal, siis on see teraapia soodne tegur, kuid kui see on kõrgendatud, siis kasutatav ravimeetod on ebaefektiivne ja ravimeid või nende kasutamise viise tuleb muuta.

Diabeet C-hepatiidi PCR-iga

Mitte igaüks ei tea, miks nad kasutavad C-hepatiidi PCR-diagnoosimeetodit. Üks kõige levinumaid haiguste rühmi on seedetrakti nakkushaigused. Kõige sagedamini on mürgis (haavandid), soolestik (koliit, enteriit) ja maks (hepatiit).

Kõigi eespool loetletud elundite seas on suurimaks koormuseks maks. Keha sees on maksa roll äärmiselt oluline:

  1. Peaaegu kõik metaboolsed reaktsioonid leiavad aset maksas (siin moodustuvad kõik olulised komponendid, mis võimaldavad organismil täielikult toimida).
  2. Maks on peamine detoksifitseerimisorgan. Selle abiga (eriti läbi sapi) eemaldatakse paljud substraadid, mis võivad põhjustada joobeseisundit ja põhjustada tõsiseid tagajärgi.

Kahjuks ei jälgi paljud inimesed oma tervist, sest maksa hakkab kannatama. Erinevate etioloogiate (viirusne, toksiline) hepatiit areneb tavaliselt.

Hepatiidi määratlus

Viiruslik hepatiit on oluline koht maksahaiguste seas. Haiguse kulgu tõsidus, ravi keerukus paneb nad selle organi teise olemuse patoloogiasse esikohale.

Kogu hepatiit jaguneb ägedaks ja krooniliseks. A-ja B-hepatiit on klassifitseeritud ägedaks. Kroonilise C-hepatiidi hulgas esineb esmakordselt.

See haigus on põhjustatud C-hepatiidi viirusest. Selle haiguse iseloomulik tunnus on see, et haigus võib kesta pikka aega ilma kliiniliste ilminguteta.

See edastatakse peamiselt vere kaudu. Verejooksuga siseneb viirus maksa, kus see hakkab rakkudes paljunema. Virioni akumuleerumise tagajärjel tekib nakatunud hepatotsüütide hävitamine. Selle tagajärjel hakkavad tootma antikehad, mis hakkavad hepatotsüütide jääke rünnakuma. Selle tulemusena on aja jooksul arenenud maksarakkude kogum, mis süvendab haiguse kulgu.

Kuna haigus on asümptomaatiline või asümptomaatiline ning kliinilised sümptomid ilmnevad ainult märkimisväärse raku kahjustusega, nõuab see haigus diagnoosimeetodite loomist, et tuvastada selle olemasolu ja võtta asjakohaseid meetmeid.

Hepatiidi C diagnoos: kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed analüüsid

Praegu kasutatakse hepatiit C diagnoosimiseks selliste meetoditega nagu maksa biopsia, immunogramm.

Need võimaldavad teil otseselt määrata nakatunud hepatotsüütide (maksa biopsia proov) olemasolu või spetsiifilisi antikehi mõjutatud rakkude vastu (immunogramm). Siiski on olemas meetod, mis võimaldab usaldusväärselt tuvastada viiruse olemasolu. See PCR on polümeraasi ahelreaktsioon.

Selle meetodi olemus seisneb selles, et teatavatel tingimustel tekib RNA ahelate tootmine. See on tingitud asjaolust, et veres on viiruse osakeste fragmendid või biopsia. Kui nendega ühendatakse mõned molekulid keskkonnas, tekib viiruse RNA-le täiendavate ahelate süntees. Järgnevas analüüsis ja võrdluses C-hepatiidi viiruse teadaoleva nukleotiidjärjestusega on võimalik kindlaks teha, kas viirus on organismis ja kas maksakahjustus on olemas.

PCR viiakse läbi pärast spetsiifiliste antikehade tuvastamist veres hepatiidi viiruse suhtes. Pärast testi tulemust tehakse - RNA on "tuvastatud" või "ei tuvastatud". Vahel võib ta öelda, et "pole piisavalt materjali" - antud juhul on vaja hepatiidi C analüüsi korrata.

Kui viirusosakeste arv on väiksem kui nõutav minimaalne kogus, siis võime öelda, et hepatiit puudub ja geneetiline materjal võib minimaalse hulga geneetilisest materjalist mimikri või mõne nukleotiidjärjestusega, mis võib kokku puutuda viirusega, "segamini ajada".

  1. PCRiga võib negatiivset tulemust täheldada, kui veres on tõesti viiruse osakesed, kuid need on nii väikesed (nakatumine toimus hiljuti või analüüsidele eelnes pikaajaline ja intensiivne viirusevastane ravi), et katsesüsteem lihtsalt ei suutnud nende kontsentratsiooni õigesti määrata. RNA - "ei tuvastatud."
  2. Kui PCRil on positiivne tulemus, on veres nii palju viiruse osakesi, et nende arv ületab katsesüsteemi madalama tundlikkuse läve. Sellisel juhul on oht nakkusprotsessi tekkeks (või see on juba üsna kaugele jõudnud). Tavaliselt on viiruse suur hulk juba ravi ja järgneva maksa siirdamise näide.

Mõnikord võib test osutuda vale-positiivseks või vale-negatiivseks.

Hepatiidi vales negatiivne PCR-i tulemus on täheldatav, kui reaktsioonikeskkonnas on mõningaid komponente, mis takistavad viiruse osakeste koopiate moodustumist. Seetõttu ei ole võimalik saada tõelist pilti vere seisundist, mis aitab kaasa viiruse läbimisele ja haiguse progresseerumisele. Hepariini esinemine veres võib samuti mõjutada reaktsiooni (vähendades vere suhtelist viskoossust). Analüüsi väär tõlgendamine on võimalik isegi siis, kui uuritava materjali transportimise ja ladustamise tingimused ei olnud täidetud.

Valepositiivsed tulemused, kui diagnoositakse C-hepatiit, tekitab PCR kõige sagedamini tuberkuloosi või töökeskkonna saastumist. Lisaks sellele võib positiivseid tulemusi täheldada teiste hepatiidi viiruste rühmade juuresolekul (ristreaktsiooni tõttu).

PCR-i kvalitatiivne analüüs hepatiit C avastamiseks

Paljude krüoglobuliinide sisaldus veres mõjutab otseselt ka PCR-i käitumist. Sellepärast on enne C-hepatiidi testi tegemist hädavajalik määrata nende kontsentratsioon veres, et tuvastada tulemuse moonutamine eelnevalt ja vältida selle tekkimist.

Pärast neid katseid selgub, kas veres on viirusosakesed. Nende määramisel on soovitatav kohe alustada viirusevastast ravi, et protsessi progresseerumist aeglustada. Erinevalt B-hepatiidist ei ole C-hepatiidi raviks täielikku ravi; haigus läheb ainult varjatud staadiumisse ja hakkab kulgema aeglasemalt. Maksakahjustus on paratamatu. Protsessi viimasel etapil, kui maks ei suuda enam funktsiooni toime tulla, võib see olla vajalik selle siirdamiseks.

Ravi toimub peamiselt kahel ravimil - interferoonil ja ribaviriinil.

Tõestasid oma efektiivsust hepatotsüütide lagunemise protsessi aeglustamisel. Lisaks sellele on infusioonravi ette nähtud maksa töö hõlbustamiseks.

Kõik patsiendid, kellel on veres leiduva viiruse osakeste arvu suurenemine, registreeritakse tingimata hepatoloogiga. Mitu korda aastas on soovitatav läbi viia ennetav kontroll, et teha kindlaks protsessi progressioon ja siirdamise indikaatorite õigeaegne tuvastamine. Lisaks on võimalik hepatoprotektoreid kasutada, kuigi arstide arvamused erinevad mõnevõrra. Mõned usuvad, et need ravimid võimaldavad teil protsessi peatada ja kaitsta endiselt kahjustamata hepatotsüüte; teised on veendunud, et nende võtmine pole mõtet ja intensiivne viirusevastane ravi tuleb läbi viia.

Seega kuulub C-hepatiit haiguste kategooriasse, mille tuvastamisel esineb mõningaid raskusi. Diagnostikameetodite parandamine ja õigeaegsed ennetavad uuringud vähendavad selle haiguse esinemist. Oluline on selle haiguse ennetamine. Vältida tuleks kontakti verega, keelduda ravimite võtmisest, ainult siis, kui haigus likvideeritakse. Ennetuse ja ravi peamine eesmärk on patsiendi teadlik suhtumine oma tervisele.

C-hepatiidi PCR-analüüsi dekodeerimine

Spetsiifiline laboratoorne uuring - PC-viiruse analüüs hepatiit C - oluliselt lihtsustab selle viirushaiguse diagnoosimist. C-hepatiit ei ole erand. Vana proovi verest saab testida viirusevastase aine rna ja muu geneetilise materjali sisalduse suhtes. Kõik patsiendid, kellel on hepatiit C vastased antikehad, tsirkuleerivad vereplasmas, analüüsitakse PCR abil, mille olemasolu kinnitas kvalitatiivset avastamist.

Tulemuste tõlgendamist tõlgendatakse uurimisvormi veerus kui "positiivset" või "negatiivset" analüüsi. Lisaks on PCR-i abil võimalik mitte ainult määrata minimaalne viiruse sisaldus, vaid ka osakeste arv. Seega on võimalik määrata hinnanguline viiruse koormus ja määrata meditsiinilise ravi taktika nii täpselt kui võimalik.

Viiruslik maksakahjustus

Maksa kui seedetrakti elemendiks on tohutu koorem. Tema rakkudes esineb kõige metaboolsetest metaboolsetest reaktsioonidest, mis tagavad kõikide elundite ja süsteemide optimaalse toimimise. Samal ajal on selle detoksifitseeriv väärtus suurepärane räbu ja metaboolsete toodete eemaldamiseks ensümaatilise sapiga.

Maksa katkestamine erineva iseloomuga viirustega on kehale väga ohtlik. Mitmekesine kliiniline pilt ja ravivastuse mittetäitmine viivad hepatiidi esile ohtu tervisele. C-hepatiit on krooniline ja võib pikka aega olla negatiivne, inimkeha aeglaselt parasiitidena. Viirus levib bioloogiliste vedelike kaudu: verd ja vähem sperma kaudu. Mittesteriilsete süstalde kuritarvitamine, nakatunud naiste loomulik sissetoomine, tervishoiutöötajate juhuslikud vigastused või kärped võivad põhjustada viiruse ülekandmist tervetele inimestele.

Haiguse õigeaegset diagnoosimist takistab peidetud kliiniline pilt ja mittesüstemaatiline patoloogia. Positiivset tulemust võib lihtsalt halvasti toimivate analüüsidega kaotada. Ainult märkimisväärne kahju maksa rakkudele põhjustab teatud sümptomaatiat, kuid vireemia negatiivne mõju ei jäta seega võimalust elundi taastamiseks.

Kaasaegne meditsiin on välja töötanud spetsiaalsed meetodid vähimatki viiruse jälgede äratundmiseks. PCR, IFA, maksa biopsia võib tuvastada vähimatki maksakahjustust ja minimaalset viirusevastaste antikehade taset. PCR-i abil on analüüsimine kõige lihtsam ja usaldusväärsem.

Kvalitatiivne analüüs

Polümeraasi reaktsiooni olemus on rna järjestuse genereerimine. Reaktsioon viiakse läbi samade viirusvalkude manulusel vereplasmas.

Spetsiaalsed katalüsaatorid võimaldavad sünteesida sarnast ahela viiruse järjestust, mida võrreldakse viiruse RNA tuntud nukleotiididega. Selle põhjal määravad nad kindlaks viiruse koormuse ja maksakahjustuse.

PCR suudab püüda isegi soovitud geeni ühe kohaloleku vereproovis. Selline diagnostiline ahelreaktsioon on samuti väga spetsiifiline. Nukleotiidide ahelate järjestus on iga olendi jaoks ainulaadne, nii et ensümaatilised praimerid loovad soovitud geneetilise teabe identsed järjestused. Seega võib iga viirust tuvastada vähimatki täpsusega, isegi kui selle kvantitatiivne näitaja on äärmiselt väike.

Patsientidel, kelle veres leiti antikehasid viirushepatiidi vastu, vii läbi PCR või Eph kvalitatiivne uuring. Analüüsi tulemus võib olla nii positiivne kui ka negatiivne, mis mõlemal juhul nõuab ravi.

Ahelreaktsiooni positiivne reaktsioon tuleks detekteerida hepatiidi viiruse RNA fragmentide esinemisena või infektsiooni nähtusena.

Praegu on vereplasm aktiivselt paljunev ja maksa rakkudes parasiitne. PCR-diagnostika võib anda negatiivse vastuse, kui plasmas esineb vähe viiruse RNA osakesi, mis on madalamad kui testi tundlikkus, või üldse mitte. Pärast otsest nakatumist kasvab viiruse hulk suhteliselt aeglaselt ja alles 1-2 nädala möödudes saab IFAS või muu kvalitatiivne uuring neid isoleerida.

Negatiivset analüüsi saab järgmistel juhtudel:

  1. Materjali võtmisel ebasoodsates tingimustes, saades vereproovi saastumisega;
  2. Kui patsient on varem saanud hepariini süsti.
  3. Võttes võetud proovide teiste ensüümide ja substraatide esinemine häirib ahelreaktsiooni kulgu.

Kvantitatiivne analüüs

Kvantitatiivne test mikrobioloogilise diagnoosina on mõeldud viiruse koormuse määramiseks. Geneetiliselt muundatud materjali koguse ja selle kontsentratsiooni määramise aluseks on kinnitatud kvalitatiivne analüüs vireemiale. Avastatud viiruse rna arv määratakse vere koguse ühikuna, tavaliselt 1 milliliitris. Nõutavad materjalid on väljendatud rahvusvahelistes üksustes, mõned laborid kasutavad eksemplaride arvu analüüsi käigus.

Tavaliselt analüüsitakse enne PCR-i mis tahes raviskeemi kvantitatiivset analüüsi. Viiruse rna loendamine toimub üsna tihti: pärast ühe, nelja, kaheteistkümne ja kakskümmend neli nädalat. 12. nädala peetakse indikatiivseks, kuna analüüsi põhjal viiakse selle perioodi jooksul läbi ravimeetmete tõhususe tõlgendamine.

Kvantitatiivne analüüs, kasutades PCR-i või IFA-d, hõlmab veeniproovide võtmist.

Tulemuste tõlgendamine kui kõrge viiruskoormus algab joonest 800 000 RÜ / ml. Selline C-hepatiidi positiivne tulemus peegeldab vähemalt 3000 000 koopiat milliliitri vere kohta. Vireemia madal tase lakkab 400 000 RÜ / ml. Uuringu tulemused võivad olla negatiivsed, aga ka näitaja "mõõtepiirkonna all".

Kvantitatiivne test, mille hinnanguline väärtus "alla mõõtepiirkonna" ütleb, et reaktsiooni ajal ei olnud võimalik RNA arvutada. Viirus liigub endiselt kehas, nagu näitab positiivne kvalitatiivne test. Pcr või ifa kvantitatiivse analüüsi negatiivne näitaja näitab rna puudumist selles vereproovis.

Vaatamata piiratud viisidele viiruse ülekandumise kaudu verest, suureneb risk, et viirus ületab sugu näärmete sekretsiooni emalt lapsele.

Kvantitatiivne analüüs annab olulist abi terapeutilise sekkumise hindamisel. Ifa ja PCR peegeldavad viirusevastaste ravimite toimet, aitavad kindlaks määrata ravi aja ja määravad patsiendi immuunsuse tekkimise. Laboratoorsete testide varane negatiivne reaktsioon näitab edukat ravi ja vajadust ravi kestuse vähendamiseks. Vireemia mööduvat langust võib tõlgendada kui teraapia muutmise vajadust. Viiruslike koormuste tase määrab haiguse prognoosi. Madala kiirusega hepatiit on tõenäoliselt lihtsalt ravitud ja viirust saab organismist täielikult eemaldada. Kõrge viirusliku esinemise määr veres nõuab hoolikat tähelepanu ja mitmekülgset ravi.

Hepatiidi C kvalitatiivne analüüs

Jäta kommentaar 7,180

Polümeraasi ahelreaktsiooni kvalitatiivne analüüs - C-hepatiidi PCR-i määramine määrab kindlaks HCV olemasolu või puudumise organismis. Laboratoorsetes tingimustes uuritakse RNA struktuuri, mis sisaldab viirust. Viiruse C avastamise korral on vaja läbi viia ravikuuri, sest maksa tähelepanuta jäetud seisund põhjustab tõsiseid tagajärgi. Kõrgekvaliteetne PCR viiakse läbi ka pärast taastumist, et kinnitada antikehade puudumist. Määratud tavapäraseks kontrollimiseks. PCR (kvalitatiivne), mis põhjustab vereseerumis madalat kontsentratsiooni, ei pruugi midagi tuvastada, kuna diagnostilise süsteemil on oma tundlikkuse piirväärtused. Haiguse esialgse või kerge vormi korral viiakse PCR ultra-diagnostika läbi ultra-tundlikes seadmetes.

Mis on RNA viirus?

C-hepatiidi viiruse (või C-hepatiidi viiruse RNA) termin RNA on maksahaigus ise. Viirus C seostub organismi tervete rakkudega sissetungimise kaudu. Aja jooksul levib kogu keha, on vaja ainult sattuda verdesse. Selle tulemusel tungib patogeen maksa sisse, kaitseb selle rakke ja teeb kõvasti tööd. Maksa rakud (hepatotsüüdid) töötavad selle mõju all, muutuvad ja sellest surevad nad. Mida kauem on viirus C maksas, seda suurem on rakkude arv. Aja jooksul arendada ohtlikke haigusi, mis põhjustavad pahaloomulise degeneratsiooni ja surma.

Maksa infektsioon selle tüüpi viirusega ei pruugi ilmneda väljastpoolt. Paljude aastate või aastakümnete vältel tunneb nakatunud inimene täiesti tervislikku seisundit ja sagedamini näitab patoloogiat ainult juhusliku uurimisega. Hepatiidi veres annetamisel uuritakse osa inimese RNA (ribonukleiinhappe) ahelast, mis on inimese geeni osa (DNA). Laboratoorsete uuringute tulemusi ei tohiks kasutada enesehoolduseks, sest see on ainult näitaja. Täpne pilt ja täiendav diagnoos on arsti poolt paremini kindlaks määratud.

Kui see on valmis: teadustöö näited

HCV kinnitamisel viiakse läbi PCR analüüs (polümeraasi ahelreaktsioon). PCR-uuringud aitavad patogeenset materjali leida RNA struktuuris ja määrata tõhus ravi. Nimetatud järgmistel juhtudel:

  • maksa põletiku tunnuste avastamine;
  • profülaktika uuringud ennetamiseks;
  • kokkupuutuvate inimeste uurimine;
  • segapärase hepatiidi diagnoos (peamise patogeeni kindlaksmääramine);
  • viiruse paljunemisvõime taseme kindlaksmääramine kroonilises vormis;
  • maksa tsirroos;
  • et määrata ettenähtud ravi tõhusus.
Teadusuuringute PCR näeb ette arsti, et määrata kindlaks hepatiidi raviskeemi efektiivsus.

PCR-i kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs on olemas. Kvantitatiivne PCR näitab RNA protsentuaalset suhet viiruse kandjate hulka veres ja kvalitatiivne viiruse olemasolu või puudumine. Kvalitatiivne positiivne näitaja (C-hepatiidi RNA olemasolu) vajab ka kvantitatiivseid uuringuid. Hepatiidi põhjustava toimeaine kõrge kontsentratsioon seondub selle ülekandumise riskiga, teiste nakatamisega. Madal arv on paremini ravitav. RNA viiruste hulk veres ei ole seotud haiguse intensiivsusega. PCR-analüüs tehakse ka interferoonravi puhul, et määrata ravikuuri kestus ja keerukus.

Hepatiit C kõrge kvaliteediga PCR-analüüsi omadused

Polümeraasi ahelreaktsiooni indeksiga kvalitatiivne analüüs määratakse kõikidele patsientidele, kellel on veres C-hepatiidi antikehad. Haigestunud ja taastunud isikud peavad katse uuesti proovima. Soovitatav on läbida B-hepatiidi test, siis positiivse järelduse korral ja hepatiit D. Samuti tuleks kvalitatiivselt analüüsitud reaktsioon viia läbi koos teiste vereanalüüsidega. Analüüsid näitavad täielikku pilti viiruse levikust.

Katsetulemustest nähtub, et ainult C-hepatiidi positiivne test on nähtav või negatiivne, see tähendab viiruse olemasolu või puudumine. Kui väljund on "tuvastatud", siis viirus on ja on endiselt aktiivne. Nimetus "ei tuvastata" tähistab viiruse või selle väikese koguse puudumist. Selle indikaatoriga tuleks meeles pidada, et diagnostiliste süsteemide analüütiline tundlikkus on erinev ja et RNA hepatiit C võib ikkagi veres olla, kuid ei avaldu analüüsis.

Eriti tundlik PCR-meetod ultrahepatiit C avaldub isegi vähesel määral. Kasutatakse fluorestsentsi hübridisatsiooni uuringut, mis on mitu korda kõrgem kui tavalised PCR-süsteemid. Seda meetodit kasutatakse mitmel juhul:

  • kahtlustatud peidetud C-hepatiidi vormid;
  • PCR-diagnostika ei kinnita patogeeni, kuid seal on antikehi;
  • tagasinõudmise korral;
  • varajase nakkuse tuvastamiseks.
Tagasi sisukorra juurde

Dekodeerimisanalüüs

HCV dekodeerimine PCR-iga mõjutab lõplikku otsust diagnoosi andmisel eelkõige ultrametodmeetodil. Selle uuringu peamine puudus on proovi ja materjalide steriilsete tingimuste rangelt kinnipidamine. Väike kõrvalekalle mõnikord annab ebaõigeid analüütilisi järeldusi, raskendab diagnoosi ja järgnevat ravi. Hepatiidi RNA määramiseks PCR-i analüüs ei pruugi alati kindlalt näidata haiguse pilti, mõnikord on mõnikord ebatäpsed ja mõlemas suunas.

Hepatiidi viiruse diagnoosimisel soovitatakse kasutada terviklikku uuringut.

Näitajate norm

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüsi puhul peetakse uuringu tulemuste kohaselt viiruse hepatiit C JgM antikehade puudumist. Samal ajal näitavad seroloogilise analüüsi tulemused, et C-viiruse antikehade esinemine on samuti normaalne. Kvalitatiivne määratlus ei näita haiguse intensiivsust, see näitab ainult R-hepatiidi C põhjustatud agensit. Seda analüüsi korratakse pärast ravi, et kinnitada tegelikku taastumist.

Kõrvalekalded

Kui JgM antikehad esinevad HCV RNA-le, siis see viitab arenevale infektsioonile. Samaaegselt haigus jätkub ägedalt või krooniliselt, avaldub erinevates etappides. Kui antikehade arvu vähenemist registreeritakse, näitab analüüs, et ravitulemused saadi taastumise ajal. Diagnoosides leitakse ainult väga haruldasi valepositiivseid juhtumeid. Neid leidub naistel raseduse ajal ja teiste nakkushaigustega inimestel.

Hepatiit C PCR uuring: tüübid, näidustused, transkriptsioon

Viiruse hepatiit C on tõsine haigus, mis tekib maksakahjustusega. Kaheksakümmend protsenti patsientidest muutub see krooniliseks. Viirus levib maksarakkudes - hepatotsüütides - ja põhjustab nende surma. Surnud kude asendatakse sidekoe fookustega, areneb fibroos.

Mis areng maksa fibroos ei suuda täita oma ülesannet, hakkab tsirroosi, mis on ohtlik selle tüsistused: kasvavat survet värativeeni, seedetrakti verejooks, halvenenud vere hüübimist, vaimseid muutusi tõttu kahjustada aju tuumade mürgiseid aineid.

Haiguse põhjuseks on viiruse nakatumine Flaviviridae perekonnast, mis kuulub RNA viiruste tüübi hulka. See tähendab, et geneetiline materjal, millega sünteesitakse patogeeni valgud, kodeeritakse ribonukleiinhappemolekulis. Infektsioon toimub vere kaudu, seksuaalselt ja rasedast naisest lootele. Kahjuks võib nakkuse ja antikehade tootmise algusest piisava ajaga edasi liikuda - kahe nädala kuni kuue kuu jooksul. See ei võimalda nakkuse tuvastamist immuunanalüüsi meetodil ja ravi alustamist ravi alustamiseks.

Mis on PCR-analüüs?

PCR on molekulaaranalüüsi meetod, mis võimaldab tuvastada patogeeni geneetilist materjali juba esimesel nädalal pärast infektsiooni, kasutades polümeraasi ahelreaktsiooni. Uuringul on kõrge spetsiifilisus, täpsus ja see võimaldab mitte ainult määrata viiruse olemasolu või puudumist, vaid ka selle kontsentratsiooni ja genotüüpi.

Uuringuks võetakse patsiendi veri, milles võib potentsiaalselt paikneda viiruse RNA. Verele lisatakse praimerid - väikese pikkusega soovitud geeni kunstlikult sünteesitud piirkonnad ja RNA polümeraas on spetsiaalne ensüüm, mis suurendab korduvalt patogeeni geneetilist materjali. Spetsiaalse seadme kasutamisel viiakse läbi mitu kütte- ja jahutustsüklit. Seejärel analüüsitakse materjali ja võrreldakse viiruse tuntud geene, mille põhjal tehakse järeldus infektsiooni esinemise või puudumise kohta.

C-hepatiidi PCR-analüüsi tüübid

On olemas kolm tüüpi PCR analüüsi:

  1. PCR-i kvalitatiivne analüüs. Uuringu esimene etapp. See võimaldab tuvastada viiruse geneetilise materjali veres.

  • PCR kvantitatiivne analüüs. Võimaldab määrata viiruse koormuse - patogeeni geneetilise materjali kontsentratsiooni ühes milliliitris veres. See uuring viiakse läbi enne ravikuuri algust ja seejärel esimesel, neljandal, kaheteistkümnendal ja (kui see on pikk) ravi kahekümne neljandal nädalal, et hinnata selle efektiivsust.

  • Genotüüpimine Hepatiidi C põhjustav põhjustab sageli ja kiiresti mutante. Selles viiruse genotüübis leidus planeedil seitse varianti. Venemaal on levinud esimene, teine ​​ja kolmas tüüp. Igal genotüübil on erinev resistentsus ravile, näiteks esimese tüübi ravi efektiivsus on kuuskümmend protsenti, teisel ja kolmandal juhul on see arv kaheksakümmend viis. Seega, selleks, et valida sobivad ravimid ja määrata piisava kestusega ravikuur, on vaja täpselt määrata, millist tüüpi viirust patsient nakatub.
  • C-hepatiidi PCR-analüüsi näited

    PCR uuring määratakse järgmistel juhtudel:

    • kokkupuude haigega, kellel võib nakkust esineda;
    • positiivne ensüümi immuunanalüüs;
    • tsirroosi tunnused: maksa suuruse muutused, põrna suurenemine, nahaaluse venoosse põrnakujulise näo tekkimine;
    • maksakahjustuse sümptomite ilmnemine: valu paremal kõhul, naha kollasus;
    • ALAT ja ASAT aktiivsuse suurenemine vere biokeemilises analüüsis;
    • enne viiruskoormuse määramist ravi alustamiseks;
    • viirusevastase ravi efektiivsuse jälgimine;
    • pärast ravi, et kontrollida relapsi;
    • diagnoositud hepatiit B juuresolekul, et välistada segatüüpi maksakahjustus.

    C-hepatiidi PCR-uuringute selgitus

    Hepatiidi C dekodeerimise PCR-analüüs ja ensüümi immuunanalüüs tuleks teha hepatoloog või nakkushaiguste spetsialist. PCR-i tulemuste analüüsimine on vajalik kombinatsioonis vere biokeemilise analüüsi, biopsia ja ultraheli andmetega. Ainult kvalifitseeritud arst oskab analüüsida uuringute tulemusi ja määrata nende alusel õige ravi.

    Kvalitatiivse analüüsi dekodeerimine.

    Analüüsitud bioloogilises materjalis leiti patogeeni geneetiline materjal. Infektsioon on kinnitatud.

    Infektsioon puudub või patogeeni RNA kogus on tundlikkuse piirist madalam.

    Kvantitatiivse analüüsi dekodeerimine.

    Normaalne tase tervetele inimestele. See tähendab, et uuritavas materjalis ei ole C-hepatiidi RNA-d ega selle kontsentratsioon on uuringu tundlikkuse piirist madalam.

    RNA kontsentratsioon on alla kvantifitseerimise vahemiku. Neid tulemusi tõlgendatakse väga hoolikalt, korreleerige neid teiste uuringute andmetega, sageli uuesti õppige.

    Viirusekoormuse tase antud kontsentratsioonil peetakse madalaks. Tavaliselt tähendab viiruse vähenemine seda, et ravi on edukas.

    Rohkem kui 8 x 10 5 RÜ / ml

    Viirusekoormuse tase antud kontsentratsioonil peetakse kõrgeks.

    Rohkem kui 2,4 * 10 ^ 7 RÜ / ml

    RNA kogus on üle kvantifitseerimisvahemiku ülempiiri. Seda tulemust ei saa teha viirusliku koormuse astme kohta. Sellistel juhtudel korratakse katset vereproovi lahjendamisega.

    Genotüübi dekodeerimine.

    Tuvastatud genotüübi tuvastatud RNA

    Biomaterjalis tuvastati teatud genotüübi ja alatüübi C-hepatiidi viirus. Tulemus on kodeeritud rooma numbrite ja ladina tähtedega, näiteks - 1a, 2b. Kokku on seitse genotüüpi ja kuuskümmend seitse alamtüüpi, kuid Venemaal on ainult kolm esimest tüüpi.

    Hepatiit C viiruse RNA avastati

    Venemaal leiti haruldast genotüüpi veres olevat RNA-d, mida ei saa seostada esimese, teise või kolmanda tüübiga. Rohkem teadusuuringuid on vaja.

    See tulemus näitab, et patsient on tervislik või et patogeeni RNA on liiga väike.

    On võimalik, et C-hepatiidi PCR-analüüs on negatiivne ja ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs tuvastab viiruse vastased antikehad. See tähendab, et patsiendil oli äge hepatiit C ja ta taastati iseendale. Umbes 20 infektsiooni juhtumit põhjustab spontaanne taastumine, kui patsiendi organismil on infektsioonile piisavalt vastupanu.

    Kuigi PCR on väga täpne analüüs, võib selle tulemusi moonutada järgmistel juhtudel:

    • vere transporditi laborisse sobimatutesse tingimustesse, temperatuur oli rikutud;
    • biomaterjaliproov oli saastunud;
    • oli veres hepariini ja teiste antikoagulantide jääkide jäljed;
    • Leiti, et uurijad on inhibiitorid - ained, mis aeglustavad või peatavad polümeraasi ahelreaktsiooni.

    PCR-i eelised muude meetodite puhul

    1. Diagnoos alguses. PCR tuvastab põhjustava toimeaine geneetilise materjali. Immunofluorestsentsanalüüsi abil saab määrata ainult immunoglobuliine - aineid, mis organism tekitab infektsiooni suhtes. C-hepatiidi nakatumise korral võib intervall infektsiooni ja immuunvastuse alguse vahel olla mitu nädalat ja kuud, sel ajal on ELISA ebaefektiivne. PCR annab vastuse esimesel nädalal pärast infektsiooni.

  • Väike vea tõenäosus. Uuritavas materjalis määratakse geneetilise materjali pindala, mis on iseloomulik ainult ühele patogeenide tüübile. See kõrvaldab valed tulemused. Kui ELISA-vead on võimalikud, kuna sama tüüpi antikehi saab erinevate viiruste vastu vabastada - neid antikehi nimetatakse ristantikehadeks.

  • Kõrge tundlikkus. PCR võimaldab tuvastada haigusetekitaja RNA isegi minimaalsetes kogustes. See võimaldab tuvastada varjatud nakkusi.
  • Kuidas valmistuda vereannetamiseks PCR-uuringute jaoks

    C-hepatiidi PCR analüüsiks kogutakse venoosse verega verd. Tavaliselt võetakse patsiendi veeni korraga kaks vere osa: esimene saadetakse PCR-ile ja teine ​​ELISA-ga. Seda tehakse selleks, et täpsemalt hinnata, kui palju patsient on nakatunud viirusega ja kuidas immuunsus selle vastu võideldes.

    Tavaliselt peab patsient järgima järgmisi reegleid:

    • hommikul võetakse vereanalüüs;
    • Viimase toidukordi ja vereannetuse vaheline intervall peaks olema kaheksa kuni kümme tundi;
    • kaks või kolm päeva enne analüüsi on vaja loobuda praetud ja rasvases toidus ja alkoholis;
    • 24 tundi enne analüüsi peaks patsient vältima füüsilist koormust: ärge kandke raskusi, ärge minge jõusaali või basseini.

    PCR-i kvalitatiivne ja kvantitatiivne analüüs hepatiit C jaoks: negatiivne, positiivne transkript

    C-hepatiit on viiruse maksahaigus, mis on põhjustatud flaviviiruse HCV-st (ingliskeelne sõna "hepatiit C-viirus"), mille struktuur sisaldab ribonukleiinhappemolekuli (RNA). RNA kannab viiruse geneetilist koodi. Selle olemasolu võimaldab hepatiidi C PCR-i analüüsi.

    HCV oht inimesele seisneb selles, et nn seroloogiline aken (infektsiooni aeg ja immuunsüsteemi reaktsiooni ilmnemine) võib olla üsna pikk - mitme nädala kuni kuue kuu jooksul.

    See ei tuvasta nakkusi ega alusta ravi õigeaegselt.

    Sõltuvalt organismi individuaalsetest omadustest võib HCV kandja esineda akuutses vormis ja esineda kroonilise haigusena, mis nõuab pikka ja kulukat ravi. Kui tuvastatakse HCV-vastased antikehad, tehakse laboratoorsed testid, sealhulgas PC-viirushepatiid C-ga. Seda katset tehakse kõigile inimestele, kelle veres on leitud HCV-vastased antikehad.

    Mis on PCR-analüüs?

    PCR-i laboratoorsed analüüsid hepatiit C jaoks - bioloogilise materjali uurimine, et tuvastada flavaviiruse esinemine.

    Polümeraasi ahelreaktsioon (lühendina tähistab) näitab keha viirusliku kahjustuse kvantitatiivset väärtust, selle kvalitatiivseid omadusi ning RNA-viirust sisaldava genotüübi.

    Nende põhjal ja täiendavate analüüside põhjal määratakse kindlaks ravi meetod ja kestus ning epidemioloogiline tegur (teisele kandjale edastamise oht).

    Mis on hepatiit C RNA analüüs?

    Hepatiit C PCR nimetatakse ka RNA analüüsiks (HCV RNA), kuna Flavaviirus sisaldab RNA osakest, mille virioni suurus on 30-60 nm. Selle mikroorganismi üks omadusi on mutatsioonide suur kalduvus.

    Igale viiruse alamliigile (genotüübile) on erinev vastupanu, mis põhjustab patsiendi jaoks erinevaid ravimeetodeid ja edasise prognoosi olemust.

    Bioloogiline materjal (venoosne veri) antakse tühja kõhuga ja seda reeglina testib reaalajaline PCR meetod (väga tundlik reaalajaline diagnostika, mille madalam tuvastuspiir on 15 IU / ml, kasutades suletud automatiseeritud süsteeme).

    On ka muid katseid, näiteks COBAS AMPLICOR, mille tundlikkus on 50-100 RÜ / ml. Iga laboriuuringu jaoks on oluline tundlikkuse künnis, st reagendi võime tuvastada viiruse miinimumkontsentratsioon bioloogilises materjalis.

    Hepatiit C analüüsi tüübid PCR abil

    Hepatiit C PCR sisaldab kolme olulist komponenti:

    • kvalitatiivne analüüs;
    • kvantitatiivne analüüs;
    • genotüpiseerimine.

    Need testid võimaldavad teil määrata viiremia olemust ja patogeeni geneetilisi omadusi. Sõltuvalt diagnostilise süsteemi tundlikkusest tehakse uuring üks kord ja mõnikord tehakse teine ​​katse tundlikuma reagendiga tulemuste kinnitamiseks või täpsustamiseks.

    Hepatiidi C kõrge kvaliteediga PCR

    Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüsi teine ​​tavaline nimetus on hepatiit C PCR-analüüs kvalitatiivne. Katse standardne tundlikkus, mis võimaldab tuvastada viiruse kahjustusi, on vahemikus 10-500 RÜ / ml.

    Hepatiidi C negatiivne PCR-analüüs näitab, et viiruse kontsentratsioon patsiendi veres on alla diagnostilise süsteemi tundlikkuse läve.

    Kui kõrgekvaliteetne PCR annab vastuse "ei tuvastatud", siis on edasiseks raviks oluline teada reaktiivi tundlikkuse künnis.

    Flavaviiruse valkude fraktsioonid ilmuvad palju hiljem.

    C-hepatiit, kvantitatiivne PCR

    PCR-hepatiidi C kvantitatiivne näitaja on viiruse koormus, mis peegeldab kehas flavaviiruse RNA kontsentratsiooni taset. See on näitaja, mis näitab, kui palju viiruse RNA fragmente on võetud vere kuupsentimeetri kohta. Hepatiit C RNA PCR-i tulemused tavapärases süsteemis kvantitatiivses testis on näidatud rahvusvaheliste ühikutes milliliitri kohta (RÜ / ml) ja neid saab registreerida erineval viisil, näiteks 1,7 miljonit või 1,700,000 RÜ / ml.

    Hepatiidi C kvantitatiivne PCR-diagnostika tuleb patsientidele enne viirusevastase ravi alustamist ja 12. ravinädalal, et hinnata valitud HCV-ga tegelemise meetodi tulemusi. Viiruslik koormus võimaldab kindlaks teha kolm olulist haigusseisundit:

    • nakkavus, st viiruse edasikandumise oht ühelt kandjalt teisele (mida kõrgem on flavaviiruse RNA kontsentratsioon, seda suurem on tõenäosus nakatada teist inimest, näiteks seksuaalse kontakti kaudu);
    • ravi meetod ja tõhusus;
    • viirusevastase ravi kestus ja prognoos (seda kõrgem on viiruskoormus, seda kauem ravi kestab).

    Hepatiidi C kvantitatiivne PCR-diagnostika sõltub laboratoorse testi tüübist ja selle tundlikkuse piirist. Norma alumist piiri peetakse näitajaks kuni 600 000 RÜ / ml, keskmine väärtus jääb vahemikku 600 000-700 000 RÜ / ml. 800 000 RÜ / ml ja kõrgemate tulemuste hulka peetakse RNA-d sisaldava viiruse kõrge taseme.

    Genotüüpimine

    Tänu kõrgele HCV mutatsioonilisele aktiivsusele looduses, on katsetamisel oluline kindlaks teha, milline viiruse genotüüp on patsiendi veres. Kokku on planeedil registreeritud 11 C-hepatiidi viiruse genotüüpi, mis sisaldavad paljusid alamliike (alatüüpe). Vene Föderatsiooni territooriumil jagunesid 1,2 ja 3.

    Kuna C-hepatiidi C PCR RNA koos genotüpiseerimisega on väga oluline analüüsi komponent võimaldab arstil määrata viiruse resistentsust (resistentsust), valida sobivad ravimid ja määrata ravikuur.

    Genotüpiseerimine võimaldab ka kaudselt määrata maksa seisundit. Näiteks kaasneb HCV-i 3 genotüübiga sageli steatoos, milles rasv kogub elundi rakkudes.

    C-hepatiidi PCR-i vereanalüüs peaks andma näitaja, mis määrab genotüübi. Laboratoorsed reaktsioonid võivad öelda, et "ei ole kirjutatud" - ja see tähendab, et viirus on inimveres, mida katsesüsteem ei tuvasta. See võib viidata sellele, et antud geograafilises piirkonnas ei ole genotüüp tüüpiline. Antud juhul peaksite analüüsi korrata diagnostilise süsteemi suurema tundlikkusega.

    C-hepatiidi PCR-analüüsi dekodeerimine

    C-hepatiidi PCR kvantitatiivne dekrüpteerimine võib põhineda ülalnimetatud andmetel. Laboratoorsete testide tulemuste saamisel kirjutavad tavaliselt järgmised andmed:

    • "Leitud" / "ei leitud" (kõrgekvaliteetne C-hepatiidi PCR);
    • RNA-d sisaldavate fraktsioonide arv, näiteks 831,680 ME / ml (kvantitatiivne PCR-analüüs);
    • arv, mis määrab HCV genotüübi, näiteks - 1, 2, 3, 4;
    • Katse nimi on enamasti reaalajas.

    Kõige olulisem PCR-i hepatiidi C analüüsiks detekteerimisel on teine ​​lõik, mis näitab viiruse koormust, mis määrab ravi prognoosi, meetodi ja kestuse.

    Kui hepatiit C PCR-test on negatiivne ja ELISA on positiivne - mida see tähendab?

    Laboratoorsete analüüside dekodeerimiseks on oluline pöörduda hepatoloogi või nakkushaiguste spetsialisti poole, kes selgitab saadud teavet vastavalt diagnostilise süsteemi tüübile ja selle tundlikkuse piirväärtusele. Meditsiinipraktikas on palju andmeid vereanalüüside kohta, mis võivad inimesi meditsiinilise hariduse puudumisel eksitada.

    Näiteks kui hepatiit C-vastane PCR-test on negatiivne ja ELISA on positiivne, võib see tähendada, et patsiendi veres ei esine HCV-d praegu, kuid varem oli ta saanud hepatiidi C ägedat kuju. Arvatakse, et positiivne ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) näitab, et on veres antikehad, mis on toodetud pärast viiruse sissetungi minevikus. Kuid tänapäeva meditsiinipraktikas peetakse ELISA-analüüsi ebapiisavalt usaldusväärseks ja see annab sageli ebatüüpilisi tulemusi, nii et arstid kasutavad seda primaarse sõeluuringuna. Haiguse diagnoosimisel lähtuvad spetsialistid täpselt PCR-testiga.

    Kasulik video

    Järgnev video annab väga üksikasjaliku ja huvitava kirjelduse PCR-meetodi olemusest, kuidas analüüsimine toimub:

    Järeldus

    PCR-i analüüsimiseks C-hepatiidi korral võetakse tavaliselt verevere. Enamasti on bioloogilise materjali kahekordne kogus - ELISA ja otseselt PCR-testi jaoks. Korrektsete katsetulemuste jaoks on vajalik vastavus bioloogilise materjali laboriproovide võtmise põhireeglitele:

    • analüüsitava veri on tühja kõhuga esimesel poolel;
    • jahu ja vereproovi võtmine peaks võtma vähemalt 8 tundi;
    • Alkoholi ja praetud toidud tuleks enne testi sooritamist välja jätta;
    • päeva jooksul enne vere annetamist on vajalik vältida suurt füüsilist koormust.

    Vereanalüüsi tulemused on tavaliselt järgmisel päeval valmis.


    Seotud Artiklid Hepatiit